Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Cromatografa
Por:
Jorge Eduardo Chvez Rosas
Asesor: Mara Estela Jimnez Encarnacin

4303
2015-2

Ingeniera Qumica

Resumen
Se presenta la informacin experimental que fue recopilada
durante el desarrollo de la cromatografa en capa fina y
columna.
A travs de esta tcnica experimental se pudo conocer y
extraer el pigmento que daba color a los chiles guajillos. La
cromatografa de capa fina sirvi para poder elegir el
disolventes y/o mezclas de disolventes para poder fraccionar
los colores del cual esta compuesto este pigmento.
Posteriormente se logro separar de forma exitosa el color
amarillo contenido en el pigmento natural del chile guajillo
llegando a la conclusin que el mtodo de cromatografa en
capa fina que sirve para elegir el disolvente adecuado es una
tcnica laboriosa e imprecisa

Introduccin
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la
separacin de especies qumicas estrechamente relacionadas
en mezclas complejas. La cromatografa es un mtodo fsico
de separacin basado en la distribucin de los componentes
de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o
estacionaria y otra mvil.
En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se
disuelve en una fase mvil, que puede ser un gas un lquido o
un fluido supercrtico. Esta fase mvil se hace pasar a travs
de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija
en una columna o sobre una superficie slida. Las fases se
eligen de tal forma que los componentes de la muestra se
distribuyen de modo distinto entre la fase mvil y la fase
estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con
ms fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente
con el flujo; por el contrario los componentes que unen
dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez.
Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes
de la muestra se separan en bandas discriminadas que
pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

Cromatografa De Capa Fina

La cromatografa sobre papel es verstil y sus mtodos se
emplean con mucha frecuencia, pero su uso se limita a
separaciones sobre celulosa, ya que otros medios
adsorbentes, como la almina y el gel de slice, no pueden
prepararse en forma de tiras. Esta dificultad puede superarse
fabricando capas finas de estas sustancias sobre placas de

vidrio. Las capas finas preparadas sobre vidrio se denominan

cromatoplacas.

Cromatografa en columna
La cromatografa en columna utiliza una columna de vidrio
vertical que se llena con un soporte slido adsorbente (fase
estacionaria: los ms utilizados son gel de slice (SiO2) y
almina (Al2O3). La muestra que se quiere separar se
deposita en la parte superior de este soporte. El resto de la
columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la
fase mvil) que, por efecto de la gravedad, hace mover la
muestra a travs de la columna. Se establece un equilibrio
entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el
disolvente eluyente que fluye por la columna.

Objetivos
Generales
Seleccionar a tcnica cromatogrfica para separacin de
compuestos coloridos y no coloridos.
Identificar a la cromatografa en capa fina como una
herramienta en la determinacin del nmero de componentes
de una mezcla.

Especfico
-Seleccionar la tcnica cromatrografica adecuada para la
separacin de los compuestos que dan color a los chiles
guajillos.

Hiptesis:
En la cromatografa de capa fina se espera tener un ensayo
para encontrar el eluyente ms apto para la CC, siendo este

aquel que sea ms afn a la mezcla problema y muestre una

mayor ascendencia en los componentes del extracto. En la
cromatografa de columna observaremos la separacin de los
componentes del extracto en este caso chiles guajillos.

Materiales
-20 Porta-objetos
-22 frascos gerber
-Charola de aluminio
-Termmetro
-Bureta de 50 ml
Pipeta volumtrica 5ml
-Pipeta graduada2ml
-Pipeta graduada 1ml
-Probeta de 100 ml
-Tubos capilares

-Encendedor
Reactivos y Sustancias
-Benceno
-Tolueno
-Acetona
-Acetato de etilo
-Etanol
-Metanol
-Hexano
-ter de petrleo
-Cloruro de Metileno
-Cloroformo
-Silica Gel para capa fina
-Silica Gel para Columna
-Chiles guajillos
Equipos
-Estufa

Diagrama
1 Capa Fina
-Preparacin de sustrato
-Preparacin de cmaras de elusin
-Preparacin de Papilla
-Preparacin de Placas
-Activacin de Placas
-Punteo
-Colocacin de placas

2 Capa Fina Pruebas de solubilidad

- Preparacin de mezclas
-Preparacin de cmaras de elusin
-Preparacin de Placas
-Activacin de Placas
-Punteo
-Colocacin de placas

Columna
-Preparacin de columna
-empacamiento de la columna
-Puntero en la columna
-Recoleccin de eluatos.

3 Capa Fina
-Preparacin de cmaras de elusin
-Preparacin de Placas
-Activacin de Placas
-Punteo
-Colocacin de placas

Tcnica Experimental
1 Capa Fina
A- Se pesaron y cortaron 20g. De chiles guajillo.
B- Se colocaron en un recipiente mbar y se les adiciono
Cloruro de metileno
De modo que los cubriera y se dejo reposar un da
C -Se filtra el sustrato y se almacena en un frasco mbar
D -Para la papilla se adicionan 30g. De silica gel para capa
fina en un frasco

Y se adiciona Acetato de etilo de forma que esta lo absorba y

se agita de forma vigorosa hasta que presente una
consistencia semilquida
E -Para la preparacin de las placas se colocan de 2 en 2 los
portaobjetos dejando 1cm. Para poder tomarlos, se separan y
esperara que se evapore el solvente cuidado de que no
quedes demasiado gruesas o con grumos
F -Para la activacin se coloca en la estufa durante 20 min. A
110C.
G -Para el punteo se cortara el tubo capilar a la llama para
poder formar una micro pipeta y se coloca dos gotas del
sustrato en la placa ya activada
H- para preparar las cmaras de elusin se cortara papel filtro
dejando una ventana para poder observar y se adicionan 5ml.
De cada disolvente la funcin del papel filtro es que la cmara
pueda absorber los gases de cada solvente
I- colocar las placas y observar como sube el sustrato a travs
de la placa y registrar resultado

