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Principio tericos:
Todo analito molecular es capaz de absorber ciertas longitudes de ondas caractersticas de radiacin
electromagnticas, en este proceso la energa de las radiaciones transferida temporalmente a la molcula
disminuyen la intensidad de la radiacin.
Cuando un haz de luz monocromtico atraviesa una capa de solucin con espesor b (cm) y una
concentracin c de una especie absorbente, la intensidad del haz disminuye de I0 a I debido a la
interaccin entre los fotones y las partculas absorbentes.
La transmitancia T de la solucin se define como la fraccin de radiacin incidente trasmitida por la
solucin. Esta es comnmente expresada como porcentaje.
T= I
I0
La absorbancia de una solucin se defina por la ecuacin:
A = - log T = - log I
I0
La absorbancia de una solucin aumenta conforme disminuye la trasmitancia .
De acuerdo a la ley de Beer, la absorbancia esta relacionada linealmente con la concentracin de la
especie absorbente (c) y con la longitud de la trayectoria (b) de la radiacin en el medio absorbente. Es
decir :
A= a . b . c
Donde a es una constante de proporcionalidad denominada absortividad . Puesto que la absortividad
debe tener unidades que cancelen las unidades de b y de c ,cuando la concentracin c se expresa en
moles por litro y b en cm, se representa a a con el smbolo . Por lo tanto :
A= .b.c
Abs
Finalizando se puede aseverar que las distintas tcnicas fotocolorimtricas y espectromtrica indican la
longitud de onda ms adecuada a utilizar a los efectos de lograr la mxima variacin de la propiedad
medida para un mismo incremento de concentracin.
2
3
Reactivos:
* Soluciones de K2CrO4 (cromato de potasio) de concentracin conocida (patrones).
* Soluciones de KMnO4 (permanganato de potasio) de concentracin conocida (patrones).
* Solucin de ambos analitos de concentracin desconocida
Procedimiento:
Se utilizar un espectrofotmetro cumplimentando los siguientes pasos:
1.- Cargar la cubeta del espectrofotmetro con: el blanco, los distintos patrones, y la muestra incgnita.
Primero se coloca el blanco (agua destilada), se selecciona la longitud de onda requerida, se lleva a cero
el equipo y luego se mide a esa longitud de onda la absorbancia de las distintas soluciones empezando
por la ms diluida. Pero puede ser suficiente el uso nico de la solucin de mayor concentracin.
2.- Manipular la cubeta del espectrofotmetro por las caras esmeriladas de la misma.
3.- Enjuagar las cubetas con agua destilada antes de colocar cada nueva sustancia y limpiar las caras no
esmeriladas con papel tis, para evitar errores en la lectura.
4.- Seleccionar la longitud de onda deseada (la que me d la mayor absorbancia, segn la coloracin de
la muestra) y leer cada 20 nm entre entre los valores de longitud de onda esperados y luego cada 50 nm.
Siempre variar entre los 400 y 700nm.
5.- Construir los espectrogramas de absorbancia de las sustancias utilizando las soluciones en las
distintas concentraciones.
6.- Determinar las concentraciones incgnitas de las soluciones cuyas concentraciones se desconocen,
mediante la curva de calibrado y analticamente usando la Ley de Lambert-Beer
Observaciones :
* Para poder leer en el espectrofotmetro la absorbancia primeramente se cargan los tubos con el blanco,
las distintas muestras, y la muestra incgnita y se secan exteriormente cuidando de no rayarlos, luego se
los coloca en el porta muestra y se cierra.
* Antes de utilizar el equipo es imprescindible leer el manual del mismo.
* Una vez terminadas de leer todas las absorbancias se procede cambiar la longitud de onda y se realiza
de la misma forma que en el punto anterior.
* A la longitud de onda correspondiente a la absorcin mxima, realizar las curva de calibrado y
determinar la concentracin de la incgnita.
Resultados: (resultados obtenidos del espectrofotmetro)
H3O+ + InC.
C.
que tambin puede escribirse tomando el logaritmo negativo de Ka : - log Ka = pKa como:
Se construye una grafica de log [ In- / HIn ]eq vs pH que de acuerdo con la ecuacin (3) o (3 a ) da orign
a una recta cuyo punto de cruce en cero, en el eje de pH corresponde al valor de pk, ya que cuando las
concentraciones de In- e HIn son iguales la fraccin vale uno y el logaritmo decimal tiene valor de cero y
por lo tanto pka = pH.
El problema analtico planteado, como se indic, es la determinacin de las concentraciones de In- e HIn
en cada solucin. Si se conocen los espectros del indicador sin disociar y disociado, es posible conocer
la(s) longitud(es) de onda de absorcin y los correspondientes coeficientes de absortividad molar para
cada especie y plantear las ecuaciones para anlisis simultneo de mezclas o aditividad de absorbancias
(tema tratado anteriormente). As para cualquier valor de pH se puede plantear que la absorbancia de la
mezcla medida a una longitud de onda dada es: