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NTE INEN 0300 (1980) (Spanish): Leche en

polvo. Determinacin de la grasa

CDU: 637

AL 03.01-302

Norma Tcnica
Ecuatoriana

LECHE EN POLVO.
DETERMINACIN DE LA GRASA

INEN 300
1977-06

Instituto Ecuatoriano de Normalizacin, INEN Casilla 17-01-3999 Baquerizo Moreno E8-29 y Almagro Quito-Ecuador Prohibida la reproduccin

1. OBJETO
1.1 Esta norma tiene por objeto establecer los mtodos para determinar el contenido de grasa en la
leche en polvo.
2. ALCANCE
2.1 Esta norma se aplica a los siguientes tipos de leche:
a)
b)
c)

Tipo I. Leche entera en polvo.

Tipo II. Leche semidescremada en polvo.
Tipo III. Leche descremada en polvo.

2.2 En esta norma se describen el mtodo Teichert y el mtodo de Roese Gottlieb.

3. TERMINOLOGIA
3.1 Contenido de grasa en la leche en polvo. Es la cantidad, expresada en porcentaje de masa, de
sustancias, principalmente grasas, extradas de la leche en polvo mediante procedimientos
normalizados.
4. DISPOSICIONES GENERALES
4.1 Para determinar el contenido de grasa en la leche en polvo, podr usarse cualquiera de los dos
mtodos descritos en esta norma. En casos de discrepancia o litigio, deber usarse el mtodo de
Roese Gottlieb.
4.2 Las pipetas volumtricas y los butirmetros Teichert, que se usen para aplicar estos mtodos,
debern estar debidamente estandarizados e inspeccionados.

5. METODO TEICHERT
5.1 Resumen
5.1.1 Separar, mediante acidificacin y centrifugacin, la materia grasa contenida en el producto
analizado y determinar e! contenido de grasa, mediante lectura directa en un butirmetro
estandarizado.
5.2 Instrumental
5.2.1 Pipeta de seguridad, para cido sulfrico.
3

5.2.2 Pipeta volumtrica de 1 cm , para alcohol amlico.

5.2.3 Butirmetro Teichert para leche en polvo, con cuello de 17 a 18 mm de largo, ampolla cerrada
con escud esmerilado, tapn de caucho y clavo de vidrio.

(Contina)
-1-

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5.2.4 Centrfuga, con velocidad de 115,2 10,5 rad/s (1 100 100 r/min).
5.2.5 Bao de agua, con regulador de temperatura, ajustado a 65 2 C.
5.2.6 Balanza analtica. Sensible al 0,1 mg.
5.3 Reactivos
3

5.3.1 Acido sulfrico, para anlisis, con densidad 1,825 0,01 g/cm a 20C.
5.3.2 Alcohol amlico, compuesto principalmente de 3 - metl - butanol y 2 - metil - butanol, y
prcticamente exento de alcoholes amlicos secundarios o terciarios y furfural; deber tener una
3
densidad de 0,881 0,002 g/cm a 20 C.
5.3.3 Agua destilada
5.4 Preparacin de la muestra
5.4.1 La leche en polvo es un producto que absorbe fcilmente humedad y olores extraos; por tanto,
es necesario que todos los utensilios, recipientes, adems de limpios y estriles, estn secos.
5.4.2 La extraccin de la muestra debe realizarse en un ambiente seco y exento de polvo y olores, lo
ms rpidamente posible, procurando reducir al mnimo el tiempo que el producto que se ha de
ensayar permanezca en contacto con el aire.
5.4.3 Transferir la leche en polvo a un frasco limpio, estril y bien seco, de capacidad
aproximadamente dos veces el volumen de la muestra, e inmediatamente tapar y homogeneizar,
invirtiendo varias veces el recipiente que lo contiene.
5.5 Procedimiento
5.5.1 La determinacin debe realizarse por duplicado sobre la misma muestra preparada.
5.5.2 Pesar con aproximacin al 0,1 mg, aproximadamente 2,5 g de muestra preparada, y transferir al
3
butirmetro. Luego aadir 9 cm de agua destilada y agitar fuertemente.
3

