Universidad Central de Venezuela

Facultad de Ciencias
Instituto de Zoologa y Ecologa Tropical
Postgrado en Ecologa

Tesis Doctoral

Aspectos ecolgicos de microalgas

con potenciales biotecnolgicos

Presentada por
Lic. Rubn Torres
CI V-11.405.173

Tutores
Dra. Evelyn Zoppi de Roa
Dr. Diego Rodrguez

Caracas 2012

Las algas son vegetales que crecen en agua, tanto dulce como salada. En el
ocano constituyen el principal componente del plancton marino. Tuvieron
mucho que ver con el origen de la vida en el mbito marino; fueron los
primeros organismos en realizar la fotosntesis cloroflica. Van desde los
microscpicos organismos unicelulares (como las espirulinas) hasta las
gigantescas kelp (el ser vivo ms largo del planeta).
Fuente: Almacn Natural

CONTENIDO
ndice de figuras ........................................................................................................... 7
ndice de tablas........................................................................................................... 10
Resumen .................................................................................................................... 12
1. Introduccin ............................................................................................................ 14
1.1 Una breve resea histrica ............................................................................ 14
1.2 Evolucin y ecologa de las microalgas ......................................................... 14
1.3 Aspectos biogeogrficos ............................................................................... 17
1.4 Importancia biotecnolgica de las microalgas ............................................... 18
2. Antecedentes en Venezuela ................................................................................... 22
3. Justificacin ............................................................................................................ 23
4. Hiptesis ................................................................................................................. 24
5. Objetivos ................................................................................................................. 25
6. Metodologa ............................................................................................................ 26
6.1 Ecologa de poblaciones de especies cultivadas ........................................... 26
6.2 Ecologa de comunidades fitoplanctnicas .................................................... 39
7. Resultados .............................................................................................................. 57
7.1 Cultivos ......................................................................................................... 57
7.2 Ensayos con poblaciones cultivadas de Arthrospira platensis ....................... 65
7.3 Comunidades fitoplanctnicas ....................................................................... 86
8. Discusin .............................................................................................................. 116
8.1 Cultivos ....................................................................................................... 116
8.2 Ensayos con poblaciones de Arthrospira platensis ...................................... 117
8.3 Comunidades fitoplanctnicas ..................................................................... 123
9. Conclusiones ........................................................................................................ 127
10. Bibliografa .......................................................................................................... 128
11. Enlaces ............................................................................................................... 135
Apndice 1 ................................................................................................................ 137
Apndice 2 ................................................................................................................ 142
Apndice 3 ................................................................................................................ 147

ndice de figuras
Figura 1. Esquema ilustrado donde se muestra el escalamiento de microalgas de
medio lquido a medio slido con el empleo de la tcnica del asa de estao. ............. 29
Figura 2. Esquema donde se muestra el escalamiento de poblaciones de microalgas a
fiolas de diferentes volmenes hasta alcanzar los cultivadores a gran escala. ........... 30
Figura 3. Imgenes donde se muestran las diferentes etapas de escalamiento del
cultivo en medio lquido en el sistema integrado LOA-Ficotrn: (a) cultivos a escala
pequea en condiciones controladas (Cmara de Crecimiento, LOA - IZET); (b), (c) y
(d) cultivos a cielo abierto en el Ficotrn, IDEA, en botellones de 5 L, tanques
circulares de 500 L y cultivadores tipo carrusel de 2000 L, respectivamente. ............. 31
Figura 4. Esquema para la preparacin de cada medio (tratamiento) del diseo
factorial fraccionado 26-1.............................................................................................. 33
Figura 5. Esquema de la disposicin espacial de los tanques cilndricos en el Ficotrn
para la ejecucin del diseo de bloques completos aleatorizados. ............................. 34
Figura 6. Ubicacin de los sitios de muestreo (el mapa se encuentra en www.guiageoameri cas.com/mapas/venezuela.htm). ....................................................................... 39
Figura 7. (a) Mapa de Venezuela donde se destaca a la pennsula de Paria en un
recuadro, (b) ubicacin del rea de estudio y (c) vista panormica del humedal
Palmares III desde una carretera que lo bordea al norte, la vegetacin herbcea
cubre la totalidad de su superficie y forma bandas monoespecficas, evidenciadas por
las tonalidades distintas del color verde, que cubren toda su superficie sin formar
espejos de agua (tomado de Torres y Zoppi de Roa 2010)......................................... 41
Figura 8. Pluviodiagrama con precipitaciones medias de 47 aos (1953-2000) del sur
de la pennsula de Paria (datos tomados de la Direccin de Meteorologa del MARN
2000). ......................................................................................................................... 42
Figura 9. Vista satelital del rea de estudio (humedal herbceo de El Clavo). La lnea
blanca dibujada en el centro de la imagen seala el transecto levantado en la salida de
campo (fuente: http://earth.google.com/). .................................................................... 43
Figura 10. Tomas fotogrficas parciales de las dos zonas de vegetacin emergente
estudiadas: (a) vista de la amplia zona central de Hymenachne amplexicaulis, en
primer plano la zona de Heliconia marginata que bordea todo el litoral sur; (b) zona de
H. marginata (fotos: Carlos Lugo). .............................................................................. 44
Figura 11. Ubicacin geogrfica del rea de estudio al sur de Monagas (Orinoco bajo),
con detalle de la localizacin en el mapa y fotografa panormica de Macapaima, uno
de los cuerpos de agua visitados (foto: Rubn Torres). .............................................. 46
Figura 12. Imagen correspondiente a un sector de la orilla de la fosa El Caracol,
(Municipio Aragua, Edo. Anzotegui, 2009), donde se pueden apreciar los desechos
petroleros que conforma parte del fondo de la misma (Foto: Olaf Ilzins). .................... 47
Figura 13. Ubicacin de la laguna de Boca Chica (crculo azul) en la pennsula de
Macanao,
isla
de
Margarita,
estado
Nueva
Esparta
(mapa:
http://www.disfrutevenezuela.com/Municipio-Peninsula-de-Macanao-Mapa.html)....... 48
Figura 14. Marcha analtica simplificada para la determinacin de nitrgeno en
muestras de agua con el mtodo Kjeldahl (1883) (contina en la pgina siguiente). .. 52
Figura 15. Marcha analtica simplificada para la determinacin del fsforo por el
mtodo colorimtrico de Murphy Riley (1962). Las dos imgenes inferiores fueron
tomadas de una presentacin digital del curso de Ecologa de Humedales, Postgrado
en Ecologa, IZET, 2009. ............................................................................................ 53

Figura 16. Algunas imgenes tomadas bajo microscopio invertido de las poblaciones
de las diferentes cepas de Arthrospira spp. en la Cmara de Crecimiento (LOA-IZET).
................................................................................................................................... 59
Figura 17. Algunos cultivos de microalgas de inters biotecnolgico presentes en la
Cmara de Crecimiento (LOA, IZET). ......................................................................... 62
Figura 18. Curvas de crecimiento poblacional de Arthrospira platensis en (a) fiolas y (b)
cilindros. La densidad poblacional est expresada en trminos de absorbancia a 680
nm. ............................................................................................................................. 66
Figura 19. Produccin de biomasa seca en fiolas y cilindros de 2 L para cada medio
mineral. La biomasa est expresada en gramos por dos litros. ................................... 67
Figura 20. Valores comparativos de pH mostrados por los diferentes medios de cultivo.
En la figura se seala con un valo rojo el lapso de disminucin de pH del medio y
la contaminacin del mismo por la cianobacteria Microcystis aeruginosa. .................. 67
Figura 21. Valores comparativos de conductividad (S/cm) mostrados por los diferentes
medios de cultivo. ....................................................................................................... 68
Figura 22. Curva de calibracin A 680 vs. Peso seco (mg). Las variables tienen una
relacin lineal (R2 = 0,9935). ....................................................................................... 68
Figura 23. Crecimiento poblacional de Arthrospira platensis en cuatro medios de
cultivo. En la fase de crecimiento rpido A 680 y el tiempo presentaron correlaciones
lineales fuertes, como se evidencia en los valores del coeficiente de determinacin
(R2). ............................................................................................................................ 70
Figura 24. Crecimiento poblacional de Arthrospira platensis en cuatro medios de
cultivo (filamentos por litro) en la Cmara de Crecimiento. ......................................... 70
Figura 25. Curvas de crecimiento poblacional de Arthrospira platensis obtenidas en un
ensayo factorial fraccionado 2 6-1 con combinaciones aleatorias de niveles mnimos y
centrales de cinco macronutrientes (tratamientos). La densidad poblacional fue medida
indirectamente con la absorbancia a una longitud de onda de 680 nm, correspondiente
al rojo dentro del espectro visible, pico de absorcin de la clorofila a. ........................ 72
Figura 26. Diagrama de columnas mostrando en orden creciente los tiempos de
duplicacin (tg) de los diferentes tratamientos del ensayo multifactorial. ..................... 79
Figura 27. Biomasa seca (g/L) cosechada en los diferentes tratamientos del ensayo
factorial 26-1. Los valores se ordenan en forma creciente. ........................................... 81
Figura 28. Diagramas circulares que muestran las variaciones porcentuales en grupos
de filamentos de diferentes tallas en una poblacin de Arthrospira platensis, a lo largo
de un periodo de incubacin que dur 30 das. La cepa se cultiv en el medio
optimizado en el ensayo factorial fraccionado 2 6-1 (tratamiento 36). ............................ 82
Figura 29. Dinmicas de crecimiento poblacional de los tres componentes de tallas de
filamentos de Arthrospira platensis: (a) filamentos con 2 clulas, (b) filamentos con
cuatro clulas y (c) filamentos con ms de cuatro clulas. La letra Y en la ordenada
es la densidad (filamentos/L) y en la abscisa el tiempo est dividido en intervalos de
tres das. Salida: PAST. .............................................................................................. 83
Figura 30. Dinmicas de crecimiento poblacional de Arthrospira platensis a partir de
tres extracciones de volmenes en fase de saturacin. De izquierda a derecha se
muestran las curvas de crecimiento a partir de 25%, 50% y 75% de extraccin. ........ 84
Figura 31. Absorbancias medias ( = 680 nm) de los cultivos en fase de crecimiento
rpido, para tres profundidades, izquierda a derecha: 15 cm (barras azules), 25 cm
(barras rojas) y 35 cm (barras amarillas). .................................................................... 85

Figura 32. Biomasa seca total (g/L) en los tres bloques. ............................................. 85
Figura 33. Biplot de los dos primeros componentes principales del ACP para las
variables (especies) y casos (parches de vegetacin) escogidas para caracterizar el
ecosistema del humedal Palmares III en noviembre de 2008. Los dos primeros
componentes principales acumularon 89,965% de la inercia total del sistema. Salida:
MVSP 3.0. .................................................................................................................. 91
Figura 34. Dendrograma del Anlisis de Agrupamiento o Cluster Analysis derivado
del conjunto de especies fitoplanctnicas y zooplanctnicas ms importantes
colectadas en el ACP. Salida: MVSP 3.0. ................................................................... 92
Figura 35. Algunas especies de microalgas representantes del fitoplancton del
humedal de El Clavo, Barlovento, Edo. Miranda: (a) Lyngbya lutea (Cyanobacteria),
400x; (b) Pinnularia sp. (Bacillariophyta), 400x; (c) Asterococcus limneticus
(Chlorophyta), (d) Micrasterias sol (Chlorophyta), 250x; (e) Closterium ehrenbergii
(Chlorophyta); 250x; (f) Spirogyra ternata (Chlorophyta), 250x. Fotos: Rubn Torres,
cmara digital PAX-CAM acoplada a microscopio invertido y a computador (programa
PAX-IT!). ..................................................................................................................... 98
Figura 36. Variaciones temporales de (a) conductividad elctrica y (b) oxgeno disuelto
a medida que la lmina de agua disminuy en el parche de Heliconia marginata (enero
febrero 2009). .......................................................................................................... 99
Figura 37. Concentraciones de nitrgeno (N) en las muestras de agua colectadas en la
zona de Heliconia marginata en la primera salida de campo al humedal de El Clavo
(05/01/2009). ............................................................................................................ 100
Figura 38. Curva de calibracin para la obtencin de fsforo total en agua de las
muestras tomadas en la zona de Heliconia marginata en la primera salida de campo al
humedal de El Clavo (05/01/2009). ........................................................................... 101
Figura 39. Biplot de los dos primeros componentes principales del ACP para los
ambientes lagunares del Orinoco bajo, sur de Monagas. Los dos primeros
componentes principales retuvieron 95,4% de la inercia total del sistema
multidimensional original. Salida: MVSP 3.0. ............................................................ 107
Figura 40. Imgenes que muestran la composicin de especies fitoplanctnicas de una
charca fangosa, especficamente proveniente del borde exterior de un rea de pozos
petroleros en el norte del Edo. Bolvar, 2009. ........................................................... 109
Figura 41. Composiciones porcentuales de las divisiones de organismos procariotas y
eucariotas integrantes de la comunidad del fitoplancton en las regiones estudiadas en
el pas a lo largo del estudio. .................................................................................... 115

ndice de tablas
Tabla 1. Especies de microalgas con potencialidades para generacin de
biocombustibles. Contenido de aceites en base seca (tomada de Albarracn 2007). .. 20
Tabla 2. Composicin qumica del medio Spirulina (Schlsser 1994). ........................ 26
Tabla 3. Diseo factorial 2 2 para ensayos de laboratorio. El experimento se simplific
a cuatro medios de cultivo sin replicacin. .................................................................. 31
Tabla 4. Resumen del diseo factorial fraccionado 26-1 (salida del programa Design
Expert)*....................................................................................................................... 32
Tabla 5. Medios de cultivos preparados en laboratorio para crecimiento de poblaciones
de microalgas y modalidades de preparacin y recipientes. ....................................... 57
Tabla 6. Concentraciones milimolares (mM) de los macronutrientes totales
(representados como elementos, a excepcin del carbono que se representa en las
formas de los aniones carbonato y bicarbonato) y relaciones milimolares sodio/potasio
en los cuatro medios minerales comparados en el diseo factorial 22. En rojo se
destacan las concentraciones milimolares de Na + y K+, y en azul las de Cl-, anin
directamente involucrado con el Na +. .......................................................................... 65
Tabla 7. Concentraciones milimolares totales de los macronutrientes que integran cada
uno de los medios de cultivo preparados. En rojo se destaca la relacin 4:1 de K y Na
en el medio 1. ............................................................................................................. 69
Tabla 8. Tasa de crecimiento per cpita de Arthrospira platensis en la fase de
crecimiento rpido, biomasa seca producida en cada medio de cultivo y pH inicial y
final. ............................................................................................................................ 71
Tabla 9. Tasas de crecimiento per cpita y capacidades de carga en cultivos de
Arthrospira platensis para el ensayo factorial fraccionado 2 6-1. En rojo se destacan los
medios con valores mayores para uno o ambos parmetros poblacionales obtenidos
de forma experimental. ............................................................................................... 77
Tabla 10. Anlisis de varianza para el diseo factorial fraccionado 2 6-1 (salida del
programa Design Expert). Los nmeros destacados en rojo son valores de p<0,05. .. 80
Tabla 11. Resumen del Anlisis de Varianza (salida de MICROSOFT EXCEL). ......... 86
Tabla 12. Composicin de especies y abundancia (clulas/litro) de los taxa
fitoplanctnicos presentes en las zonas de vegetacin en noviembre de 2008. Bm
(Brachiaria mutica), EcBmSe (ecotono B. mutica - Sesbania exasperata), Se (S.
exasperata), EcSeCa (ecotono S. exasperata - Cyperus articulatus), Ca (C.
articulatus), EcCaTd (ecotono C. articulatus-Typha dominguensis), Td (T.
dominguensis) y EcTdSe (ecotono T. dominguensis - S. exasperata)......................... 87
Tabla 13. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad
fitoplanctnica de Palmares III en sus diferentes parches de vegetacin
monoespecfica y ecotonos (noviembre 2008). Salida: PAST. .................................... 89
Tabla 14. Distancias Jaccard entre los parches de vegetacin acutica del humedal
Palmares III, noviembre de 2008, definidas a partir a las abundancias de las especies
fitoplanctnicas. Los valores estn acotados entre 0 y 1, los destacados en rojo indican
similitudes altas y en azul se seala a la pareja de vegetaciones con menor similitud.
Salida: PAST. ............................................................................................................. 90
Tabla 15. Variables fisicoqumicas y concentraciones de cationes y aniones del agua,
determinados en las zonas de vegetaciones monoespecficas estudiadas en el
humedal de Palmares en noviembre de 2008. ............................................................ 92

10

Tabla 16. Composicin de especies y abundancias (clulas/litro) de los taxa

fitoplanctnicos presentes en las zonas de vegetacin para agosto de 2009. EcBm1Ca
y EcCaBm2 (ecotonos B. mutica - C. articulatus); EcBm2Td (ecotono B. mutica - T.
dominguensis). ........................................................................................................... 93
Tabla 17. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad
fitoplanctnica de Palmares III en sus diferentes parches de vegetacin
monoespecfica y ecotonos (agosto 2009). Salida: PAST. .......................................... 94
Tabla 18. Distancias Jaccard entre los parches de vegetacin acutica del humedal
Palmares III, agosto de 2009, definidas a partir a las abundancias de las especies
fitoplanctnicas. Los valores estn acotados entre 0 y 1, los destacados en rojo indican
similitudes altas y en azul se seala a la pareja de vegetaciones con menor similitud.
Salida: PAST. ............................................................................................................. 94
Tabla 19. Variables ambientales medidas en agosto de 2009..................................... 95
Tabla 20. Grupos (Taxa) fitoplanctnicos identificados en los diferentes ambientes de
vegetacin en El Clavo, Barlovento, Edo. Miranda (enero de 2009). .......................... 95
Tabla 21. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad
fitoplanctnica del humedal de El Clavo (enero 2009). Salida: PAST.......................... 97
Tabla 22. ndice de similitud de Jaccard para las tres zonas estudiadas en el Clavo,
Edo. Miranda (enero de 2009). El anlisis se hizo en PAST. ...................................... 97
Tabla 23. Valores medios desviaciones estndares de las variables fisicoqumicas
tomadas en la zona de Heliconia marginata del humedal herbceo de El Clavo, Edo.
Miranda en enero - febrero de 2009. ........................................................................... 99
Tabla 24. Lista de especies y abundancia (cel./L) del fitoplancton en aguas libres de
las lagunas estudiadas en el bajo Orinoco, sur de Monagas. .................................... 102
Tabla 25. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad
fitoplanctnica de lagunas de inundacin del bajo Orinoco (sur de Edo. Monagas), para
enero de 2010. Salida: PAST. ................................................................................... 105
Tabla 26. ndice de similitud de Jaccard para las lagunas estudiadas en el bajo
Orinoco, sur del Edo. Monagas (enero de 2010). En rojo se resaltan los valores ms
altos. Salida: PAST. .................................................................................................. 106
Tabla 27. Composicin y abundancia (clulas por litro) de la comunidad fitoplanctnica
de tres ambientes de los mdulos inundables de Mantecal (noviembre 2010). ......... 107
Tabla 28. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad
fitoplanctnica entres ambientes de los mdulos inundables de Mantecal (Edo. Apure),
en noviembre de 2010. Salida: PAST. ...................................................................... 108
Tabla 29. ndice de similitud de Jaccard para comparacin de los tres ambientes
estudiados en Mantecal (Edo. Apure). Salida: PAST. ............................................... 109

11

Resumen
Las poblaciones naturales suelen estar bajo presin ambiental constante, y sus
tamaos poblacionales estn limitados por la disponibilidad de recursos. En el caso de
la ecuacin logstica, el parmetro que define la magnitud de la poblacin en equilibrio
es la capacidad de carga (K), mientras que la dinmica de retorno al mismo, luego de
una perturbacin, depende de la tasa de crecimiento per cpita (r). Las comunidades
estn caracterizadas por atributos estructurales como diversidad y relaciones
interespecficas. Las cianobacterias son los organismos fotosintticos ms antiguos
del planeta; se encuentran a mitad de camino entre las bacterias y las algas
eucariotas, pues su organizacin es procaritica pero su aparato fotosinttico es
similar al de las algas. Arthrospira y Spirulina son dos gneros de cianobacterias
filamentosas que han colonizado diversos ambientes y algunas especies son
extremfilas y de distribucin muy restringida. Estas especies son propias de
ambientes alcalinos (lagos de soda) y han experimentado pocas presiones
ambientales, entre ellas competencia y depredacin escasas. Poseen un gran valor
alimenticio para animales y humanos, como lo demuestran numerosas
investigaciones. Del mismo modo, existen microalgas eucariotas que poseen gran
potencial para la biotecnologa alimentaria y petrolera (bioenergtica), esta ltima con
la finalidad de generar combustibles alternativos (biocombustibles), con valores
ecolgicos y econmicos para generar energa elctrica y traccin para vehculos.
Esta investigacin se enfoc en el estudio de las dinmicas poblacionales de A.
platensis (especie en revisin) y muestreos de comunidades fitoplanctnicas con
inters en especies autctonas de gran valor biotecnolgico. Se disearon
experimentos para optimizar medios de cultivos para A. platensis a escala pequea en
sistemas controlados (Cmara de Crecimiento) y escalas mayores en sistemas no
controlados (Ficotrn). Se obtuvieron medios de cultivo idneos para el crecimiento de
A. platensis en condiciones controladas (medio 1 = medio Parra (2005)) y naturales
(tratamiento 36: medio central), con miras a su aprovechamiento biotecnolgico a gran
escala. La dinmica de crecimiento poblacional de A. platensis evidencia
densodependencia logstica, con una estructura de tallas que vara a medida que la
poblacin crece desde etapas tempranas hasta la capacidad de carga. Se encontraron
representantes de varios gneros y especies de cianobacterias (Arthrospira spp.,
Spirulina subsalsa, Lyngbya spp., Oscillatoria spp. y Anabaena spp.) y microalgas
eucariticas (Scenedesmus spp., Isochrysis galbana, Chlorella sp., Chaetoceros sp.,
Navicula platalea, Dunaliella salina y D. viridis) de gran inters biotecnolgico en
diferentes lugares de la geografa variada del pas, lo que conduce a la idea de que
Venezuela cuenta con un gran potencial en su diversidad para la biotecnologa de
microalgas.

12

13

1. Introduccin
1.1 Una breve resea histrica
Las referencias ms antiguas del consumo de microalgas por el hombre datan del
Antiguo Testamento, puesto que el man que permiti la supervivencia del pueblo de
Israel es un liquen del desierto (simbiosis de hongo y alga) (Garca-Blairsy 2008).
Spolaore y col. (2006) mencionan que el primer uso de las microalgas por los seres
humanos se remonta a 2000 aos atrs en China; para entonces, los chinos utilizaban
Nostoc sp. para sobrevivir durante la hambruna. No obstante, no se conoce con
precisin cundo el humano empez a emplear las microalgas (Snchez y col. 2003).
El uso corriente de estos recursos tiene tres precedentes: tradicin, desarrollo
cientfico y tecnolgico, y la denominada tendencia verde (Henrikson 1994). En la
Amrica de la conquista europea, Bernal Daz del Castillo, miembro de las tropas de
Hernn Corts, report en 1521 que una pasta azulada (la hoy conocida Arthrospira
maxima) era cosechada del lago Texcoco, secada y vendida para consumo humano
en un mercado de Tenochtitln (hoy Ciudad de Mxico). Los aztecas dieron a este
alimento el nombre de tecuitlalt, el cual en su lengua literalmente significa
excrementos de las piedras e indiscutiblemente form parte de su cultura alimentaria,
social, econmica y poltica (Ciferri 1983, Snchez y col. 2003).
Se sabe entonces que el empleo alimentario de microalgas por la humanidad no es
reciente. Hoy da, algunas culturas de la zona del lago Chad en frica subsahariana,
como la etnia kanembu, conservan las mismas prcticas de cosecha artesanal de A.
platensis (identificacin en revisin) legadas desde tiempo inmemorial. Esta
cianobacteria filamentosa constituye la base de la dieta diaria de esa tribu, la que
extraen del lago y secan al sol para preparar una galleta denominada dih; este hbito
alimentario peculiar le ha brindado a los kanembu mejor estado de salud que tribus
vecinas que no consumen el dih (Ciferri 1983). Cuando los cientficos descubrieron la
rapidez con la que las poblaciones de estos microorganismos crecen, con un
rendimiento 20 veces mayor que la soja o soya (Glycine max) por unidad de superficie,
los describieron como el alimento del futuro (Henrikson 1994).

1.2 Evolucin y ecologa de las microalgas

Dentro del vasto grupo de seres vivos considerados bajo la denominacin de
microalgas, stas incluyen en su definicin ms amplia a las cianobacterias
(anteriormente cianofitas o cianofceas y conocidas comnmente como algas verdeazules). Estos seres constituyen el grupo de organismos fotosintticos ms antiguos

14

del planeta y se puede decir que se encuentran a mitad de camino entre las bacterias
y las algas, porque su organizacin es procaritica pero su aparato fotosinttico es
similar al de las algas (Prosperi 2000).
La Tierra tiene una edad aproximada de 4.600.000.000 de aos y se ha podido
comprobar que 1.000.000.000 de aos despus de su formacin ya haba actividad
orgnica en la corteza terrestre. Los sedimentos no metamorfoseados ms antiguos
de hace 3.500.000.000 de aos muestran las primeras bacterias y los estromatolitos,
las ms antiguas comunidades coloniales de las que se tenga conocimiento,
constituidas principalmente por algas verdes-azules filamentosas semejantes a las
Oscillatoriales (Orden al que pertenecen los gneros Oscillatoria, Lyngbya, Spirulina y
Arthrospira, entre otros), colonias que se asentaron en las costas de los mares
primitivos. Hoy slo quedan estromatolitos vivos en la costa sur de Australia, las
Bahamas y algunas otras costas e islas remotas y prstinas (Woese 1987).
Hace unos 2.000.000.000 de aos las cianobacterias produjeron suficiente oxgeno
para modificar sustancialmente la atmsfera terrestre. Muchos anaerobios obligados
(aquellos que no viven en presencia de oxgeno) fueron daados por el oxgeno y
algunos desarrollaron modos de neutralizarlo, o se restringieron a vivir en reas donde
este gas no penetra. Por seleccin natural algunos organismos aerobios se adaptaron
a vivir desarrollando una va respiratoria que utilizaba el oxgeno para extraer ms
energa de los alimentos y transformarla en ATP, prosperaron y radiaron en mltiples
formas de vida. La respiracin aerobia se incorpora as al proceso anaerobio ya
existente de la gluclisis (Woese 1987, Mercado 1999).
Las cianobacterias y las microalgas eucariticas al ser productoras que utilizan la luz
solar como fuente de energa contienen clorofila y otros pigmentos accesorios que les
otorgan una gran eficiencia fotosinttica. Por el proceso de fotosntesis que regula el
contenido de oxgeno y dixido de carbono en la atmsfera, las microalgas contribuyen
notablemente a aliviar el efecto invernadero y se constituyen en protagonistas de la
produccin inicial de materia viva en ecosistemas acuticos (Mercado 1999).
La ecologa de microalgas est determinada por un sinnmero de factores ambientales
biticos y abiticos que regulan sus poblaciones y determinan la amplitud de su
dispersin y la capacidad de invadir nuevos hbitats. Posiblemente el factor ms
importante en la determinacin de la abundancia del fitoplancton, comunidad acutica
errante constituida por microalgas, sea la disponibilidad de nutrientes. Las poblaciones
fitoplanctnicas aumentan sus nmeros aceleradamente en la poca de crecimiento

15

(surgencias, afloramientos, estacin de mezcla en la zona limntica de los lagos, etc.),

por lo que ciertos nutrientes pueden hacerse limitados (Paulson 2005).
Otro factor primario a tomar en cuenta, principalmente en lo que respecta a la
distribucin espacial del fitoplancton, es la luz, fenmeno fsico que restringe a las
poblaciones de microalgas a parches en la zona iluminada (euftica) de los cuerpos de
agua, nico lugar donde pueden hacer la fotosntesis. Si bien, las diferentes especies
de microalgas pueden entablar competencias intra e interespecficas fuertes por la luz,
las comunidades fitoplanctnicas mantienen una riqueza elevada con tamaos
poblacionales moderados, fenmeno que ha sido denominado por Hutchinson (1961)
la paradoja del plancton.
De lo anterior se desprende la idea de que las poblaciones naturales suelen estar
siempre bajo presin ambiental constante, y sus tamaos poblacionales estn
limitados por la disponibilidad de recursos. Aun cuando matemticamente el
crecimiento poblacional es exponencial a densidades bajas, progresivamente se hace
densodependiente a medida que el tiempo avanza y la densidad crece. El modelo
logstico, el modelo densodependiente ms conocido, explica el crecimiento de las
poblaciones durante lapsos ms prolongados. Grficamente se observa un periodo
inicial de latencia y adecuacin (crecimiento lento), seguido de un incremento
exponencial (crecimiento rpido) para luego culminar en un plateau donde se alcanza
la capacidad de carga del ambiente, K (May 1976).
Las microalgas pueden ser organismos con un gran impacto negativo en la ecologa
de los ambientes hmedos del planeta. Muchas especies de cianobacterias son
problemticas en lagos y embalses usados para abastecimiento de agua para
consumo humano, donde crecen muy bien y frecuentemente producen florecimientos o
blooms, fenmenos en los que muchas especies se pueden acumular en las
espumas superficiales con densidades poblacionales sumamente altas. Estos
afloramientos son inducidos por enriquecimientos con macronutrientes como el fsforo
y el nitrgeno, principalmente derivados de actividades antrpicas (aguas ricas en
fertilizantes provenientes de zonas agropecuarias, vertidos industriales, aguas
domsticas, etc.); estn acompaados de la produccin de malos olores y sabores en
el agua, as como de neuro y hepatotoxinas mortales para animales domsticos y
seres humanos que la consumen (Carmichael 1994). En el mar ocurren las
denominadas mareas rojas, compuestas principalmente por dinoflagelados altamente
txicos, que producen una mortandad masiva de peces; tambin se dan las mareas
blancas o blooms en poca de surgencia, congregaciones constituidas por diatomeas

16

que originan el efecto opuesto a las mareas rojas, pues desencadenan una gran
produccin secundaria del zooplancton y de los siguientes peldaos de la cadena
alimentaria marina. Estas zonas de surgencia son de gran importancia en la economa
pesquera de muchas naciones del mundo.

