INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

LABORATORIO DE BIOQUMICA
Cruz Montiel Mario Arturo

ALUMNOS:

Herrera Mora Sara Lorena

GRUPO: 3FV1

SECCION: IV

[ A.R]
PRCTICA NO 5.5:
Efecto de la concentracin del sustrato
sobre la velocidad de reaccin
INTRODUCCION:
Cuando se utilizan concentraciones
crecientes de sustrato en una serie de
determinaciones, al representar Vo frente a la
concentracin de sustrato se encuentra
frecuentemente una curva hiprbola.
OBJETIVO:
Observar y analizar el efecto de la
concentracin de sustrato sobre la velocidad
de reaccin enzimtica, y con los datos
obtenidos de la experiencia determinar la
constante de Michaelis-Meten
RESULTADOS:
Clculos:

[ AR ] ( m / 2.0 ml):

Se obtiene al

interpolar la absorbencia de ambas

experiencias (5.2 y 5.3) en la curva tipo de
azucares reductores previamente elaborada
(exp 5.1)
Velocidad de reaccin de la enzima
(unidades internacionales):
Donde

[ A . R ]=

Concentracin de azucares

reductores (moles)
NOTA: Se dividir entre 10, debido a que por
cada molcula de Sacarosa hidrolizada
durante los 5 minutos de incubacin, se
formaran dos molculas de azucares
reductores (2 molculas de glucosa)

2
5

V O =

[ A . R]
10

Concentracin de enzima
(g/2.0ml)

1 ml=10 mg

0.1=x

NO DE
TUBO
sacarosa
0.2 M (ml)

BL
AN
CO

PROBLEMAS

0.5

0.1

0.2

0.3

0.5

0.8

regulador
de
acetatos
0.05 M,
pH4.7 (ml)

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

agua (ml)

0.5

0.9

0.8

0.7

0.5

0.2

PREINCUB
ACION
Enzima 10
g/(ml)

1.0
0.5

5min. Temperatura ambiente

0.0

incubacin
Inactivaci
n

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

5 minutos a temperatura ambiente

0.5ml de
3,5DNS+
enzima

0.5 ml de 3,5 DNS

Desarrollo
de color

5 minutos a 92C (bao mara(

dilucin

Enfriar en bao de hielo y diluir con 2.0 ml de

agua
leer en espectrofotmetro a 540 nm

absorbenc
ia
AR micro
moles/2.0
ml
Velocidad
(U.I)
Concentra
cin de
enzima
(g/2.0
ml)

0.16
3

0.30
5

0.4
42

0.5
30

0
0

5.3 EFECTO DEL pH

NO DE
TUBO

BL
A
N

PROBLEMAS

0.643

0.619

C
O
T

relacion cons/ V. de reaccion

0.5
0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.7

Ph= 6.5

Ph= 7

PREINCU
5min. Temperatura ambiente
BACION
0.5
Enzima
0.0 0.5 0.5
0.5
0.5 0.5
10 g/
(ml)
incubaci
5 minutos a temperatura ambiente
n

0.2

Inactivaci
n

0.5ml
de
3,5DN
S+
enzima

0.5

Ph=5

0.3

0.5

Ph=4.5

0.5

0.5

Ph=3

0.6

0.5

agua (ml) 0.5

Ph=3

Ph=5

sacarosa
0.5
0.2 M
(ml)
regulador
de
citratos
0.2 M,
(0.5ml)

0.5

0.5
0.4

0.1
0
0

5 minutos a 92C (bao mara(

Dilucin

Enfriar en bao de hielo y diluir con 2.0

ml de agua

leer en espectrofotmetro a 540 nm

absorben
cia
AR micro
moles/2.
0 ml
Velocidad
(U.I)
pH

0.0
6

0.0
17

0.3
73

0.5
04

3.1
3

0.3
13

0.5

5.0

6.5

0.026

4.5

0.9
67
9.4

0.9
4
7

DISCUSIN:
En la experiencia 5.2 observamos que al
graficar los datos experimentales se
obtiene una recta con pendiente positiva,
lo que nos indica que a mayor
concentracin de enzimas mayor ser la
velocidad de la reaccin catalizada por
dicha enzima

En la experiencia 5.3 observamos que se

forma una curva donde el punto mximo
de esta ser igual a Vo mxima, que se
alcanza a un pH especfico para cada
enzima, se observa que entre ms
alejado a ambos lados del pH optimo,
menor ser la velocidad de reaccin,
deduciendo as que a cambios bruscos
de pH la enzima tiende a perder su
naturaleza de catalizador, es decir se
desnaturaliza

0.5 ml de 3,5 DNS

Desarroll
o de
color

CONCLUSIONES:
Existe una relacin directamente
proporcionar entre la concentracin de la
enzima y la velocidad de reaccin
enzimtica
El pH optimo de la enzima invertasa se
encuentra en un pH de entre 4.5 y 5.5
La velocidad de reaccin es directamente
proporcional a la concentracin del
azcar reductor.

BIBLIOGRAFIA:

Halvor N. Christensen, Graham A.

Palmer; Cintica enzimtica: curso
programado para estudiantes de
medicina y ciencias biolgicas, Reverte,
1980, pg. (167-170)
David L. Nelson, Michael M. Cox,
Principios de bioqumica, pg. 194,
196,197; Ed omega

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
LABORATORIO DE BIOQUMICA
Cruz Montiel Mario Arturo

ALUMNOS:

GRUPO: 3FV1
Donald Voet, Judith G. Voet, Bioqumica,
Ed. Mdica Panamericana, 2006

Herrera Mora Sara Lorena

SECCION: IV