5.5.3 Verter 10 cm , exactamente medidos, de cido sulfrico en el butirmetro Teichert, cuidando de

no humedecer con cido el cuello del butirmetro, y agitar.
5.5.4 Verter 1 cm3, exactamente medido, de alcohol amlico en el butirmetro, cuidando de no
humedecer con el alcohol el cuello del butirmetro. El alcohol amlico debe aadirse siempre despus
de la leche, y sacudir inmediatamente durante no menos de 3 segundos.
5.5.5 Tapar hermticamente el cuello del butirmetro y agitar en una vitrina de proteccin, invirtiendo
lentamente al butirmetro dos o tres veces durante la operacin, hasta que las partculas slidas
desaparezcan.
5.5.6 Colocar el butirmetro con su tapa hacia abajo en el bao de agua a 65 2 C, durante un
tiempo no menor de 3 min ni mayor de 10 min, cuidando que la columna de grasa quede sumergida
completamente en el agua.

(Continua)
-2-

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5.5.7 Inmediatamente despus de la agitacin, centrifugar el butirmetro con su tapa colocada

hacia afuera; si no hay un nmero suficiente de butirmetros para llenar completamente la centrfuga,
colocarlos simtricamente, equilibrndolos con uno que contenga igual volumen de agua, caso de ser
necesario. Una vez que la centrfuga alcanza la velocidad necesaria, continuar la operacin durante
un tiempo no menor de 5min ni mayor de 6min a tal velocidad.
5.5.8. Retirar el butirmetro de la centrfuga y colocarlo con la tapa hacia abajo, en el bao de agua
a 65 2 C, durante un tiempo no menor de 3 min n i mayor de 10 min, manteniendo la columna de
grasa completamente sumergida en agua.
5.5.9 Sacar el butirmetro del bao de agua y examinar su contenido. Si no hay una clara divisin
entre la capa grasa y el cido, o si el cido no est limpio, ajustar la tapa del butirmetro y repetir el
procedimiento descrito desde 5.5.6 hasta 5.5.9.
5.5.10 Cuando se han conseguido tas condiciones establecidas en 5.5.9 (ver 5.5.11) y antes de
proceder a la lectura, colocar el nivel de separacin entre el cido y la columna de grasa, sobre la
marca de una graduacin principal de la escala; esto se consigue presionando o aflojando
adecuadamente la tapa del butirmetro. Leer las medidas correspondientes a la parte inferior del menisco
de grasa; la diferencia entre las dos lecturas da el contenido de grasa de la leche. Al realizar las
lecturas, debe mantenerse la escala en posicin vertical y el punto de lectura al mismo nivel de los
ojos. La lectura del menisco debe aproximarse a 0,05% (ver 5.5.11).
5.5.11 Instrucciones adicionales. Si existe formacin de una capa esponjosa o no definida en la base
de la columna de grasa, debe repetirse el ensayo, teniendo cuidado de aadir el volumen correcto de
alcohol amlico y de disolver completamente cualquier partcula blanca de leche. Si la columna de
grasa presenta una coloracin muy oscura que dificulta la lectura, o hay carbonizacin en la interfase,
debe repetirse el ensayo, luego de verificar la densidad del cido sulfrico. El butirmetro debe lavarse
perfectamente al final de la operacin (ver Anexo A).

6. MTODO ROESE GOTTLIEB

6.1 Resumen
6.1.1 Se extrae, con ter de petrleo y ter dietlico, la grasa contenida en un extracto amnicoetanlico de la leche en polvo; se evaporan los solventes y se pesa el residuo.
6.2 Instrumental
6.2.1 Balanza analtica, sensible al 0,1 mg.
6.2.2 Tubos o matraces de extraccin, provistos con tapones de vidrio esmerilado, neopreno u otro
material que no sea afectado por los solventes utilizados,
3

6.2.3 Matraces Erlenmeyer de 150a 250 cm .

6.2.4 Estufa, con ventilacin y regulador de temperatura, ajustada a 103 2 C, o estufa al vaco,
ajustada a una temperatura de 70 a 75 C y presin menor de 66 kPa (50 mm Hg).