1.3 Aspectos biogeogrficos

En el contexto evolutivo y ecolgico, Spirulina y Arthrospira son dos de los gneros de
cianobacterias ms interesantes de este grupo antiguo, debido a la historia natural y
evolucin singulares de algunas de sus especies en ambientes extremos y sumamente
restringidos, muchos de ellos agrestes e inhspitos para casi cualquier otra forma de
vida, donde han tenido muy poca competencia y depredacin. No obstante el carcter
extremfilo de ciertas especies de Spirulina y Arthrospira, estos gneros son ubicuos,
pues se encuentran representantes en ambientes marinos costeros, estuarinos,
humedales dulceacucolas, lagos, etc., lo que tambin sugiere una idea del xito
colonizador de estas cianobacterias filamentosas (Ciferri 1983).
Las microalgas extremfilas, como Arthrospira platensis, han evolucionado en sitios
que eran vastos en el precmbrico, y de los que ahora slo quedan unos pocos sitios
aislados como relictos de esos mares antiguos por procesos continuos de evaporacin
y desertificacin. Estos procesos hoy da an prosiguen y se intensifican con el
proceso de calentamiento global, como es el caso del lago Chad (frica
Subsahariana), cuya superficie ha retrocedido en forma notable en el curso de menos
de un siglo. Dicho lago constituye uno de los ltimos hbitats naturales de
microorganismos antiguos como A. platensis (Ciferri 1983).
De acuerdo al concepto de especie morfolgica, la mayora de las especies de algas
de agua dulce son cosmopolitas. Esto implica que las especies poseen mecanismos
muy eficientes para la dispersin o sus caracteres morfolgicos han permanecido
estticos en un tiempo evolutivo amplio. No obstante, hoy da muchos ficlogos
prestan atencin a variaciones intraespecficas en aspectos fisiolgicos y bioqumicos.
Por otro lado, observaciones cuidadosas de poblaciones naturales pueden revelar
aislamiento reproductivo dentro de una morfoespecie o entre taxa intraespecficos
(Ichimura 1996).
Se puede demostrar que los patrones de distribucin de organismos sobre la
superficie del planeta no son aleatorios. Esta no aleatoriedad requiere explicaciones
en trminos de procesos y reconstrucciones de eventos geolgicos y biolgicos en la
historia de la vida en la Tierra. Los procesos implican la formacin de patrones

17

biogeogrficos a partir de procesos abiticos muy lentos y a gran escala que incluyen
los movimientos tectnicos de placas, cambios en los niveles de los mares y ocanos
y cambios climticos, entre otros aspectos geolgicos. Estos procesos han operado
casi en concierto, pues el clima puede ser afectado por los movimientos de los
continentes y los cambios en la circulacin ocenica; los movimientos tectnicos
pueden alterar las corrientes ocenicas; el clima ha podido influir en la eustasia 1 de la
periodicidad interglaciar. A un nivel ms local, las erupciones volcnicas,
desertificaciones, cataclismos terrestres, huracanes, etc. tambin han contribuido a la
creacin de patrones de distribucin en diferentes hbitats (Myers y Giller 1991).
La determinacin de patrones de distribucin parte de un anlisis biogeogrfico. Tales
patrones son dciles a anlisis sin supuestos especficos de procesos subyacentes o
pueden ser usados para probar hiptesis sobre procesos. La biogeografa histrica y
ecolgica indirectamente ha usado patrones observados de distribucin de organismos
para probar hiptesis, con miras a explicar procesos tales como la vicariancia
(separacin de grupos por barreras geogrficas), dispersin, interacciones de especies
y eventos de perturbacin (Myers y Giller 1991).

1.4 Importancia biotecnolgica de las microalgas

Pocas personas, fuera del mbito cientfico, conocen qu son las llamadas
cianobacterias, a pesar de que estos organismos son responsables tanto de beneficios
como de problemas en asuntos humanos (Prosperi 2000). Tampoco se conoce a la
mayor parte de las microalgas eucariotas, an las bien sabidas propiedades abrasivas
de las tierras de diatomeas; o las especies que producen las perjudiciales mareas
rojas; o todava sus primas mayores, las macroalgas, tan apreciadas en la
gastronoma japonesa y europea, as como en las industrias de geles como el agar y
carragenina, esta ltima para espesar jaleas y gelatinas. Son tambin invaluables los
aportes de las microalgas a la industria de los colorantes por la gran diversidad de
pigmentos que producen. Clorofitas del gnero Dunaliella acumulan elevados
contenidos de carotenoides, varias veces ms que la zanahoria en base seca, por un
proceso denominado carotenognesis, que las hacen fuente primaria de provitamina A
para humanos (Guevara y col. 2005).

El trmino eustasia se emplea para designar los hundimientos y posteriores ascensos de la

corteza terrestre en aquellas zonas en que existieron grandes glaciares continentales durante
el Pleistoceno. Con la formacin de los grandes glaciares, el relieve se fue hundiendo por el
peso del propio hielo y al finalizar el perodo glacial y desaparecer esos glaciares, el relieve
previamente hundido tiende a "rebotar" hacia arriba debido a que se queda liberado de dicho
peso (http://es.wikipedia.org/wiki/Eustasia).

18

A pesar del empleo milenario de las microalgas como alimento humano, la

biotecnologa de estos microorganismos en realidad slo comenz a desarrollarse a
mediados del siglo pasado. Hoy en da, existen numerosas aplicaciones comerciales
de las microalgas. Por ejemplo, (i) las microalgas pueden ser utilizadas para mejorar el
valor nutritivo de los alimentos y la alimentacin animal debido a su composicin
qumica, (ii) desempean un papel crucial en la acuicultura y (iii) pueden ser
incorporadas a los cosmticos. Adems, se cultivan como fuentes muy valiosas de
diversas molculas. Respecto a esto ltimo, por ejemplo, los cidos grasos
poliinsaturados de los aceites se aaden a las frmulas infantiles y complementos
nutricionales y los pigmentos son importantes como tintes naturales. Istopos
bioqumicos estables ayudan en la determinacin estructural y los estudios
metablicos. La investigacin futura deber centrarse en la mejora de los sistemas de
produccin y la modificacin gentica de las cepas. Las microalgas constituyen de
esta manera una alternativa econmica cada vez ms diversificada y competitiva
(Spolaore y col. 2006).
Entre los beneficios que la humanidad obtiene de las cianobacterias, por citar uno de
mltiples ejemplos, se encuentra su utilizacin como biofertilizantes en agricultura,
gracias a su capacidad de fijar nitrgeno atmosfrico (N 2) y producir compuestos
orgnicos ricos en nitrgeno que contribuyen a incrementar los rendimientos de las
cosechas de arroz (Prosperi 2000). El empleo de algunas especies de los gneros
Spirulina y Arthrospira para la alimentacin humana est ampliamente comprobado
por un sin fin de investigaciones cientficas, las que coinciden en su inocuidad (no son
txicas), gran palatabilidad (ms de 90% comestible) y sus importantes cantidades de
protenas (65-70% en base seca), vitaminas y otros nutrientes (Ciferri 1983, Henrikson
1994, Mani y col. 2000, Pervushkin y col. 2001, Sachdeva y col. 2004).
Est ampliamente comprobado el beneficio alimentario de Spirulina y Arthrospira en
animales de granjas pecuarias (aves de corral, porcinos, etc.) y acucolas (peces,
camarones, etc.), y consumo humano (Martnez-Palacios y col. 1996, Soler y col.
2000, Nandeesh y col. 2001, Jaime-Ceballos y col. 2004). Las tecnologas empleadas
para cultivar masivamente microalgas y obtener productos alimenticios, farmacuticos
y cosmticos de su biomasa son limpias en su totalidad; las granjas a cielo abierto
tienen un gran valor ecolgico como trampas vivientes de gases de efecto invernadero
y purificacin de biogs (Conde y col. 1993), as como recuperacin de cuerpos de
agua contaminados (Ayala y Vargas 1987, Sim y Goh 1988, Caizares y col. 1993).

19

Existen diversas especies de microalgas que metabolizan hidrocarburos, los

bioacumulan en sus vacuolas y producen aceites, a partir de los cuales se pueden
producir biocombustibles (biodiesel). La clorofita Botryococcus braunii se caracteriza
por su capacidad de producir hidrocarburos insaturados de cadena larga, llegando a
contenidos que van de 15 a 75% de su peso seco. Adems, esta microalga produce
polisacridos extracelulares que inducen la formacin de colonias, el tamao de las
mismas depende de la hidrodinmica de estrs en el biorreactor. Su gran potencial
como fuente renovable de combustibles de base o de productos qumicos ha sido
demostrado por diferentes grupos de investigacin (Casadevall y col. 1985, Banerjee y
col. 2003).
Otras especies de microalgas con gran potencial en biotecnologa petrolera, debido a
sus gran contenido de lpidos, son Schizochytrium sp., Nannochloropsis sp., Nitzschia
sp., Isochrysis sp. y Tetraselmis suecica, entre otras (Tabla 1).
Tabla 1. Especies de microalgas con potencialidades para generacin de biocombustibles.
Contenido de aceites en base seca (tomada de Albarracn 2007).

Especie

Contenido de aceite (% de peso seco)

Botryococcus braunii

25 75

Chlorella sp.

28 32

Crypthecodinium cohnii

20

Cylindrotheca sp.

16 37

Dunaliella primolecta

23

Isochrysis sp.

25 33

Monallanthus salina

20

Nannochloris sp.

20 35

Nannochloropsis sp.

31 68

Neochloris oleoabundans

35 54

Nitzschia sp.

45 47

Phaeodactylum tricornutum

20 30

Schizochytrium sp.

50 77

Tretraselmis suecica

15 23

20

Por su parte, la diatomea marina Chaetoceros muelleri puede tener potencial para su
explotacin como un precursor renovable de los combustibles lquidos o como fuente
de lpidos, esto sobre la base de su alta tasa de crecimiento, la tolerancia a una amplia
gama de temperaturas y conductancias especficas, y una gran cantidad de lpidos
intracelulares (Mcginnis y col. 1997).
El fitoplancton ha sido ampliamente estudiado en sus dinmicas poblacionales y
comunitarias. Los estudios tericos a partir de observaciones empricas y de campo
han crecido notablemente debido a la importancia de muchas especies de microalgas
en la alimentacin, farmacia, medicina, control de calidad de aguas, etc. Un aspecto
an incipiente es el estudio biogeogrfico de microalgas en sus ambientes nativos.
Este trabajo trata de dos temas: (1) estudio de las dinmicas poblacionales en
especies cultivadas y (2) muestreo y caracterizacin de hbitats y aspectos
comunitarios de especies autctonas de gran valor en la biotecnologa alimentaria y
petrolera.

21

2. Antecedentes en Venezuela
En Venezuela se han hecho numerosos trabajos taxonmicos y ecolgicos de
microalgas. Diversas especies fitoplanctnicas de importancia biotecnolgica son
nativas de Venezuela; las clorofitas Botryococcus braunii y Chlorella vulgaris y
cianobacterias del gnero Spirulina han sido reportadas para el embalse de Guri
(Gonzlez de Infante y Riehl 1992). Anteriormente, B. braunii tambin se encontr en
la laguna de San Javier del Valle, Edo. Mrida (Yacubson 1974). En aguas salobres y
estuarinas, como el sistema del lago de Maracaibo (norte del lago) se ha reportado la
cianobacteria Spirulina subsalsa y otras cianobacterias eurihalinas (Rodrguez 2001).
En diversos sistemas marinos costeros y lagunas hipersalinas del pas se han
colectado diferentes especies de clorofitas del gnero Dunaliella (Guevara y col.
2005), as como prasinofitas del gnero Tetraselmis (Romero y col. 2002), entre otras
especies.
Por otra parte, algunas investigaciones se han orientado a ensayos de cultivos de
microalgas en condiciones controladas con fines biotecnolgicos. Algunos anlisis han
permitido la determinacin de las composiciones nutricionales y producciones de
metabolitos de diferentes especies de microalgas: Anabaena sp. (Morales y col. 2002),
Chlorella sp. (Mora y col. 2004) y Dunaliella salina (Guevara y col. 2005). Otros
ensayos han conducido a la cuantificacin de efectos inmunomoduladores de Spirulina
subsalsa (Cheng-Ng y col. 2005). Parra (2005) aisl y purific c-ficocianina y
aloficocianina de Arthrospira platensis, dos pigmentos de gran inters en la industria
de los colorantes y marcadores moleculares. Naranjo y col. (2010) hicieron una
revisin del uso de A. platensis como biofactora de metabolitos secundarios de inters
farmacolgico, con nfasis en el cido pipeclico.
La Asociacin Civil Gente de Ciencias (2007), organizacin cientfica y social
venezolana constituida por profesionales del rea de las ciencias naturales, con
experiencia en el cultivo de microalgas (cultivos en laboratorio y campo; optimizacin
de medios de cultivo, fotobiorreactores y obtencin de productos de microalgas), con
nfasis en Arthrospira platensis desde el ao 2000. Las investigaciones se
concentraron en la aplicacin de la biotecnologa de microalgas en temas como la
nutricin animal y humana. Recientemente con Botryococcus braunii, Nannochloropsis
sp., Tetraselmis chuii e Isochrysis galbana, entre otras especies, se ha explorado la
factibilidad de producir biocombustibles a partir de aceites sintetizados o acumulados
en sus compartimentos intracelulares.

22

3. Justificacin
Este trabajo est enmarcado en el estudio ecolgico, taxonmico y biogeogrfico de
especies de microalgas eucariticas y cianobacterias autctonas con potencialidades
para su cultivo masivo en Venezuela y empleo en la acuicultura, biotecnologa
alimentaria, generacin de biocombustibles (biodiesel), biorremediacin, produccin de
energas limpias y trampas de gases de efecto invernadero. Tambin se incorporan
especies cultivadas en Venezuela desde hace varios aos, como Arthrospira platensis
y A. maxima de conocido perfil nutricional, mdico y biorremediador, por lo que tienen
gran demanda mundial; ms de 70 pases las cultivan comercialmente (Henrikson
1994).
Las especies de los gneros Spirulina y Arthrospira han sido incorporadas con xito
notable en programas sociales y alimentarios dentro de pases del cuarto mundo con
altas tasas de desnutricin, como el frica Ecuatorial. Conviene entonces incorporar el
estudio ecolgico de estas cianobacterias para conocer sus tasas de crecimiento
ptimas y otros parmetros poblacionales con miras a cultivarlas a gran escala en el
pas y aprovechar su biomasa con la firme intencin de establecer programas
nutricionales similares en Venezuela y Latinoamrica, a sabiendas de los niveles
preocupantes de desnutricin que imperan en los pases de esta regin.
El estudio de los organismos en su ambiente natural brinda la oportunidad de conocer
las especies con las que cuenta Venezuela y adquirir un conocimiento integral de sus
ambientes naturales. Esta propuesta lleva implcito un propsito productivo de emular
las condiciones naturales para lograr sus cultivos en sistemas controlados, y una
finalidad de conservacin a partir del conocimiento de los ambientes para manejo
sustentable de ecosistemas o su proteccin como santuarios de vida. En sntesis, la
meta de esta investigacin es brindar puntos de partida a partir de un estudio
ecolgico integral a expectativas y necesidades creadas en el pas por la bsqueda de
fuentes alternativas de alimentos, medicinas, pigmentos y energas limpias, as como
perspectivas para la recuperacin de ecosistemas acuticos contaminados. Esta
propuesta est enmarcada en el Plan Nacional Simn Bolvar como nuevo modelo
sociopoltico para el pas.

23

4. Hiptesis
1. Las poblaciones de Arthrospira platensis cultivadas en el laboratorio presentan
densodependencia, y un crecimiento poblacional que puede ser descrito con
modelos matemticos.
2. La geografa y ecologa variadas del pas permiten esperar una gran diversidad de
especies de microalgas distribuidas en forma discontinua y gradientes, algunas de
ellas con gran potencial biotecnolgico.

24

5. Objetivos
1. Establecer la dinmica de crecimiento poblacional de Arthrospira platensis con
optimizacin de medios de cultivo para fines productivos.
2. Caracterizar hbitats y comunidades fitoplanctnicas con especies de inters
biotecnolgico en el pas.
Del objetivo 1 se desprenden los objetivos especficos:
a. Caracterizar el crecimiento poblacional de A. platensis en condiciones
controladas y naturales.
b. Determinar los parmetros poblacionales.
c. Realizar anlisis de perturbacin en el modelo dinmico.
Del objetivo 2 derivan los objetivos especficos:
a. Identificar especies de microalgas de muestras colectadas en el campo.
b. Determinar riqueza, abundancia e ndices de diversidad.
c. Establecer relaciones entre ambientes, variables fsicas y qumicas y la
composicin de especies encontradas.

25

6. Metodologa
El plan general de trabajo se dividi en dos niveles de organizacin: poblacional y
comunitario.

6.1 Ecologa de poblaciones de especies cultivadas

Los estudios poblacionales se condujeron por aproximaciones experimentales y con
base en la teora ecolgica. Los mismos se centraron en cultivos de la cianobacteria
Arthrospira platensis (cepa Lefevre 1963/M-132-1, Repblica Checa). La especie se ha
cultivado en el Laboratorio de Optimizacin Agrcola (LOA-IZET) por ms de ocho
aos. Arthrospira maxima (cepa cubana), es una especie congnere obtenida para el
cepario del laboratorio en tiempo ms reciente. El cepario tambin cuenta con otras
especies de valor biotecnolgico provenientes de otros ceparios del pas y del
extranjero, as como colecciones de campo: Chaetoceros sp. (Bacillariophyta),
Botryococcus braunii (Chlorophyta), Chlamydomonas sp. (Chlorophyta), Chlorella
vulgaris (Chlorophyta), Dunaliella salina (Chlorophyta), D. viridis (Chlorophyta), D.
primolecta (Chlorophyta), Haematococcus pluvialis (Chlorophyta), Scenedesmus sp.
(Chlorophyta), Spirulina subsalsa (Cyanobacteria), Isochrysis galbana (Haptophyta),
Nannochloropsis sp. (Ochrophyta), Tetraselmis sp. (Prasinophyta), Porphyridium
cruentum (Rhodophyta) y Rhodosorus marinus (Rhodophyta).
Medios de cultivo. Se procedi a la preparacin de un medio de cultivo estndar para
cianobacterias filamentosas alcalfilas de los gneros Spirulina y Arthrospira
denominado medio Spirulina o SAG (Schlsser 1994), que es una modificacin del
medio Aiba y Ogawa (1977). Parra (2005), incorpor algunos cambios a este medio
nutritivo. La composicin del medio Spirulina se presenta en la Tabla 2.
Tabla 2. Composicin qumica del medio Spirulina (Schlsser 1994).

Componentes

Solucin Stock
(mL)

Masa (g)

Concentracin
en el medio
final

Solucin I

500 (2X)

NaHCO3
Na2CO3
K2HPO4*

13,61
4,03
0,50

1,6210-4M
3,8010-5M
2,8710-4M

Solucin II

500 (2X)

NaNO3*
K2SO4
NaCl

5,00
2,00
2,00

2,9410-5M
5,7410-6M
1,7110-5M

26

pH
Alcalino
(>9)

Neutro
(7)

Tabla 2. Continuacin.

Componentes

Solucin Stock
(mL)

Masa (g)

MgSO4.7H2O
CaCl2.2H2O
FeSO4.7H2O
Na2EDTA.2H2O

0,40
0,02
0,02
0,16

Concentracin
en el medio
final (1X)
8,1110-7M
2,7210-7M
3,6010-8M
2,1510-7M

Traza metlica

1000 (1000X)

Na2EDTA.2H2O
FeSO4.7H2O
ZnSO4.7H2O
MnSO4.7H2O
H3BO3

0,80
0,70
0,001
0,002
0,01
0,001
0,001
0,00005

2,1510-6M
2,5210-6M
3,4810-9M
8,9710-9M
1,6210-7M
3,4410-9M
4,1310-9M
2,0010-11M

Co(NO3)2.6 H2O
Na2MoO4.2 H2O

CuSO4.5H2O

pH

Neutro
(7)

*Parra (2005) reemplaz el K2HPO4 por KH2PO4, debido a la mayor solubilidad de la primera
en agua. Tambin sustituy el NaNO3 por KNO3 para obtener una relacin Na:K ms prxima a
la fisiolgica (4:1).

Spirulina subsalsa fue cultivada en medio Spirulina combinado con agua de mar
(50:50), debido al origen estuarino de la cepa (Morales, com. pers.). El resto de las
especies de microalgas del cepario se cultivaron en diferentes medios probados y
estandarizados como ptimos para sus crecimientos poblacionales: medio F/2
(Guillard 1975), para microalgas marinas como Nannochloropsis sp., Tetraselmis sp. e
I. galbana; medio Algal (Fbregas y col. 1985), el cual fue empleado tanto para
microalgas de agua dulce como Chlamydomonas sp., C. vulgaris y Scenedesmus sp.,
como para diatomeas marinas (Chaetoceros sp.), con adicin de silicatos, rodofitas (P.
cruentum y R. marinus) y Tetraselmis sp., con adicin de agua de mar, y clorofitas de
ambientes hipersalinos (Dunaliella spp.), con la incorporacin de solucin saturada de
cloruro de sodio (NaCl); medio Chu-13 (Chu 1942) modificado por Dayananda (2007)
para B. braunii; Haematococcus pluvialis fue cultivada en medio Bristol (Bold 1949).
Para especies del gnero Dunaliella tambin se prob el medio de Serpa y Caldern
(2006). Las composiciones de estos medios se presentan en el Apndice 1.
La preparacin de los medios se efectu conforme los siguientes pasos generales:
1. Se prepar una solucin madre 1000X (solucin concentrada) de micronutrientes
(oligoelementos o traza metlica), segn lo establecido en cada medio de cultivo.
Para ello, las sustancias requeridas como sales inorgnicas cristalizadas grado
analtico se pesaron en una balanza analtica digital AND (d = 1 mg).

27

2. Las sustancias constituyentes de la solucin de macronutrientes, sales inorgnicas

cristalizadas grado analtico (salvo bicarbonato y carbonato de sodio, sales que
debido a sus altos requerimientos para el medio Spirulina se obtuvieron de sacos
de 25 50 kg de agroqumicos grado tcnico), tambin se pesaron en una balanza
analtica digital AND (d = 1 mg). Las sales de bicarbonato y carbonato de sodio se
pesaron en una balanza digital de 10 kg (d = 1 g).
3. Cada sal se disolvi en forma independiente con agitacin magntica y calor, luego
se mezclaron todos los componentes de la solucin madre y se enras al volumen
final, generalmente de un (1) litro, en un baln aforado o en un cilindro graduado
de 1 L. Algunas sales, como el sulfato ferroso heptahidratado (sal utilizada
generalmente como fuente de hierro para todos los medios), tuvieron que ser
disueltas con un quelante (EDTA disdico o citrato trisdico dihidratado). No se
aadieron vitaminas ni carbohidratos a ninguna solucin de medio nutritivo.
4. La solucin madre de micronutrientes se esteriliz en un autoclave analgico
vertical KALSTEIN durante 45 min hasta una temperatura tope de 119C
(temperatura ptima = 121C), y una presin de 10 PSI (presin ptima = 15 PSI).
Antes de autoclavar cualquier solucin y material (pipetas Pasteur, fiolas, botellas
vacas, etc.), una cinta de papel autoadhesivo indicador (o testigo) se coloc a
cada recipiente.
5. A la solucin de macronutrientes se aadi la alcuota correspondiente de solucin
madre de micronutrientes estril, para de este modo obtener el medio de cultivo
ntegro. Para trasvasar soluciones se tom la previsin de destapar el envase
frente a la llama azul de un mechero FISHER.
6. Finalmente, la solucin de medio de cultivo se autoclav para luego enfriar y
proteger con papel envolvente.
Inculo. Se obtuvieron cultivos monoalgales y monoclonales (poblaciones surgidas de
un filamento) de A. platensis (cepa Lefevre), por la virtud de estas cianobacterias de
reproducirse asexualmente por particiones de filamentos o tricomas en sitios crticos
que necrosan y se escinden formando hormogonios (filamentos reproductivos), sitios
denominados necridia o necridios. Esto garantiz uniformidad gentica en las
poblaciones de estos microorganismos.
Para la obtencin de cultivos monoclonales se cumpli la pauta siguiente:

28

1. De una cepa se aisl un filamento en una cpsula de Petri con solucin buffer
alcalina (bicarbonato-carbonato de sodio, 4:1) bajo un estereoscopio (lupa).
2. Cada filamento se coloc en un tubo de ensayo con medio Spirulina esterilizado y
se coloc en cmara de crecimiento (T = 27C) con iluminacin permanente. El
periodo de incubacin fue de 15 das, tiempo en el cual el filamento inicial pudo
clonarse en varios filamentos va escisin en necridios.
3. Los cultivos monoclonales se escalaron a fiolas de 250 mL y se mantuvieron sin
agitacin en la cmara de crecimiento. En estos recipientes se mantuvieron para
ser empleados en medios slidos y completar proceso de purificacin de la cepa.
Para la siguiente etapa de purificacin del cultivo monoalgal y monoclonal, con la
finalidad de controlar contaminacin de bacterias y hongos, se emplearon los
siguientes pasos:
1. Se prepararon medios slidos con disolucin en caliente de agar no purificado en
medio Spirulina (1,5 g de agar por cada 100 mL de medio), de esta manera se
elabor un medio de agar alcalino.
2. Las soluciones con agar se autoclavaron en cpsulas de Petri, para hacer placas y
en tubos de ensayo inclinados para obtener cuas. Una vez obtenidos los medios
slidos estriles, se procedi a encender la llama azul en un mechero FISHER y
limpiar el mesn con etanol absoluto. Este procedimiento se hizo con el fin de
tener las mayores condiciones de asepsia posibles.
3. Bajo estas condiciones de asepsia y llama azul, una vez que las soluciones
esterilizadas se enfriaron, se procedi a la siembra de las cepas vivas. Los medios
solidificados en placas y tubos fueron sembrados por medio de un asa metlica
pasada por llama azul y enfriada en algn punto del medio slido, teniendo
cuidado de no inocular posteriormente en esa zona (figura 1).

Figura 1. Esquema ilustrado donde se muestra el escalamiento de microalgas de medio lquido

a medio slido con el empleo de la tcnica del asa de estao.

29

4. Finalmente las cepas en las soluciones nutritivas solidificadas se ubicaron en el

cepario o cmara fra bajo luz fra (tubos fluorescentes day-light) a una
temperatura media de 23C.
Luego de la obtencin de cepas limpias, monoclonales y monoalgales, se procedi al
escalamiento a fiolas de 250 mL, y de stas a fiolas de mayores volmenes en forma
sistemtica hasta llegar a los cultivos en fiolas de 2 L con agitacin y sin fotoperiodo
(luz por 24 h diarias). Para ello se procedi del modo siguiente:
1. Soluciones lquidas esterilizadas se trasvasaron a fiolas de 250 mL cubiertas con
tapones de algodn y gasa. Todo este material previamente se autoclav. Los
medios lquidos nuevos se inocularon con pequeos volmenes de cepas
provenientes de cuas y placas del cepario en cmara fra.
2. Las cepas cultivadas en medio lquido se colocaron en la cmara de crecimiento
bajo luz fra y temperatura media de 27C, con agitacin y luz continuas. La
agitacin en la cmara de crecimiento la provey un blower KAWAKE ( HP; 220
V), y se condujo a travs de un sistema de tubos y mangueras hasta culminar en
pipetas Pasteur esterilizadas sumergidas en las soluciones con inculo.
3. Los dos pasos anteriores se repitieron para los escalamientos sucesivos hasta
culminar en cultivos a escala mayor (figuras 2 y 3).

