PRUEBAS CUALITATIVAS (EXTRACCIN EN PLANTAS)

Pruebas para Grupos Funcionales

Para realizar las pruebas se utilizaron soluciones a 50 mg/ml de los extractos
disueltos en metanol (es un ejemplo)
Prueba de Liebermann-Burchard: Prueba utilizada para determinar triterpenos y
compuestos esteroidales. Se coloc una gota de la solucin del extracto sobre una
placa de porcelana de 12 pozos, se evapor el solvente y posteriormente se
agreg una gota de cloroformo y dos gotas del reactivo; posteriormente se
observaron cambios de coloracin. El reactivo utilizado se prepar utilizando una
gota de cido sulfrico a una mezcla de 1.0 ml de anhdrido actico y 1.0 ml de
cloroformo.

Prueba de Salkowski: Se utiliz para determinar esteroles y metilesteroles, es

similar a la de Liebermann-Burchard, la muestra en cloroformo se puso en
contacto con una gota de cido sulfrico, la prueba fue positiva s se desarrollaron
colores amarillo o rojo.
Prueba de Shinoda: Se utiliz para la identificacin de compuestos de tipo
flavonoide; 1.0 mg de la muestra se disolvieron en metanol y unas limaduras de
magnesio, se le aplic calor (60C) y despus unas gotas de HCl por las paredes.
Se consider positiva con la aparicin de colores naranja, rojo, rosa, azul o violeta.
Prueba de Baljet: Para sesquiterpenlactonas, se utilizan 2 soluciones que se
mezclan en volmenes iguales antes de usarse, la solucin A, un gramo de cido
pcrico en 100 ml de metanol; solucin B, 10 g de hidrxido de sodio en 100 ml de
agua. Para la prueba se colocan 10 mg de compuesto y 3-4 gotas de reactivo, la
prueba es positiva si se forma una coloracin naranja o rojo obscuro.
Prueba de Dragendorff: Se utiliza la modificacin de Munier y Machelobuf para la
determinacin de alcaloides. Para ello se preparan dos soluciones, la solucin A

con 0.85 g de nitrato de bismuto, los cuales se mezclaron con 10 ml de cido

actico glacial y 40 ml de agua y Solucin B con 8 g de yoduro de potasio disuelto
en 20 ml de agua. El reactivo se prepara mezclando 5 ml de A, 4 ml de B y 100 ml
de agua (este reactivo es estable por un ao). Se disuelven de 1 2 mg de la
muestra en etanol y se colocan unas gotas en una placa de porcelana, luego se
aaden unas gotas del reactivo, la prueba es positiva si se presentan coloraciones
rojo o naranja, persistentes por 24 h.
Prueba de bromo en tetracloruro de carbono: Para insaturaciones, a 2 mg de la
muestra se le agregan una solucin de bromo al 2 % en tetracloruro de carbono; la
prueba se considera positiva si la coloracin de la solucin desaparece al
principio.
Prueba del permanganato de potasio: Para dobles enlaces, se prepar una
solucin de permanganato de potasio al 2 % en agua, se disuelven 0.2 mg de la
muestra en agua, acetona, o metanol, se toma con un capilar y se le agrega la
solucin de permanganato de potasio. La prueba es positiva si se produce la
decoloracin del reactivo.
Prueba de 2,4- Dinitrofenilhidracina: Para grupo carbonilo. En un tubo de ensaye
se disuelven 50 mg de 2,4-dinitrofenilhidracina en 1 ml de metanol caliente. Se
agregan 50 mg del compuesto carbonlico y se calent a bao Mara por 10 a 15
min; se deja en reposo y se enfro en bao de hielo, la aparicin de un precipitado
naranja indica la presencia de un grupo carbonilo.
Prueba de Molisch: Para azcares. En un tubo de ensaye se coloca la muestra, se
aadieron 3 gotas del reactivo de Molisch, y se agit. Despus se inclina el tubo y
se deslizan por la pared 2 ml de cido sulfrico concentrado. La prueba es positiva
si se forma un anillo coloreado en la interfase. El reactivo se prepara disolviendo 1
g de -naftol en 100 ml de metanol al 95 %.
Prueba de NaOH: Para determinar lactonas. Se disolvieron 1-2 mg de muestra en
solucin alcohlica de NaOH al 10 %. La presencia de color naranja que
desaparece al agregar HCl indica la presencia de un anillo lactnico.

Prueba de Brntrager: Para determinar naftaquinonas y antraquinonas. Se hierve

por 10 min una pequea porcin de extracto con hidrxido de potasio (KOH 2-5%)
para luego enfriarla, se acidula con HCl 1N y se extrae con benceno. La capa se
separa y se agita con un poco de la solucin de KOH. Si la fase del benceno se
decolora y la alcalina se torna roja, esto indic presencia de quinonas.
Prueba del cloruro frrico FeCl3: Para determinar oxihdrilos fenlicos. Se
disuelven 1 a 2 mg del extracto muestra en 1 ml de etanol, mas una gota de
solucin de cloruro frrico en agua al 15 %. Fue positiva para la presencia de
oxihdrilos fenlicos con la aparicin de coloracin o precipitado rojo, azul, violeta
o verde.
Cumarinas: Se disuelve una porcin de extracto muestra (1-2 mg) en solucin
alcohlica de KOH al 10 %. Una coloracin amarilla, que desapareci al acidular
con HCL 1N se registra como positiva.
Prueba del bicarbonato de sodio. La sal se prepara al 10% en agua. Se disuelven
de 1-2 mg de la muestra disuelta en agua o etanol y se le agregan de 2-3 gotas de
cido sulfrico concentrado. Se agita ligeramente. Luego se agregan 2-3 gotas de
la solucin de bicarbonato de sodio. La aparicin de burbujas y su permanencia
por ms de 1 minuto indican la presencia de saponinas.
Prueba del H2SO4. Una pequea cantidad de muestra se disuelve en H2SO4 y se
observa coloracin amarilla para flavonoides, naranja-guinda para flavonas, rojoazuloso para chalconas y rojo-prpura para quinonas.
Prueba del cido sulfrico-formaldehdo. Se prepara una mezcla de 1 mr. De cido
sulfrico concentrado con una gota de formaldehdo. Se agregan de 1-5 mg. de la
muestra disuelta en disolvente no aromtico, se aaden unas gotas de la mezcla
anterior y si aparece un color rojo-violeta, la prueba es positiva para compuestos
aromticos. (Harborne J.B., 1998)