2 Capa Fina

A- partiendo de la primera cromatografa se eligieron para la

mezcla de solventes el ter de petrleo, acetona y acetato de
etilo. El primero es menos polar y el segundo y tercero se
comportaron como los ms polares se preparara una mezcla
de estos para las cmaras de elusin en una proporcin de 1:4
como se muestra en el sig. Listado.
ter
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
4.5

- Acetato
4.5
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.5
0.5**

0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0

ter - Acetona
4.5
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
4.5 0.5

**Proporcin y mezcla elegida

B- Se sugiere repetir los pasos los pasos E, F, G, de la 1
cromatografa de capa fina.
C- Para preparar las cmaras de elusin se cortara papel filtro
dejando una ventana para poder observar y se adicionan 5ml.
De cada mezcla mencionada en el listado anterior.

Columna
A- con ayuda de un alambre se coloca una bola de algodn en
el interior de la bureta.
B- se purga la bureta con el solvente menos polar ter de
petrleo para que no queden burbujas de aire y procurando
que no suba el algodn.
C- se hace una mezcla con la silica para columna y ter de
petrleo y se coloca en la bureta, en caso de sedimentar
purgar la bureta y si quedan residuos adheridos a la bureta
despegarlos con ter de petrleo.
D- Adicionar 2ml. Del sustrato de chiles con ayuda de una
pipeta a la bureta
E-Aadir 1cm. De sal a la bureta, esta servir como
empaque
F- Aadir 10 ml. De la mezcla elegida y esperar a que el
sustrato descienda por gravedad al final columna
G- Colectar de 1 a 2ml. de eluatos en 20 tubos de ensaye
cada vez que haya cambio de tonalidad el eluato se deber
cambiar de tubo.

3 Capa Fina
A- Se volvern a acondicionar las cmaras de elusin con 5ml.
De la mezcla de ter-Acetato en las proporciones antes
mencionadas.
B- Se volver a preparar y activar las placas cromatograficas.
C- Se punteara en cada placa el sustrato original y cada
eluato colectado de cada tubo de ensaye
D- Se colocaran en la respectiva cmara y se har la
respectiva comparacin

Clculos

100ml. De mezcla se solventes para cromatografa de

columna
4.5ml. + 0.5ml. =5.0ml
4.5 (20) ml. + 0.5 (20) ml.=100ml

Discusin de resultados
En el proceso de la extraccin del sustrato no existieron
dificultades El problema de la capa fina durante su desarrollo
fue que al introducir las cromatoplacas dentro de las cmaras
de elucin los colores no eran separados de igual manera, fue
fcil de comprobar por que al hacer comparaciones entres
otros equipos era evidente que exista una gran diferencia
entres sus resultados y los nuestros a dems que la perdida
de volumen de disolvente en las cmaras de elucin era
indiscutible.
Cundo pudimos elegir los disolventes y las mezclas de
disolventes adecuados para separar colores se presentaron
una serie de problemticas empezando por como preparar la
columna, que present la dificultad de introducir el algodn
en la base interna de la bureta, hasta introducir de manera
correcta la papilla de la gel de slice, que fue un proceso
bastante laborioso. Adems cuando fueron agregada las
mezclas y el sustrato (uno a uno) no separaron los colores

como esperbamos mas que nada pareca ser que estaban

mezclados entre si los colores que esperbamos obtener.
Los colores Rojo y Naranja fueron los nico que presentaron
separacin, las tonalidades Amarillas ni siquiera se movieron
en la cromatoplaca, En esta ultima etapa del experimento, los
Naranjas pesar de mostrar separacin no se alcanzaron a
distinguir entre si en la cromatoplaca,

Conclusiones

La cromatografa realizada al pigmento natural del chile

guajillo, solo pudimos separar de manera eficiente el color
anaranjado dado que el pigmento rojo pareca estar mezclado
con el naranja y el amarillo no pudo notarse
Adems que el acetato de etilo es el disolvente que lo separo
de forma ideal as como las mezclas de cualquier otro
disolvente con tolueno sin importar el volumen de este. El
mtodo de cromatografa en capa fina que se utilizo para
encontrar al disolvente ideal, para usarlo en cromatografa en
columna.
La cromatografa en columna es un mtodo bastante laborioso
e inexacto por que no se tiene la certeza de saber que
disolvente separara los colores que se desean separar
adems las mezclas entre disolventes lo hacen aun mas
impreciso, puesto que las variantes se potencializan mucho

mas, debido a que la variacin entre los volmenes de

disolvente as como las naturaleza de los mismos hace que la
incertidumbre crezca mas y hace un trabajo mas laborioso.

Bibliografa
Paginas web
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos
_6700.pdf
http://www.ub.edu/oblq/oblq
%20castellano/cromatografia_tipus.html#columna
Libros
-Brewester, R.Q. Introduccin al curso prctico de qumica
orgnica experimental. Almahambra S.A. Madrid 1978.
-Fieser L.F. Experimentos de qumica orgnica experimenta,
Almahambra, S.A. Madrid
1978. -Pavia, DL; Lampman, G.M.;
riz, G.S. And Engel; Introducttion to laboratory techniques: A
mall Scale Aaprproach, Saunders CollagePublishing., U.S.A.
1998.