Figura 2. Esquema donde se muestra el escalamiento de poblaciones de microalgas a fiolas de

diferentes volmenes hasta alcanzar los cultivadores a gran escala.

Diseo de experimento. Los experimentos en laboratorio bajo condiciones

controladas se ejecutaron a escala menor (fiolas de 2 L); estas pruebas se ejecutaron
en la cmara de crecimiento del cepario del Laboratorio de Optimizacin Agrcola
(LOA). Los ensayos en campo se llevaron a cabo a escala mayor y con monitoreo de
las condiciones ambientales en la Planta Experimental Ficotrn ubicada en el
Instituto de Estudios Avanzados (IDEA), Sartenejas, Edo. Miranda. Se ensay en

30

botellones de 5 L, tanques cilndricos de 500 L y cultivadores tipo carrusel (en ingls

race-ways) de 2000 L (figura 3).

(a)

(b)

(c)

(d)

Figura 3. Imgenes donde se muestran las diferentes etapas de escalamiento del cultivo en
medio lquido en el sistema integrado LOA-Ficotrn: (a) cultivos a escala pequea en
condiciones controladas (Cmara de Crecimiento, LOA - IZET); (b), (c) y (d) cultivos a cielo
abierto en el Ficotrn, IDEA, en botellones de 5 L, tanques circulares de 500 L y cultivadores
tipo carrusel de 2000 L, respectivamente.

Cada diseo de experimento se defini por el nmero de factores o variables

independientes a fijar y su nmero de niveles (Montgomery 2001). En todos los
experimentos se consideraron variables dependientes: (1) la densidad poblacional
(filamentos/L), por el mtodo directo de conteo de filamentos, y (2) la absorbancia a
longitud de onda () = 680 nm, para el mtodo indirecto.
Los ensayos de laboratorio se organizaron en diseos factoriales 22 (dos factores,
sodio (Na) y potasio (K), con dos niveles, alta y baja concentracin), para comparar
cuatro medios de cultivo (modificaciones del medio Spirulina) empleados para A.
platensis. Los ensayos no se replicaron en nmero de fiolas, puesto que se supone la
existencia de repeticiones del experimento en cada una de las posibles combinaciones
de los niveles del factor correspondiente (Montgomery 2001). Se hicieron ajustes
matemticos para modificar la relacin Na +:K+, sin variar en forma notable las
concentraciones de los dems iones. Con estas pruebas se determin el medio de
cultivo ptimo para el crecimiento poblacional en condiciones controladas, a partir de
los dos cationes ms importantes en el equilibrio electroqumico entre los
compartimentos intra y extracelulares, y contraiones de las sales inorgnicas. Las
interacciones entre factores se evaluaron con un ANOVA de dos vas ( = 0,05). La
Tabla 3 muestra el resumen del ensayo factorial 22.
Tabla 3. Diseo factorial 22 para ensayos de laboratorio. El experimento se simplific a cuatro
medios de cultivo sin replicacin.

K+ alto

K+ bajo

Na+ alto

++

Na+ bajo

31

En campo se continu la investigacin con diseos factoriales de mayor complejidad, a

medida que se aadieron factores. El primer experimento de campo se llev a cabo en
botellones plsticos de 5 L y el diseo correspondi a un factorial fraccionado 2 6-1 de
resolucin VI, montado con el programa Design Expert versin 6, donde las variables
independientes o factores fueron seis sales grado alimenticio a dos niveles, con cinco
puntos centrales. El programa produjo 37 tratamientos, 5 centrales y el resto
combinaciones aleatorias de los factores (Tabla 4). Las sales forman parte del medio
Spirulina (Schlsser 1994), pero en lugar de la sustitucin de Parra (2005) de KNO 3
por NaNO3, se emple NH4NO3, esto debido a razones de costos. A esta escala de
experimentacin se emplearon sales grado alimenticio y no reactivo, el NH4NO3 result
la fuente de nitrgeno disponible y muy empleada en produccin de fertilizantes.
6-1

Tabla 4. Resumen del diseo factorial fraccionado 2

Study Type:
Initial
Design:
Center
Points:
Design
Model:

Factorial
2 Level Factorial

Runs:
Blocks:

37
No
Blocks

Low
Actual
6805
2015
250
500
500
1176

(salida del programa Design Expert)*.

5
Reduced
3FI

Factor

Name

Units

Type

A
B
C
D
E
F

NaHCO3
Na2CO3
K2HPO4
NaCl
K2SO4
NH4NO3

mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L

Numeric
Numeric
Numeric
Numeric
Numeric
Numeric

High
Actual
13610
4030
500
1000
1000
2352

Low
Coded
-1
-1
-1
-1
-1
-1

High
Coded
1
1
1
1
1
1

Mean
10207,5
3022,5
375
750
750
1764

Std.
Dev.
3164,3
937,0
116,2
232,5
232,5
546,8

*Para ms detalle sobre este ensayo, ver Apndice 2.

Las variables respuestas o dependientes aleatorias fueron: absorbancia a 680 nm,

nmero de filamentos por litro, y biomasa final (g/L). El medio ptimo para este
experimento se escogi por una tcnica matemtica multivariada denominada
superficie de respuesta (ver Apndice 2 con salida del anlisis en Design Expert, y
Apndice 3 que muestra un marco terico breve que explica la tcnica).
Para este ensayo de campo, los medios se prepararon segn esquema de la figura 4.
Los pasos se enumeran a continuacin:
1. Se prepararon soluciones stocks por triplicado con agua destilada y se preservaron
en envases limpios. Los primeros ocho tratamientos se prepararon en dos
soluciones de 500 ml cada una: Solucin I (Stocks A, B y C) y Solucin II (stocks I,

32

D, E, F y II). Las preparaciones se hicieron en grupos de ocho debido a la

capacidad limitada del autoclave (16 botellas de vidrio de 1 L c/u).
2. Se autoclavaron las soluciones I y II de cada tratamiento.
3. Cada tratamiento se afor a 4 L con agua filtrada.
4. Se tom una muestra de 50 mL de cada tratamiento y se realizaron medidas de pH
y conductividad como mtodo de comprobacin de calidad del medio.

Stock A

Stock B

1/2L
Sol. I
de Trat.
X

Stock C

Stock I

Autoclavar I y II

Stock D Stock E

Stock F

Stock II

1/2L
Sol. II
de Trat.
X

4L Trat.
X

Figura 4. Esquema para la preparacin de cada medio (tratamiento) del diseo factorial
fraccionado 26-1.

La siguiente escala de volumen en el estudio, la constituyeron tanques cilndricos de

500 L. El diseo experimental empleado para evaluar el crecimiento poblacional de A.
platensis en este tipo de cultivadores fue un factorial 3 2 con bloques completos
aleatorizados. Se estableci un sistema de 9 tanques cilndricos de 500 litros de
polietileno de alta densidad, con sistema de bombeo y aireacin (blower KAWAKE
HP; 220 V) bajo invernadero (Ficotrn). El sistema de bombeo est compuesto de dos
bombas de pecera (cada bomba aproximadamente suministra 2 Lmin -1). Cada medio
en tanque se inocul con 10% de los volmenes totales, dando como resultado una
concentracin promedio de 83 mg/L. Las prdidas por evaporacin se repusieron con
agua filtrada. Cada 72 h se midi la absorbancia o densidad ptica (DO) en un
espectrofotmetro SHIMADZU UV-160 a = 680 nm. Como medio de cultivo se
emple el optimizado en el diseo factorial fraccionado 26-1. La variable independiente
aleatoria fue la profundidad (cm), debido a que este factor fsico resulta determinante

33

en las tasas de crecimiento y mortalidad de filamentos por la generacin de puntos

oscuros donde la fotosntesis se anula. Las variables respuestas a evaluar fueron la
absorbancia a 680 nm (medida cada tres das) y biomasa total (g/L), sta ltima
determinada una vez realizada la cosecha al final del periodo de incubacin. La figura
5 muestra un esquema de este sistema de tanques y su disposicin espacial para el
experimento.

60 cm

15 cm

25 cm

35 cm

25 cm

60 cm

35 cm

15 cm

BLOQUES

A1-25
A2 25
A3 15
B1 35
B2 15
B3 25
C1 15
C2 35
C3 35

15 cm

60 cm

25 cm

60 cm

35 cm

B
F IL A S

1024`12`` N 6653`13`` O

Figura 5. Esquema de la disposicin espacial de los tanques cilndricos en el Ficotrn para la

ejecucin del diseo de bloques completos aleatorizados.

Un Anlisis de Varianza (acrnimo en ingls ANOVA) de dos vas ( = 0,05) se realiz

para determinar efectos significativos de tratamientos y bloques. La corrida de la
prueba se ejecut en EXCEL versin 2007.
Finalmente, para piletas o cultivadores tipo carrusel de 2000 L no se realiz un diseo
experimental formal, pues slo se dispuso de un sistema con agitacin por paletas de
los ocho construidos en la planta. De esta forma, no se dispuso de rplicas para
comparar medias poblacionales de A. platensis con diferentes tratamientos. Slo se
pudo recurrir a un muestreo sin norma o puntual cada tres das para valorar la
absorbancia a 680 nm y biomasa final (g/L), una vez realizada la cosecha.
Biomasa. Para la obtencin de biomasa seca, en laboratorio se procedi a colectar la
biomasa hmeda en una malla de polister con 27 m de apertura de poro, mientras
que en el campo (Ficotrn) la cosecha se hizo con filtros metlicos con dimetro de
poro de 55 m. El pH del medio de cultivo de A. platensis se caracteriza por su

34

alcalinidad elevada (9,5 a 10), por lo que la biomasa fue neutralizada con agua filtrada
o agua acidulada para fines de aprovechamiento alimenticio; un pH-metro digital
HANNA permiti monitorear la reduccin del pH hasta 7. Finalmente, la biomasa
hmeda y neutralizada fue extendida sobre una superficie de papel parafinado y
colocada en rejas metlicas, para ser secada en un deshidratador a 60C por 24 h. La
biomasa total o final se estableci una vez alcanzado el plateau y sucedidos algunos
das para la estabilizacin de la curva (de 15 a 30 das de incubacin).
Determinacin de la densidad poblacional. Se determin el crecimiento poblacional
de A. platensis por dos mtodos: (1) directo, por conteo de filamentos en cmaras
cilndricas desmontables Utermhl (1958) bajo un microscopio invertido LEICA DMIL, y
(2) indirecto, por absorbancia o densidad ptica en un espectrofotmetro digital
SHIMADZU UV-160 a longitudes de onda () de 680 y 700 nm, correspondientes al
rojo y rojo lejano, respectivamente, en las cuales la clorofila a tericamente tiene
absorcin ptima de luz visible y umbral visible-infrarrojo.
Para el conteo de filamentos, se emple el mtodo de conteo de bandas (Utermhl
1958) en una cmara de 25 mL. Previamente, las muestras se dejaron sedimentar en
la cmara por 24 h. Una vez hecho el cmputo de filamentos por banda, se determin
la densidad ( D ) o nmero de filamentos por litro a partir de la ecuacin:

Dfilamentos /L

S
N 1000 (1)
L T V

Donde:

S = superficie total de la cmara de sedimentacin ( r 2 )

N = nmero total de filamentos contados

L = longitud de la banda recorrida (2 r )

T = ancho de la banda recorrida (segn aumento del objetivo)

V = volumen total de la cmara (25 mL)
Para determinar el ancho de la banda, se calibr el microscopio con una escala
grabada en un ocular (aumento 10x) dividida en 100 lneas, la cual se superpuso a
otra escala de 2 mm de longitud grabada en un portaobjetos ubicado sobre el carro.
Para el aumento de cada objetivo se obtuvieron los siguientes factores de conversin:

35

10x: 3 lneas = 0,05 mm

20x: 10 lneas = 0,08 mm
32x: 20 lneas = 0,1 mm
Previo a cada ensayo con el mtodo indirecto, en el espectrofotmetro se hizo un
barrido (en ingls scan) de absorbancias, en un intervalo de longitudes de onda de
400 a 700 nm, con factibilidad de expandir hacia el espectro UV por el lmite inferior o
el infrarrojo por el lmite superior; de esta manera se verificaron los mximos u ptimos
de absorcin de las cepas de A. platensis.
La densidad ptica ( DO ) es la absorcin de un elemento ptico por unidad de
distancia, para una longitud de onda dada:

DO

A
1
1
I
log10T log10 0 (2)
l
l
l
I

Donde:

A = Absorcin a longitud de onda

l = Distancia que la luz viaja por una muestra (i.e., el grosor de la muestra, o dicho de
otro modo, anchura o abertura de la cubeta, con exclusin de las paredes) medida en
centmetros (cm). Si l = 1 cm, entonces DO = A

T = Transmitancia por unidad

I0 = Intensidad del rayo de luz incidente
I = intensidad del rayo de luz transmitido
(http://es.wikipedia.org/wiki/Densidad_ptica)
Mientras ms alta es la densidad ptica, ms corta es la transmitancia. Esta ltima
medida est acotada entre 0 y 1, si se transforma a porcentaje (como generalmente se
registra en espectrofotmetros), entonces la transmitancia se lee entre 0 y 100%. Para
calibrar el espectrofotmetro, se emple una solucin blanco, la cual tericamente
tiene 100% T o A = 0, y la misma se rest a las absorbancias de las muestras.
Modelos para crecimiento poblacional y cosecha de biomasa. Los estudios
tericos tienen valor predictivo y se verifican en experimentos de laboratorio y campo.
Los supuestos generales de los modelos determinsticos son los siguientes (Begon y
col. 1996):

36

1. Las poblaciones son aisladas o cerradas (E = I = 0; donde E = tasa de emigracin,

I = tasa de inmigracin).
2. Las dinmicas son coetneas (cohortes o individuos de la misma edad).
3. Los individuos son unitarios, excluyendo los modulares (Ej.: colonias de filamentos
o clulas).
4. Todos los individuos se consideran unidades reproductivas.
5. En modelos discretos, el tiempo entre generaciones t se iguala a la unidad.
El modelo de crecimiento densodependiente de partida es el logstico continuo de una
poblacin simple sin estructura:

dN
N
rN 1 (3)
dt
K
Siendo N(t) la densidad al tiempo t; r la tasa per cpita de crecimiento poblacional
cuando N 0, y K la capacidad de carga o densidad de equilibrio.
La solucin de la ecuacin (3) es:

N (t )

N0 K
N 0 ( K N 0 )e rt

(4)

Siendo N0 = N(0).
El modelo de crecimiento logstico, en su forma discreta, se puede expresar como:

N t 1 N t N t r1 bN t (5)
O bien,

Nt 1 Nt 1 r rbNt (6)
Donde N t y N t 1 son densidades poblacionales a tiempos t y t+1, respectivamente, y

b es una constante definida como un trmino de retroalimentacin densodependiente.

Este modelo es iterativo y el sistema de ecuaciones tiene un arreglo matricial que
representa la estructura de la poblacin en el tiempo (Caswell 2001).

37

Como una aproximacin experimental a la tasa de crecimiento instantnea (r), se

determin la tasa de crecimiento per cpita o de recambio en intervalos de tiempo (t,

t+n) en la fase inicial de crecimiento exponencial, r = N/[N(t)t], donde, las tasas

instantnea y media son comparables a densidades bajas (May 1976).
El punto de equilibrio estable (capacidad de carga, N K ) tambin se determin en
forma experimental, a partir del conteo de filamentos en el plateau de la curva de
crecimiento.
El tiempo de duplicacin, tg (Begon y col. 1996), es el intervalo temporal en el que la
poblacin inicial ( N 0 ) se duplica suponiendo crecimiento exponencial. Esto implica
que N(t) al tiempo tg es dos veces el tamao inicial de la poblacin (N(t) = 2 N 0 ). La
definicin matemtica de tg surge de un despeje e integracin de la ecuacin
diferencial de crecimiento exponencial:

dN
rN
dt
2 N0

N0

ln

2N 0
rt g
N0

ln 2 rt g

tg

dN
r dt
N
0

tg

ln 2
(7)
r

Como se puede observar en la ecuacin (7), el tiempo de duplicacin es independiente

del tamao poblacional inicial ( N 0 ).
Con el medio escogido como ptimo en el factorial fraccionado 2 6-1, se reprodujeron
algunos cultivos de A. platensis en botellones de 5 L, y se hicieron conteos de
filamentos clasificados en diferentes tallas (el criterio escogido fue el nmero de
clulas por filamento). Las categoras de tallas escogidas fueron: (1) filamentos con
dos clulas (hormogonios), (2) filamentos con cuatro clulas y (3) filamentos con ms
de cuatro clulas.
Finalmente, con empleo del mismo medio optimizado, se hizo un anlisis de
estabilidad posterior a perturbaciones sobre poblaciones de A. platensis. Dichas
perturbaciones consistieron en extracciones de volmenes (25, 50 y 75%) en la fase
de saturacin o capacidad de carga (K) y dilucin con medio optimizado hasta el
enrase del recipiente. Se graficaron las dinmicas de crecimiento hasta el equilibrio.

38

6.2 Ecologa de comunidades fitoplanctnicas

Los estudios de comunidades fitoplanctnicas se llevaron a cabo en diversas
localidades del pas. Se ubicaron especies nativas de cianobacterias (entre ellas
representantes de los gneros Arthrospira y Spirulina) y eucariotas en ecosistemas
como humedales herbceos de la pennsula de Paria (Edo. Sucre) y El Clavo
(Barlovento, Edo. Miranda), lagunas de inundacin del ro Orinoco (Edo. Monagas),
sabanas inundadas todo el ao (mdulos de Mantecal, Edo. Apure), ambientes
marinos costeros (Baha de Mochima, Edo. Sucre, y Puerto Cabello, Edo. Carabobo),
lagunas hipersalinas (Las Cumaraguas, Edo. Falcn), algunos sistemas contaminados
con crudos, producto de la explotacin petrolera comercial, como la fosa El Caracol
(Edo. Anzotegui), y manaderos naturales de hidrocarburos como la laguna de Boca
Chica en la isla de Margarita, estado Nueva Esparta (Mata Garca 2003). La figura 6
seala la ubicacin geogrfica de los sitios visitados.

Salinas de Las
Cumaraguas,
Paraguan
Laguna de
Bocachica, Isla de
Margarita
Lagunas de
inundacin, Bajo
Orinoco
Humedales de la
pennsula de Paria
Humedales de
Barlovento
Puerto Cabello
Baha de Mochima
Fosa El Caracol,
Edo. Anzotegui
Mdulos de Mantecal

39

Figura 6. Ubicacin
de los sitios de
muestreo (el mapa
se encuentra en
www.guiageo-ameri
cas.com/mapas/ve
nezuela.htm).

Humedales de la pennsula de Paria. La pennsula de Paria est localizada en el

extremo noreste de la regin Nororiental de Venezuela, en el estado Sucre, y abarca
un rea de 1.078 km (figura 7a). Limita al norte con el Mar Caribe y al sur con el golfo
de Paria. La Boca Dragn la separa de la Isla de Trinidad en su extremo este.
Geogrficamente est localizada entre las coordenadas 102700 N 104232 N y
623200 W

631100 W. La geomorfologa de la pennsula de Paria es muy

accidentada. Se trata de un sistema montaoso menos macizo que la serrana del

Interior, con relieves poco prominentes, pendientes de 30 a 45% y alturas
relativamente bajas (500 a 1000 m). El sustrato geolgico est constituido por rocas
del Cretceo metamrfico (cuarcitas, esquistos, filitas), y los rasgos ms importantes
de la evolucin geomorfolgica cuaternaria de los depsitos continentales estn
influenciados por fenmenos tectnicos. Los suelos son en general poco profundos, de
textura entre franco-arenosa y franco-arcillosa. El clima es tropical hmedo en el norte
caribeo (zona de barlovento) y semi-rido o tropical de sabana en el sur (zona de
sotavento). La precipitacin anual media de la pennsula de Paria est comprendida
entre 881,30 y 2348,6 mm, con una clara tendencia de las lluvias a incrementarse en
direccin sur-norte. La temperatura media anual para los primeros 500 m de altura,
gradualmente disminuye de 27,3 a 23,8C (MARN 1992).
La vegetacin natural de la regin comprende una variedad importante de formaciones
que notablemente cambian de norte a sur. El norte est dominado por la selva hmeda
tropical y el sur tiene una vegetacin de sabana con formas arbreas caractersticas
como el chaparro y el manteco. En las desembocaduras de los ros que vierten sus
aguas en el Golfo de Paria o el Mar Caribe, existen comunidades de manglares. Hay
diversas zonas hmedas interiores que contienen una vegetacin palustrina. El
entorno del rea de estudio, es de tipo bosque bajo y denso, con actividad
agropecuaria y levemente intervenido (MARN 1992).
Palmares III fue el sitio escogido para el muestreo en los aos 2008 y 2009 (Proyecto
Fonacit 2001001850). Es un humedal palustrino, segn el sistema de clasificacin de
Tabilo-Valdivieso (1999). Sus aguas son someras y semipermanentes y est ubicado
en un terreno bajo o estero. Su localizacin geogrfica precisa es la vertiente sur de la
pennsula, cerca de la poblacin de Los Palmares, con latitud 103458 N, longitud
625210 W y altitud de 30 m.s.n.m. (figura 7b). El rea del humedal est cubierta de
vegetacin emergente, predominantemente de hbito herbceo, no siendo evidente la
formacin de espejos de agua. Unas pocas especies de fanergamas forman zonas o
bandas monoespecficas, aunque tambin existen algunos sectores con vegetacin
mixta, y al sur limita con un sembrado de cocoteros (figura 7c).

40

Figura 7. (a) Mapa de Venezuela donde se destaca a la pennsula de Paria en un recuadro, (b)
ubicacin del rea de estudio y (c) vista panormica del humedal Palmares III desde una
carretera que lo bordea al norte, la vegetacin herbcea cubre la totalidad de su superficie y
forma bandas monoespecficas, evidenciadas por las tonalidades distintas del color verde, que
cubren toda su superficie sin formar espejos de agua (tomado de Torres y Zoppi de Roa 2010).

41

Palmares III tiene un rgimen hdrico estacional o semipermanente, producto de una

estacionalidad marcada. Valores medios mensuales que sintetizan 47 aos (19532000) de determinaciones del rgimen anual de lluvias en las cercanas del humedal,
registradas por la Estacin Meteorolgica de Irapa, establecen un promedio anual de
precipitaciones de 930,8 mm (MARN 2000). Se define que la estacin seca va de
diciembre a marzo, abril es una transicin de sequa a lluvia, la estacin lluviosa
corresponde al intervalo de mayo a octubre y finalmente noviembre es la transicin de
lluvia a sequa (figura 8).

Figura 8. Pluviodiagrama con precipitaciones medias de 47 aos (1953-2000) del sur de la

pennsula de Paria (datos tomados de la Direccin de Meteorologa del MARN 2000).

Las comunidades de plantas que forman zonas monoespecficas son: (1) gramnea
(Brachiaria mutica (Forssk) Stapt in Pain, Poaceae), (2) leguminosa (Sesbania
exasperata H.B.K., Fabaceae), (3) junco (Cyperus articulatus L., Cyperaceae) y (4)
enea (Typha dominguensis (Pers.) Poir. Ex Steud., Typhaceae).
Humedal de Barlovento. Al este de Caracas, donde finaliza la Cordillera de la Costa,
se inicia la llanura de Barlovento, la cual geopolticamente es una regin del centro de
Venezuela, ubicada en el estado Miranda, que abarca los municipios Acevedo, Andrs
Bello, Brin, Buroz, Pez y Pedro Gual. Esta regin se encuentra inserta en la
depresin de Barlovento, siendo una de las regiones naturales que conforman la
denominada regin Norte Costera. Se ubica entre los paralelos 10 y 11 latitud norte y

42

los meridianos 65 y 67 longitud oeste. Al norte limita con el mar Caribe; al sur lo hace
con la serrana del Interior y el estado Gurico; al este delimita con la serrana del
Litoral de la cordillera de la Costa, el estado Vargas y otros municipios del estado
Miranda;

al

oeste

culmina

en

el

ro

Uchire

estado

Anzotegui

(http://es.wikipedia.org/wiki/Barlovento_(Venezuela)).
El rea donde se realiz la investigacin en 2009 (Ecologa de Humedales, materia
electiva del postgrado en Ecologa IZET-UCV), se denomina El Clavo, ubicado a 10
msnm, 101534 N y 66728 O (figura 9). La precipitacin total anual es 2484 mm,
con distribucin bimodal, con mximos en julio-agosto y noviembre-diciembre y la
mnima entre febrero-marzo, por lo cual la estacin seca es corta (MARN 1996). De
acuerdo al sistema de clasificacin de Holdridge (Ewel y Madriz 1968, cit. Gordon y
Feo 2007), la zona de vida corresponde a un bosque hmedo tropical. El humedal
herbceo es inundado por el ro Colorado, afluente del ro Tuy, y est dominado por
Hymenachne amplexicaulis (Poaceae). En algunos sitios del humedal se encuentran
otras especies como: Montrichardia arborescens (L.) Schott, Mimosa sp., Polygonum
acuminatum Kunth, Ludwigia octovalvis (Jacq.) Raven, Ipomoea sp., Ludwigia
helminthorrhiza (Mart.) Hara, Pistia stratiotes L., Eichhornia crassipes (Mart.) Solms.,
Lemna sp., Salvinia auriculata Aubl., Azolla filiculoides Lam. y Utricularia sp. La textura
de los suelos del humedal es arcillosa (72% arcilla, 22,4% limo y 5,6% arena); el
porcentaje medio de materia orgnica total del suelo es 2,7%, y su pH medio 6,4. La
conductividad del agua vara entre 116 y 294,7 mS/cm, y el pH del agua 6-8 (Feo
2002; cit. Gordon y Feo 2007).

Figura 9. Vista satelital del rea de estudio (humedal herbceo de El Clavo). La lnea blanca
dibujada en el centro de la imagen seala el transecto levantado en la salida de campo (fuente:
http://earth.google.com/).

43

Se muestrearon dos zonas contiguas de vegetacin emergente monoespecfica, en un

sentido suroestenoreste en la parte ms estrecha del humedal (ver en la figura 9 la
lnea blanca que seala el transecto). Las especies dominantes en cada zona de
vegetacin fueron: (1) la hierba arbrea Heliconia marginata (Heliconiaceae), y (2) la
gramnea Hymenachne amplexicaulis. Las figuras 10a y 10b muestran vistas parciales
de las dos zonas de vegetacin estudiadas en el humedal herbceo de El Clavo.

(a)

(b)
Figura 10. Tomas fotogrficas parciales de las dos zonas de vegetacin emergente estudiadas:
(a) vista de la amplia zona central de Hymenachne amplexicaulis, en primer plano la zona de
Heliconia marginata que bordea todo el litoral sur; (b) zona de H. marginata (fotos: Carlos
Lugo).

44

Lagunas de inundacin del Orinoco bajo. El Orinoco es uno de los ros ms

importantes del mundo, no tanto por su longitud y caudal (2.140 km y algo ms de
30.000 m/s), ni por la extensin de su cuenca (989.000 km); ni siquiera por las
peculiaridades que encierra, sino por su importancia histrica y econmica y la
significacin que ha tenido para Venezuela, pas en el que se extiende la mayor parte
de su cuenca, con casi las dos terceras partes de la misma. Es probablemente el ro
ms caudaloso del mundo con relacin a su cuenca, similar en extensin a la del
Danubio, pero con un caudal que triplica al de este ltimo. En toda la extensin de la
cuenca del Orinoco los climas son isotermos, es decir, climas con escasas variaciones
de temperatura a lo largo del ao (la diferencia entre la temperatura media de los
meses ms y menos clidos es de apenas 3C), como corresponde a la zona
intertropical. Se distinguen de manera bastante ntida cinco grandes tipos de clima en
las zonas bajas (hasta los 800 msnm aproximadamente, segn las consideraciones de
Antonio W. Goldbrunner, fundador de los estudios de Meteorologa en Venezuela), de
los que destacan el clima de selva (Af en la clasificacin de Kppen) y el de sabana
(Aw en la misma clasificacin) (http://es.wikipedia.org/wiki/Cuenca_del_Orinoco). El
clima de sabana es el caracterstico de la zona del Orinoco bajo.
La temporada de sequa se extiende de noviembre a abril y la de lluvia se ubica entre
mayo y octubre (Instituto Nacional de Canalizaciones 1999, cit. Rodrguez y
Betancourt 1999). Como sistema de inundacin, el ro Orinoco presenta en su orilla
bosques sometidos a inundaciones peridicas. Estos bosques crecen cercanos a las
lagunas, y en las reas de inundacin se desarrollan las macrofitas acuticas (BlancoBelmonte 1990). Entre las especies de plantas acuticas dominantes en estas
lagunas, se encuentran las flotantes libres Eichhornia crassipes (bora) y Paspalum
repens (tapn volador).
La figura 11 muestra el rea de estudio a orillas del ro Orinoco en la ribera sur del
estado Monagas, en las proximidades del puente Orinokia. Se destacan la ubicacin y
una fotografa de la laguna Macapaima, uno de los ambientes estudiados en el periodo
seco del ao 2010 (Proyecto PDVSA-IZET Orinokia). Algunos tramos son inundados
en forma directa y constituyen lagunas muy alargadas, paralelas y muy prximas al
curso principal; tambin se forman brazos y canales que comunican a unas lagunas
con otras. La laguna Macapaima es un sistema que se inunda en forma secundaria por
medio de un canal; estas lagunas suelen tener formas redondeadas y no se ubican
contiguas al ro Orinoco, sino que ms bien algo apartadas tierra adentro. En poca de
sequa, estas lagunas redondas suelen quedar aisladas porque bajan los niveles tanto
del curso principal como de los canales.

