Manejo y Almacenamiento de Semen

Congelado en Carneros

Irma Celi.
Investigadora privada

Manejo del tanque de almacenamiento

Medir el contenido de Nitrgeno lquido mediante una
varilla graduada (cm. pulg.). Cuidar que el nivel este por
arriba de 4 a 5 pulgadas, el chequeo debe hacerse cada 2
- 3 semanas.
Guardar el tanque en un lugar fresco y seguro
Fijar bien el tanque durante el transporte para evitar
balanceo o choque.
Determinar la localizacin del semen que se va a usar,
antes de abrir el tanque; sacar la pajilla que se necesite e
inmediatamente tapar el tanque.

Partes del tanque criognico

Manipulacin de semen
No exponer el semen a temperatura ambiente por mas
de 20 segundos.
Nunca levante la canastilla con el semen a una altura
que sobrepase el cuello del tanque, por ms de 40
segundos.
Si necesita ms tiempo para su trabajo, devolver las
dosis al fondo por 15 segundos para restablecer la
temperatura a la del nitrgeno lquido.
Usar en lo posible guantes y pinzas de madera o
plstico al manipular el semen, as evitara quemarse
las manos con el nitrgeno lquido.

Generalidades sobre tanques y semen

Pajillas y/o pellets debidamente identificadas y tener un
inventario.
Se recomienda tener en cada canastilla del tanque, semen
de un solo carnero.
La presentacin del semen congelado en la actualidad es
en pellets de 0.2 cc y pajillas de 0.5 0.25 cc de capacidad.
El almacenamiento en pajillas presenta la ventaja de
ahorrar espacio en el tanque, permitiendo una gran
capacidad de almacenamiento

Congelacin de semen en pellets

Preparar una barra de hielo

seco (-79 oC)

Dejar en el hielo por espacio

de 1 minuto.

Depositar 0.2 ml de semen

diluido refrigerado (5 oC)

Semen despus de 1 minuto, listo

para ir al Nitrgeno lquido

Congelacin de semen en pellets

Completar el congelamiento sacudiendo los pellets

contenidos en el hielo seco directamente al nitrgeno
lquido (-196 oC).

Los pellets de cada carnero

son
almacenados en canastillas individuales
dentro de goblets cubiertos por algodn
para evitar que los pellets floten en el
nitrgeno lquido.

Retiro de pellet para la descongelacin.

Descongelacin y evaluacin del semen

Tubo temperado en agua tibia

a 37C x 10 minutos.

Colocar una gota de semen

descongelado
para
evaluar
la
motilidad. Esta debe ser mayor de
60%
Colocar el pellet y agitar lentamente
hasta descongelar (25-30 seg)

Congelacin de semen de carnero en pajillas

Secado de pajillas de semen

diluido refrigerado a 5 oC.

Caja de congelamiento de
semen.

Pajillas sometidas a vapores de

nitrgeno lquido por 2 minutos
hasta 140 oC.

Pajillas sumergidas en
nitrgeno lquido (-196 oC)

Almacenamiento de semen empajillado

Almacenamiento de pajillas a granel

Almacenamiento de pajillas en varillas

Descongelacin de pajillas de semen

Descongelacin en agua
temperada a 37-38 oC

Secar completamente

Sumergir la pajilla por

espacio de 15-20 segundos

Cortar del extremo del

alcohol polivinilico

Evaluacin de motilidad

Eliminar la primera gota de

semen

Cubrir con una lmina cubre

objeto.

Colocar una gota de semen

en el portaobjeto a 38 oC.

Motilidad progresiva individual

mayor de 60%

DILUYENTE IMV PARA SEMEN DE OVINO

CONGELADO

Cada frasco contiene 40 ml de diluyente. Agregue 10 ml de yema de

huevo fresco a cada frasco antes de usar. Los huevos deben estar
limpios para minimizar la contaminacin de agentes patgenos y
tambin de jabn. Tenga cuidado de no incluir la clara del huevo.

Despus que se ha agregado la yema de huevo y mezclado

completamente con el diluyente, puede centrifugarse para mejorar
su transparencia. Centrifugue el diluyente a 4000 r.p.m. durante 20
minutos o su equivalente. La materia flotante debe ser escurrido a
travs de un papel de filtro grueso para remover grasas ligeras y
luego ser usado como diluyente de semen. Generalmente cuanto
ms rpido y largo sea el centrifugado del diluyente mejor ser la
claridad. La centrifugacin no es esencial pero producir una mayor
claridad para la evaluacin del semen.

El diluyente contiene Gentamicina.

El diluyente contiene Glycerol

La relacin de dilucin variar dependiendo de la calidad inicial del

semen y de la concentracin de las clulas vivas requeridas
despus del descongelado. Generalmente, recomendamos una
relacin de dilucin de 1:10 (una parte de semen para 10 partes de
diluyente) para una alta calidad de semen en inseminacin
laparoscpica. No recomendamos relacin de dilucin menores de
1:4.
La dilucin inicial debe hacerse a 35 oC. Ambos, semen y diluyente
deben estar a 35 oC para evitar un shock de fro. Poner el diluyente
ms el semen en bao de agua fra de 100 a 200 ml (cmara) para
enfriarlo calmadamente. Enfre a 5 oC por aproximadamente 1.5
horas
Despus que el diluyente ms el semen ha sido enfriado a 5oC
mantener esta temperatura, sin enfriar ni calentar. Permita que el
semen se equilibre por cuatro horas antes del congelado.
Incremente el tiempo de equilibrio si es necesario para incrementar
su recuperacin.
Congelar en vapor de nitrgeno lquido, colocando las pajillas
oredenadas sobre Zarandelas a 1 cm. del nivel de nitrgeno lquido
por 2 minuto, tiempo en el cual se alcanza la -140 oC de
temperatura. Posteriormente Las pajillas se sumergen en Nitrgeno
lquido (-196 o C).
Almacenar las pajillas congeladas.