ICIDCA.

Sobre los Derivados de la Caa de

Azcar
ISSN: 0138-6204
revista@icidca.edu.cu
Instituto Cubano de Investigaciones de los
Derivados de la Caa de Azcar
Cuba
Bello Gil, Daniel; Carrera Bocourt, Emilia; Daz Maqueira, Yuset
Determinacin de azcares reductores totales en jugos mezclados de caa de azcar utilizando el
mtodo del cido 3,5 dinitrosaliclico
ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caa de Azcar, vol. XL, nm. 2, mayo-agosto, 2006, pp. 45-50
Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar
Ciudad de La Habana, Cuba

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=223120664006

Cmo citar el artculo

Nmero completo
Ms informacin del artculo
Pgina de la revista en redalyc.org

Sistema de Informacin Cientfica

Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina, el Caribe, Espaa y Portugal
Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto

Daniel Bello Gil*, Emilia Carrera Bocourt y Yuset Daz Maqueira

Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar (ICIDCA)
e.mail: daniel.bello@icidca.edu.cu

RESUMEN
Se desarroll un procedimiento para determinar la concentracin de azcares reductores totales en jugos mezclados de caa de azcar por el mtodo del cido 3,5 dinitro saliclico (DNS). Se evaluaron dos procedimientos para la preparacin del reactivo del DNS:
en fro y en caliente. Se realiz un anlisis comparativo con el mtodo de Eynon- Lane
para diferentes diluciones del jugo. El mtodo del DNS en fro mostr menores desviaciones que el mtodo de Eynon-Lane y que el mtodo del DNS en caliente, tomando como
referencia los g/L de sacarosa que reporta el Manual Analtico para el Control Unificado
(MACU) para soluciones puras de sacarosa a los diferentes Brix de jugo ensayados. El
mtodo del DNS en caliente mostr las mayores desviaciones en la determinacin de
azcares reductores totales en jugos de caa de azcar.
Palabras clave: azcares reductores totales, mieles de caa de azcar, jugos de caa de
azcar, Eynon- Lane, cido 3,5 dinitrosaliclico.
ABSTRACT
It was developed a procedure to determine the concentration of total reducing sugars in
mixed Sugarcane juices using the method of the 3,5 dinitrosalicylic acid (DNS). Two procedures for the preparation of the reagent of the DNS were evaluated: in cold and hot. It
was carried out a comparative analysis with the method of Eynon-Lane for different dilutions of the Sugarcane juice. The method of the DNS in cold showed minor deviations
than the Eynon-Lane method and the DNS in hot method, taking like reference the saccharose concentration that Analytical Handbook of Unified Control reports for pure solutions of saccharose to the assayed Brix. The method of the DNS in hot showed the higher
deviations in the determination of total reducing sugars in Sugarcane juices.
Key words: total reducing sugars, Sugarcane molasses, Sugarcane juices, Eynon-Lane,
3,5 dinitrosalicylic acid.
ICIDCA No. 2, 2006

45

INTRODUCCIN
El desarrollo de mtodos analticos es
esencial en el seguimiento y control del proceso de fabricacin de azcar y alcohol. En
la Industria sucro-alcoholera es comn el
empleo del mtodo desarrollado por Eynon
y Lane para la determinacin de azcares
reductores en mieles y caldos de fermentacin de destileras(1,2), siendo ste el aceptado por las normas cubanas y el recomendado por la Comisin Internacional para los
Mtodos Uniformes de Anlisis de Azcar
(ICUMSA en Ingls) (3,4).
El mtodo de Eynon-Lane tiene como
principal inconveniente el ser un mtodo
volumtrico donde el punto final de la valoracin se detecta por cambio de color, adems es un mtodo poco productivo. Sin
embargo, ha demostrado ser exacto y preciso en la determinacin de azcares reductores en mieles y baticiones de mieles (2,5).
Sumner y colaboradores desarrollaron
otro mtodo utilizando el cido 3,5 dinitrosaliclico (DNS) para calcular la concentracin de azcares reductores en distintos
materiales. El procedimiento se basa en una
reaccin redox que ocurre entre el DNS y
los azcares reductores presentes en la
muestra (6,7,8,9). Este mtodo ha sufrido
varias modificaciones a travs de los aos
para adecuarse al anlisis de diferentes
materiales y su principal ventaja radica en
su alta sensibilidad y productividad debido
a que es un mtodo espectrofotomtrico
(10,11).
El mtodo del DNS no es recomendable
utilizarlo para la determinacin de azcares
reductores en muestras intensamente coloreadas como mieles y caldos de fermentacin que la contengan. Estudios de Otero y
colaboradores muestran dispersin en la
determinacin de azcares reductores en
mieles por el mtodo del DNS con la modificacin de Miller (12).
En la actualidad, el programa alcoholero
cubano y en especial la produccin de alcohol a partir de jugos mezclados de caa de
azcar necesita del desarrollo de nuevos
procedimientos analticos: precisos, de elevada productividad y de poca manipulacin
tcnica que permitan llevar con exactitud la
contabilidad y eficiencia global del proceso.
En el presente trabajo se desarrolla un
procedimiento para la determinacin de
46