45

Figura 11. Ubicacin geogrfica del rea de estudio al sur de Monagas (Orinoco bajo), con
detalle de la localizacin en el mapa y fotografa panormica de Macapaima, uno de los
cuerpos de agua visitados (foto: Rubn Torres).

Mdulos inundables de Mantecal. Los mdulos de Mantecal son un caso especial de

manejo agroecolgico. En ellos, la regulacin del caudal de agua se efecta mediante
la construccin de diques-carreteras en las sabanas inundables de los Llanos bajos de
Venezuela (Cressa y col. 1993). Estos diques tienen una extensin de 3.600 ha con
una capacidad de 40 x 106 m3 (Schargel y Gonzlez 1973, cit. Cressa y col. 1993).
Los mdulos se encuentran en el centro-norte del estado Apure, prximos a Mantecal
y al curso del ro Apure. Mantecal es una poblacin satlite de la pequea ciudad de
Bruzual, capital del Municipio Muoz, jurisdiccin a la cual el pueblo pertenece
(http://es.wikipedia.org/wiki/Mantecal). El estudio en el ecosistema artificial de los
mdulos se llev a cabo en las postrimeras del periodo lluvioso, transicin hacia la
sequa, en noviembre de 2010 (Proyecto Mantecal, IZET).
En casi todo el territorio apureo prevalece una vegetacin de sabana, con amplio
dominio del componente herbceo, entre este ltimo se incluyen abundantes
pastizales que alimentan a numerosas reses de ganado vacuno y bufalino de la zona.
Tambin existen matorrales y arbustos, frecuentemente acompaados de enormes
palmas que agrupadas forman los paisajes de morichales y palmares comunes a todo

46

el llano. Posee tambin secciones intercaladas de selvas, llamadas "de galera", y en

menor grado, zonas de bosque tropical lluvioso y hmedo montano en las
estribaciones de los Andes. En esteros y mrgenes de ros prolifera la vegetacin
acutica (http://es.wikipedia.org/wiki/Apure).
Fosas petroleras. Dentro del marco de estudios de ambientes acuticos
continentales, se determin la realizacin de muestreos de plancton en fosas
petroleras, que son ambientes residuales altamente contaminados derivado de su
empleo como sumideros de desechos de la actividad petrolera comercial. Interesan
adems estos ambientes contaminados, por el hallazgo de especies fitoplanctnicas
que suponen ser un gran potencial para la biotecnologa petrolera, en procura de la
derivacin de biocombustibles (biodiesel).
Muestras compuestas de suelo arenoso, materia vegetal, hidrocarburo y agua, fueron
colectadas de la macro-fosa Caracol en la regin de Caico Seco, ubicada en el
municipio Aragua del estado Anzotegui, en el ao 2009. Esta fosa fue escogida por
representar un rea de exposicin histrica a hidrocarburos que oper durante muchos
aos como una de las principales y ms grandes recolectoras de desechos petrolferos
de la zona. La figura 12 muestra un acercamiento a la zona de descarga.

Figura 12. Imagen correspondiente a un sector de la orilla de la fosa El Caracol, (Municipio

Aragua, Edo. Anzotegui, 2009), donde se pueden apreciar los desechos petroleros que
conforma parte del fondo de la misma (Foto: Olaf Ilzins, IDEA).

47

Igualmente se colectaron muestras de un pozo (P57X) ubicado al norte del estado

Bolvar, 2009. Las muestras provienen en forma especfica de una pequea charca
fangosa en la parte exterior del pozo mencionado, enmarcada en un lugar donde se
encuentra petrleo, ripios y sedimentos de perforacin.
Laguna de Boca Chica. Se trata de una laguna costera hipersalina ubicada en la
proximidad de Punta Arenas, en el extremo suroccidental de la pennsula de Macanao,
isla de Margarita, Edo. Nueva Esparta (figura 13). Se trata de un ambiente extremo
donde se han reportado emanaciones naturales de crudos. El sitio fue visitado en julio
de 2009 para obtener algunas muestras fitoplanctnicas.

Figura 13. Ubicacin de la laguna de Boca Chica (crculo azul) en la pennsula de Macanao,
isla de Margarita, estado Nueva Esparta (mapa: http://www.disfrutevenezuela.com/MunicipioPeninsula-de-Macanao-Mapa.html).

Mata Garca (2003) cita en forma textual: En lo que respecta a Margarita, en un

artculo del ao 1919, Charles Caracristi afirm haber descubierto un mene en Punta
Arenas (Pennsula de Macanao). Aguerrevere (1936), expresa en el mismo orden de
ideas: ... en la regin occidental de Margarita, cerca de la Laguna de Bocachica, hay
unas pequeas manifestaciones de petrleo (...), no quiere esto decir que se haya
comprobado definitivamente que no hay depsitos de valor comercial en ese lugar.
Lorenz (1951, cit. Mata Garca 2003), ofreci una explicacin de las potencialidades
petrolferas de Margarita: La isla de Margarita propiamente ofrece pocas condiciones
favorables para la existencia de yacimientos petrolferos, en vista de que: 1) el

48

cretcico, por su carcter metamrfico, cabe descartarlo como roca madre; 2) los
sedimentos terciarios no poseen espesores halagadores; 3) estructuras favorables son
inestables o estn parcialmente erosionadas.
Baha de Mochima. Esta baha profunda y semi-cerrada, de gran belleza paisajstica,
forma parte del Parque Nacional Mochima, Edo. Sucre, en los lmites con el Edo.
Anzotegui, a orillas del mar Caribe. El Parque Nacional Mochima se encuentra
altitudinalmente ubicado desde 0 hasta 600 msnm, al noreste de Venezuela, entre las
ciudades de Barcelona, Puerto la Cruz y Cuman, y se extiende a lo largo de la costa
en un rea de 94.935 ha (http://www.mochima.org/).
El clima del Parque Nacional Mochima es semirido. En la costa las temperaturas
oscilan entre 22 y 28C, y existen dos periodos contrastantes: (1) una poca seca que
se extiende de enero a mayo, con una media de lluvias de 3,5 mm/mes y (2) una
poca lluviosa entre junio y diciembre, con una media de lluvias de 60-70 mm/mes. En
el parque existe una variada vegetacin en donde predominan cactus, arbustos,
helechos y orqudeas, encontrndose rboles de mayor tamao en la zona ms alta
del parque. Parte de la flora la conforman los mangles y la hierba de vidrio (Salicornia
fruticosa, Sesuvium portulacastrum y Batis martima). Se pueden conseguir cactceas
como el guamacho y leguminosas como el cuj y el dividive (http://www.mochima.org/).
En la poblacin de Mochima, ubicada al sur de la baha, se encuentra la Estacin
Biolgica Mochima (Sucre), que es una dependencia de la Fundacin Instituto de
Estudios Avanzados (IDEA). El proyecto de microalgas (Proyecto BID-Fonacit
2006000537), cuya acometida impuls la Asociacin Civil Gente de Ciencias, est
embebido

en

un

megaproyecto

(Hidrocarburos

Verdes)

de

esta

institucin

gubernamental. Por tal motivo, se procedi a la toma de muestras fitoplanctnicas y

zooplanctnicas en esa localidad marina costera, en agosto de 2009, con el inters
especial de colectar especies de microalgas marinas de gran potencial para la
obtencin de biocombustibles.
Salinas de Las Cumaraguas. Las Cumaraguas es un sitio natural de salinas,
ubicadas al noreste de la pennsula de Paraguan, especficamente en el Municipio
Falcn. Su acceso es por va terrestre. Presentan un espectculo digno de ver en
horas del atardecer, cuando el tanino que contienen las aguas que irrigan ese sector,
les torna el color a rojizo. El estado Falcn cuenta con grandes potencialidades para el
desarrollo de la industria salinera. Existen cinco (05) salinas naturales y unas 220.000
ha de superficie aptas para la construccin de salinas artificiales repartidas a lo largo
del territorio falconiano. De las salinas del estado, slo Las Cumaraguas se encuentra

49

bajo explotacin industrial y privada, siendo el resto de las salinas explotadas de

manera artesanal (http://www.tuplaya.com/paginasfalcon/salinas/lascumaraguas.htm).
Las coordenadas astronmicas de las salinas de Las Cumaraguas son 1206 N y
6954 W (Guevara y col. 2005).
Ambientes hipersalinos como Las Cumaraguas y Boca Chica, ambos con condiciones
semi-ridas y precipitaciones escasas, son propicios para el desarrollo de especies
extremfilas que toleran grandes concentraciones de NaCl, como especies del gnero
Dunaliella (Chlorophyta), las cuales constituyen las fuentes vivientes ms ricas en
carotenoides, contando hasta 14% de su masa seca (Guevara y col. 2005), lo que se
traduce en grandes posibilidades para su empleo en biotecnologa alimentaria,
farmacutica y pigmentos. Es por esto que en octubre de 2010, en el marco del
proyecto de microalgas para la exploracin de especies nativas de gran valor
biotecnolgico, se visitaron las salinas de Las Cumaraguas para obtener muestras de
agua con grandes densidades poblacionales de Dunaliella spp., para apuntar al inicio
de su cultivo en condiciones controladas de laboratorio y optimizar el medio nutritivo.
Puerto Cabello. El muelle de Puerto Cabello est localizado en la ciudad del mismo
nombre, norte del estado Carabobo, regin Central de Venezuela, a orillas del mar
Caribe. Se trata de un ambiente marino costero muy perturbado por actividades
antrpicas relacionadas con dinmicas de las faenas portuarias, refineras y el vertido
de efluentes domsticos. La ciudad de Puerto Cabello tiene una poblacin aproximada
de 203.633 habitantes y su puerto es el segundo en importancia para el pas, debido a
su gran actividad de importacin de materias primas para el sector industrial
venezolano, que normalmente se trasladan hacia Valencia, la capital del estado
Carabobo, y otras regiones del pas. El Palito est a la entrada de Puerto Cabello, una
de las refineras de petrleo ms importantes del pas. La ciudad tambin posee
relevancia en el rea comercial y turstica, pero su actividad por tradicin ha sido la
portuaria (http://www.ipapc.gov.ve/).
La temperatura oscila entre 23 y 30C, con una media anual de 27C. El clima es
semirido en la franja litoral con una precipitacin anual de 463 mm. En tierra
predomina la vegetacin xerfila, y en ambientes estuarinos y marinos costeros se
extiende el bosque de manglar, con el mangle rojo (Rhizophora mangle) como la
especie dominante (http://es.wikipedia.org/wiki/Puerto_Cabello). Se muestrearon
diversos punto en el muelle, en enero de 2011, en procura de evaluar la composicin
fitoplanctnica y zooplanctnica del lugar y caracterizar su estado ambiental.

50

El trabajo de campo se ejecut como se describe a continuacin:

Se hicieron muestreos en ambientes parcelados, como humedales herbceos y
litorales con vegetacin, por el modelo de muestreo estratificado sin afijacin (nmero
homogneo de muestras), que sirvi de muestreo piloto para trabajos posteriores en
los mismos sitios con muestreo por conglomerados con afijacin ptima, es decir,
mayor nmero de muestras se tomaron en lugares con varianzas altas y menor
nmero en zonas con varianzas bajas (Azorn 1970, Scheaffer y col. 1987). En cada
estrato se tomaron al azar cinco muestras de fitoplancton, para ello se levantaron
parcelas de 2 2 m y se escogieron pares ordenados con una tabla de nmeros
aleatorios. Las muestras se colectaron con una botella de captacin LaMotte de 1 L,
en forma sistemtica desde el borde hasta el centro de la parcela, de este modo slo
se perturbaron los puntos muestreados, sin alterar el resto. Las muestras de
fitoplancton se fijaron in situ con solucin de lugol.
En aguas abiertas (espejos de agua y ambientes marinos costeros), el fitoplancton se
colect en forma diferente. Tres puntos a lo largo de un transecto, con aleatorizacin
del tiempo en minutos para la escogencia del primer punto, permitieron tomar dos
muestras puntuales de fitoplancton en cada sitio con una botella LaMotte de 1 L.
Posteriormente, en forma continua se tomaron muestras muy grandes por medio de
dos arrastres horizontales de 5 min con red (poro = 105 m) realizados desde una
pequea embarcacin con motor fuera de borda a una velocidad de 2 nudos 2. El
sistema de captura por botella permiti la retencin de fitoplancton pequeo
(nanoplancton), pues constituye un tipo de trampa hermtica que captura la muestra
con el agua, mientras que la red tom en forma selectiva microalgas de mayor tamao.
Como complemento al estudio comunitario, en los mismos ambientes se tomaron
algunas muestras de zooplancton, para conocer la microbiota animal asociada al
fitoplancton. Se tomaron dos muestras con botella LaMotte de 1 L en humedales
herbceos y ambientes litorales, y dos barridos con red (poro = 105 m) en ambientes
abiertos (lagunas de inundacin y ambientes marinos costeros). Las muestras se
fijaron in situ con solucin de formalina al 10% V/V.
Finalmente, se midieron in situ algunas variables ambientales (pH, conductividad,
salinidad, O2 disuelto y temperatura) con un medidor digital HORIBA U-10, bajo la

1 nudo = 1 milla nutica por hora = 0,5144 metros por segundo (SI). Esta definicin se basa
en el acuerdo internacional sobre la longitud de la milla nutica, adoptado por EE. UU. (que
utilizaba previamente una longitud de 1.852,249 m) y el Reino Unido (que utilizaba previamente
una longitud de 1.853,184 m), entre otros pases (http://es.wikipedia.org/wiki/Nudo_(unidad)).

51

lmina de agua. La radiacin solar se determin como luminancia (densidad de

fotones) con un luxmetro LUTRON-LX y la profundidad con una vara graduada.
Laboratorio. Una vez trasladadas las muestras, stas se limpiaron y procesaron para
identificar las especies y determinar sus abundancias (conteos en cmara Bogorov
bajo estereoscopio o en cmara Utermhl bajo microscopio invertido). Las especies
fitoplanctnicas se identificaron con ayuda de claves e ilustraciones: Ortega (1984),
Varela y col. (1986) y Matto y Parra (1995). Para el zooplancton la taxonoma se hizo a
partir de los trabajos de Edmonson (1959), Elster y Ohle (1978), Infante (1980),
Dussart (1984), Reid (1984), Zoppi de Roa y Vsquez (1991), Zoppi de Roa (1993),
Velho y Lansac-Tha (1996) y Velho y col. (1996).
Para algunas muestras de agua tomadas en un humedal de Barlovento, se hicieron
algunos anlisis de nutrientes, principalmente nitrgeno (mtodo de Kjeldahl (1883)) y
fsforo (mtodo de Murphy-Riley (1962)). Las muestras de agua se fijaron en campo
con cido sulfrico. De seis puntos muestreados en la zona de H. marginata, las
muestras tomadas en los puntos 1, 2 y 3 estaban muy prximas, por lo que fueron
unidas y se obtuvo una muestra combinada, lo que permiti tener una muestra ms
representativa. Los mtodos qumicos estn representados en las figuras 14 y 15.
Para muestras de Paria, algunos nutrientes se determinaron por absorcin atmica.

Muestra de
campo fijada con
cido sulfrico

Filtracin de
la muestra

Destruccin de la
materia orgnica
con cido sulfrico
concentrado

Equipo de
destilacin
Kjeldahl

Figura 14. Marcha analtica simplificada para la determinacin de nitrgeno en muestras de

agua con el mtodo Kjeldahl (1883) (contina en la pgina siguiente).

52

Figura 14. Continuacin (Fotos de equipo Kjeldahl y sucedneas tomadas de una presentacin
digital del curso de Ecologa de Humedales, Postgrado en Ecologa, IZET, 2009).

Muestra de
campo fijada
con cido
sulfrico

Filtracin de
la muestra

Destruccin de la
materia orgnica
con cido sulfrico
concentrado

Medicin y
curva de
calibracin

Figura 15. Marcha analtica simplificada para la determinacin del fsforo por el mtodo
colorimtrico de Murphy Riley (1962). Las dos imgenes inferiores fueron tomadas de una
presentacin digital del curso de Ecologa de Humedales, Postgrado en Ecologa, IZET, 2009.

53

ndices de diversidad. Para el anlisis comunitario se cumplieron las pautas

siguientes:
1. Los cmputos del fitoplancton quedaron expresados segn el nivel de organizacin
o forma de vida en clulas, colonias y filamentos por litro, para el caso de muestras
obtenidas con botella de captacin, o en clulas, colonias y filamentos por metro
cbico para el caso de muestras tomadas con red. En forma anloga para el
zooplancton, los organismos totales quedaron expresados en individuos por litro
(Ind./L) o individuos por metro cbico (Ind./m3), segn que el mtodo de captura
haya sido por empleo de botella de captacin o red, respectivamente. Para la
extrapolacin al volumen de arrastre o barrido con red, V, se calcul la distancia, d,
recorrida en bote a partir del tiempo recorrido y la velocidad de la embarcacin, la
cual fue aproximadamente constante, resultando un movimiento rectilneo
uniforme. Esta distancia se multiplic por el rea de la boca de la red, A, que es
circular (A = r2), obtenindose el volumen, V, de un cilindro, V = dr2.
2. La riqueza (S) y la equidad ( J ' ) (Pielou 1975) son dos parmetros comunitarios de
relevancia para caracterizar la diversidad, por lo que fueron calculados. La riqueza
es la sumatoria de las especies presentes en la comunidad y es el ndice de
diversidad ms sencillo que se conoce. Por su parte, la ecuacin que describe a la
equidad es la siguiente:

J ' = H ' /H max = H ' /lnS (8)

Donde H ' es el ndice de diversidad de Shannon-Wiener (Shannon y Weaver 1949) y

H max = lnS es la diversidad mxima. El uso del ndice de Shannon-Wiener se basa en

suponer que los individuos se muestrean al azar en una poblacin infinita y que todas
las

especies

estn

representadas

en

la

muestra.

Este

ndice

se

define

matemticamente como:
S

H ' = -pi lnpi (9)

i =1

Siendo pi la fraccin de abundancia de la especie i.

3. Se emple el ndice de Simpson, D (Simpson 1949), el cual es un ndice de
dominancia y representa la probabilidad de que dos individuos obtenidos al azar de

54

una muestra pertenezcan a la misma especie. Por lo tanto, valores mayores

indican menor diversidad. Su representacin matemtica es:
S
n n 1
D = i i
(10)
i =1 N N 1

El cual normalmente es calculado como:

S

D = pi2 (11)
i =1

Cuando se utiliza el recproco de este ndice (1/D), los valores son interpretados como
el nmero de especies esperado de una muestra con una determinada distribucin de
individuos en especies. El valor 1/D aumenta cuando la muestra es ms equitativa, por
lo cual 1/D tiene un significado biolgico ms claro que el ndice original.
Otro ndice de dominancia empleado es el de Berger-Parker (1970):

d=

N mx
(12)
N

Donde:

N mx = nmero total de individuos de la especie ms abundante

N = nmero total de individuos en la comunidad

Se determin el ndice de similitud o distancia Jaccard (1901), el cual es definido como
la razn entre el tamao de la interseccin y el tamao de la unin de dos conjuntos
de muestras, por lo que Del Pino y col. (2006) lo clasifican como un ndice de
diversidad beta (), donde se considera la tasa o grado de cambio en la composicin
de especies entre diferentes comunidades en un paisaje.
El programa ejecutable libre PAST se utiliz para la determinacin de los ndices
anteriormente descritos.
Anlisis de Datos. El manejo de la informacin obtenida se hizo con un Anlisis de
Datos (Andrienko y Andrienko 2006), que describe el patrn de distribucin espacial y
temporal de las especies asociadas a diferentes ambientes. El anlisis de datos se
llev a cabo en tres fases:
1. Descriptiva (anlisis de homogeneidad, asimetra y curtosis de las variables,
evaluacin de valores extremos). Se establecieron estadsticos robustos para

55

variables con notables asimetras y valores extremos. Se eliminaron del anlisis

especies zooplanctnicas con desviaciones estndares menores a 0,4 Ind./L (Pea
y Rodrguez 2003).
2. Anlisis de Componentes Principales (ACP) iterativo para escoger las variables
estadsticamente importantes representadas en grficos biplot tridimensionales
(Fluir 1988). En este anlisis se utilizaron las densidades poblacionales de las
especies fitoplanctnicas (clulas, colonias y filamentos por litro) y zooplanctnicas
(Ind./L) como variables dependientes aleatorias. Con esta metodologa se
seleccionaron las especies que se consideraron ms importantes desde el punto
de vista estadstico y que posteriormente se emplearon en el Anlisis de
Agrupamiento.
3. Anlisis de Agrupamiento o Cluster Analysis (Anderberg 1973), con empleo de la
Distancia Eucldea como medida de disimilitud, el mtodo de Wards como mtodo
de agrupamiento y las variables dependientes aleatorias escogidas con el ACP:
densidades poblacionales de las especies zooplanctnicas (Ind./L). Se calcularon
los centroides para establecer las especies con mayor ponderacin. Un Anlisis
Multivariado de Varianza (acrnimo en ingls MANOVA) se utiliz para establecer
diferencias significativas entre grupos ( = 0,05).
Los anlisis descriptivos multivariados se realizaron en el software MVSP 3.0. Los
programas JMP versin 3.2.1 (1997) y SPAD versin 3.0 (1999) sirvieron para hacer
Anlisis de Datos en general, y MINITAB release 13.20 (2000) fue otra herramienta til
para evaluar la fase descriptiva.

56

7. Resultados
7.1 Cultivos
Los medios de cultivo empleados para las especies del cepario y la cmara de
crecimiento estn listados en la Tabla 5 con sus respectivas fuentes bibliogrficas. Es
importante acotar que las temperaturas del cepario (cmara fra sin sistema de
agitacin) y la cmara de crecimiento (cmara clida con sistema de agitacin
continua), 24 y 27C, respectivamente, se mantuvieron constantes a lo largo del
periodo de incubacin, pues se trata de un ambiente controlado. Como se puede
observar, el medio algal (Fbregas y col. 1985) fue el de ms amplio uso en el
laboratorio, puesto que result adaptable a los requerimientos de una gran variedad de
especies de microalgas provenientes de distintos ambientes (dulceacucola, marino y
salinas). El medio Spirulina (Schlsser 1994) con las modificaciones introducidas por
Parra (2005) funcion muy bien para todas las cepas de Arthrospira spp. cultivadas en
la Cmara de Crecimiento, y se pudieron escalar en esa misma preparacin de placas
y tubos con cuas a medio lquido en tubos y posteriormente a fiolas.
Tabla 5. Medios de cultivos preparados en laboratorio para crecimiento de poblaciones de
microalgas y modalidades de preparacin y recipientes.

Medio de cultivo

Especie

Cepa

Placas/cuas
(medio slido
en cpsulas y
tubos)

Spirulina (Schlsser
1994, modificacin
del Aiba y Ogawa
1971) + modificacin
de Parra (2005)

Arthrospira mxima

Cubana

Arthrospira platensis

Cubana

Arthrospira platensis

Lefevre

Spirulina + agua de
mar (50:50) (Morales,
comunicacin
personal) y F/2
(Guillard 1975)

Spirulina subsalsa

C4

Chu-13 (Dayananda y
col. 2007)

Botryococcus braunii

UTEX572

Nannochloropsis sp.

MAD1

Tetraselmis sp.

TE

Isochrysis galbana

Nueva
Esparta

Chlamydomonas sp.

F/2 (Guillard 1975)

Medio Algal
(Fbregas y col. 1985)

57

Tubos
(medio
lquido)

Fiolas (medio
lquido)

Tabla 5. Continuacin.

Medio de cultivo

Medio Algal
(Fbregas y col. 1985)
Medio Algal con
adicin de silicatos

Medio Algal con

adicin de agua de
mar

Medio Algal con

adicin de solucin
saturada de NaCl
(grado alimenticio)

Serpa y Caldern
(2006)

Bristol (Bold 1949)

Especie

Cepa

Placas/cuas
(medio slido
en cpsulas y
tubos)

Chlorella vulgaris

Scenedesmus sp.

Chaetoceros sp.

Porphyridium
cruentum

C1

Rhodosorus marinus

C2

Tetraselmis sp.

TE

Dunaliella salina

Dunaliella viridis

Dunaliella
primolecta

DPN

Dunaliella salina

Dunaliella viridis

Dunaliella
primolecta

DPN

Haematococcus
pluvialis

HPOC8

Tubos
(medio
lquido)

Fiolas (medio
lquido)

Una evaluacin microscpica de las diferentes cepas, cultivadas en la cmara fra sin
agitacin y la cmara clida o de crecimiento rpido con agitacin, pudo comprobar
que los cultivos estaban en buen estado (monoalgales y poco detrito), donde las cepas
cubanas de A. platensis y A. maxima mostraron filamentos helicoidales, si bien en
poblaciones de la segunda se evidenciaron algunos filamentos lineales. Por su parte,
la cepa Lefevre de A. platensis se caracteriz por mostrar una poblacin integrada en
forma absoluta por filamentos lineales en todas las rplicas ubicadas en la Cmara
de Crecimiento. La figura 16 muestra un conjunto de fotografas tomadas con una
cmara digital PAX-CAM acoplada al microscopio invertido y al computador, lo que
permiti visualizar los filamentos con alta resolucin y detectar el estado de pureza de
los cultivos. Durante todo el periodo de mantenimiento, las observaciones al
microscopio no detectaron invasiones de otras especies de microalgas.

58

Figura 16. Algunas imgenes tomadas bajo microscopio invertido de las poblaciones de las
diferentes cepas de Arthrospira spp. en la Cmara de Crecimiento (LOA-IZET).

59

Fig. 16. Continuacin.

La cianobacteria Spirulina subsalsa se cultiv en medio Spirulina + agua de mar

(50:50), puesto que la cepa existente en la coleccin proviene de un ecosistema
estuarino. Los cultivos fueron viables y las poblaciones crecieron de modo rpido. Sin
embargo, una observacin que se hizo recurrente en estos cultivos, es que una vez
que las poblaciones eran grandes, se iniciaba la formacin de grandes colonias de
filamentos muy adosados entre s (grandes flculos), y que adems segregaban una
sustancia mucilaginosa abundante y viscosa que envolva a las colonias y, al cabo de
pocos das, dicha sustancia mezclada con sal precipitada del medio se endureca y
conformaba una especie de cascarn. La consecuencia de esto es que las colonias de
filamentos se fijaban a las paredes del recipiente, y no podan ser desprendidas, an
con la agitacin constante del aire presurizado enviado del blower. Como frmula
alternativa, S. subsalsa fue cultivada en medio F/2. Esta modificacin de medio deriv
en un resultado positivo consistente en la no formacin de las capas cementantes
evidenciadas en el medio Spirulina + agua de mar (50:50), pero en contraposicin a
ello las poblaciones no incrementaron su tamao en la forma que lo hacan en el
medio anterior, las mismas se mantuvieron en flculos pequeos y dispersos con una
coloracin verde menos intensa que el caso citado.

60

Otras especies de la coleccin. En trminos generales, los medios funcionaron,

salvo el medio Algal para Dunaliella primolecta y el medio Serpa y Caldern (2006)
para todas las especies del gnero Dunaliella, puesto que las cepas no pudieron
adecuarse a los mismos bajo las condiciones de la Cmara de Crecimiento. Algunas
de las fiolas con cultivos de D. salina y D. viridis en medio Algal exhibieron
crecimientos poblacionales notables, dada la coloracin verde que adquirieron y no
incolora como en D. primolecta. Algunas de las cepas que han crecido exitosamente
en fiolas de 250 mL se trasladaron a fiolas de 2000 mL, y han podido replicarse. No
obstante, dos cultivos en fiolas de 250 mL de D. viridis en buen estado de crecimiento
al ser unidas y llevadas a una fiola de 2000 mL con medio nuevo no pudieron
adecuarse y permanecieron en estado de latencia.
Una especie que ha crecido muy bien en fiolas pequeas y se ha trasvasado a fiolas
grandes es la clorofita dulceacucola Haematococcus pluvialis. Esta microalga ha
permanecido en una fase de crecimiento rpido con poblaciones sanas y libres de
contaminacin por otras especies de microalgas. El color que siempre se ha
observado en los cultivos de esta especie es un verde oliva, el cual es tpico de una
poblacin con una estructura de clulas jvenes, y no la coloracin roja prpura
predominante en una poblacin de clulas maduras en condiciones de estrs.
Los cultivos de las especies Botryococcus braunii, Nannochloropsis sp. y Tetraselmis
sp., especies de particular inters en la produccin de biocombustibles, se
mantuvieron en muy buen estado. La primera especie creci bien en medio Chu-13
(Dayananda y col. 2007) y las otras dos hicieron lo propio en el medio F/2 (Guillard
1975). Las tres especies pudieron ser escaladas a fiolas de 2000 mL en la cmara
clida, y el crecimiento poblacional fue ptimo. Como observacin curiosa, uno de los
cultivos de B. braunii en fiolas sediment, las clulas formaron grandes colonias y al
parecer produjeron una sustancia cementante que las adhiri al fondo y paredes del
recipiente de vidrio, a pesar de que el sistema de la cmara clida cont con agitacin
fuerte por medio de aireacin presurizada. La figura 17 muestra una serie de
fotografas donde se evidencia la condicin monoalgal de los cultivos de estas
especies, y slo algunos animales (rotferos) y protozoarios (ciliados) han sido
observados.
Finalmente, como se present en la Tabla 5, algunas especies cultivadas, como
Chlamydomonas sp., Chlorella vulgaris y Chaetoceros sp., no pudieron ser escaladas
a fiolas, bien sea porque sus tamaos poblacionales eran pequeos y permanecieron
en tubos de ensayo dentro de la cmara fra, o algunas fueron trasvasadas y no
pudieron crecer a mayores volmenes (efecto de dilucin).

