Anlisis de resultados

Las pruebas, Benedict y el volumen generado de CO2 en la experimentacin pueden ser

utilizadas para el seguimiento de la fermentacin. La prueba de Benedict sirve para
caracterizar carbohidratos, estos tienen en su estructura el grupo funcional carbonilo, en su
forma ceto-aldehdo. El reactivo de Benedict ([Cu(C3H5 O(COO) 3)2 ] 4- en medio
alcalino se emplea para detectar sustancias reductoras, como los aldehdos, que reducen al
Cu +2 a Cu+1 en forma de xido cuproso; el color del precipitado puede ser amarillo o rojo
dependiendo de la naturaleza y cantidad del agente reductor (Miranda Ruvalcaba et al.
2008); en una prueba negaiva el color azul del reactivo permanece .En la primera seccin se
puso de manifiesto el carcter reductor de la glucosa, pues dio positivo a la prueba,
mostrando un precipitado rojo ladrillo luego de ser calentado en agua hirviendo. La misma
prueba se realiz con la levadura, dando un resultado negativo descartndose as la
presencia de cualquier azcar reductor en esta, que pudiese interferir con los posteriores
experimentos, asegurando slo la presencia del hongo ascomiceto. La prueba de Benedict
se utiliz para seguir el proceso de fermentacin realizado por Saccaromyces cerevisiae
sobre la solucin de glucosa al 2%, el fundamento de este procedimiento es que como ya se
mencion anteriormente, que la glucosa es un azcar reductor y por tanto da positivo a la
prueba con el reactivo de Benedict, gracias a esto, se espera que conforme avance el
proceso de fermentacin el poder reductor de la solucin de glucosa al 2% vaya
decreciendo hasta desaparecer en el momento en que toda o la mayora de la glucosa sea
transformada en etanol y CO2. As pues la prueba de Benedict se realiz en 30, 60, 90 y
120 minutos, incubando a 37C, se confirm que el proceso de fermentacin llego a su
trmino a los 90 min, ya que en ese momento la prueba dio negativa, pero como el color del
precipitado puede ser amarillo o rojo dependiendo de la naturaleza y cantidad del agente
reductor, si puede apreciarse una disminucin en la tonalidad roja que tiendehaca el color
amarillo que es indicativo de la que la fermentacin se esta llevando a cabo, si bien noa una
buena velocidad,utilizndose dicha temperatura debido a que el metabolismo
delmicroorganismo estudiado se lleva a cabo de manera ptima. En cuanto a la
fermentacin con diferentes carbohidratos, se prepararon sistemas en los que el volumen
producido de CO2era medido cada 5 minutos para, determinar qu carbohidrato poda
sermetabolizado con mayor eficacia por la levadura (saccaromyces cerevisiae) de esta
forma puede sermedida cuantitativamente la actividad de fermentacin de esta, y puede
hacerse un comparativo tambin de como vara la velocidad del proceso con cada diferente
carbohidrato. Se utilizaron los siguientescarbohidratos: glucosa, fructosa, sacarosa y
galactosa. Donde el que se metabolizara ms rpido, fue la glucosa por ser el sustrato
preferido por Saccharomyces Cerevisiae debido a que la glucosa entra directamente a
gluclisis para dar piruvato y seguir por la va de la fermentacin hasta obtener etanol y
CO2.Al realizar la prueba con fructosa que est presente como azcar libre en muchas
frutas, y se obtiene de la hidrlisis de la sacarosa, la fosforilacin de esta, da lugar a
fructosa-6-fosfaton un intermediario gucoltico, (Mathews & K. E., 2002) de esta forma la
fructosa puede tambin ser aprovechada por Saccharomyces cerevisiae. Con la sacarosa,
que es un disacrido formado por una molcula de glucosa y una de fructosa, no es raro que
la sacarosa pueda ser metabolizada por Saccharomycescerevisiae; y finalmente la galactosa,
ni siquiera fue metabolizada por dicha levadura, ya que este carbohidrato no sirve como
sustrato en dicho proceso. El rendimiento terico estequiomtrico para la transformacin de
glucosa en etanol es de 0.511 g de etanol y 0.489g de CO 2 por 1g de glucosa. Este valor

fue cuantificado por Gay Lussac. En la realidad es difcil lograr este rendimiento, porque
como se seal anteriormente, la levadura utiliza la glucosa para la produccin de otros
metabolitos. El rendimiento experimental vara entre 90% y 95% delterico, es decir, de
0.469 a 0.485 g/g. Los rendimientos en la industria varan entre 87 y 93% delrendimiento
terico (Boudarel, 1984). Otro parmetro importante es la productividad (g/h/l), la cual se
define como la cantidad de etanol producido por unidad de tiempo y de volumen. (Vzquez
&Dacosta, 2007). De manera paralela tambin se llev a cabo la fermentacin en presencia
y ausencia de NaF en el sistema para analizar y observar el efecto que tiene sobre la
fermentacin. En eltubo que contena NaF no se llev a cabo el proceso de fermentacin,
esto se debea que el in fluoruro acta como inhibidor de la enolasa (2-fosfo-Dgliceratohdirolasa; EC: 4.2.1.11)(UniProtKB, 2013). La enolasa est formada por 2
subunidades iguales y requiere al catin Mg+2como cofactor debido a que este estabiliza al
homodimero adems de que ayuda en la catlisis(UniProtKB, 2013) de la reaccin2-fosfoD-glicerato= fosfoenolpiruvato + H2O. El papel que juega la enolasa es fundamental en el
proceso de la glucolisis, pues es por medio de esa ruta metablica que se obtiene el piruvato
que es el sustrato de partida para llevar a cabo el proceso de fermentacin alcohlica. Por lo
tanto al inhibir a la 2-fosfo-D-gliceratohdirolasa se impide que se forme el
fosfoenolpiruvato en el paso nmero 9 de la glucolisis y por lo tanto ya no se forma
piruvato. La forma en que el NaF inhibe a la enzima es por la formacin de un complejo del
in F- con el Mg+2 de esta forma el homodmero de la enzima pierde estabilidad, su
conformacin y por lo tanto su accin cataltica. Debido a esto no hay fermentacin.
Podemos ver que la temperatura optima a la que se lleva a cabo el proceso es 37, mientras
que a 0 C no ocurre ninguna reaccin, debido a que este proceso es exotrmico, y las
levaduras tienen un rgimen de funcionamiento en unos rangos de temperatura ptimos, se
debe entender adems que las levaduras son seres mesfilos.

Conclusin
Debido a la mala calidad de la levadura los datos experimentales no se obtuvieron de
formacompleta o confiable. De todas formas se realiz el anlisis de los resultados

proporcionados por laprofesora y de los que se obtuvieron de manera parcial. Se llev a

cabo el proceso de fermentacinen glucosa de manera parcial por accin de Saccharomyces
cerevisiae, se prob tambin que lalevadura acta sobre fructosa y sacarosa, pero no as
sobre galactosa. Quedo demostrado que NaFfunciona como inhibidor en el proceso de
fermentacin debido a la formacin de un complejo F-Mgque impide se lleve a cabo el
noveno paso de glucolisis. No pudo demostrarse experimentalmente elfinal de la
fermentacin por medio de la prueba de Benedict pero se hizo un estudio y anlisisterico
de ello.
Referencias
Horton, R. (2008).
Principios de bioqumica
(4ta ed.). D.F., Mxico: Perarson.
Koolman, J. (2004).
Bioqumica Texto y Atlas.
D.F.: Panamericana