(Continua)
-3-

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6.2.5 Material para facilitar la ebullicin, exento de grasa, no poroso; se recomienda perlas de vidrio o
de otro material adecuado.
6.2.6 Desecador, con cloruro de calcio anhidro u otro deshidratante adecuado.
6.2.7 Bao Mara.
6.2.8 Centrfuga, provista con motor trifsico (para evitar la formacin de chispas que puede producir
explosin con los solventes) y capaz de mantener una velocidad de (500 a 600 r/min) 52,32 a 62,82
rad/s. El uso de la centrfuga es opcional (ver 6.5.9).
6.3 Reactivos
3

6.3.1 Solucin al 25% de hidrxido de amonio, con densidad 0,91 g/cm a 20 C.

6.3.2 Alcohol etlico, solucin al 96% (v/v).
6.3.3 ter dietlico, exento de perxido (ver Anexo B).
6.3.4 ter de petrleo, con cualquier intervalo de destilacin comprendida entre 30 y 60 C.
6.3.5 Mezcla de solventes, preparada poco antes de usarse mezclando volmenes iguales de ter
dietIico y ter de petrleo. En lugar de esta mezcla puede usarse ter dietIico o ter de petrleo,
aisladamente.
6.4 Preparacin de la muestra
6.4.1 Se seguirn las instrucciones sealadas en el numeral 5.4 de esta norma.
6.5 Procedimiento
6.5.1 La determinacin debe realizarse por duplicado sobre la misma muestra preparada.
6.5.2 Secar un matraz Erlenmeyer (que puede contener, si se desea, el material para facilitar la
ebullicin) en la estufa durante 30 a 60 min. Dejarlo enfriar en el desecador y pesarlo con
aproximacin a 0,1 mg.
6.5.3 Dentro del aparato de extraccin o en un recipiente secado y tarado, pesar con
aproximacin a 0,1 mg, aproximadamente 1 g de muestra preparada, si se trata de una leche entera
3
en polvo, 1,5 g de leche semi - descremada o descremada en polvo. Agregar 10 cm de agua y
agitar hasta dispersin to-tal de la muestra.
3

6.5.4 Agregar a la porcin de ensayo 1,5 cm de la solucin al 25% de hidrxido de amonio, agitar
suavemente el recipiente o el matraz de extraccin sobre el bao Marta a 70 C por 15 min y luego
enfriarlo bajo un chorro de agua corriente.
6.5.5 Si la digestin de la porcin de ensayo ha sido efectuada dentro del matraz de extraccin (ver
3
6.5.8), aadir 10 cm de alcohol etlico y mezclar el contenido, en forma suave y completa,
manteniendo abierto el matraz.

(Continua)
-4-

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6.5.6 Agregar 25 cm de ter dietlico, cerrar el matraz de extraccin humedeciendo previamente el

cuello de la tapa y agitarlo enrgicamente, invirtindolo repetidamente durante un minuto; si es
necesario, enfriarlo bajo un chorro de agua.
3

