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TRABAJO PRACTICO N 5: ABSORCIOMETRA

Principio tericos:
Todo analito molecular es capaz de absorber ciertas longitudes de ondas caractersticas de radiacin
electromagnticas, en este proceso la energa de las radiaciones transferida temporalmente a la molcula
disminuyen la intensidad de la radiacin.
Cuando un haz de luz monocromtico atraviesa una capa de solucin con espesor b (cm) y una
concentracin c de una especie absorbente, la intensidad del haz disminuye de I0 a I debido a la
interaccin entre los fotones y las partculas absorbentes.
La transmitancia T de la solucin se define como la fraccin de radiacin incidente trasmitida por la
solucin. Esta es comnmente expresada como porcentaje.
T= I
I0
La absorbancia de una solucin se defina por la ecuacin:
A = - log T = - log I
I0
La absorbancia de una solucin aumenta conforme disminuye la trasmitancia .
De acuerdo a la ley de Beer, la absorbancia esta relacionada linealmente con la concentracin de la
especie absorbente (c) y con la longitud de la trayectoria (b) de la radiacin en el medio absorbente. Es
decir :
A= a . b . c
Donde a es una constante de proporcionalidad denominada absortividad . Puesto que la absortividad
debe tener unidades que cancelen las unidades de b y de c ,cuando la concentracin c se expresa en
moles por litro y b en cm, se representa a a con el smbolo . Por lo tanto :
A= .b.c

donde tiene unidades de L cm-1 mol-1 .

Abs

Espectro de soluciones de distintas concentracin de un analito C 3 C2 C1

Finalizando se puede aseverar que las distintas tcnicas fotocolorimtricas y espectromtrica indican la
longitud de onda ms adecuada a utilizar a los efectos de lograr la mxima variacin de la propiedad
medida para un mismo incremento de concentracin.

2
3

Curva de calibrado ( A vs C ) y ( log T vs C ) a distintas long. de onda de trabajo.


En el espectro de la figura numero uno se observa que la mxima absorbancia corresponde a la longitud
de onda 1 con respecto a 2 y 3.
Efectivamente al hacer incidir un haz de longitud de onda 1 se produce la mayor variacin de la
absorbancia al variar la concentracin, producindose en menor grado cuando el haz incidente tenga la
longitud de onda 2 o 3. .Es decir, que el filtro o monocromador a utilizar debe trasmitir la longitud de
onda de mxima absorbancia de la sustancia a analizar para obtener la mayor sensibilidad.
Esto puede verificarse en la prctica trazando la curva de calibrado de A= f (c) o logT= f(c) para los
distintos filtros. En la figura 2 se puede apreciar que al trabajar a la longitud de onda 1 se produce
mayor variacin de la propiedad medida (absorbancia o transmitancia) para igual variacin de la
concentracin, con el consiguiente aumento de la sensibilidad (o lo que es lo mismo la seleccin de
mejor longitud de onda de trabajo).
Uno de estos casos se presenta cuando por razn de comodidad u otras, se desea ajustar la zona de
concentracin cubierta por la curva de calibrado a una determinado rango de valores que se encontrara
en la prctica; en este caso a veces es necesario disminuir la sensibilidad, no usando el filtro o la
longitud de onda ms adecuada. Otro caso se produce cuando existen interferencias en la solucin (que
nos lleven a obtener datos falsos), los cuales para ser eliminados nos obligan a utilizar una longitud de
onda no adecuada.

1.- Determinacin de la concentracin de una muestra de concentracin desconocida.


OBJETIVOS:
Seleccionar la longitud de onda de mxima absorbancia para la determinacin de analitos en soluciones
acuosas.
Calcular la concentracin de una incgnita de la misma.
Aparatos y materiales:
* Fotocolormetro o especrofotmetro.
* Cubetas adecuadas.
* Papel milimetrado.