61

Figura 17. Algunos cultivos de microalgas de inters biotecnolgico presentes en la Cmara de

Crecimiento (LOA, IZET).

62

Figura 17. Continuacin.

63

Figura 17. Continuacin.

64

7.2 Ensayos con poblaciones cultivadas de Arthrospira platensis

Los ensayos con poblaciones de Arthrospira platensis tuvieron como punto de partida
un ensayo factorial 22 preliminar en dos bloques (cilindros y fiolas). Se prepararon
cuatro medios combinados: medio Spirulina (Schlsser 1994) con modificaciones de
Parra (2005), renombrado en este ensayo como medio Parra ( +), medio estndar
original de Aiba y Ogawa (1977) (+ ), medio mximo (+ +) y medio mnimo ( ). La
Tabla 6 muestra las concentraciones milimolares de los macronutrientes en las cuatro
combinaciones resultantes, con atencin en los niveles de dos cationes alcalinos (Na+
y K+), cuyas concentraciones fueron modificadas de tal manera que no se afectaran
las concentraciones del resto de los iones. El ion cloruro (Cl-) por estar estrechamente
relacionado con el ion sodio (Na+), increment su concentracin milimolar con gran
notoriedad en los medios donde el nivel de sodio fue mximo (+). En este primer
ensayo la relacin milimolar Na+:K+ no es 4:1 para el medio + Parra.
Tabla 6. Concentraciones milimolares (mM) de los macronutrientes totales (representados
como elementos, a excepcin del carbono que se representa en las formas de los aniones
carbonato y bicarbonato) y relaciones milimolares sodio/potasio en los cuatro medios minerales
comparados en el diseo factorial 22. En rojo se destacan las concentraciones milimolares de
+
+
+
Na y K , y en azul las de Cl , anin directamente involucrado con el Na .

Macronutrientes
totales
N
P

++

4,63
0,77

4,85
0,51

4,72
0,77

4,63
0,77

K
Mg

2,31
0,08

3,86
0,08

9,19
0,08

2,31
0,08

Ca

0,04

0,07

0,07

0,04

0,11

1,17

0,20

0,11

Na

60,66

75,21

80,89

60,66

Cl
CO32

0,85

10,51

43,55

0,85

21,83

21,83

15,71

21,83

HCO3

110,23

117,67

103,97

110,23

Na+/K+

26,2

19,5

8,8

26,2

Las figuras 18a y 18b muestran las curvas de crecimiento poblacional de A. platensis
en los cuatro medios de cultivo y dos tipos de cultivadores, fiolas y cilindros,
respectivamente. Las curvas de crecimiento muestran que el medio Aiba y Ogawa
propici mayor incremento poblacional de A. platensis en cilindros a los 20 das de
incubacin, tiempo en el cual se detuvo el experimento. En fiolas, las cinticas en los
medios Aiba Ogawa y Parra tuvieron gran similitud. Para ambos tipos de recipientes,

65

el medio + + sucedi a los anteriores. Puede observarse que el medio se

caracteriz por presentar un perodo de latencia y adecuacin muy prolongado, hasta
que la poblacin empez a crecer abruptamente a partir del da 15. No obstante, entre
este tratamiento y los dems no hubo diferencias significativas ( = 0,05).
2,500

2,000

A 680

1,500

1,000

0,500

0,000
1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112131415 1617181920

(a)
3
2,5

A 680

2
1,5
1
0,5
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
T iempo (das )

Aiba y Ogawa
Mnimo ( )

Mximo (+ +)
Parra

(b)
Figura 18. Curvas de crecimiento poblacional de Arthrospira platensis en (a) fiolas y (b)
cilindros. La densidad poblacional est expresada en trminos de absorbancia a 680 nm.

La figura 19 presenta una comparacin grfica de la produccin de biomasa seca en

los cuatro medios propuestos para el ensayo factorial. Como se puede evidenciar el
medio Aiba y Ogawa una vez ms result ser el ms productivo en cilindros y fiolas. El
medio Parra tuvo en fiolas una produccin de biomasa que casi iguala a la del Aiba y
Ogawa, pero comparativamente baja en cilindros. El medio + + tuvo una produccin
similar en ambos tipos de recipientes, y la cosecha del medio tuvo una produccin
muy baja en los dos envases, siendo ligeramente superior en cilindro. En este ensayo
se apreci que hubo diferencias significativas entre fiolas y cilindros para los
tratamientos y Parra, as como entre el medio y los medios restantes para
ambos recipientes. La dispersin de datos (desviaciones estndares) fue pequea.

66

2
1,8
1,6

Biomasa (g/2L)

1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
Mnimo ( )

Mximo (+ +)

Parra

Fiola

Aiba y Ogawa

Cilindro

Figura 19. Produccin de biomasa seca en fiolas y cilindros de 2 L para cada medio mineral. La
biomasa est expresada en gramos por dos litros. Intervalos de confianza: media desviacin
estndar.

Los valores de pH de los cuatro medios ensayados caracterizaron el ambiente qumico

donde crecieron los filamentos de A. platensis durante el periodo de incubacin. Los
medios Aiba y Ogawa, Parra y + + exhibieron un gran paralelismo a lo largo de los
das del ensayo con una tendencia hacia el incremento. En contraste, el medio
mostr una tendencia inversa, al iniciar con un pH ms alto que los otros tres medios y
despus decrecer, hasta que en los ltimos 5 das experiment un nuevo aumento, el
cual coincidi con el comienzo del crecimiento rpido de A. platensis en ese medio,
luego de una latencia y adecuacin prolongadas. Durante el lapso en el que el pH baj
para el medio mnimo, aparentemente desfavorable para A. platensis, prosper otra
especie de cianobacteria oportunista, Microcystis aeruginosa, la cual desapareci del
medio una vez el pH volvi a subir y A. platensis volvi a dominar (figura 20).
10,40
10,20
10,00

pH

9,80
9,60
9,40
9,20
9,00

Contaminacin del medio

por Microcystis aeruginosa

8,80
8,60
1

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

Tiempo (das)

Mnimo ( )

Mximo (+ +)

Parra

Aiba y Ogawa

Figura 20. Valores comparativos de pH mostrados por los diferentes medios de cultivo. En la
figura se seala con un valo rojo el lapso de disminucin de pH del medio y la
contaminacin del mismo por la cianobacteria Microcystis aeruginosa.

67

La conductividad elctrica se mantuvo constante en todos los medios a lo largo del

periodo de incubacin, y result similar para los medios Parra y Aiba - Ogawa,
mientras que para el medio mximo (+ +), los valores de conductividad resultaron
ligeramente mayores por su condicin de medio enriquecido. Por su parte, el medio
mnimo ( ) tuvo valores muy inferiores y paralelos a los registrados para los medios
anteriores (figura 21).
30,00

Cond. (S/cm)

25,00
20,00
15,00
10,00
5,00
0,00
1

10 11 12 13 14 15 16 17 18

Tiempo (das)

Mnimo ( )

Mximo (+ +)

Parra

Aiba y Ogawa

Figura 21. Valores comparativos de conductividad (S/cm) mostrados por los diferentes medios
de cultivo.

En la figura 22 se observa la relacin entre la absorbancia de la masa celular y el peso

seco de la misma. La curva muestra una tendencia lineal que fue evaluada con una
regresin lineal simple, con un coeficiente de regresin R2 = 0,9935, que evidencia una
correlacin fuerte. Se calcul el peso seco de la masa celular presente en 1000 ml de
cultivo, en base a la linealidad de la fase de crecimiento rpido, con la obtencin del

Absorbancia ( = 680 nm)

valor medio de 586 mg (0,586 g/L) de masa seca de A. platensis en ese volumen.

1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0

y = 0,0011x + 0,0578
R = 0,9935

200

400

600

800

1000

1200

Peso seco (mg)

Figura 22. Curva de calibracin A680 vs. Peso seco (mg). Las variables tienen una relacin
lineal (R2 = 0,9935).

68

El experimento factorial 2 2 se replic en un nuevo conjunto de fiolas, donde hubo un

reajuste de las concentraciones de los medios nutritivos del ensayo anterior (Tabla 7).
En este nuevo ensayo, la nomenclatura de los medios vari, el medio 1 corresponde al
anteriormente mencionado medio Parra, el medio 2 es el Aiba y Ogawa, el medio 3
corresponde al medio mximo (+ +) y por ltimo el medio 4 es el mnimo ( ). Se
logr un mejor arreglo de las combinaciones milimolares de los macronutrientes, para
obtener en el medio 1, con la modificacin de Parra (2005), una relacin Na+:K+ bien
aproximada a la relacin fisiolgica normal de estos dos cationes en clulas vivas, lo
que no se consigui en el primer perfil nutricional.
Tabla 7. Concentraciones milimolares totales de los macronutrientes que integran cada uno de
los medios de cultivo preparados. En rojo se destaca la relacin 4:1 de K y Na en el medio 1.

Nutriente

Medio 1

Medio 2

Medio 3

Medio 4

29,44

29,40

29,86

29,90

2,87

2,87

3,33

3,30

K+

63,75

17,22

18,07

17,22

Mg2+

0,81

0,81

0,81

0,81

Ca2+

0,27

0,27

0,27

0,26

SO42-

6,60

6,60

1,34

0,86

Na+

238,07

284,60

282,62

238,06

Cl-

17,65

17,65

75,83

1,40

CO32-

38,70

38,70

27,85

38,70

HCO3-

162,02

162,02

143,16

163,02

16,5

15,6

13,8

Na+/K+

3,73

La figura 23 muestra las curvas de crecimiento poblacional de A. platensis en los

cuatro medios de cultivo. Como en el ensayo anterior, los medios 1 y 2 presentaron
cinticas similares, aunque la pendiente del segundo supera un poco a la del primero.
La curva del medio 3 tiene la tercera pendiente ms alta, mientras que en la curva de
crecimiento correspondiente al medio 4 se aprecia que la fase de latencia es muy
prolongada y la poblacin rpidamente crece los ltimos 5 das del ensayo. La fase de

69

crecimiento rpido de todas las curvas present una fuerte tendencia lineal. En
ninguno de los casos se alcanz el plateau o capacidad de carga.
2,500

A680 = 0,1619t + 0,0473

2
R = 0,9991
2,000

A680 = 0,1612t + 0,0136

2
R = 0,9969

A680

1,500

A680 = 0,1471t + 0,0124

R2 = 0,9986

1,000

A680 = 0,1426t + 0,0404

R2 = 0,9968
0,500

0,000
0

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

Tiempo (das)
Medio 1

Medio 2

Medio 3

Medio 4

Figura 23. Crecimiento poblacional de Arthrospira platensis en cuatro medios de cultivo. En la

fase de crecimiento rpido A680 y el tiempo presentaron correlaciones lineales fuertes, como se
evidencia en los valores del coeficiente de determinacin (R2).

La figura 24 exhibe las curvas de crecimiento para el segundo ensayo, ahora con
densidades poblacionales. Se evidencian tendencias similares a las observadas con
valores de absorbancias, la pendiente del medio 2 supera en forma ligera a las de 1 y
3, y en el medio 4 hubo un crecimiento muy lento y desfasado de los otros, por la
prolongada fase de latencia y adecuacin. Las capacidades de carga no fueron

Densidad (filamentos/L)

alcanzadas y no se encontraron diferencias significativas ( = 0,05) entre los medios.

400000
350000
300000
250000
200000
150000
100000
50000
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Tiempo (das)
Medio 1

Medio 2

Medio 3

Medio 4

Figura 24. Crecimiento poblacional de Arthrospira platensis en cuatro medios de cultivo

(filamentos por litro) en la Cmara de Crecimiento.

70

La Tabla 8 resume los principales resultados obtenidos en el ensayo. Las tasas de

crecimiento per cpita (r) se calcularon entre los das 7 y 10. Los mayores valores de

r, capacidad de carga (K) y produccin de biomasa correspondieron al medio 1. La

poblacin que creci en el medio 3 presenta una tasa per cpita ligeramente menor a
los medios 1 y 2. Los medios 1, 2 y 3 tuvieron valores de pH inicial y final muy
prximos con una tendencia al aumento, el medio 4 mostr valores similares.
Tabla 8. Tasa de crecimiento per cpita de Arthrospira platensis en la fase de crecimiento
rpido, biomasa seca producida en cada medio de cultivo y pH inicial y final.
Medio

Parmetros poblacionales
r (das-1)

K (filamentos/L)

0,50

412.900

0,48

3
4

Biomasa seca (g/L)

pH
Inicial

Final

0,840

9,12

10,15

390.300

0,797

9,17

10,16

0,30

321.800

0,717

9,19

10,04

0,01

0,243

9,70

9,86

En la siguiente etapa de escalamiento, se realiz el primer diseo multifactorial a cielo

abierto en botellones de 5 L. Los ensayos produjeron, en periodos de incubacin
uniformes (28 das), curvas de crecimiento logsticas con amortiguaciones montonas
y oscilaciones amortiguadas sostenidas y crecientes (figura 25).
La inmensa mayora de los tratamientos siguieron la dinmica de una tpica curva
sigmoidea, que grficamente representa el modelo logstico de crecimiento
poblacional. Las curvas se caracterizaron por presentar una fase inicial de crecimiento
lento (latencia y adecuacin), donde incluso en algunos cultivos se evidenciaron
decrecimientos entre los das 1 y 4. A esta fase de crecimiento lento o estacionario le
sigui otra de crecimiento rpido o exponencial, la cual dur tres (3) das en la mayora
de los tratamientos. Finalmente, despus del punto de inflexin de la curva el
crecimiento empez a amortiguarse hasta alcanzar el estado de saturacin (plateau),
donde la mayora de las poblaciones se estabilizaron una vez fue alcanzada la
capacidad de carga del ambiente (medio de cultivo).
Varios tratamientos alcanzaron un equilibrio estable con atenuacin montona
(monotonic damping) en el valor de la capacidad de carga ( K), mientras que algunas
poblaciones

alcanzaron

dicha

capacidad

de

carga

con

oscilaciones,

unas

amortiguadas y otras sostenidas, lo que puede atribuirse a algn retraso temporal en

el efecto de la densidad. Algunos tratamientos como el 6, 22, 26, 28 y 29 no
alcanzaron el plateau y los cultivos continuaron un crecimiento indefinido, en la

71

mayora de los casos con marcadas oscilaciones. Por su parte, la curva del
tratamiento 19 alcanz la capacidad de carga a una absorbancia muy inferior a los
medios ms productivos, pero claramente muestra un patrn de oscilaciones
amortiguadas.

Tratamiento 2

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 1

1,000

0,500

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

16

19

22

25

28

19

22

25

28

19

22

25

28

Tratamiento 4

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 3

1,000

0,500

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

13

16

Tiempo (das)

Tratamiento 6

Tratamiento 5
2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

13

Tiempo (das)

1,000

1,000

0,500

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

13

16

Tiempo (das)

Tiempo (das)

Figura 25. Curvas de crecimiento poblacional de Arthrospira platensis obtenidas en un ensayo

factorial fraccionado 26-1 con combinaciones aleatorias de niveles mnimos y centrales de cinco
macronutrientes (tratamientos). La densidad poblacional fue medida indirectamente con la
absorbancia a una longitud de onda de 680 nm, correspondiente al rojo dentro del espectro
visible, pico de absorcin de la clorofila a.

72

Tratamiento 8

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 7

1,000

0,500

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

1,000

0,500

19

22

25

28

19

22

25

28

19

22

25

28

19

22

25

28

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

13

16

Tiempo (das)

Tratamiento 12

Tratamiento 11
2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

16

Tratamiento 10

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 9

1,000

1,000

0,500

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

13

16

Tiempo (das)

Tiempo (das)

Tratamiento 13

Tratamiento 14

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

13

Tiempo (das)

1,000

0,500

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

Tiempo (das)

10

13

16

Tiempo (das)

Figura 25. Continuacin.

73

Tratamiento 16

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 15

1,000

1,000

0,500

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

1,000

0,500

19

22

25

28

19

22

25

28

19

22

25

28

19

22

25

28

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

13

16

Tiempo (das)

Tratamiento 19

Tratamiento 20

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

16

Tratamiento 18

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 17

1,000

0,500

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

13

16

Tiempo (das)

Tratamiento 21

Tratamiento 22

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

13

Tiempo (das)

Tiempo (das)

1,000

1,000

0,500

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

13

16

Tiempo (das)

Tiempo (das)

Figura 25. Continuacin.

74

Tratamiento 24

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 23

1,000

0,500

1,000

0,500

0,000

0,000

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

1,000

0,500

19

22

25

28

19

22

25

28

19

22

25

28

19

22

25

28

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

13

16

Tiempo (das)

Tratamiento 28

Tratamiento 27
2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

16

Tratamiento 26

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 25

1,000

1,000

0,500

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

13

16

Tiempo (das)

Tiempo (das)

Tratamiento 29

Tratamiento 30

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

13

Tiempo (da)

1,000

1,000

0,500

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

13

16

Tiempo (das)

Tiempo (das)

Figura 25. Continuacin.

75

Tratamiento 32

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 31

1,000

0,500

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

16

19

22

25

28

19

22

25

28

19

22

25

28

Tratamiento 34

2,500

2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

A680 nm

Tratamiento 33

1,000

0,500

1,000

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

Tiempo (das)

13

16

Tiempo (das)

Tratamiento 36

Tratamiento 35
2,500

2,000

2,000

1,500

1,500

A680 nm

2,500

1,000

1,000

0,500

0,500

0,000

0,000
1

10

13

16

19

22

25

28

10

13

16

Tiempo (das)

Tiempo (das)

Tratamiento 37
2,500

2,000

A680 nm

A680 nm

13

Tiempo (das)

1,500

1,000

0,500

0,000
1

10

13

16

19

Tiempo (das)

Figura 25. Continuacin.

76

22

25

28

La tasa per cpita de crecimiento, N/[N(t)t], presenta un incremento notable en

algunas curvas para los primeros das. Casi todas las curvas coincidieron en el da 10
como tiempo tope del crecimiento aparentemente exponencial, donde es vlido
aproximar la tasa per cpita de crecimiento al valor r. Posteriormente a este lapso de
tiempo, el crecimiento disminuye progresivamente hasta llegar al equilibrio en K. La
poblacin decreci hasta cero (N/t = 0), en todas los casos donde la capacidad de
carga, K, se alcanz. Para algunos tratamientos se observaron decrecimientos en los
primeros tres das (N/t < 0), antes del inicio del crecimiento rpido, principalmente
en las curvas correspondientes a los tratamientos 2, 3, 4, 12, 18, 25, 32 y 35, lo que
revela fases de latencia y adaptacin marcadas por parte de las poblaciones de A.
platensis. La Tabla 9 resume las tasas de crecimiento per cpita (das-1) para tres
intervalos de tiempo en fase de crecimiento rpido, as como las capacidades de carga
(filamentos/L) para el mtodo de conteo de filamentos.
Tabla 9. Tasas de crecimiento per cpita y capacidades de carga en cultivos de Arthrospira
platensis para el ensayo factorial fraccionado 26-1. En rojo se destacan los medios con valores
mayores para uno o ambos parmetros poblacionales obtenidos de forma experimental.
Tratamiento

Tasa de crecimiento per cpita (das-1)

Capacidad de carga, K
(filamentos/L)

Das 7 10

Das 10 13

Das 13 16

0,22

0,21

0,11

762.000

0,12

0,16

0,06

812.000

0,44

0,35

0,22

658.500

0,20

0,114

0,08

785.000

0,20

0,17

0,10

0,15

0,12

0,05

0,46

0,42

0,37

630.500

0,42

0,40

0,25

654.700

0,41

0,32

0,20

616.870

10

0,45

0,40

0,27

11

0,30

0,25

0,17

523.540

12

0,29

0,22

0,11

722.520

13

0,68

0,41

0,28

522.410

14

0,82

0,75

0,52

739.750

15

0,54

0,40

0,29

740.165

16

0,85

0,81

0,70

1.782.960

17

0,65

0,50

0,32

789.875

18

0,72

0,54

0,35

1.425.000

19

0,37

0,30

0,21

374.100

20

0,18

0,19

0,10

730.589

21

0,21

0,20

0,12

798.500

77

Tabla 9. Continuacin.
Tratamiento

Tasa de crecimiento per cpita (das-1)

Capacidad de carga,
K (filamentos/L)

Das 7 10

Das 10 13

Das 13 16

22

0,18

0,17

0,09

23

0,23

0,15

0,10

851.450

24

0,37

0,30

0,16

730.215

25

0,41

0,35

0,22

831.230

26

0,16

0,12

0,08

27

0,45

0,39

0,30

730.257

28

0,27

0,18

0,14

29

0,84

0,71

0,69

30

0,20

0,21

0,11

31

0,25

0,22

0,12

32

0,19

0,11

0,07

33

0,82

0,74

0,64

1.932.680

34

0,51

0,45

0,40

1.747.890

35

0,10

0,11

0,05

301500

36

0,75

0,65

0,51

2.520.000

37

0,70

0,51

0,32

2.050.000

La figura 26 describe en orden creciente los tiempos de duplicacin (tg) para

poblaciones inoculadas en 37 botellones con los tratamientos preparados. Para la
obtencin de estos valores se utiliz la tasa de recambio entre los das 7 y 10, en la
fase de crecimiento rpido, como valor de la tasa de crecimiento poblacional, dado que
al da 10 las poblaciones duplicaron sus tamaos. Algunos de los tratamientos con las
mejores dinmicas de crecimiento poblacional, como los tratamientos 14, 16, 18, 29,
33, 36 y 37 estuvieron entre los medios con tiempos generacionales ms cortos (de
0,8 a 1 da), y algunos con dinmicas menos eficientes tuvieron tiempos
generacionales ms prolongados, como 2, 6 y 32. El tratamiento 2 tuvo un tiempo de
duplicacin muy prolongado (6,5 das), a pesar de ostentar una de las capacidades de
carga ms elevadas, pero el gran retraso inicial producto de una latencia y adecuacin
prolongadas, desplaz con mucho el inicio de la fase crecimiento rpido, alcanzando el
plateau aproximadamente a los 18 das, cuando poblaciones en otros medios lo
haban logrado de 10 a 15 das. Algo similar se puede decir del medio 35 que tuvo el
valor de tg ms alto de todos los tratamientos. El medio 16 present el tiempo de
duplicacin ms corto (0,8 das), esto debido a una tasa de crecimiento per cpita muy
alta en la fase exponencial, lo que permiti a la poblacin salir prontamente de una
breve fase de latencia y alcanzar el plateau un poco antes de los diez (10) das.

78

Figura 26. Diagrama de

columnas mostrando en orden
creciente los tiempos de
duplicacin
(tg)
de
los
diferentes tratamientos del
ensayo multifactorial.

79

El medio ms productivo en biomasa fue el tratamiento 36 (aprox. 2,3 g/L), mientras

que el tratamiento 29 result el menos rendidor. Varios de los medios (16, 18, 33 y 36)
que mostraron los tg ms bajos, tambin se constituyeron en los ms productivos en
biomasa seca (figura 27). Un tiempo de duplicacin corto implica que la produccin de
biomasa ser elevada en un trmino de tiempo breve, a la vista estn los resultados
que indican que los tratamientos con tiempos generacionales menores alcanzaron la
capacidad de carga en un nmero de das inferior, alrededor de 10 das, y entonces
los 20 das restantes del ensayo permitieron generar un rendimiento superior de
biomasa para fines de produccin masiva a escala mayor.
El anlisis de varianza para las diferentes combinaciones aleatorias y niveles centrales
de cinco macronutrientes, para la variable respuesta densidad ptica o absorbancia,
determin diferencias significativas ( = 0,05) para las sales que constituyen la
solucin I del medio Spirulina. Esto repercuti en forma determinante en las dinmicas
poblacionales tan variables que se observaron en cada uno de los medios nutritivos.
De este anlisis estadstico se desprende que las fuentes de carbono (NaHCO3 y
Na2CO3) y fsforo (KH2PO4), as como el efecto del modelo o diseo empleado,
resultan concluyentes para evidenciar diferencias significativas en los crecimientos de
las poblaciones de A. platensis, donde hubo combinaciones aleatorias de esos
componentes qumicos esenciales para el desarrollo y replicacin de los filamentos. El
nitrgeno, otro nutriente relevante en la nutricin mineral de A. platensis, no tuvo
efecto significativo en las cinticas evidenciadas (Tabla 10).
Tabla 10. Anlisis de varianza para el diseo factorial fraccionado 26-1 (salida del programa
Design Expert). Los nmeros destacados en rojo son valores de p<0,05.
Fuente

Suma de
Cuadrados

Grados de
libertad

Cuadrado
Medio

Modelo

4,18

16

0,26

4,88

0,0007

NaHCO3
Na2CO3
KH2PO4
NaCl
K2SO4
KNO3

1,19
0,43
0,25
8,32E+00
0,18
0,12

1
1
1
1
1
1

1,19
0,43
0,25
8,32E+00
0,18
0,12

22,32
8,12
4,76
0,16
3,42
2,21

0,0001
0,0102
0,0418
0,6978
0,0799
0,1532

A partir de estas determinaciones, se escogi el tratamiento 36 como el ptimo para

ser probado en ensayos a escala mayor. Esta decisin deriva del anlisis de las
interacciones de la biomasa con las concentraciones milimolares de los nutrientes ms
importantes en la ejecucin del experimento, siendo el 36 uno de los tratamientos
centrales (ver Apndice 2), con mejores valores de parmetros y biomasa.

80

BS (g/L)

2,500
2,000
1,500
1,000

11 10

15

22

27

14

Orden creciente de biomasa seca

17 12 31 26

20 24 35 13

16 23 33 18 34 37 21

36

81

0,500
0,000
29 19 30 25 28 32

Tratamiento

Figura 27. Biomasa seca

(g/L) cosechada en los
diferentes tratamientos del
ensayo factorial 26-1. Los
valores se ordenan en
forma creciente.

La figura 28 muestra el resultado de un ensayo para establecer en forma experimental

la estructura de tallas de la poblacin de A. platensis. El resultado evidencia que las
proporciones de tallas efectivamente varan a lo largo del periodo de crecimiento de la
poblacin. En un principio (das 0 a 6) predominan los filamentos pequeos (2 4
clulas). Una vez que las fases de latencia y adecuacin ocurren y dan paso a la fase
de crecimiento rpido, los porcentajes de filamentos cortos o jvenes disminuyen en
forma sistemtica, y filamentos maduros rpidamente comienzan a aumentar sus
nmeros hasta llegar a la fase de saturacin (capacidad de carga) y porcentualmente
ser las tallas predominantes en la estructura de la poblacin.

Da 0
3%

32%

Da 6
5%

65%

53%
2 clulas

2 clulas

4 clulas

4 clulas

> 4 clulas

> 4 clulas

42%

Da 12
17%

Da 18
53%

42%

2%
45%

2 clulas

2 clulas

4 clulas

4 clulas

> 4 clulas

> 4 clulas

41%

Da 24

Da 30

1%
67%

1%
32%

15%

2 clulas

2 clulas

4 clulas

4 clulas

> 4 clulas

> 4 clulas
84%

Figura 28. Diagramas circulares que muestran las variaciones porcentuales en grupos de
filamentos de diferentes tallas en una poblacin de Arthrospira platensis, a lo largo de un
periodo de incubacin que dur 30 das. La cepa se cultiv en el medio optimizado en el
6-1
ensayo factorial fraccionado 2 (tratamiento 36).