6.5.7 Quitar cuidadosamente el tapn y aadir 25 cm de ter de petrleo, empleando los primeros
centmetros cbicos para enjuagar el tapn y el interior del cuello del matraz de extraccin, y
recogiendo el lquido del enjuague dentro del matraz. Colocar el tapn y mezclar el contenido agitando
e invirtiendo el matraz repetidamente durante 30 segundos; continuar con lo indicado en 6.5.9.
6.5.8 Si la digestin de la porcin de ensayo ha sido efectuada dentro de un recipiente diferente del
matraz de extraccin, transferir el contenido del recipiente al matraz de extraccin, enjuagando el
3
3
3
recipiente sucesivamente con 10 cm de alcohol etlico, 25 cm de ter etlico y 25 cm de ter de
petrleo, y transfiriendo cada vez el solvente al matraz de extraccin y agitando el matraz como se
indic anteriormente.
6.5.9 Dejar el matraz en reposo hasta que la capa superior etrea est lmpida y completamente
separada de la capa acuosa; la separacin puede tambin efectuarse usando la centrfuga. Quitar
cuidadosamente el tapn, enjuagarlo junto con el interior del cuello del matraz con unos pocos
centmetros cbicos de la mezcla de solventes, recogiendo los lquidos del enjuague dentro del
matraz.
6.5.10 Transferir lo ms completamente posible, mediante decantacin o con la ayuda de un sifn
(ver nota 1), la capa superior etrea al matraz Erlenmeyer tarado (ver 6.5.2), teniendo cuidado de no
arrastrar ninguna porcin de capa acuosa. Luego, a continuacin, enjuagar el tapn del matraz y el
sifn con una pequea porcin de ter de petrleo, que se incorpora al contenido del matraz
Erlenmeyer.
6.5.11 Repetir la extraccin dos veces ms, siguiendo el procedimiento indicado desde 6.5.6 hasta
3
3
6.5.9, pero usando cada vez 15 cm de ter dietlico y 15 cm de ter de petrleo, y omitiendo el
enjuague final en la ltima extraccin.
6.5.12 Evaporar o destilar la mayor cantidad de solvente posible (incluyendo el alcohol etlico). Si
el matraz Erlenmeyer es de poca capacidad, ser necesario eliminar de esta manera parte del
solvente despus de cada extraccin.
6.5.13 Cuando ya no se detecte el olor de los solventes, calentar el matraz inclinado sobre su costado,
durante una hora, dentro de la estufa a 103 2 C. Dejar enfriar el matraz en el desecador y pesarlo
con aproximacin a 0,1 mg. Repetir el calentamiento por perodos de 30 a 60 min, enfriando y
pesando hasta que no haya disminucin en la masa.
6.5.14 Agregar de 15 a 25 cm3 de ter de petrleo, para verificar si el material extrado es
completamente soluble, calentar suavemente y agitar hasta que toda la grasa se haya disuelto. Si el
material extrado es completamente soluble en el ter de petrleo, la masa de grasa es la diferencia
entre la masa final del matraz con el extracto y la masa original del matraz vaco (ver 6.5.2).

(Continua)
_________________________
NOTA 1. Cuando la transferencia se realiza por decantacin, puede ser necesario aadir un poco de agua
destilada para llenar el nivel de separacin entre las dos capas y facilitar as la decantacin.
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6.5.15 Si el material extrado no es completamente soluble en el ter de petrleo, o en caso de duda y

siempre en caso de discrepancia o de litigio (ver 4.1), extraer la masa del matraz mediante lavados
sucesivos con ter de petrleo tibio, dejando que el material insoluble se asiente antes de cada
decantacin. Enjuagar la parte exterior del cuello del matraz tres veces. Calentar el matraz con el
material insoluble durante una hora en la estufa, colocndolo en posicin horizontal. Enfriar en el
desecador y, procediendo en la manera indicada al final de 6.5.13, pesar con aproximacin a 0,1 mg.
La masa de grasa, en este caso, es la diferencia entre la masa del matraz con el extracto total y la
masa del matraz con el material insoluble.
6.5.16 Debe realizarse un solo ensayo en blanco sobre 10 cm3 de agua destilada, usando el mismo
instrumental, los mismos reactivos en las mismas cantidades y el mismo procedimiento que para la
muestra. Si la materia extrada excede de 0,5 mg, los reactivos debern purificarse o desecharse.
6.6 Clculos
6.6.1 El contenido de grasa en la leche entera en polvo, leche semidescremada en polvo y leche
descremada en polvo (ver Anexo C) se calcula mediante la ecuacin siguiente:
G=

(m1 m2) (m3 m4)

