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ACIDES AMINES
METHODES CHROMATOGRAPHIQUES.
METHODES ELECTROPHORETIQUES.
DOSAGES SPECIFIQUES.
CHROMATOGRAPHIE
CHROMATOGRAPHIE
CHROMATOGRAPHIE
CHROMATOGRAPHIE
DIONS.
SUR PAPIER.
SUR COUCHE MINCE.
EN PHASE GAZEUSE.
SUR ECHANGEUR
rservoir
Solvant
(phase mobile)
colonne
phase stationnaire
collecteur
C2H4 N H
C2H4
CH2
SO3-
O
CH2
C
O
SO3Na+
Les cations de la solution (ici Na+) vont se fixer sur les charges
ngatives de la phase stationnaire.
Asp
CH2
COONH3+
NH3+
CH
COO-
CH2OH
CH2
Lys
Ser
CH COOCH2
CH2
CH2
NH3+
- tape 3: On lue (on rince) la colonne avec une solution de NaCl un peu
plus concentre.
NH3+
CH
NH3+
COO-
CH2OH
Lys
Ser
CH COOCH2
CH2
CH2
CH2
NH3+
NH3+
CH COOCH2
COO-
Asp
Les ions Na+ tant plus nombreux que prcdemment ils vont entrer en
comptition avec les acides amins pour se fixer sur la colonne.
Ils vont remplacer tout dabord les acides amins les moins positifs.
Lys
CH COOCH2
CH2
CH2
NH3+
CH
COO-
CH2OH
CH2
NH3+
Ser
La concentration en Na+ tant plus forte, seuls les acides amins les plus
chargs vont rester fixs la colonne.
NH3+
CH COOCH2
CH2
CH2
CH2
Lys
NH3+
Les ions Na+ sont en large excs, ils vont remplacer toutes les molcules
qui taient encore sur la colonne.
1-2: On dpose le mlange, les molcules les plus charges se fixent tout
de suite alors que les moins charges se fixent plus bas.
3-4: On rince la colonne avec une solution de NaCl de concentration
croissante. On dcroche successivement les diffrentes molcules.
1-2: Quand on met le mlange sur la colonne, seule la protine qui peut
interagir avec le ligand se fixe.
3-4: Pour dcrocher la protine de la colonne, on lue avec une solution
contenant le ligand.
Les petites molcules vont donc perdre du temps dans les billes alors
que les grosses molcules vont trs vite traverser la colonne.
retard
billes poreuses
lution avec le
volume mort
(Vm)
280nm
dtecteur
Volume dlution
REACTION A LA NINHYDRINE.
Detecteur uv .
Enregistreur + Trace.
DO 215 nm
anode +
dpt
cathode -
Phase de migration
Le gel est alors mis en place dans la cuve
et puis aprs fermeture du couvercle et
mise en marche de lalimentation, la
migration des protines dmarre
La tension applique au gel et le temps de
migration dpendent de la nature des
chantillons analyser.
Fixation et coloration
Une fois la migration lectrophortique termine,
le gel est plong pendant deux minutes dans le
fixateur (acide alcool), sch puis plong
pendant trois minutes dans le colorant.
Une succession de bains dans la solution de
dcoloration permet ensuite d'liminer la
coloration du fond de faon faire apparatre les
bandes correspondant aux diverses protines
spares.
Dcoloration du fond
lecture
peut se faire l'oeil nu (analyse qualitative)
ou par densitomtrie (enregistrement de
l'absorbance en fonction de la distance de
migration) ; dans ce cas, l'intgration des
pics permet une analyse quantitative des
fractions.
Trac densitomtrique du
protinogramme d'un srum humain
normal