A continuacin se presentan tres grficos de barras y cajas combinados (en ingls bar
chart/box plot) que brindan informacin de la dinmica de crecimiento de los tres

82

componentes poblacionales de filamentos discriminados por sus tallas y la dispersin

de los datos (desviaciones estndares), respectivamente. Se verifica que la cohorte de
filamentos con dos clulas tiene un crecimiento poblacional vigoroso y sostenido hasta
el da 12 cuando alcanza un mximo, y desde este punto crtico empieza a declinar de
forma rpida hasta valores nfimos al final del periodo cuando la poblacin se
estabiliza y es madura. Los filamentos con cuatro clulas tienen una dinmica similar
(patrn unimodal) a la exhibida en el perfil de los filamentos ms cortos de dos clulas,
pero con un desfase, alcanzando el mximo el da 18 y luego, como en el caso
anterior, declina la poblacin a niveles basales hacia postrimeras del tiempo de
crecimiento asinttico. El tercer conjunto de tallas, correspondiente a filamentos con
ms de cuatro clulas, posee una dinmica tarda respecto a los dos primeros, puesto
que la poblacin se incrementa luego de que se han formado muchos filamentos
cortos que empiezan a crecer radialmente y sumar clulas al filamento, de este modo
la poblacin de filamentos grandes empieza a ser ampliamente dominante al final del
periodo de crecimiento y se estabiliza con ligeras fluctuaciones en el estado de
saturacin. Los datos medios, que son los que se grafican, presentaron poca
dispersin, lo que puede mostrarse como una aproximacin experimental a una

1,8E06

6,4E05

1,6E06

5,6E05

1,4E06

4,8E05

1,2E06

(a)

30

27

24

21

18

15

12

30

27

24

21

18

15

2E05

4E05

8E04

12

6E05

1,6E05

2,4E05

8E05

1E06

3,2E05

4E05

7,2E05

(b)
2,7E06
2,4E06
2,1E06
1,8E06

1,5E06
1,2E06
9E05
6E05
3E05

30

27

24

21

18

15

12

(c)
3

estructura de tallas de la poblacin de A. platensis (figura 29).

Figura 29. Dinmicas de crecimiento poblacional de los tres componentes de tallas de

filamentos de Arthrospira platensis: (a) filamentos con 2 clulas, (b) filamentos con cuatro
clulas y (c) filamentos con ms de cuatro clulas. La letra Y en la ordenada es la densidad
(filamentos/L) y en la abscisa el tiempo est dividido en intervalos de tres das. Salida: PAST.

83

Por ltimo, para poner a prueba la idoneidad del modelo logstico como modelo
dinmico para A. platensis, se hizo una prueba sencilla de extraccin de volmenes a
partir de la saturacin o capacidad de carga (K), y reemplazar el volumen retirado con
medio de cultivo optimizado (tratamiento 36). Esta aproximacin experimental permiti
medir en cuanto tiempo la poblacin retorn a K en las siguientes situaciones: (1)
retiro de un volumen por encima del punto de inflexin ( N = K/2), correspondiente a
25% del volumen total del cultivo; (2) retirar la mitad de la poblacin (50%), para llevar
a la poblacin hasta el punto de inflexin; (3) extraccin del 75% del volumen total, que
implica cosechar la mayor parte de la poblacin en una concentracin muy por debajo
del punto de inflexin. Se puede observar que en el primer caso, a pesar de tratarse
de una remocin cercana al punto de saturacin, su pendiente es inferior a la obtenida
para una remocin de 50%, lo que evidencia que el segundo tratamiento reduce a la
poblacin justo a la fase de crecimiento rpido, mientras que con un 25% de remocin
las condiciones son similares o prximas a la saturacin. El tratamiento con una
reduccin de 75% de la poblacin total llev a los filamentos remanentes a un tamao
basal, y la recuperacin evidentemente se hizo muy lenta y, al momento de que en los
otros tratamientos las poblaciones alcanzaron y se estabilizaron en la capacidad de
carga, en el tercer caso la poblacin an no sala de la fase de latencia. El tiempo en
el que la poblacin en el primer tratamiento (25%) retorn a K fue de cinco das, y con
una remocin de 50% la poblacin tard igual nmero de das.
3,000
2,500

A680

2,000
1,500
1,000
0,500
0,000
1

9 11 13 15 1

9 11 13 15 1

9 11 13 15

Tiempo (das)
Figura 30. Dinmicas de crecimiento poblacional de Arthrospira platensis a partir de tres
extracciones de volmenes en fase de saturacin. De izquierda a derecha se muestran las
curvas de crecimiento a partir de 25%, 50% y 75% de extraccin.

84

Para el cultivo de A. platensis en tanques circulares de 500 L en el Ficotrn, el

crecimiento poblacional de filamentos se intensific, evidenciado en forma indirecta por
la medicin de la absorbancia, una vez entraron en la fase de crecimiento rpido,
siendo superior en tanques con profundidades menores, seguido de los de
profundidad intermedia y finalmente por los de profundidad mayor (figura 31).
1,2
1

A680

0,8
0,6
0,4
0,2
0
A3

B2

C1

A1

A2

B3

B1

C2

C3

Tanque
Figura 31. Absorbancias medias ( = 680 nm) de los cultivos en fase de crecimiento rpido,
para tres profundidades, izquierda a derecha: 15 cm (barras azules), 25 cm (barras rojas) y 35
cm (barras amarillas).

Cuando se observa la otra variable respuesta, biomasa total producida por tanque
(g/L), el patrn es similar, los tanques de mayor produccin son los de menor
profundidad de medio lquido, mientras que los de profundidades mayores resultaron
los de menor produccin (figura 32).
1,2

Biomasa seca (g/L)

1
0,8
0,6
0,4
0,2
0

A3

B2

C1

A1

A2

B3

B1

C2

Tanque

Figura 32. Biomasa seca total (g/L) en los tres bloques.

85

C3

Es indiscutible pensar que la profundidad de la lmina de agua en los tanques

circulares afecta de manera diferencial la tasa de crecimiento y produccin de
biomasa. El anlisis de varianza determin que hay diferencias significativas ( = 0,05)
entre los tratamientos (profundidades). Por otro lado, el efecto de los bloques en el
experimento parece no ser relevante (Tabla 11).
Tabla 11. Resumen del Anlisis de Varianza (salida de MICROSOFT EXCEL).

Fuente de Variacin

Suma de
Cuadrados

Grados de
libertad

Media de
cuadrados

Fo

Tratamientos (profundidad)

4197,31

2098,66

11,82

Bloques (columnas)
Error
Total

556,03
709,95
5463,29

2
4
8

278,01
177,49

1,57

F0,05;2;4=6,94
Para cultivadores tipo carrusel (2500 L de capacidad) se tiene informacin limitada de
su dinmica y produccin de biomasa. La tasa de crecimiento per cpita media del
cultivo en carrusel, como aproximacin a la tasa instantnea, fue 0,25 das-1 y la
biomasa seca total 0,5 g/L, en la nica cosecha realizada. Se puede advertir cmo
disminuyen la tasa de crecimiento per cpita media y la produccin de biomasa desde
botellones hasta el carrusel en condiciones no controladas y con fotoperiodo (slo el
intervalo de horas con luz natural).

7.3 Comunidades fitoplanctnicas

El estudio de comunidades fitoplanctnicas ofrece la oportunidad de explorar los
ambientes acuticos variados del pas, as como colectar numerosas especies de
cianobacterias y microalgas eucariticas con gran potencial biotecnolgico.
Ambientes dulceacucolas. La Tabla 12 presenta la composicin y abundancia de la
biota fitoplanctnica de un humedal herbceo de la pennsula de Paria (Palmares III).
El fitoplancton estuvo principalmente representado, en riqueza y abundancia, por
diatomeas (Bacillariophyta) y algas verde-azules (Cyanobacteria). La zona de
Brachiaria mutica (Poaceae) fue la comunidad vegetal con mayor nmero de especies
(24), mientras que el ecotono Cyperus articulatus (Cyperaceae) - Typha dominguensis
(Typhaceae) fue la vegetacin con riqueza menor (8).
Las especies de diatomeas cuantitativamente importantes fueron: Gyrosigma
attenuatum, muy comn en B. mutica y el ecotono T. dominguensis - Sesbania

86

exasperata (Fabaceae); tres especies del gnero Navicula con densidades

poblacionales grandes en zonas diversas, en especial N. platalea con una densidad
notable en el ecotono S. exasperata - C. articulatus; Nitzschia valens, abundante en B.
mutica, S. exasperata y C. articulatus. Otras diatomeas, como Pinnularia gibba y
Pleurosigma sp., fueron numerosas en B. mutica, pero se hicieron raras o ausentes en
las dems zonas de vegetacin. Oscillatoria sp. fue la nica cianobacteria abundante y
dominante, con densidades grandes en B. mutica, S. exasperata y los ecotonos B.
mutica - S. exasperata y T. dominguensis - S. exasperata. Otra cianobacteria,
Anabaena sp., fue muy importante en el parche de B. mutica. Tambin se encontraron
ejemplares de Spirulina subsalsa, Arthrospira sp y Chlorella sp. Las algas verdes
(Chlorophyta) y euglenofitas (Euglenophyta) escasearon en todas las comunidades
vegetales. Se hall un gnero de dinoflagelado (Pyrrophyta) con algunos individuos de
la especie Protoperidinium sp. en el ecotono S. exasperata - C. articulatus.
Tabla 12. Composicin de especies y abundancia (clulas/litro) de los taxa fitoplanctnicos
presentes en las zonas de vegetacin en noviembre de 2008. Bm (Brachiaria mutica), EcBmSe
(ecotono B. mutica - Sesbania exasperata), Se (S. exasperata), EcSeCa (ecotono S.
exasperata - Cyperus articulatus), Ca (C. articulatus), EcCaTd (ecotono C. articulatus-Typha
dominguensis), Td (T. dominguensis) y EcTdSe (ecotono T. dominguensis - S. exasperata).
TAXA

Bm

EcBmSe

Se

EcSeCa

Ca

EcCaTd

Td

EcTdSe

Se

Cocconeis striata

Eunotia monodon

Fragilaria crotonensis

Frustulia sp.

264

80

24

40

20

236

24

Gomphonema brasiliense

Navicula fulva

72

12

32

32

52

20

32

N. oblonga

48

14

40

20

12

40

N. platalea

40

64

336

64

64

Nitzschia valens

80

50

64

24

96

40

24

64

N. obtusa

Pinnularia gibba

68

Pleurosigma sp.

48

20

Surirella sp.

Bacillariophyta (15 especies)

Gyrosigma attenuatum

87

Tabla 12. Continuacin.

TAXA

Bm

EcBmSe

Se

EcSeCa

Ca

EcCaTd

Td

EcTdSe

Se

24

192

20

12

84

Arthrospira sp.

Chroococcus sp.

Lyngbya sp.

24

12

Merismopedia sp.

Microcystis aeruginosa

24

M. flos-aquae

16

48

Nostoc sp.

68

20

Oscillatoria sp.

236

488

192

12

180

192

Spirulina subsalsa

12

16

12

Chlorella sp.

24

Closterium sp.

12

Desmidium baylei

16

Hyalotheca sp.

12

Lambertia setosa

Scenedesmus sp.

Euglena sp.

12

Phacus undulatus

28

Trachelomonas hispida

T. superba

72

36

Protoperidinium sp.

Riqueza (S)

24

19

14

19

12

10

13

Synedra sp.
Cyanobacteria (10 especies)
Anabaena sp.

Chlorophyta (6 especies)

Euglenophyta (4 especies)

Pyrrophyta (1 especie)

88

Las comunidades fitoplanctnicas de Palmares III no slo variaron en forma cualitativa

(composicin de especies) en los diferentes parches de vegetacin emergente, los
ndices de diversidad revelan que tambin cambiaron en forma cuantitativa a lo largo
de los ambientes parcelados. Para 2008, la diversidad, expresada en el ndice
Shannon-Wiener (H), relativamente fue alta en los parches de B. mutica (Bm) y C.
articulatus (Ca) debido a que la riqueza y equidad, sus dos componentes, tambin
fueron elevadas; en el caso de T. dominguensis (Td), con el tercer valor ms alto, el
ambiente mostr la equidad ms prominente del humedal en esa poca. Los ecotonos
de vegetacin o ambientes de transicin fueron menos diversos que los parches
monoespecficos contiguos. En el ecotono S. exasperata C. articulatus (EcSeCa) la
equidad se constituy en la ms baja, subsecuentemente los ndices de dominancia de
Simpson y Berger-Parker tuvieron valores sobresalientes (Tabla 13).
Tabla 13. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad
fitoplanctnica de Palmares III en sus diferentes parches de vegetacin monoespecfica y
ecotonos (noviembre 2008). Salida: PAST.
ndice

Bm

EcBmSe

Se

EcSeCa

Ca

EcCaTd

Td

EcTdSe

Riqueza (S)

24

19

14

19

12

11

Equidad (J)

0,80

0,54

0,72

0,46

0,81

0,78

0,88

0,66

Shannon-Wiener (H)

2,55

1,60

1,89

1,00

2,38

1,62

2,20

1,59

Dominancia de Simpson (D)

0,11

0,40

0,23

0,58

0,12

0,26

0,15

0,27

Berger-Parker (d)

0,20

0,62

0,42

0,75

0,23

0,41

0,31

0,39

La Tabla 14 muestra los valores del ndice de distancia o similitud Jaccard, para el
conjunto de ambientes parcelados (asociaciones de plantas emergentes) del humedal
Palmares III en noviembre de 2008. En trminos generales, se evidencian similitudes
notables

entre

algunos

parches

monoespecficos

con

ecotonos

vecinos,

principalmente en el gradiente B. mutica (Bm) ecotono B. mutica S. exasperata

(EcBmSe) S. exasperata (Se). Es curioso que el ecotono S. exasperata C.
articulatus (EcSeCa) sea tan diferente del parche monoespecfico de C. articulatus
(Ca), cuando la otra vegetacin monoespecfica que converge en esa rea del
humedal guarda una similitud notable con la misma zona ecotonal o mixta entre ambas
especies vegetales. Las formaciones de vegetacin espacialmente ms apartadas
entre s en el humedal tuvieron similitudes moderadas a bajas. Los ambientes ms
dismiles fueron el ecotono S. exasperata C. articulatus y la zona monoespecfica de
T. dominguensis (Td).

89

Tabla 14. Distancias Jaccard entre los parches de vegetacin acutica del humedal Palmares
III, noviembre de 2008, definidas a partir a las abundancias de las especies fitoplanctnicas.
Los valores estn acotados entre 0 y 1, los destacados en rojo indican similitudes altas y en
azul se seala a la pareja de vegetaciones con menor similitud. Salida: PAST.

Bm
EcBmSe
Se
EcSeCa
Ca
EcCaTd
Td
EcTdSe

Bm

EcBmSe

Se

EcSeCa

Ca

EcCaTd

Td

EcTdSe

1
0,654
0,462
0,320
0,344

0,654
1
0,571
0,400
0,462

0,462
0,571
1

0,344
0,462
0,375
0,273
1

0,231
0,286
0,467
0,417
0,421

0,333
0,240
0,182

0,533
0,375

0,320
0,400
0,533
1
0,273

0,105
0,240

0,296
0,304
0,250
0,176
0,154

0,231
0,333
0,296

0,286
0,240
0,304

0,467
0,182
0,250

0,417
0,105
0,176

0,421
0,240
0,154

1
0,250
0,118

0,250
1
0,211

0,118
0,211
1

Un Anlisis de Componentes Principales (ACP) permiti comparar las especies

fitoplanctnicas y zooplanctnicas ms importantes del ecosistema estudiado en la
pennsula de Paria. La diatomea Navicula platalea, las cianobacterias Oscillatoria sp. y
Anabaena sp., Platyas quadricornis (Rotifera: Monogononta), Diaphanosoma birgei
(Crustacea: Branchiopoda: Cladocera), Moina minuta (Crustacea: Branchiopoda:
Cladocera) y Prionodiaptomus colombiensis (Crustacea: Maxillopoda: Copepoda:
Calanoida), estadsticamente se constituyeron en las especies fitoplanctnicas y
zooplanctnicas ms importantes en 2008, luego de anlisis descriptivos y ACP
iterativos empleados para eliminar variables en forma sistemtica.
La figura 33 muestra el biplot del ACP, con la representacin de los dos primeros
componentes principales (CP), los cuales renen una inercia acumulada de 89,965%,
que indica una gran reduccin del espacio multidimensional en los dos primeros ejes.
Oscillatoria sp. fue la especie ms relacionada con el primer componente principal, y
tambin tuvo una relacin estrecha con el ecotono B. mutica S. exasperata
(EcBmSe), mientras que N. platalea se constituy en la segunda especie ms
importante y la ms estrechamente relacionada a la segunda nube de puntos ms
grande, resumida en el segundo componente principal (CP2), y con una relacin
cercana con el ecotono S. exasperata C. articulatus (EcSeCa). Estas dos especies
de microalgas no tuvieron correlacin alguna, por lo que fueron independientes entre
s, a juzgar por sus autovectores que conformaron un ngulo recto entre s. Las
especies zooplanctnicas seleccionadas para el anlisis tuvieron autovectores muy
cortos, debido a las diferencias de escalas, y se concentraron en el origen de
coordenadas, sin guardar relaciones claras con las especies fitoplanctnicas
mencionadas. Moina minuta tuvo una relacin positiva con Navicula platalea. Las
zonas de vegetacin muestran un patrn en herradura que puede indicar algn
gradiente ambiental.

90

140

Navicula platalea

112
EcSeCa
84

CP 2

56

Oscillatoria sp.
28

Moina minuta

EcBmSe

Diaphanosoma
Se
birgei
Prionodiaptomus
colombiensis
Bm
Platyas quadricornis
-99.62

-66.41

Ca

Anabaena
33.21
sp. 66.41
EcTdSe

-33.21

EcCaTd
Td

99.62

132.82

166.03

-28

-56

-84
CP 1

Vector scaling: 146,94

Figura 33. Biplot de los dos primeros componentes principales del ACP para las variables
(especies) y casos (parches de vegetacin) escogidas para caracterizar el ecosistema del
humedal Palmares III en noviembre de 2008. Los dos primeros componentes principales
acumularon 89,965% de la inercia total del sistema. Salida: MVSP 3.0.

El dendrograma (figura 34) del anlisis de agrupamiento derivado de las especies

fitoplanctnicas y zooplanctnicas que destacaron en el ACP, muestra que se
formaron tres (3) grupos: (1) ecotono B. mutica S. exasperata discriminado por
Oscillatoria sp. con el valor de centroide ms alto; (2) ecotono S. exasperata C.
articulatus (EcSeCa) al cual est asociada N. platalea y (3) B. mutica, S. exasperata y
ecotono T. dominguensis S. exasperata, C. articulatus, ecotono C. articulatus T.
dominguensis y T. dominguensis, con asociacin de M. minuta. La vegetacin
monoespecfica de T. dominguensis ecolgicamente es muy parecida al ecotono que
esta especie forma con C. articulatus. La mayor parte de los otros ambientes poseen
disimilitudes de mediana magnitud en la escala Euclidiana. Los dos ecotonos que
conforman el segundo y tercer grupo, respectivamente, son ambientes muy diferentes
entre s y a cualquier otra comunidad de plantas acuticas que existen en el humedal.

91

Figura 34. Dendrograma del Anlisis de Agrupamiento o Cluster Analysis derivado del
conjunto de especies fitoplanctnicas y zooplanctnicas ms importantes colectadas en el
ACP. Salida: MVSP 3.0.

En cuanto al ambiente abitico, las variables fisicoqumicas mostraron una cierta

uniformidad, slo algunas oscilaciones en el oxgeno disuelto. Los valores de salinidad
resultaron importantes para establecer que el humedal es un ambiente con
caracterstica salobre. Se adicionan datos de algunos iones importantes para la
caracterizacin qumica del agua del humedal, principalmente metales alcalinos con
concentraciones importantes de sodio y muy bajas de potasio, que robustecen la idea
del carcter salobre del ambiente, y alcalino-trreos (cantidades notables de calcio y
magnesio), y aniones como sulfatos y cloruros en concentraciones altas (Tabla 15).
Tabla 15. Variables fisicoqumicas y concentraciones de cationes y aniones del agua,
determinados en las zonas de vegetaciones monoespecficas estudiadas en el humedal de
Palmares en noviembre de 2008.
Parmetro/ ion
pH
Conductividad (mS/cm)
O2 (mg/L)
T (C)
Salinidad ()
Profundidad (cm)
Ca2+ (mg/L)
Mg2+ (mg/L)
Na+ (mg/L)
K+ (mg/L)
Cl- (mg/L)
SO42- (mg/L)

B. mutica
7,3
2,3
1,4
25,1
0,11
23,8
93,0
64,0
255,0
7,8
540,0
237,0

S. exasperata
6,9
2,3
2,3
25,4
0,11
21,8
94,0
55,0
285,0
7,1
500,0
257,0

92

C. articulatus
7,1
2,7
3,2
24,6
0,12
19,0
118,0
58,0
258,0
9,8
460,0
343,0

T. dominguensis
7,3
3,5
4,5
25,8
0,13
18,6
112,0
60,0
325,0
4,6
660,0
298,0

En agosto de 2009, un segundo muestreo en el mismo humedal de Paria, present

caractersticas fisonmicas cambiantes en la vegetacin, debido a un incendio en
sequa que diezm buena parte de la cobertura herbcea original, la cual cubra 100%
de su superficie, sin formar espejos de agua. El fitoplancton estuvo representado casi
en su totalidad por cianobacterias y euglenofitas, con predominio de las primeras en el
ecotono B. mutica - C. articulatus y abundancia de las segundas en B. mutica y T.
dominguensis. En trminos generales, la riqueza fue muy inferior a la observada en
noviembre. Hubo un dominio alternado de una especie de euglenofita (Trachelomonas
superba) y una cianobacteria (Oscillatoria sp.). En esta poca nuevamente se
encontraron representantes del gnero Arthrospira. Las diatomeas, en general,
escasearon en todos los ambientes, la nica especie resaltante de este grupo fue N.
fulva en la zona B. mutica y el ecotono B. mutica - C. articulatus. Se observaron muy
pocas clorofitas. No se encontr fitoplancton en la zona de C. articulatus (Tabla 16).
Tabla 16. Composicin de especies y abundancias (clulas/litro) de los taxa fitoplanctnicos
presentes en las zonas de vegetacin para agosto de 2009. EcBm1Ca y EcCaBm2 (ecotonos
B. mutica - C. articulatus); EcBm2Td (ecotono B. mutica - T. dominguensis).
TAXA
Bacillariophyta (4 especies)
Gyrosigma attenuatum
Navicula fulva
Nitzschia valens
Pinnularia gibba
Cyanobacteria (5 especies)
Arthrospira sp.
Chroococcus sp.
Lyngbya sp.
Microcystis aeruginosa
Oscillatoria sp.
Chlorophyta (1 especie)
Closterium sp.
Euglenophyta (2 especies)
Trachelomonas hispida
T. superba
Riqueza (S)

Bm1

EcBm1Ca

Ca

EcCaBm2

Bm2

EcBm2Td

Td

0
100
60
20

0
100
20
20

0
0
0
0

0
100
20
20

0
100
60
20

0
23
5
0

40
20
0
0

20
0
20
0
0

0
20
0
20
7560

0
0
0
0
0

0
20
0
20
7560

20
0
0
0
0

0
0
0
0
0

0
0
0
0
0

20

20

0
10.000
7

20
300
8

0
0
0

20
300
7

0
10.000
8

0
450
3

0
7680
3

La Tabla 17 muestra los ndices de diversidad empleados para caracterizar la

estructura comunitaria fitoplanctnica de Palmares III en agosto de 2009. Las riquezas
fueron muy bajas en todos los ambientes, por lo que la equidad pas a tener
preponderancia o peso mayor en el valor del ndice Shannon-Wiener. Hubo zonas de
vegetacin como los dos parches de B. mutica (Bm), observados en esa poca, con
equidades muy altas que produjeron los ndices de diversidad ms altos para el
humedal. El resto de los ambientes exhibieron valores de equidad muy bajos con la
subsecuente disminucin de la diversidad y aumento de los ndices de dominancia de
Simpson y Berger-Parker.

93

Tabla 17. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad

fitoplanctnica de Palmares III en sus diferentes parches de vegetacin monoespecfica y
ecotonos (agosto 2009). Salida: PAST.
ndice
Riqueza (S)
Equidad (J)
Shannon-Wiener (H)
Dominancia de Simpson (D)
Berger-Parker (d)

Bm1

EcBm1Ca

Ca

Bm2

EcBm2Td

Td

0,85
1,65

0,15
0,31

0
0

0,83
1,49

0,23
0,25

0,05
0,05

0,76
0,40

0,12
0,94

0
0

0,72
0,43

0,11
0,94

0,02
0,99

El ndice de similitud o distancia Jaccard seala que la mayor similitud entre bandas de
vegetacin, diferentes a ellas mismas, se encontr entre los dos parches de B. mutica
(Bm1 y Bm2). La segunda pareja de ambientes parcelados con mayor similitud
ecolgica es la establecida entre B. mutica (Bm2) y su ecotono con T. dominguensis
(EcBm2Td). Los dems ambientes difirieron en forma notable y en distintos grados
(Tabla 18).
Tabla 18. Distancias Jaccard entre los parches de vegetacin acutica del humedal Palmares
III, agosto de 2009, definidas a partir a las abundancias de las especies fitoplanctnicas. Los
valores estn acotados entre 0 y 1, los destacados en rojo indican similitudes altas y en azul se
seala a la pareja de vegetaciones con menor similitud. Salida: PAST.
Bm1

EcBm1Ca

Bm2

EcBm2Td

Td

Bm1

0,364

0,429

0,250

EcBm1Ca
Bm2

1
0,400

0,375
0,500

0,222
0,286

EcBm2Td

0,364
0,857
0,429

0,857
0,400
1

0,375

0,500

0,500

Td

0,250

0,222

0,286

0,500

Las variables fsicas y qumicas exhibieron cierta uniformidad en agosto de 2002. Se

encontraron incrementos leves de la salinidad, conductividad, temperatura y
profundidad hacia la zona de T. dominguensis. La concentracin de oxgeno en el
agua tambin mostr un aumento hacia esa vegetacin, aunque ms notable que los
otros factores abiticos. El pH se mostr ms alto en el parche de C. articulatus, sin
embargo en todas las comunidades se mantuvo alrededor de la neutralidad. En cuanto
a la intensidad de luz, se obtuvieron diferencias grandes entre la cantidad de luz que
lleg al techo vegetal y la que las plantas dejaron filtrar hasta la lmina de agua. La
zona de C. articulatus gener la disminucin mayor de densidad fotnica (luminancia),
al slo permitir que se filtraran 2 lux hasta la superficie del agua, de los 70 lux que
llegaron al dosel (Tabla 19).

94

Tabla 19. Variables ambientales medidas en agosto de 2009.

Luminancia (lux)
Sobre el
Bajo el
techo
techo
56
8

ZONA

pH

Conductividad
(mS/cm)

Temperatura
(C)

Salinidad
()

Profundidad
(cm)

Oxgeno
(mg/L)

B. mutica
Ecotono B.
mutica-C.
articulatus
C. articulatus
Ecotono B.
mutica-T.
dominguensis
T.
dominguensis

6,93

2,30

26,92

0,11

18,75

0,88

6,92

2,33

26,90

0,11

15,00

0,74

53

14

7,50

2,39

25,55

0,11

17,50

0,44

70

7,41

3,05

31,47

0,14

16,00

2,68

65

19

7,31

3,10

30,78

0,15

29,00

3,02

60

38

En la depresin de Barlovento, Edo. Miranda, especficamente en un sector

denominado El Clavo, se muestrearon dos zonas contiguas de vegetacin emergente
monoespecfica: Heliconia marginata (Heliconiaceae) e Hymenachne amplexicaulis
(Poaceae), en sentido suroeste noreste en la parte ms estrecha de un humedal
herbceo que ocupa la parte ms baja (estero) de una zona boscosa con pendientes
pronunciadas. Este estudio se realiz en enero de 2009 a comienzo de sequa, pero
an con algunas lluvias copiosas. En una zona pequea de espejo de agua, el
fitoplancton tuvo una abundancia importante, aunque con riqueza baja, y dominio
amplio de dos especies: la cianobacteria Lyngbya lutea (500 filamentos/L) y en
segundo trmino la clorofita Spirogyra ternata (100 filamentos/L). Asterococcus
limneticus fue comn en la zona de H. amplexicaulis. En las dos zonas con vegetacin
emergente, las densidades poblacionales de las dos primeras especies y de algunas
otras cianobacterias, clorofitas y diatomeas fueron muy inferiores al espejo (Tabla 20).
Tabla 20. Grupos (Taxa) fitoplanctnicos identificados en los diferentes ambientes de
vegetacin en El Clavo, Barlovento, Edo. Miranda (enero de 2009).
Zona de
muestreo

Muestra

Divisin

Especie

Cyanobacteria

Microcoleus
chthonoplastes

Filamentoso

Unicelular

Filamentoso

Unicelular

Unicelular

Colonial

He1
Chlorophyta
Cyanobacteria

Heliconia
marginata
He2

Chlorophyta

He3

Abundancia
(clulas/L;
colonias/L;
filamentos/L)

Nivel de
organizacin

Chlorophyta

Closterium
littorale
Microcoleus
chthonoplastes
Closterium
ehrenbergii
Closterium
lineatum
Asterococcus
limneticus

95

Tabla 20. Continuacin.