azcares reductores totales en jugos mezclados de caa de azcar por el mtodo del
cido 3,5 dinitrosaliclico. Adems, se hace
un anlisis comparativo con el mtodo de
Eynon y Lane.
MATERIALES Y MTODOS
2.1. Tratamiento del Jugo mezclado de
caa de azcar
Se preparan diferentes diluciones del
jugo mezclado de caa de azcar para que
queden a los siguientes Brix: 14.4; 12.9;
11.8; 11.1; 9.0; 6.9 y 5.15.
Se centrifuga 10 ml de cada dilucin de
jugo a 10 000 r.p.m, 10 min y se filtra el
sobrenadante por papel de filtracin rpida.
2.2. Inversin del jugo mezclado de caa
de azcar
Se toma 1 ml de jugo filtrado en matraz
de 100ml y se le adicionan 5 ml de H:Cl 1:1
(v/v). Se coloca a 65 C en bao de agua por
10 min. Se deja enfriar a temperatura
ambiente y se neutraliza con NaOH al 10 %
(w/v). Se enrasa con agua destilada (1,2).
2.3. Soluciones de sacarosa pura
Se preparan soluciones de sacarosa pura
a las siguientes concentraciones: 60, 80,
100, 120, 140 g/L.
2.4. Preparacin del reactivo del cido 3,5
dinitrosaliclico: en fro y en caliente
Se pesan 5 g de cido 3,5 dinitrosaliclico,
150 g de tartrato de Na-K y 8 g de NaOH. Se
disuelve el NaOH en 200 ml de agua (d) y se
aade en agitacin el tartrato de Na-K lentamente. Se completa con agua (d) hasta 400 ml
y se comienza a aadir lentamente el cido
3,5 dinitrosaliclico. Se deja en agitacin toda
la noche, se enrasa a 500 ml y se filtra.
La preparacin del reactivo en caliente
es idntica pero se hace en agitador magntico con calentamiento (6,7,8,9).
2.5. Desarrollo de la reaccin del DNS
En tubos de cristal de 10 ml se adicionan
0.5 ml de muestra y 0.5 ml del reactivo de
DNS. Los tubos se colocan en bao de agua
a 100 C por 5 min. Se enfran hasta temperatura ambiente y se le aade 5 ml de agua
destilada. Se agita y se realiza la lectura a
540 nm en espectrofotmetro.
ICIDCA No.2, 2006

2.6. Curva patrn de Glucosa

Se prepar la solucin patrn de
Glucosa a las siguientes concentraciones:
0.5, 0.7, 0.9, 1.1, 1.3, 1.5, 1.7 y 1.9 g/L. Se
desarrolla la reaccin con el reactivo DNS
segn acpite 2.5.
2.7 Mtodo de Eynon-Lane
Se desarroll el mtodo de Eynon-Lane
segn modificacin ICIDCA (1,2,5).
RESULTADOS Y DISCUSIN
3.1 Curva patrn de Glucosa
Se obtuvieron altos coeficientes de
correlacin para las curvas patrn de
Glucosa utilizando el mtodo del DNS en
caliente y en fro (figura 1 y 2).