x 100
m

Siendo:
G
= contenido de grasa, en porcentaje de masa.
m
= masa de la muestra analizada, en g.
m1 = masa del matraz Erlenmeyer con el extracto, en g.
m2 = masa del matraz Erlenmeyer vaco o del matraz Erlenmeyer con el material insoluble, en g.
m3 = masa del matraz Erlenmeyer con el extracto resultante de la determinacin en blanco, en g.
m4 = masa del matraz Erlenmeyer vaco empleado en la determinacin en blanco o del matraz
Erlenmeyer con material insoluble, en g,
6.7 Errores de mtodo
6.7.1 La diferencia entre los resultados de una determinacin efectuada por duplicado no debe
exceder de 0,2%; en caso contrario, debe repetirse la determinacin.
6.8 Informe de resultados
6.8.1 Como resultado final, debe reportarse la media aritmtica de los dos resultados de la
determinacin, aproximada a dcimas.
6.8.2 En el informe de resultados, deben indicarse el mtodo usado y el resultado obtenido. Debe
mencionarse, adems, cualquier condicin no especificada en esta norma, o considerada como
opcional, as como cualquier circunstancia que pueda haber influido sobre el resultado.
6.8.3 Deben incluirse todos los detalles necesarios para la completa identificacin de la muestra.

(Continua)
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ANEXO A
LIMPIEZA DE LOS BUTIROMETROS

A.1 Es conveniente limpiar los butirmetros mientras estn calientes, para mayor facilidad de la
limpieza.
A.2 Quitar los tapones y, luego de verter el cido en una cpsula, lavar los butirmetros llenndolos
parcialmente con una solucin a 40 o 50 C de carb onato de sodio o fosfato trisdico al 2% (o con
algn detergente adecuado), agitndolos enrgicamente para conseguir la limpieza de la ampolla
graduada. Repetir la operacin tres o cuatro veces.
A.3 Enjuagar inmediatamente con agua caliente, dos o tres veces, con agitacin enrgica y,
finalmente, aclararlos con agua fra y colocarlos, con el cuello hacia abajo, en una gradilla para que
goteen y se sequen.
A.4 Debe darse un tratamiento similar a los tapones.
A.5 Inmediatamente antes de usar los butirmetros, es indispensable verificar que stos se
encuentren completamente secos.

(Continua)
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ANEXO B
DETERMINACION DE PEROXIDOS EN EL ETER DIETILICO
3

B.1 Para determinar la presencia de perxidos en el ter dietlico, agregar a 10 crn de ter,
contenidos en una pequea probeta provista de tapn de vidrio esmerilado y previamente lavado con
3
ter, 1 cm de solucin de yoduro de potasio al 10% recin preparada. Agitar bien la mezcla y dejarla
en reposo durante un minuto. No debe aparecer coloracin amarilla en ninguna de las capas.
B.2 El ter dietlico puede mantenerse exento de perxidos, aadindole tiras de zinc, formadas de
una lmina que previamente ha sido sumergida en una solucin diluida y acidificada de sulfato de
2
cobre, durante 1 minuto, y luego lavada en agua. Deben usarse aproximadamente 80 cm de lmina
de zinc para cada litro de ter y debe cortarse la lmina en tiras de una longitud suficiente para llegar
desde el fondo hasta, por lo menos, la mitad del envase.

(Continua)
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ANEXO C
CALCULO DEL CONTENIDO DE GRASA EN EL EXTRACTO SECO
Para determinar el contenido de grasa en el extracto seco de una leche en polvo, puede aplicarse la
expresin aritmtica siguiente;
G' =

G
x 100
100 H

Siendo:
G = contenido de grasa en el extracto seco, en porcentaje de masa.
G = contenido de grasa, en porcentaje de masa.
H = contenido de humedad, en porcentaje de masa.

(Continua)
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APENDICE Z

Z.1 NORMAS A CONSULTAR

Esta norma no requiere de otras para su aplicacin

Z.2 NORMAS PUBLICADAS SOBRE EL TEMA

INEN 3
INEN 4
INEN 17
INEN 299
INEN 301
INEN 302
INEN 303
INEN 304
INEN 305
INEN 306
INEN 307

Leche y productos lcteos. Definiciones.