Zona de
muestreo

Espejo de agua
(dominado por
Lemna sp. y
algunas otras
flotantes libres)

Muestra

Abundancia
(clulas/L;
colonias/L;
filamentos/L)

Divisin

Especie

Nivel de
organizacin

Cyanobacteria

Lyngbya lutea

Filamentoso

500

Bacillariophyta
(diatomeas)

Pinnularia sp.

Unicelular

Asterococcus
limneticus

Colonial

19

Micrasterias
sol

Unicelular

Closterium
ehrenbergii

Unicelular

Closterium
lineatum

Unicelular

Spirogyra
ternata

Filamentoso

100

Cyanobacteria

Lyngbya lutea

Filamentoso

100

Colonial

16

Unicelular

Chlorophyta

Asterococcus
limneticus
Closterium
cornu
Closterium
lineatum
Closterium
parvulum
Spirogyra
ternata

Unicelular

Unicelular

Filamentoso

10

Filamentoso

100

Colonial

86

Unicelular

Unicelular

Unicelular

Filamentoso

11

E1
(muestra
nica)
Chlorophyta

Hy1

Hymenachne
amplexicaulis
Cyanobacteria

Lyngbya lutea

Chlorophyta

Asterococcus
limneticus
Micrasterias
sol
Closterium
ehrenbergii
Closterium
lineatum
Spirogyra
ternata

Hy2

96

Tabla 20. Continuacin.

Zona de
muestreo

Hymenachne
amplexicaulis

Muestra

Divisin

Especie

Hy2

Chlorophyta

Volvox aureus

Cyanobacteria

Lyngbya lutea

Chlorophyta

Asterococcus
limneticus
Closterium
cornu
Closterium
ehrenbergii
Closterium
lineatum
Closterium
parvulum
Spirogyra
ternata

Hy3

Abundancia
(clulas/L;
colonias/L;
filamentos/L)

Nivel de
organizacin
Colonial
(cenobio)
Filamentoso

100

Colonial

47

Unicelular

Unicelular

Unicelular

Unicelular

Filamentoso

Los ndices de diversidad establecen que el ambiente ms diverso es el parche de H.

marginata, la cual estuvo soportada en una equidad mxima, pese a su menor riqueza.
Los ndices de dominancia fueron elevados en espejo y H. amplexicaulis debido a las
grandes abundancias de unas pocas especies (Tabla 21).
Tabla 21. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad
fitoplanctnica del humedal de El Clavo (enero 2009). Salida: PAST.
ndice
Riqueza (S)
Equidad (J)
Shannon-Wiener (H)
Dominancia de Simpson (D)
Berger-Parker (d)

Heliconia marginata

Espejo de agua

Hymenachne amplexicaulis

1,000
1,609

0,338
0,702

0,502
1,103

0,200
0,200

0,650
0,790

0,424
0,556

El ndice de similitud de Jaccard suministr informacin probabilstica de los ambientes

a partir de su composicin en especies. Las dos zonas con vegetacin emergente
fueron ms parecidas entre s que respecto al espejo de agua (Tabla 22).
Tabla 22. ndice de similitud de Jaccard para las tres zonas estudiadas en el Clavo, Edo.
Miranda (enero de 2009). El anlisis se hizo en PAST.
Heliconia hirsuta

Espejo de agua

Hymenachne
amplexicaulis

Heliconia marginata

0,54054

0,64706

Espejo

0,54054

0,51429

Hymenachne amplexicaulis

0,64706

0,51429

97

La figura 35 muestra una serie de fotos, donde se exhiben ejemplares de especies

representantes de la comunidad fitoplanctnica del humedal de El Clavo.

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

Figura 35. Algunas especies de microalgas representantes del fitoplancton del humedal de El
Clavo, Barlovento, Edo. Miranda: (a) Lyngbya lutea (Cyanobacteria), 400x; (b) Pinnularia sp.
(Bacillariophyta), 400x; (c) Asterococcus limneticus (Chlorophyta), (d) Micrasterias sol
(Chlorophyta), 250x; (e) Closterium ehrenbergii (Chlorophyta); 250x; (f) Spirogyra ternata
(Chlorophyta), 250x. Fotos: Rubn Torres, cmara digital PAX-CAM acoplada a microscopio
invertido y a computador (programa PAX-IT!).

En trminos generales, para cada una de las fechas en las que se visit el humedal de
El Clavo, las mayora de las variables fisicoqumicas tuvieron gran uniformidad en los
diferentes puntos muestreados dentro de la zona de H. marginata, nico parche de

98

vegetacin donde se tomaron esas mediciones dentro del mbito del estudio. La
profundidad de la lmina de agua disminuy rpidamente de enero a febrero conforme
la estacin seca se aproxim, seal de que la poca fue una transicin de lluvia a
sequa y los valores de oxgeno y conductividad variaron (Tabla 23).
Tabla 23. Valores medios desviaciones estndares de las variables fisicoqumicas tomadas
en la zona de Heliconia marginata del humedal herbceo de El Clavo, Edo. Miranda en enero febrero de 2009.
Salida

Profundidad
(cm)

Temperatura
(C)

05/01/2008
26/01/2008

69,2 15,4
13,7 7,0

30/01/2008

pH

%O2

[O2]mg/L

CE (S)

24,7 0,6

6,28 0,1
5,92 0,2

2,2 1,3
8,7 6,4

0,3 0,2
0,7 0,5

11,3 4,6

22,5 0,3

5,58 0,3

0,9 0,8

07/02/2008

12,7 6,4

24,7 0,9

6,41 0,1

10,2
9,3
6,5 1,9

14/02/2008

13,7 5,7

24,6 0,3

6,17 0,4

3,9 0,6

0,7 0,3

01/03/2008

11,3 4,6

23,1 0

5,73 0,2

10,8
3,2

1,0 0,4

87,1 2,1
108,3
6,1
99,4
36,5
104,0
8,4
133,8
61,2
154,4
61,5

0,5 0,1

CE
especfica
(S/cm)
86,8 2,1
107,2
5,8
94,4
34,6
102,8
6,9
132,5
60,4
149,4
57,9

Salinidad
()
<<1
0,1 0
0,1 0
0,1 0
0,1 0
0,1 0

Las mediciones de conductividad elctrica (CE) y concentracin de oxgeno (O 2)

fluctuaron entre los puntos a lo largo del seguimiento. Dichas fluctuaciones
principalmente fueron notables en el oxgeno, pero ambas variables mostraron
tendencias al incremento de sus valores a lo largo del tiempo, conforme la profundidad
de la lmina de agua disminuy (figura 36).
80,0

160,0

70,0

140,0

80,0
70,0

1,0

60,0

40,0
80,0
30,0

60,0
40,0

20,0

20,0

10,0

0,0
2

0,6

40,0
30,0
20,0

0,2

10,0

0,0

0,0
1

Tiempo (das)
CE (S)

50,0

0,4

0,0
1

[O2]mg/L

50,0

100,0

60,0
0,8
Prof. (cm)

120,0
CE (S)

1,2

Tiempo (das)

Profundidad (cm)

[O2]mg/L

(a)

Profundidad (cm)

(b)

Figura 36. Variaciones temporales de (a) conductividad elctrica y (b) oxgeno disuelto
a medida que la lmina de agua disminuy en el parche de Heliconia marginata (enero
febrero 2009).

99

Prof. (cm)

180,0

Los nutrientes determinados para el estudio en El Clavo fueron dos de los elementos
ms importantes y limitantes para las plantas y el fitoplancton: el nitrgeno (N) y el
fsforo (P). La determinacin de N total por mtodo Kjeldahl (1883) result en una
concentracin de 2,94 g/L de N para una muestra combinada 1-2-3, 6,44 g/L para otra
muestra combinada 4-5 y finalmente una concentracin de 2,31 g/L para la muestra 6.
Llama la atencin que en la muestra combinada 4-5 la concentracin de N duplica a la
determinada en la muestra combinada 1-2-3 y casi triplica al contenido de la muestra
6, siendo todas muestras provenientes de la misma zona de H. marginata y tomadas
en la misma fecha. El punto de quiebre en la determinacin de N lo determin la
cantidad de cido clorhdrico (HCl) empleado para cada titulacin, ya que se necesit
verter un volumen doble de HCl en la bureta para hacer el viraje a la coloracin final de
la muestra combinada 4-5; la relacin del volumen de HCl con la concentracin de N
total es lineal o directa (figura 37).

Conc. N (mg/L)

6
5
4
3
2
1
0
1,2,3

4,5

Muestra
Figura 37. Concentraciones de nitrgeno (N) en las muestras de agua colectadas en la zona de
Heliconia marginata en la primera salida de campo al humedal de El Clavo (05/01/2009).

Las concentraciones de fsforo total (P) en fracciones de las mismas muestras

anteriormente mencionadas, se determinaron a partir de la curva de calibracin
resultante de la medicin de patrones de distintas concentraciones a las que se midi
su absorbancia a = 640 nm. En la muestra combinada 1-2-3 la concentracin de P
fue 0,01 mg/L; en la muestra combinada 4-5 la concentracin de P arroj un resultado
fsicamente ilgico, pues se trata de una concentracin negativa (-4,61 mg/L), producto
de una transmitancia de 100% que al aplicar el factor de conversin a absorbancia

100

deriv en el valor negativo sealado, lo que se traduce en una interpretacin dual: (1)
no haba P en la muestra o (2) se produjo un error experimental en algn paso de la
marcha analtica; la muestra 6 produjo el valor ms alto de contenido de P en agua
(0,19 mg/L). La figura 38 muestra la curva de calibracin con la indicacin de los
conjuntos de pares ordenados o interceptos de las absorbancias experimentalmente
determinadas, e introducidas en la ecuacin de regresin lineal, as como sus
correspondientes valores en miligramos por litro, con la salvedad de la muestra
combinada 4-5, por lo ya reseado.

Absorbancia ( = 640 nm)

0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
y = 0,4401x + 0,0308
R2 = 0,9949

0,2
0,1

(0,11;0,19 mg/L)
(0,04;0,01 mg/L)

0
0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,2

1,4

1,6

Concetracion de fsforo (mg/L)

Figura 38. Curva de calibracin para la obtencin de fsforo total en agua de las muestras
tomadas en la zona de Heliconia marginata en la primera salida de campo al humedal de El
Clavo (05/01/2009).

En enero de 2010 se muestrearon una serie de lagunas de inundacin del bajo

Orinoco, al sur de Monagas, prximas al puente Orinokia. La composicin del
fitoplancton consta de cuatro grandes grupos, en orden de importancia: Cyanobacteria,
Chlorophyta, Bacillariophyta y Euglenophyta. La Tabla 24 presenta los taxa del
fitoplancton de cada localidad, en total 77 especies de los cuatro grupos antes
mencionados. Entre los componentes ms importantes destacan las cianobacterias
filamentosas (Lyngbya circumcreta, Anabaena flos-aqua y A. planctonica) dominantes
en las localidades de Los Pocitos y Macapaima, y Lyngbya circumcreta domin en las
dos lagunas anteriores y en la laguna Ramonero. Entre las coloniales destacaron
Microcystis elastica y M. parasitica en Los Pocitos y Macapaima; Gloeocapsa

101

aeruginosa fue importante en Macapaima. La cianobacteria unicelular Chroococcus sp.

destac por su abundancia en Baador. En Macapaima y Palital se encontraron
individuos de Spirulina subsalsa. De los grupos restantes, resaltan la diatomea
Achnanthes sp. en La Redonda, y la euglenofita Trachelomonas sp. en Guarampo. A
pesar de que ninguna especie de clorofita result numricamente dominante, el grupo
fue el primero en nmero de especies y tercero en abundancia.

Las
Palometas

Ramonero

Guarampo

La Redonda

Baador

Palital

Macapaima

Grupos/Estaciones

Los Pocitos

Tabla 24. Lista de especies y abundancia (cel./L) del fitoplancton en aguas libres de las
lagunas estudiadas en el bajo Orinoco, sur de Monagas.

56538

515560

Cyanobacteria
Unicelulares
Chroococcus sp.

886044

Filamentosas
Anabaena planctonica

1272000

1172640

A. flos-aqua

1600968

1549560

A. spiroides

400000

78000

Lyngbya sp.

439880
12564

128822

40846

34052

37704
4282

L. circumcreta

3000656

1900830

515288

L. limnetica

905628

161238

153958

282690

15710

18852

1203386

147674

Oscillatoria sp.
Spirulina subsalsa

52350

4188

7179252

5197308

21034

Aphanocapsa biformis

234528

288972

A. pulchra

213588

188460

Gloeocapsa aeruginosa

196836

586320

Microcystis inserta

169614

41880

Total filamentosas

2698000
15710

180084
96324

15710

332946

3247612

Coloniales

345821
18846

97402

105090

M. minima

200541

M. elastica

586320

339228

M. parasitica

335040

586320

M. robusta

196836

83760

Aphanocapsa biformis

234528

288972

A. pulchra

213588

188460

Gloeocapsa aeruginosa

196836

586320

2094

223082

14658

116254

3142

2094

4084

40787

345821
18846

102

97402

105090

586320

Microcystis inserta

169614

41880

345821
18846

97402

105090

M. minima

200541

M. elastica

586320

339228

M. parasitica

335040

586320

M. robusta

196836

83760

Merismopedia sp.
M. punctata

10470

282690

113076

2094

Total coloniales

2056308

2399724

Total Cianobacterias

9235560

7597032

Nostoc sp.

2094

223082

14658

116254

12564

12568

48162
69196

3142

2094

Actinastrum
hantzschii

35598

452448

6284

2094

39682

692239

1655834

153958

17804

372628

3939851

33504
20940

Closterium sp.

10470

C. acutum

197946

C. cetaceum

20940

C. ktzingii

15710

C. ehrenbergii
C. macilentum
Coelastrum
cambricum
Cosmarium sp.

41880
3142

C. aplanatum

4188
113076
37692

9426
12564
4188

C. bioculatum

3142

C. denticulatum

6284

C. logiense

2094

C. margaritiferum

6284

Euastrum ansatum

2094

E. elegans

2094

E. pulchellum

16752

Gonatozygon sp.

12568

103

40787

3142

15710

Bambusina sp.

4084

3142

Chlorophyta

Artrodesmus sp.

Ramonero

196836

Las
Palometas

G. aeruginosa

Guarampo

188460

La Redonda

213588

Baador

Macapaima

A. pulchra

Grupos/Estaciones

Palital

Los Pocitos

Tabla 24. Continuacin.

G. pilosum

Ramonero

Las
Palometas

Guarampo

La Redonda

Baador

Palital

Los Pocitos

Grupos/Estaciones

Macapaima

Tabla 24. Continuacin.

23034

Kirchneriella lunaris
Pediastrum duplex

2094

37692

6284

25128

41880

P. tetras
Scenedesmus sp.

167520

S. armatus

2094

9426

12564

9426

2094

6284

S. bimorfus

6284

S. brasiliensis

41880

16752

S. intermedius
S. quadricauda

73290

Selenastrum gracile

50272
4188

Spirogyra sp.

12564

S. gracile

18846

Staurastrum sp.

31410

S. brasiliense

3142
6284

3142

12568
10470

S. leptocladum

3142

S. noticum

3142

S. tetracerum

2094

Staurodesmus sp.

8376

3142

Tetraedrum
arthrodesmiformis

14658

T. minimum

6284

Ulothrix zonata

4188

Xanthidium sp.
Total Chlorophyta

2094
0

544440

211494

122538

270212

249186

97402

628400

50258

77478

Bacillariophyta
Achnanthes sp.
A. lanceolata

3142

A. heteromorpha

12568

Actinella guianensis

3142

Gomphonema sp.

4188

G. tenellum

Pinnularia sp.

12568

12564

Hydrosera sp.
Melosira granulata

297348

4188
10470

226152

21994
8376

104

6284

50272

3142

9426

108888

138943

P. dactylus

Ramonero

Las
Palometas

Guarampo

La Redonda

Baador

Palital

Los Pocitos

Grupos/Estaciones

Macapaima

Tabla 24. Continuacin.

4188

P. hemiptera

12564

P. pectinata

9426

P. singularis

33504

Tryblionella rustica

2094
10470

Total
Bacillariophyta

8376

226152

3142

330852

122538

678672

230340
59698

644952

138943

Euglenophyta
Trachelomonas sp.

2094

593838

60726

Total Euglenophyta

2094

593838

60726

4739076

3815268

Total Fitoplancton

9246030

1449048

1553748

4141156

3010036

4257734

Los ndices de diversidad sealan que las lagunas con mayor variedad fueron
Macapaima y Palital, puesto que tuvieron las mayores riquezas y equidades, junto con
Los Pocitos, el tercer ambiente ms diverso y que present la misma equidad que
Macapaima. En las lagunas donde la equidad disminuy, los ndices de dominancia
aumentaron, adems las riquezas tambin resultaron bajas en los mismos, lo que trajo
como consecuencia valores de diversidad relativamente bajos (Tabla 25).
Tabla 25. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad
fitoplanctnica de lagunas de inundacin del bajo Orinoco (sur de Edo. Monagas), para enero
de 2010. Salida: PAST.
ndice
Riqueza (S)
Equidad (J)
Shannon y Wiener
(H)
Dominancia de
Simpson (D)
Berger-Parker (d)

Los
Pocitos

Macapaima

Palital

Baador

La
Redonda

Guarampo

Las
Palometas

Ramonero

24
0,82

35
0,82

43
0,75

29
0,73

25
0,48

9
0,34

14
0,80

14
0,68

2,59

2,92

2,82

2,45

1,54

0,74

2,12

1,80

0,12

0,08

0,15

0,13

0,37

0,68

0,15

0,29

0,26

0,17

0,37

0,27

0,57

0,82

0,26

0,52

Por su parte, el ndice de similitud de Jaccard revela que los ambientes de mayor
similitud en el nmero y abundancias de especies comunes fueron Macapaima y Los
Pocitos. Los otros ambientes mostraron pocas similitudes entre s, por lo que cada una
de esas lagunas tuvo una composicin de especies diferente (Tabla 26).

105

Tabla 26. ndice de similitud de Jaccard para las lagunas estudiadas en el bajo Orinoco, sur del
Edo. Monagas (enero de 2010). En rojo se resaltan los valores ms altos. Salida: PAST.
Los Pocitos

Macapaima

Palital

Baador

La Redonda

Guarampo

Las Palometas

Ramonero

Los Pocitos

Macapaima

0,69
0,14
0,36
0,11
0,14

0,69
1
0,18
0,39
0,13
0,10

0,14
0,18
1
0,24
0,13
0,13

0,36
0,39
0,24
1
0,20
0,15

0,11
0,13
0,13
0,20
1
0,13

0,14
0,10
0,13
0,15
0,13
1

0,19
0,17
0,14
0,26
0,26
0,44

0,46
0,32
0,12
0,26
0,11
0,15

0,19
0,46

0,17
0,32

0,14
0,12

0,26
0,26

0,26
0,11

0,44
0,15

1
0,17

0,17
1

Palital
Baador
La Redonda
Guarampo
Las Palometas
Ramonero

Un anlisis de componentes principales (ACP) permiti establecer relaciones entre las

especies fitoplanctnicas y zooplanctnicas ms importantes en el anlisis descriptivo
e iterativo, para la eliminacin sistemtica de especies con pocas varianzas y raras
que redundaron en informacin. Los dos primeros ejes retuvieron 95,4% de la varianza
del sistema multidimensional. Las cianobacterias Anabaena planctonica, Lyngbya
circumcreta y L. limntica, y los rotferos Brachionus havanaensis, Keratella americana
y Lecane proiecta fueron las especies escogidas para este anlisis puesto que
tuvieron las mayores varianzas y correlaciones con los primeros componentes
principales. La figura muestra el biplot, donde las tres especies de cianobacterias
estuvieron fuertemente relacionadas a los dos primeros componentes principales, y
los organismos L. circumcreta y L. limntica al primer componente principal, y A.
planctonica al segundo componente principal. Los rotferos no aparecen en este biplot,
puesto que estuvieron relacionados con otros componentes, sus abundancias y
varianzas resultaron muy inferiores a las de las especies fitoplanctnicas, de las que
se contaron hasta millones de clulas por litro. Lyngbya circumcreta estuvo asociada a
la laguna Ramonero y totalmente superpuesta a L. limnetica (mxima correlacin). Las
lagunas Guarampo, Palital, La Redonda y Las Palometas estuvieron muy asociadas
entre s (figura 39).
En Mantecal se muestrearon algunos bajos, esteros (pastizal) y espejos de agua, en
etapas finales de lluvias o inicio de la transicin de lluvia a sequa (noviembre de
2010). Se hicieron muestreos puntuales en cada estrato a lo largo del gradiente
ambiental desde el bajo hasta el espejo.

106

968947.3

Anabaena planctonica
775157.9

581368.4

CP 2

387578.9

Los Pocitos
Macapaima

193789.5

Baador
-387578.9
-193789.5
La Redonda
Las Palometas
Guarampo
Palital

Ramonero

Lecane proiecta
Brachionus
Keratella
Lyngbya
limnetica
americana
havanaensis
193789.5

Lyngbya circumcreta
387578.9

581368.4

775157.9

968947.3

-193789.5

-387578.9
CP 1

Vector scaling: 807456,00

Figura 39. Biplot de los dos primeros componentes principales del ACP para los ambientes
lagunares del Orinoco bajo, sur de Monagas. Los dos primeros componentes principales
retuvieron 95,4% de la inercia total del sistema multidimensional original. Salida: MVSP 3.0.

La Tabla 27 muestra la composicin de especies fitoplanctnicas en tres ambientes de

los mdulos inundables de Mantecal. Dominaron las clorofitas, seguidas de las
cianobacterias y en menores proporciones las euglenofitas y diatomeas. Las especies
ms abundantes fueron las clorofitas Desmidium baylei y Scenedesmus brasiliensis en
bajo, Euastrum pectinatum en bajo y pastizal y Cosmarium subtumidum en pastizal.
La cianobacteria Microcystis aeruginosa fue el principal representante de este grupo
en las muestras, y tambin se hallaron filamentos de Arthrospira sp. El espejo de agua
fue el ambiente menos rico en especies y tambin exhibi las menores densidades
poblacionales.
Tabla 27. Composicin y abundancia (clulas por litro) de la comunidad fitoplanctnica de tres
ambientes de los mdulos inundables de Mantecal (noviembre 2010).
Taxa
Cyanobacteria
Anabaena planctonica
Arthrospira sp.
Chroococcus sp.

Bajo

Pastizal

Espejo

5416
1285
2569

745
4545
458

45

107

89

Tabla 27. Continuacin.

Cylindrospermum muscicola
Lyngbya circumcreta
Merismopedia glauca

1045

1526

Microcystis aeruginosa
M. flos-aqua

14025
4188

748

225

Nostoc sp.
Oscillatoria tenuis

4326

458
4589

Chlorophyta
Cosmarium sp.
Cosmarium subtumidum
Closterium ehrenbergii
Desmidium baylei
Euastrum crassum

457
4458
784
45126
1546

2546
14565
6821
4895
74

12546
3012
1458
15689
4589

15878
485
5963
856
589
2589

451

5846

745

1265
512

Euastrum pectinatum
Hyalotheca sp.
Micrasterias sol
Scenedesmus brasiliensis
Scenedesmus quadricauda
Staurastrum paradoxum
Staurastrum triangularis
Euglenophyta
Trachelomonas superba
Phacus orbicularis
Bacillariophyta
Achnanthes lanceolata

1256

236

152
58

2548

452

Gomphonema sp.

74

859

412

Una observacin de los ndices de diversidad permite fcilmente advertir que en el

pastizal se conjugan una riqueza y equidad elevadas que se combinan para la
obtencin de un valor de diversidad Shannon-Wiener relativamente alto, si se compara
con los otros ambientes contiguos. El bajo fue el segundo lugar ms diverso, donde
riqueza y equidad disminuyeron un poco. El espejo fue menos rico y equitativo que los
otros dos ambientes, y los ndices de dominancia, especialmente el de Berger-Parker,
subieron en forma notable (Tabla 28).
Tabla 28. Algunos ndices de diversidad empleados para caracterizar la comunidad
fitoplanctnica entres ambientes de los mdulos inundables de Mantecal (Edo. Apure), en
noviembre de 2010. Salida: PAST.
ndice

Bajo

Pastizal

Espejo

Riqueza (S)
Equidad (J)

19
0,744

22
0,803

8
0,611

Shannon y Wiener (H)

Dominancia de Simpson (D)

2,189
0,181
0,365

2,483
0,114
0,208

1,271
0,387
0,553

Berger-Parker (d)

108

El ndice de Jaccard muestra que el bajo y el pastizal tuvieron una gran similitud, y
que el espejo fue un ambiente totalmente diferente a ambos (Tabla 29).
Tabla 29. ndice de similitud de Jaccard para comparacin de los tres ambientes estudiados en
Mantecal (Edo. Apure). Salida: PAST.

Bajo
Pastizal
Espejo

Bajo

Pastizal

Espejo

1
0,640
0,286

0,640
1
0,304

0,285
0,304
1

Fosas petroleras y lagunas con emanaciones naturales de crudos. La figura 40

muestra un conjunto de fotos con observaciones de especies de microalgas de una
muestra de pozo (P57X) del Edo. Bolvar, 2009. La muestra proviene en forma
especfica de una pequea charca fangosa en la parte exterior del pozo mencionado,
enmarcada en un lugar donde se encuentra petrleo, ripios y sedimentos de
perforacin. Se evidenciaron muchas cianobacterias filamentosas (principalmente
Oscillatoria tenuis); tambin hubo una cantidad de euglenofitas y diatomeas pennadas,
y algunas clorofitas (principalmente Scenedesmus spp.).

Figura 40. Imgenes que muestran la composicin de especies fitoplanctnicas de una charca
fangosa, especficamente proveniente del borde exterior de un rea de pozos petroleros en el
norte del Edo. Bolvar, 2009.

109

Figura 40. Continuacin.

110

Figura 40. Continuacin.

111

Figura 40. Continuacin.

112

Figura 40. Continuacin.

La Fosa El Caracol en la regin de Caico Seco, ubicada en el municipio Aragua del

estado Anzotegui, fue escogida para la bsqueda de especies de microalgas nativas
con gran potencialidad para la produccin de biodiesel, por representar un rea de
exposicin histrica a hidrocarburos que oper durante muchos aos como una de las
principales y ms grandes recolectoras de desechos petrolferos de la zona. Se
tomaron muestras de agua libre en tres puntos denominados: Zona I, Zona II y Zona
III.
En la Zona I se identificaron dos gneros de cianobacterias (Chroococcus y
Anabaena), un gnero de clorofita (Chlamydomonas) y una especie de diatomea
(Tabellaria flocculosa). Para la Zona II se reportaron dos gneros de clorofitas
(Chlamydomonas y Chlorella), un gnero de cianobacteria (Anabaena, aunque una
especie diferente a la encontrada en la Zona I) y uno de diatomea (Navicula).
Finalmente en la Zona III, a diferencia del resto de las zonas, en esta localidad de
estudio se identificaron cinco gneros de cianobacterias (Lyngbya, Merismopedia,
Aphanocapsa, Synechocystis y Chroococcus) adems de una clorofita (Chlorella sp.).
Salinas y lagunas hipersalinas. La laguna de Boca Chica en la isla de Margarita,
Edo. Nueva Esparta, es un ambiente natural extremfilo, con una salinidad elevada (>
40 ppm), que se presenta como una laguna costera en la costa suroeste de la

113

pennsula de Macanao, donde ocurren emanaciones naturales de crudo. Un anlisis

de muestras tomadas en este lugar, mayo de 2009, refiere que en las mismas se
encontraron ejemplares de Dunaliella primolecta (Chlorophyta) y Chaetoceros sp.
(Bacillariophyta)

en

densidades

muy

bajas,

125

145

clulas

por

litro,

respectivamente.
La salina de Las Cumaraguas, norte de la pennsula de Paraguan, Edo. Falcn, es
otro ambiente extremfilo donde se ubica una de las poblaciones naturales de
Dunaliella salina ms importantes del Caribe sur. Las muestras colectadas exhibieron
abundancias de 14.000 a 75.000 clulas por litro, en fase de crecimiento, y se inici el
cultivo de la especie en la Cmara de Crecimiento con la metodologa expuesta y
resultados explicados en la seccin de cultivos.
Ambientes marinos costeros. En Mochima y Puerto Cabello, entre los aos 2009 y
2010, se colectaron muestras de fitoplancton marino donde las diatomeas centrales
(Bacillariophyta) y dinoflagelados dominaron en riqueza y abundancia los ambientes.
En la baha de Mochima, se encontraron individuos de las diatomea Chaetoceros sp. y
Nitzschia valens, as como la haptofita Isochrysis galbana, en densidades bajas (100 a
250 clulas por litro). En el muelle de Puerto Cabello se hallaron blooms (o
afloramientos) de la diatomea Coscinodiscus sp. (>17.000.000 de clulas por litro), el
dinoflagelado colonial Alexandrium catenella (>15.000.000 de clulas por litro) y la
cianobacteria Anabaena sp. (>5.000.000 de clulas por litro).
Sntesis de los ambientes. La figura 41 muestra una sntesis grfica de todas las
regiones muestreadas y las composiciones porcentuales del fitoplancton en cada
lugar. Se muestra que en los ambientes de aguas continentales las cianobacterias,
diatomeas y clorofitas fueron los grupos ms representativos. Las euglenofitas
constituyeron otros representantes de agua dulce encontrados en porcentajes muy
inferiores, pero en la fosa petrolera de Bolvar se evidencia una gran importancia
numrica de este taxn, junto a cianobacterias, clorofitas y diatomeas en porcentajes
menores. Las clorofitas del gnero Dunaliella resultaron muy importantes en
ambientes hipersalinos, con una dominancia absoluta en las salinas de Las
Cumaraguas. En medios martimos, las diatomeas, pirrofitas (o dinoflagelados) y las
haptofitas, stas en Mochima representadas por Isochrysis galbana, resultaron los
taxones predominantes. Con esta representacin grfica de las divisiones de
cianobacterias y microalgas eucariotas, se comprueban las grandes variaciones
porcentuales de los taxones mayores del fitoplancton, como consecuencia de la
variedad de ambientes acuticos representados en el pas.