Figura 1. Curva patrn de Glucosa (DNS en

caliente)

Figura 2. Curva patrn de Glucosa (DNS en frio)

Ambos mtodos detectan los cambios en

la concentracin de azcares reductores con
cambios proporcionales en las lecturas de
densidad de ptica a 540 nm.
3.2 Determinacin de azcares reductores
totales en jugos de caa mezclado
Las tablas 1 A y B muestran los resultados de determinacin de azcares reductores totales utilizando los mtodos del DNS
en fro, DNS en caliente y por Eynon-Lane
para los diferentes Brix de trabajo. Se tom
como referencia los valores de concentracin que reporta el MACU para soluciones
puras de sacarosa a los diferentes Brix ensayados (13).
Las figuras 3, 4 y 5 muestran las curvas
de correlacin Brix vs g/L de azcares

Tabla 1 A y B . Resultados de la concentracin de azcares reductores totales en g/L por

el mtodo de DNS en fro, DNS en caliente y Eynon -Lane. A: Experimento 1 y B
Experimento 2.

A
Brix
14,4
12,9
11,8
11,1
9
6,9
5,15

g/l MACU
152,15
135,48
123,38
115,74
93,06
70,76
52,97

g/l (DNS frio)

154,3
142,7
133,4
123,7
96,8
78,7
54,8

g/l (DNS caliente)

158
146
144
128
103
82,5
55,4

g/l Eynon-Lane
140
126
116
103
88
67
46

Brix
14,4
12,9
11,9
10,9
9,2
7,2
5,1

g/l MACU
152,15
135,48
124,48
113,56
95,21
73,92
51,93

g/l (DNS frio)

153,3852281
140,4417089
132,2954381
122,5199131
93,19333816
73,28023172
53,91020999

g/l (DNS caliente)

161, 223491
143, 278956
136, 0195759
128, 7601958
95, 56280587
73, 21137031
55,84013051

g/l Eynon-Lane
140
125
114
103
90
70
46

ICIDCA No. 2, 2006

47

reductores por el mtodo del DNS en caliente, DNS en fro y Eynon-Lane respectivamente. Se obtuvieron altas correlaciones
por los tres mtodos, o sea, un cambio en el
Brix del jugo de caa se tradujo en un cambio proporcional en la concentracin de
azcares reductores por los tres mtodos
ensayados.

Figura 3. Correlacin Brix vs g/l de azcares

reductores totales para el mtodo del DNS en
caliente.

Figura 4. Correlacin Brix vs g/l de azcares

reductores totales para el mtodo del DNS en
frio.

Figura 5. Correlacin Brix vs g/L de azcares

reductores totales para el mtodo de Eynon y
Lane.

Las figuras 6 A y B muestran las desviaciones en g/L para los tres mtodos ensaya48

dos con respecto a los valores de referencia

del MACU. La desviacin se calcul para
cada Brix de jugo segn:
Desviacin g/L = g/L reductores calculadosg/L sacarosa MACU

Figura 6 A. Desviacin en g/L de la concentracin

de azcares reductores totales para los tres mtodos ensayados con respecto a las concentraciones de sacarosa reportadas por el MACU para los
diferentes Brix de trabajo (Experimento 1).

Figura 6 B. Desviacin en g/L de la concentracin de azcares reductores totales para los tres
mtodos ensayados con respecto a las concentraciones de sacarosa reportadas por el MACU para
los diferentes Brix de trabajo (Experimento 2).

En los dos experimentos realizados con

jugo de caa de azcar mezclado (A y B) el
mtodo del DNS en fro mostr las menores
desviaciones y el DNS en caliente y el mtodo de Eynon mostraron las mayores desviaciones. Se comprob que de manera general
a medida que disminuye el Brix del jugo
mezclado las desviaciones para los tres
mtodos ensayados son menores. Tambin
los valores de concentracin de azcares
reductores totales en g/100 ml tienden a
acercarse al valor del Brix ensayado. Esta
ICIDCA No. 2, 2006

tendencia se reporta por el MACU para

soluciones puras de sacarosa, a medida que
estas soluciones son ms diluidas la concordancia Brix-g/100 ml de sacarosa es mayor.
El aumento de la concentracin de sacarosa
en los jugos influye directamente en la densidad del jugo, alejando progresivamente los
valores de concentracin de azcares reductores en g/ 100 ml del valor del Brix ensayado.
3.3 Determinacin de azcares reductores
totales en soluciones de sacarosa puras
Se realiz un estudio de determinacin
de azcares reductores totales en soluciones
puras de sacarosa. La tabla 2 muestra los
resultados obtenidos por los tres mtodos
ensayados y la figura 7 las desviaciones
obtenidas por los tres mtodos para cada
concentracin de sacarosa.
Al igual que en los experimentos con
jugos de caa mezclados se obtuvo una
mayor desviacin en el mtodo del DNS en
caliente, utilizando esta metodologa se
sobrestima la determinacin de azcares
reductores totales en soluciones de sacarosa
puras. Se obtuvieron menores desviaciones

Figura 7. Desviacin en la determinacin de

azcares reductores totales en g/L para el mtodo del DNS en fro, el DNS en caliente y el mtodo del Eynon-Lane.

para el mtodo de Eynon-Lane, seguido del

mtodo del DNS en fro. Este resultado
difiere del obtenido en jugos de caa de
azcar mezclado donde el mtodo que mostr las menores desviaciones fue el DNS en
fro seguido del Eynon- Lane. La presencia
de fangos, cenizas y otros contaminantes en
los jugos de caa pudiera estar afectando en
mayor medida la determinacin de azcares
reductores totales por el mtodo de EynonLane.
CONCLUSIONES
Se estableci un procedimiento para la
determinacin de reductores totales en
jugos mezclados de caa de azcar por el
mtodo del cido 3,5 dinitrosaliclico.
Utilizando este procedimiento el DNS en
fro mostr menores o comparables desviaciones a las obtenidas cuando la determinacin se realiz por el mtodo de
Eynon y Lane. Con el mtodo del DNS en
caliente se obtuvieron las mayores desviaciones por lo que no es recomendable su
uso para la determinacin de azcares
reductores totales en los tipos de sustratos
ensayados.
El mtodo del DNS en fro mostr altos
coeficientes de correlacin g/L de azcares
reductores totales vs Brix jugo. Tambin se
demostr que el mtodo del DNS en fro es
ms productivo que el mtodo tradicional
de Eynon-Lane, siendo sta una ventaja
importante para la posible inclusin del
mismo en la marcha analtica diaria de una
destilera de alcohol. Adems, se demostr
que los contaminantes presentes en los
jugos de caa de azcar afectan, en mayor
medida, la determinacin de azcares
reductores totales por el mtodo de EynonLane.

Tabla 2. Resultados de la concentracin de azcares reductores totales en g/L por el

mtodo de DNS en fro, DNS en caliente y Eynon -Lane
C (Sacarosa) g/l
140
120
100
80
60

ICIDCA No. 2, 2006

g/l DNS frio

142,2519913
128,1317886
106,0463432
87,94351919
51,19478639

g/l DNS caliente

162,6101142
144,502447
115,954323
96,7862969
55,02446982

Eynon-Lane
132
121
96
82
63

49

Agradecimientos
Los autores desean dejar constancia de
su gratitud al MSc Reynaldo Fraga y al Dr.
Antonio Bell.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Manual de tcnicas analticas, ICIDCA,1974.
2. Biart J. R, Manual de Tcnicas analticas
de las plantas de Levadura, ICIDCA ,1976.
3. Catlogo de Normas Cubanas, NC 81-42:
88, 2004
4. International Commission of Unified
Methods of Sugar Analysis (ICUMSA),
Methods Book, 2005.
5. Lane J. H., Eynon L., Int. Sug. J. 25, 143,
1923.

50

6. Sumner J. B., J. Biol. Chem. 47, 5, 1921.

7. Sumner J. B., J. Biol. Chem. 62, 287, 1924.
8. Sumner J. B., J. Biol. Chem. 65, 393, 1925.
9. Sumner J. B. y Sisler E. B., Arch. Biochem
4, 333, 1944.
10. Miller G. L., Anal. Chem. 31, 426, 1959.
11. Rivers D. B., Granchek S. J., Woodfoord
L.C. y Emert G. H., Biotechnol. and
Bioeng. 26, 800, 1984.
12. Otero M. A. y colaboradores,
Limitaciones del mtodo del cido 3,5
DNS en mieles finales, Revista ICIDCA No
1, XX, 1986.
13. Manual analtico para el Control
Unificado (MACU) de alcohol y levadura
Sacharomyces. Control analtico Parte 1,
Cuba, 1975.

ICIDCA No. 2, 2006