Reactivos:
* Soluciones de K2CrO4 (cromato de potasio) de concentracin conocida (patrones).
* Soluciones de KMnO4 (permanganato de potasio) de concentracin conocida (patrones).
* Solucin de ambos analitos de concentracin desconocida
Procedimiento:
Se utilizar un espectrofotmetro cumplimentando los siguientes pasos:
1.- Cargar la cubeta del espectrofotmetro con: el blanco, los distintos patrones, y la muestra incgnita.
Primero se coloca el blanco (agua destilada), se selecciona la longitud de onda requerida, se lleva a cero
el equipo y luego se mide a esa longitud de onda la absorbancia de las distintas soluciones empezando
por la ms diluida. Pero puede ser suficiente el uso nico de la solucin de mayor concentracin.
2.- Manipular la cubeta del espectrofotmetro por las caras esmeriladas de la misma.
3.- Enjuagar las cubetas con agua destilada antes de colocar cada nueva sustancia y limpiar las caras no
esmeriladas con papel tis, para evitar errores en la lectura.
4.- Seleccionar la longitud de onda deseada (la que me d la mayor absorbancia, segn la coloracin de
la muestra) y leer cada 20 nm entre entre los valores de longitud de onda esperados y luego cada 50 nm.
Siempre variar entre los 400 y 700nm.
5.- Construir los espectrogramas de absorbancia de las sustancias utilizando las soluciones en las
distintas concentraciones.
6.- Determinar las concentraciones incgnitas de las soluciones cuyas concentraciones se desconocen,
mediante la curva de calibrado y analticamente usando la Ley de Lambert-Beer
Observaciones :
* Para poder leer en el espectrofotmetro la absorbancia primeramente se cargan los tubos con el blanco,
las distintas muestras, y la muestra incgnita y se secan exteriormente cuidando de no rayarlos, luego se
los coloca en el porta muestra y se cierra.
* Antes de utilizar el equipo es imprescindible leer el manual del mismo.
* Una vez terminadas de leer todas las absorbancias se procede cambiar la longitud de onda y se realiza
de la misma forma que en el punto anterior.
* A la longitud de onda correspondiente a la absorcin mxima, realizar las curva de calibrado y
determinar la concentracin de la incgnita.
Resultados: (resultados obtenidos del espectrofotmetro)

2.- Determinacin espectrofotomtrica del pKa de un indicador cido-base.


OBJETIVOS:
Determinar la constante de equilibrio de disociacin de un indicador cido-base utilizando medidas
espectrofotomtricas.
Fundamentos:
El colorante verde de bromocresol es un indicador cido-base monoprtico. El equilibrio de disociacin
en solucin acuosa:
HIn + H2O
C (1-)

H3O+ + InC.
C.

donde: Ka = [H3O+] . [In-] / [HIn]


Aplicando logaritmos: log Ka = log [H3O+] + log [In-] / [HIn] (1)
Multiplicando ambos miembros por (-1): pKa = pH + log [In-] / [HIn] (2)
Reemplazando [HIn] y [In-] en funcin de : pKa = pH + log (1 ) /
Es posible obtener el pK de un indicador cido-base determinando la magnitud de la relacin logartmica
que aparece en las ecuaciones (2) (3), para un pH dado, en el que ambas se encuentran en equilibrio.
Si tanto In- como HIn obedecen a la ley de Lambert-Beer, sus concentraciones pueden determinarse
espectrofotomtricamente, mtodo que posee la ventaja de no perturbar el equilibrio.
Para ellos se determinan los espectros de absorcin, como mnimo, de tres soluciones, que contengan la
misma concentracin total del indicador a diferentes pH:
1) solucin cuyo pH es tal que el indicador se encuentra totalmente en su forma disociada (In -). La
denominamos solucin del indicador a pH alcalino.
2) Solucin en la que el indicador se encuentra totalmente en su forma no disociada (HIn). Es la solucin
de pH intermedio del indicador a pH cido.
3) Solucin de pH intermedio del indicador en el que ambas formas se encuentran presentes en la
cantidad apreciable.
Los tres espectros se cortan en un punto llamado punto isobstico o isoabsortivo. es el punto en el cual
las absortividades molares In- y HIn se igualan; y esto es caracterstico de un sistema que contiene dos
cromferos interconvertibles. La existencia de un punto isoabsortivo es la evidencia de que existe un
equilibrio qumico entre dos especies.
Se selecciona una longitud de onda e, a la los espectros de la forma cida y bsica estn lo ms alejados
posible, y se determinan las absorbancias de las tres soluciones.
En la solucin de pH intermedio, el trmino logartmico de las ecuaciones (2) (3) puede determinarse
en funcin de las absorbancias. En el caso representado en la figura, resulta:
pKa = pH + log (Absica Aintermedia) / ( Aintermedia Acida) (4)
Muchos indicadores utilizados en las valoraciones cido-base son molculas orgnicas que poseen uno o
ms protones que pueden ser cedidos o bien poseen grupos que pueden aceptar protones, comportndose
como cidos o bases. Segn sea el medio en el que se encuentren en solucin la especie - cida o bsicapredominante en solucin depende del pH del medio que los contiene. Generalmente estas sustancias son
cidos o bases dbiles y se utilizan como indicadores debido a que sus iones presentan un color
diferente- o longitud de onda de absorcin diferente- al de la forma sin disociar.
En forma general un indicador cido se puede- en medio acuoso- representar por el equilibrio:

Cuya constante de equilibrio o constante de acidez, tomando f =1 sera:

que tambin puede escribirse tomando el logaritmo negativo de Ka : - log Ka = pKa como:

reordenando esta ecuacin se tiene:


pka - pH = - log [ In- / HIn ]eq (3)
pH = pka + log [ In- / HIn ]eq (3a)
En el caso del indicador cido si se hallan las concentraciones de In- e HIn en el equilibrio y se mide el
pH de dicha solucin del indicador es posible calcular la constante.
Experimentalmente la metodologa seguida consiste en preparar varias soluciones del indicador de la
misma concentracin pero con diferentes valores de pH (utilizando soluciones buffer para mantener el
pH constante) y a cada solucin se le registra su curva espectral. Seleccionando las longitudes de onda
adecuadas se pueden determinar las concentraciones de In- e HIn en el equilibrio para cada solucin (por
anlisis simultneo).

Se construye una grafica de log [ In- / HIn ]eq vs pH que de acuerdo con la ecuacin (3) o (3 a ) da orign
a una recta cuyo punto de cruce en cero, en el eje de pH corresponde al valor de pk, ya que cuando las
concentraciones de In- e HIn son iguales la fraccin vale uno y el logaritmo decimal tiene valor de cero y
por lo tanto pka = pH.

El problema analtico planteado, como se indic, es la determinacin de las concentraciones de In- e HIn
en cada solucin. Si se conocen los espectros del indicador sin disociar y disociado, es posible conocer
la(s) longitud(es) de onda de absorcin y los correspondientes coeficientes de absortividad molar para
cada especie y plantear las ecuaciones para anlisis simultneo de mezclas o aditividad de absorbancias
(tema tratado anteriormente). As para cualquier valor de pH se puede plantear que la absorbancia de la
mezcla medida a una longitud de onda dada es:

pka = pH - log [ AIn,pH / ( ApH MUY BASICO -AIn,pH ) ]

Se estudiar el indicador verde de bromocresol, que pertenece a la familia de colorantes de la


sulfonftalena; de la que tambin forman parte el azul de bromocresol, prpura de bromocresol, azul de
bromotinol, rojo de fenol y rojo de cresol.
Como regulador del pH, se utilizar el sistema cido actico-acetato, para obtener valores de pH
prximos al pKa del indicador.
Soluciones stock utilizadas:
- Solucin 2,5.10-5 M del indicador a pH alcalino: en matrz de 100 ml coloque 5,0 ml de la solucin
stockdel indicador, agregue 5 ml de NaAc 0,2 M y lleve con agua destilada.
- Solucin 2,5.10-5 M del indicador a pH cido: en matrz de 100 ml coloque 5,0 ml de la solucin stock
del indicador, agregue 3 gotas de HCl concentrado (12M) y lleve a volumen con agua destilada.
- Solucin 2,5.10-5 M del indicador a pH intermedio: en matrz de 100 ml coloque 5,0 ml de la solucin
stock del indicador, agregue 5 ml de NaAc 0,2 M y 10 ml de HAc 0,1 M y lleve a volumen con agua
destilada.
Procedimiento:
Obtener los espectros de las tres soluciones del indicador a diferentes pH midiendo la absorbancia de
cada una de las soluciones a intervalos de 20 nm desde 400 hasta 700 nm, utilizando blanco de agua
destilada. Con el peachmetro determine el pH de la solucin del indicador a pH intermedio.
Clculos y resultados:
1.- Representar grficamente (sobre papel milimetrado) en una misma figura los valores de A vs. ledos
para las tres soluciones de distinto pH del indicador. Seale el punto isosbstico.
2.- Seleccionar e y extraer de la grfica los valores de Absica, Aintermedia y Acida. Efectuar los clculos.
3.- Comparar el valor de pKa obtenido con datos de las tablas.

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