Leche y productos lcteos. Maestreo.
Leche y productos lcteos. Examen microbiolgico. Disposiciones generales.
Leche en polvo. Determinacin de la humedad.
Leche en polvo. Determinacin de la protena.
Leche en polvo. Determinacin de las cenizas.
Leche en polvo. Determinacin de la acidez.
Leche en polvo. Determinacin de bacterias activas.
Leche en polvo. Determinacin de bacterias coliformes.
Leche en polvo. Determinacin del ndice de solubilidad.
Leche en polvo. Ensayo de la fosfatasa.
Z.2 BASES DE ESTUDIO

Norma Francesa V 04-346. Lait Sec. Determination de la teneur en matire grasse. Association
Francaise de Normalisation. Pars, 1971.
Mtodo AOAC de anlisis. Dairy Products. Fat Roese Gottlieb Method. Official Final Action.
Association of Official Analytical Chemists. Washington, 1970.
DA INSTRUCTION No. 918 - 103 - 1. Methods of laboratory analysis for dry whole milk and non-fat dry
milk. Determination of fat. Washington, D.C., 1970.
Norma Sanitaria OFSANPAN - IAHJTZ 022-01-01. Leche en polvo. Lpidos. OPS/OMS. Oficina
Sanitaria Panamericana. Washington, 1968.
Norma Britnica 696: Part 2. Gerber method for the determination of fat in milk and milk products.
British Standards Institution. Londres, 1969.
Norma Britnica 1743. Methods for the chemical analysis of dried milk. Determination of fat content.
British Standards Institution. Londres, 1968.

-10-

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INFORMACIN COMPLEMENTARIA
Documento:
NTE INEN 300

TITULO: LECHE EN POLVO. DETERMINACIN DE LA Cdigo:

GRASA.
AL 03.01-302

ORIGINAL:
Fecha de iniciacin del estudio:

REVISIN:
Fecha de aprobacin anterior por Consejo Directivo
Oficializacin con el Carcter de
por Acuerdo No.
de
publicado en el Registro Oficial No.
de
Fecha de iniciacin del estudio:

Fechas de consulta pblica: de 1976-05-28

Subcomit Tcnico: Leche y productos lcteos
Fecha de iniciacin:
Integrantes del Subcomit Tcnico:

1976-07-13

Fecha de aprobacin: 1976-10-01

NOMBRES:

INSTITUCIN REPRESENTADA:

Sr. Manuel Tobar Zaldumbide

Dr. Alberto Proao
Ing. Nicols Guilln,
Dr. Germn Fierro y
Dr. Sergio Coellar

HERTOB, PROMISA, EL ANGEL

MINISTERIO DE LA PRODUCCION
MINISTERIO DE LA PRODUCCION
PASTEURIZADORA QUITO, ILESA, SUPER DE
GUAYAQUIL E INDUSTRIA LECHERA
CARCHI
CAMARA DE AGRICULTURA DE LA 1ra. Zona
CAMARA DE AGRICULTURA DE LA 1ra. Zona
PRODUCTOS LACTEOS GONZALEZ
PRODUCTOS LACTEOS GONZALEZ
INSTITUTO NACIONAL DE NUTRICION
INSTITUTO NACIONAL DE NUTRICION
DIRECCIN DE HIGIENE MUNICIPAL
INDUSTRIA LECHERA CAP

Ing. Carlos Molina

Ing. Jaime Flores Gonzlez
Sr. Luis Gonzlez y
Dr. Hernan Avila Orejuela
Dr. Nelson Valle P.
Dr. Gustavo Guerra
Dr. Jorge Donoso
Sr. Carlos Pazmio Gallo
Ing. Federico Schaerer
Ing. Ejvind Christensen
Sr. Jos E. Muoz
Sr. Pablo Lozada
Ing. Jos Arellano
Dra. Leonor Orozco

FAO
FAO

COLEGIO DE QUMICOS DE PICHINCHA

INSTITUTO DE COMERCIO EXTERIOR E INTEGRACIN.

CENTRO DE DESARROLLO CENDES

INEN

Otros trmites: 4 Esta norma sin ningn cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de
OBLIGATORIA a VOLUNTARIA, segn Resolucin de Consejo Directivo de 1998-01-08 y oficializada
mediante Acuerdo Ministerial No. 235 de 1998-05-04, publicado en el Registro Oficial No. 231 del 1998-05-20
El Consejo Directivo del INEN aprob este proyecto de norma en sesin de 1977-07-02
Oficializada como: Obligatoria
Registro Oficial No. 153 del 1980-03-24

Por Acuerdo Ministerial No. 330 del 1980-03-12