114

Composicin porcentual

100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%

Haptofitas
Pirrofitas
Euglenofitas
Diatomeas
Clorofitas
Cianobacterias

Figura 41. Composiciones porcentuales de las divisiones de organismos procariotas y

eucariotas integrantes de la comunidad del fitoplancton en las regiones estudiadas en el pas a
lo largo del estudio.

115

8. Discusin
8.1 Cultivos
Los medios preparados para mantenimiento y experimentos se caracterizaron por sus
componentes exclusivamente minerales (medios minerales), es decir, slo se
emplearon sales inorgnicas sin la incorporacin de fuentes orgnicas para los
macronutrientes (Ej.: urea como fuente de nitrgeno) y micronutrientes. La nica
incorporacin orgnica a los medios minerales fue el EDTA disdico, el cual no
funcion como nutriente, sino como agente quelante que secuestr iones Hierro II
(Fe2+) y calcio (Ca2+). Por este mecanismo ambos cationes permanecieron como
formas solubles en agua. En el caso especfico del Fe2+, la accin del quelante evit
que se oxidara a Hierro III (Fe 3+) y reaccionar con el fsforo del medio, para formar un
precipitado de fosfato frrico, lo que trae como consecuencia la no disponibilidad de
este nutriente para las microalgas. De forma homloga, la mediacin del quelante
impidi que el ion calcio hiciese precipitar a los aniones fosfato y sulfato.
Por otro lado, no hubo necesidad de suplementar con vitaminas y carbohidratos
(cultivos mixotrficos) a ningn medio nutritivo, a pesar de formar parte de sus
formulaciones. Ciferri (1983) y Duerr y col. (1997) mencionan que cultivos mixotrficos
producen una cantidad de biomasa elevada en comparacin con la autotrofa (medios
minerales para microalgas, incluidas fuentes inorgnicas de carbono, como los
empleados en esta investigacin) y heterotrofa. Dicha aseveracin se puede deber al
efecto energtico de la incorporacin de carbohidratos a los medios, as como la
actuacin eficiente de las vitaminas como coenzimas en muchos procesos catablicos.
Adems, estos aditivos orgnicos aumentan el valor nutricional de la biomasa de
microalgas. No obstante, adiciones de carbohidratos simples como glucosa, sacarosa
o fructosa, tambin producen crecimientos rpidos y descontrolados de bacterias, las
cuales pueden ser patgenas y mortales para los cultivos. Otros microorganismos
favorecidos por la adicin de carbohidratos y vitaminas son las microalgas invasoras,
las cuales suelen poseer tasas de crecimiento per cpita (r) superiores a las de
especies de valor biotecnolgico, como Arthrospira spp. y Spirulina spp., las que
pueden ser desplazadas por competencia. El medio altamente bsico (pH>9,5) donde
crece A. platensis es un escudo o primera lnea de defensa para estas especies
primitivas, las cuales evolucionaron en esos ambientes agrestes e inhspitos para casi
cualquier otra forma de vida (Ciferri 1983).
Para el medio Schlsser (1994, modificacin del medio Aiba y Ogawa (1977)), un
aporte importante realizado por Parra (2005) fue la sustitucin en algunas sales, del

116

catin sodio (Na+) por el catin potasio (K+), para generar una relacin Na+ : K+ 4 a 1
(la proporcin en el medio original es de 10 a 1). Este ajuste tuvo por finalidad una
mayor aproximacin a las condiciones imperantes en los medios naturales de A.
platensis en los lagos carbonatados de frica (Lvque 1987).
La razn de la adaptabilidad de la cepa Lefevre de A. platensis a las condiciones
naturales del pas puede derivar de las caractersticas del lugar de origen de esa
variedad, frica tropical (especficamente borde sur del desierto del Sahara). Las
similitudes climticas en temperatura y radiacin solar altas durante la mayor parte del
ao son adecuadas para esa cepa silvestre, ms que para otras que slo se han
cultivado en invernaderos y condiciones controladas de manera persistente. Los
ambientes naturales de A. platensis son lagos y lagunas carbonatados, cerrados,
altamente alcalinos con valores de temperatura y radiacin solar elevados. Estos
cuerpos de agua estn confinados a regiones desrticas tropicales y subtropicales en
el interior de los continentes y, en general, son ambientes naturales muy hostiles, por
lo que a menudo los centros urbanos estn apartados de ellos (Jones y Grant 1999).
La composicin de los medios de cultivo afecta la tasa de crecimiento y produccin de
biomasa de los microorganismos, y define el costo de produccin del mismo (Raoof y
col. 2006). Por esa razn, para esta investigacin fue de gran importancia obtener
medios de cultivo ptimos que permitiesen maximizar la produccin y minimizar los
costos. Por ejemplo, el empleo de sales grado tcnico y alimenticio, en lugar de sales
grado reactivo o analtico de precios muy elevados debido a sus altos grados de
pureza, ha permitido la viabilidad econmica de los experimentos. Por otro lado, en
numerosas oportunidades sales de alta pureza han demostrado ser menos nutritivas
que las de grado tcnico o alimenticio. Estas impurezas constituyen valores nutritivos
agregados que aumentan la calidad nutricional de los medios preparados.

8.2 Ensayos con poblaciones de Arthrospira platensis

Los ensayos factoriales 22 permitieron llegar a una primera aproximacin del proceso
de optimizacin de los medios de cultivos, con el propsito firme de conocer y procurar
tasas de crecimientos poblacionales y rendimientos de biomasa ptimos para la meta
de aprovechamiento biotecnolgico de A. platensis. Los medios 1 y 2 presentaron una
dinmica similar, lo cual indica que el intervalo de variacin de las concentraciones de
Na+ y K+ no afectaron la tasa de crecimiento poblacional, por lo que puede explorarse
la posibilidad de disminuir las concentraciones de estos iones hasta un mnimo que
permita mantener esta tasa de crecimiento. La tasa de crecimiento ligeramente menor
del medio 3 indica que un incremento del Cl - pudo afectar en forma desfavorable el

117

crecimiento de A. platensis. En el caso de la curva de crecimiento del medio 4, con

una fase de latencia y adecuacin muy prolongada, la misma seala que una
disminucin pronunciada del Cl- en conjunto con el SO42- incrementan de modo
apreciable dicha adaptacin al medio. Sin embargo, la baja concentracin de estos
iones no afecta la tasa de crecimiento una vez alcanzada la fase exponencial.
En los ensayos se lograron ajustes del pH del medio de cultivo a un valor de 10,5, una
unidad por encima de lo establecido por Melack (1979), lo que signific una mejor
aproximacin al pH del medio natural de A. platensis. Los cambios incorporados por
Parra (2005), y reajustes posteriores en el segundo ensayo factorial 2 2, determinaron
que el pH del medio se mantuviera estable por un tiempo prolongado y con pocas
variaciones en la conductividad, de este modo siendo alcanzadas las condiciones
ptimas para el crecimiento de A. platensis. Estas condiciones de laboratorio se
corresponden con los trabajos de Wood y Talling (1988), Njuguna (1988), Melack
(1988) y Jones y Grant (1999), donde se reportan alcalinidades extremas y
osmolaridades elevadas de los ambientes originarios de esta cepa.
A un pH de 8,5, el medio de cultivo de A. platensis frecuentemente se contamin con
otras especies de microalgas (principalmente de los gneros de cianobacterias
Anabaena, Microcystis y Oscillatoria), las cuales se encuentran comnmente en el
agua potable, lo que visualmente origin matices de color verde diferentes al verdeazul, caracterstico de los medios observados cuando A. platensis es la nica especie
existente. Sena y col. (2011) mencionan un tratamiento de alta alcalinidad (pH 12, con
empleo de KOH) de 72 h, como procedimiento inicial determinante para eliminar a
Microcystis spp. y otras cianobacterias, partiendo del hecho de que A. platensis
sobrevive a condiciones de dureza y alcalinidad extremas en lagos de soda (en ingls
soda lake). La toxicidad de un medio muy alcalino con contenido de sales potsicas
como KOH o K2CO3 para cianobacterias invasoras u oportunistas como Microcystis
aeruginosa, aparentemente viene del hecho de que esta especie y congneres tienen
densidades bajas de canales de potasio, por lo que una entrada masiva de iones
potasio (K+) al compartimento intracelular no permite su salida rpida por los canales,
debido a su insuficiencia numrica, y ocurre un gran desequilibrio electroqumico con
inversin de la polaridad de la membrana plasmtica. La consecuencia final es la
muerte de la clula por intoxicacin con potasio.
Para la cuantificacin del peso neto de la biomasa de A. platensis, result necesario
determinar una relacin lineal entre la absorbancia y el peso seco de la biomasa, de tal
manera de conocer su peso neto en cualquier instante de tiempo de manera rpida,
precisa y no destructiva. Boussiba y Richmond (1979) fueron los nicos en cuantificar

118

biomasa seca de microalgas en cultivos controlados, pero no lo hicieron en sentido

estricto, ni mucho menos en una relacin lineal para su determinacin. Otros autores
como Chen y col. (1996), Chen y Zhang (1997) y Zhang y Chen (1999), no
desarrollaron una metodologa cuantitativa para estimar la biomasa, ya que sta fue
tomada hmeda, lo que puede conducir a errores importantes en la cuantificacin de
su peso.
La tasa de crecimiento para un cultivo autotrfico de A. platensis en medio Zarrouk,
obtenida por Chen y Zhang (1997), fue de 0,0083 h-1, mientras que para un cultivo
mixotrfico (suplementado con glucosa) en medio Zarrouk, reportado por los mismos
autores, el valor fue de 0,026 h-1, ambos en condiciones de laboratorio. La tasa de
crecimiento per cpita o de recambio obtenida en este trabajo para el cultivo
autotrfico en medio 1, el ms productivo de las cuatro combinaciones obtenidas para
condiciones controladas, fue de 0,50 das-1 = 0,021 h-1, similar a la obtenida por Chen
y Zhang (1997) para el cultivo mixotrfico, y ms de dos veces superior a la
conseguida para su cultivo autotrfico. Entonces, para los fines de este trabajo resulta
significativo el rendimiento notablemente superior obtenido en cultivos con medios
minerales, y similar al mixotrfico sin suplir glucosa u otra fuente orgnica.
El ensayo factorial fraccionado 2 6-1 permiti evaluar el crecimiento diferencial de
poblaciones de A. platensis en un gran nmero de medios de cultivos simultneos con
combinaciones aleatorias de macronutrientes. El crecimiento diferenciado para cada
tratamiento puede deberse a que estas cianobacterias crecen en condiciones
altamente selectivas, principalmente en concentraciones altas de sales (Borowitzka
1999). Es evidente que cultivos con tratamientos centrales y algunos con
concentraciones importantes de ciertas sales inorgnicas propiciaron crecimientos
vigorosos y relativamente saludables de las poblaciones de A. platensis, con poca o
nula contaminacin de otras especies de microalgas. En contraste, otros tratamientos
fueron poco viables por carencias considerables de una buena parte de los
requerimientos nutricionales de la microalga, disminuyendo notablemente la capacidad
de carga del medio. No es descartable que debido al empleo de sales amnicas en los
tratamientos, sus concentraciones hayan sido suficientemente altas en algunos
recipientes, como para intoxicar o limitar el crecimiento de las poblaciones residentes
de A. platensis, conocido el efecto deletreo que el amonio en concentraciones altas
tiene sobre esta especie (Boussiba 1989).
Como consecuencia de la selectividad de medios de cultivo de A. platensis, la especie
cont con dinmicas de crecimiento poblacional variables. Vonshak y Richmond
(1985) reportaron que tasas de crecimiento per cpita elevadas se observaron a

119

densidades poblacionales bajas, mientras que tasas de crecimiento bajas estuvieron

relacionadas con limitacin por luz en cultivos densos bajo condiciones ptimas a cielo
abierto, lo que coincide con la mayora de las curvas obtenidas para el ensayo
multifactorial a partir del punto de inflexin, cuyas dinmicas se maximizaron en
medios centrales, como el tratamiento 36, que contaron con las concentraciones
ptimas de los principales nutrientes, en especial las fuentes de carbono.
El tiempo de duplicacin (tg) es un parmetro poblacional importante en la
caracterizacin de la dinmica de crecimiento poblacional de microorganismos, y tiene
gran aplicabilidad en biotecnologa como medida de eficiencia de cultivos masivos de
microalgas para maximizar la velocidad y rendimiento de los mismos. Melack (1979)
obtuvo para A. platensis un tiempo de recambio (turnover time), comparable con el tg
obtenido en varios de medios del ensayo factorial fraccionado, de 8,9 a 18,9 h en
condiciones naturales en un lago de Kenia. Para especies congneres de A. platensis
o

prximas

ella,

se

tiene

que

Tomaselli

col.

(1995)

determinaron

experimentalmente valores de tg de 27 horas para Spirulina subsalsa en condiciones

de laboratorio; Garnier y col. (1994) obtuvieron un tg de 70 h para A. maxima en
condiciones de laboratorio.
Los cultivos a mayor escala (tanques circulares de 500 L y cultivadores tipo carrusel
de 2000 L) brindaron la oportunidad de probar el medio optimizado en botellones, para
iniciar el cultivo masivo de A. platensis. Es importante resaltar la disposicin espacial
de los tanques para el experimento. Debido a que para el momento del ensayo en
tanques se aproximaba el solsticio de invierno, la proyeccin de la eclptica solar sobre
el Ficotrn ocurri a ms de 30 al sur, ms all de los 10 respecto al Ecuador, lo cual
constituye una fuente de variacin adicional no deseada. Para contrarrestar este
efecto, se escogi un Diseo en Bloques Aleatorios que permiti extraer la variacin
posible, producto del fenmeno descrito. El anlisis de varianza no produjo
diferencias significativas entre los bloques, lo que hace presumir que la inclinacin u
oblicuidad de los rayos solares no tuvo una implicacin directa en la dinmica de los
cultivos. En otros trminos, la diferencia de minutos transcurridos entre los tanques
que se iluminaron primero en el eje cardinal Este, con los rayos iniciales del alba, y los
ltimos tanques en el punto cardinal opuesto iluminados de ltimo, no repercuti de
manera decisiva en el crecimiento de las poblaciones, a pesar de que los
microorganismos responden de manera rpida a cambios igualmente rpidos. La
profundidad de la lmina s tuvo un efecto significativo, esto debido a que a mayor
profundidad los rayos solares penetran cada vez con menor intensidad y se forman

120

puntos oscuros donde las microalgas no pueden fotosintetizar y mueren, cayendo en

forma notable la productividad primaria.
Tambin es destacable la disminucin del rendimiento de la cosecha de biomasa en
cultivos a escalas mayores a las de botellones. En estos recipientes la produccin de
biomasa fue alta en buena medida por el volumen de los mismos, pero tambin a su
disposicin inclinada que aument en forma notable la superficie de exposicin a los
rayos solares. La temperatura es otro factor decisivo en la produccin primaria, la
misma en botellones fue 2 o 3C superior a los tanques, los cuales tuvieron en contra
su diseo, pues son recipientes muy altos que generan sombra abundante an en
horas del medioda y el material (polietileno) no es conductor de calor. En estanques
tipo carrusel el volumen empleado es de 2000 L, la capacidad calrica aumenta an
ms, no obstante sus temperaturas fueron ligeramente ms altas que las de los
tanques, ya que este tipo de cultivadores tiene un diseo de superficie amplia con
poca profundidad (lmina delgada), lo que genera mayor exposicin a los rayos
solares y generacin de pocos puntos muertos o zonas no iluminadas. No obstante, la
produccin de biomasa no fue elevada, quiz debido a algn factor fsico como la
temperatura, para la cual hubo un seguimiento y se registraron valores moderados a
bajos (18 - 20C en horas diurnas; 17 - 19C durante las noches). La causa alternativa
puede obedecer a la preparacin y suministro de medio nutritivo en cantidades
suficientes, as como sus solubilidades, tomando en cuenta los altos grados de
impurezas de las sales grado tcnico o alimenticio aplicadas, en ocasiones
conformadas por conglomerados muy compactos.
La estructura de tallas en la poblacin de filamentos de A. platensis permite explicar
mecanismos

de

autorregulacin

poblacional

tpicos

de

poblaciones

con

densodependencia. A densidades poblacionales muy bajas, los recursos (luz y

nutrientes) son disponibles y predominan tricomas muy cortos y hormogonios
(filamentos reproductivos de las cianobacterias del Orden Oscillatoriales constituidos
por slo dos clulas), lo que permite una adaptacin rpida al medio y crecer en forma
exponencial, una vez se inicia la fase de crecimiento rpido. En el proceso de
maduracin del cultivo, empiezan a dominar filamentos o tricomas de gran tamao
(con muchas clulas) y en la fase de saturacin la tasa de crecimiento instantnea se
reduce notablemente hasta llegar a cero en la capacidad de carga. En esta etapa no
hay produccin de hormogonios y los filamentos maduros no reproductivos son el
componente de talla ampliamente predominante en el cultivo en fase de equilibrio.
Entonces, cuando la capacidad de carga es alcanzada, no hay incremento poblacional

121

y la poblacin se atena u ocurren retrasos (oscilaciones amortiguadas y ciclos)

asociados a efectos de la densidad alrededor del punto de equilibrio estable (K).
La tasa de crecimiento per cpita explica la recuperacin de una poblacin luego de
una perturbacin (May 1976). Una perturbacin por extraccin de una parte de la
poblacin en estado de equilibrio puede ser respondida en funcin del tamao de las
poblaciones remanentes en el medio y de su tasa intrnseca de crecimiento per cpita.
La tasa de crecimiento elevada de A. platensis, principalmente en condiciones
naturales, es debida a su forma de reproduccin vegetativa por escisin de filamentos
y generacin de hormogonios que se multiplican radialmente por fisin binaria en
pocos das. La perturbacin no puede ser total o llegar a niveles basales, porque las
poblaciones remanentes en el cultivo son pequeas y biolgicamente inviables, lo que
puede conducir a la extincin. Una remocin de 75% y reemplazo con medio nutritivo
nuevo gener un efecto de dilucin que no permiti que la poblacin se adecuara en
forma rpida. Esto no es conveniente en trminos biotecnolgicos, puesto que se
busca maximizar el rendimiento de cosecha con una tasa de recuperacin o resiliencia
elevada.
Como nota complementaria para el tema de poblaciones, llama la atencin la
morfologa rectilnea de los filamentos de A. platensis en condiciones de laboratorio
(Cmara de Crecimiento), cuyos filamentos originalmente tenan una estructura
helicoidal, tpica del gnero. Una sucesin de varias generaciones desde el primer
inculo en la Cmara de Crecimiento con exposicin a luz artificial (400 lux) origin el
cambio a la forma rectilnea. Al respecto, se debe comentar que cuando la cepa fue
llevada al Ficotrn, y los cultivos se aclimataron a condiciones a cielo abierto, la misma
nuevamente empez a adquirir la morfologa helicoidal, luego de su exposicin a la
radiacin solar por tres generaciones sucesivas. La explicacin a esta recuperacin
est contenida en la calidad o composicin de longitudes de onda de la luz solar,
especficamente a su componente de rayos ultravioletas, los que inducen a un
arrollamiento o arreglo de los tricomas en forma espiral, que generan en los filamentos
regiones alternas de mayor y menor exposicin a las radiaciones ms fuertes (Ciferri
1983).
En condiciones de laboratorio, la cianobacteria se adecu a una fuente luz artificial
menos intensa (luz fra) y de menor calidad (a pesar del empleo de las denominadas
lmparas fluorescentes day-light que contienen la mayor parte de las longitudes de
onda del visible), y su disposicin rectilnea permiti aumentar la superficie de
exposicin de los filamentos para captar la luz con mayor eficiencia. En condiciones
naturales, las zonas oscuras o menos expuestas de los filamentos espirales o

122

helicoidales, como adaptacin pertinente para hallar proteccin o menor exposicin de

los filamentos a las radiaciones ultravioletas, suelen incrementar en forma notable las
concentraciones de ficocianinas, pigmentos antena exclusivos de las cianobacterias
que contribuyen a la captacin de longitudes de onda adicionales a las captadas por la
clorofila a, y que contribuye al incremento de su eficiencia fotosinttica. Resulta de
particular inters biotecnolgico la produccin de A. platensis (y A. mxima) en
condiciones naturales o semi-controladas a cielo abierto (estanques cerrados) para
obtener poblaciones con morfologa helicoidal, por el gran atractivo que brindan las
ficocianinas a la industria de los colorantes y su empleo en salud y farmacutica como
marcadores moleculares (Henrikson 1994).

8.3 Comunidades fitoplanctnicas

En aguas continentales, los humedales de Paria, Barlovento y Mantecal tienen como
caracterstica comn las presencias de grandes formaciones vegetales que ocupan la
mayor parte de su superficie, con predominio de plantas emergentes de hbito
herbceo, de all la denominacin de humedales herbceos (Mitsch y Gosselink 2007),
si bien las composiciones de especies, fisionomas y dominancias varan.
Asociaciones del fitoplancton y zooplancton a determinadas clases de vegetacin
dentro de un mismo humedal se evidenciaron en anlisis de componentes principales.
En el caso del humedal Palmares III, pennsula de Paria, se encontr un patrn en
herradura de los parches de vegetacin, lo que conlleva la presuncin del
establecimiento de un gradiente espacial, con la composicin de especies planctnicas
variando a lo largo de las zonas de vegetacin monoespecfica y ecotonos. En este
mismo anlisis multivariado se observaron relaciones biticas entre especies
fitoplanctnicas, y de stas con algunos organismos zooplanctnicos, como los
cladceros, los cuales se alimentan del fitoplancton. La disposicin parcelada de la
vegetacin acutica genera asociaciones diferenciales de las comunidades del
fitoplancton y zooplancton en sus predios. Las intensidades variables de la radiacin
solar bajo los techos de las asociaciones de plantas tienen causalidad inmediata en las
disposiciones espaciales o formas de crecimiento de las diferentes especies de
plantas emergentes. La consecuencia de esto es que la calidad de luz que se filtra
hasta la lmina de agua es escasa, por lo que la sombra generada va en detrimento
de la actividad fotosinttica del fitoplancton, mientras que para el zooplancton
significan refugios eficaces de depredadores visuales.
La homogeneidad de buena parte de las variables abiticas en el agua robustece el
pensamiento de que la estructura area de la vegetacin y ciertas condiciones

123

microclimticas locales son las causas reales del establecimiento de patrones de

distribucin espacial de las especies fitoplanctnicas y zooplanctnicas. En los
humedales ubicados en Paria, Barlovento y Mantecal contrastan en modo notable las
composiciones y abundancias de las especies entre los distintos parches de
vegetacin. Por otra parte, las distintas zonas de vegetacin generaron efectos locales
sobre algunas variables fisicoqumicas,

como

la

concentracin de oxgeno

(concomitante a cambios en la concentracin de dixido de carbono) y conductividad,

por tasas de descomposicin diferenciales asociadas al tipo de material vegetal y
variaciones en las concentraciones de iones disueltos, respectivamente. En el caso del
humedal de Barlovento, tales cambios en la concentracin de oxgeno y conductividad
se relacionaron con la disminucin progresiva de la profundidad de la lmina de agua
por advenimiento de sequa, lo que produjo un efecto de concentracin de iones. Las
asociaciones

de

plantas

emergentes

tambin

establecen

microclimas.

Las

concentraciones de nutrientes, principalmente el fsforo y el nitrgeno, resultaron

bajas en ese humedal, lo que determina que el flujo de energa y materia para el
funcionamiento del ecosistema est determinado, en modo preponderante, por los
aportes de las plantas acuticas en forma de hojarasca y materiales en distintos
estados de descomposicin que constituye una fuente importante de nutrientes para la
comunidad del plancton (Mitsch y Gosselink 2007). Las cianobacterias pueden
contribuir al incremento de las fuentes de nitrgeno en el humedal mediante la fijacin
de nitrgeno atmosfrico.
El carcter salobre del humedal Palmares III, segn sistema de clasificacin de TabiloValdivieso (1999), se pone de manifiesto en la composicin de especies
fitoplanctnicas descritas para este ambiente, en el cual se encontraron microalgas
tpicas de agua dulce como clorofitas, euglenofitas y cianobacterias del gnero
Arthrospira, diatomeas con un espectro amplio de tolerancia a la salinidad (eurihalinas)
de los gneros Navicula y Nitzschia, as como pirrofitas (o dinoflagelados) del gnero
Protoperidinium y la cianobacteria Spirulina subsalsa, especies principalmente
relacionadas a ambientes estuarinos.
Para lagunas de inundacin del bajo Orinoco, las grandes abundancias de
cianobacterias fijadoras de nitrgeno (en especial especies de los gneros Lyngbya y
Anabaena,

stas

caracterizadas

por

sus

grandes

heterocistos),

indican

concentraciones altas de este elemento en Los Pocitos, Macapaima y Ramonero. El

fitoplancton menos abundante en ambientes como Palital, Baador y La Redonda, con
un nmero de especies muy alto en el Orden Desmidiales, sugiere que se trata de
ambientes limpios, oligotrficos y con aguas ligeramente cidas (Comas 2008). Las

124

diatomeas resultaron muy abundantes en Las Palometas y La Redonda, este grupo es

muy importante para la alimentacin del zooplancton encontrado en la zona,
principalmente rotferos y cladceros. La abundancia de diatomeas en esas lagunas
indica valores de pH ligeramente alcalinos, con presencia de silicatos (Wetzel 1975).
Por su parte, la laguna de Guarampo fue un ambiente diferente en cuanto a la
estructura de la comunidad fitoplanctnica, en este caso hubo abundancias menores
de la mayora de sus componentes, con predominio notable de euglenofitas del gnero
Trachelomonas; este tipo de composicin fitoplanctnica a menudo caracteriza a
ambientes ricos en materia orgnica y ligeramente eutrofizados (Comas 2008). La
relacin estrecha de Guarampo con Palital, Las Palometas y La Redonda en el anlisis
de componentes principales se debe a las densidades poblacionales menores
registradas en estos ambientes, mas no a las composiciones de especies, las cuales
son muy diferentes.
En general, para la mayora de los ambientes de agua dulce estudiados la diversidad
fue alta donde las equidades, y en segundo trmino las riquezas, contribuyeron en
modo determinante a los valores del ndice Shannon-Wiener. La reduccin de los
valores de diversidad por equidades bajas incrementaron los ndices de dominancia en
algunos sitios, donde se encontraron dominios amplios de algunas especies
fitoplanctnicas. Los estudios con ndices de diversidad permiten caracterizar las
comunidades a un nivel simple, como sistemas independientes o aislados. Los ndices
de distancia y similitud de Jaccard brindan comparaciones entre comunidades
distintas, donde se establece un segundo nivel de anlisis de complejidad comunitaria
(diversidad beta) respecto al estudio de comunidades simples (diversidad alfa) (Del
Pino y col. 2006). En el humedal de Paria, las similitudes entre ambientes contiguos y
disimilitudes entre parches lejanos encontraron asidero en la propuesta de este ndice
de complejidad al constatar, que efectivamente al haber pocas especies comunes a
ciertos ambientes, los clasifica como comunidades diferentes dentro de una gran
comunidad heterognea dividida en ambientes parcelados.
Spirulina subsalsa, especie de gran valor biotecnolgico, fue encontrada en Paria y
lagunas de inundacin del Orinoco. Rodrguez (2001) la reporta en aguas salobres y
estuarinas, como el sistema del lago de Maracaibo (norte del lago). Esto evidencia que
S. subsalsa puede ser hallada en una gran variedad de ambientes, con una
distribucin geogrfica amplia en el pas. En Barlovento y Mantecal se hallaron
algunas especies de cianobacterias de los gneros Lyngbya y Arthrospira, as como
clorofitas del gnero Scenedesmus, especies tambin referidas con potencialidades
importantes para la biotecnologa. Las presencias de microalgas en ambientes

125

extremfilos, como salinas y lagunas hipersalinas, y altamente contaminados o

intervenidos, como las fosas petroleras y el muelle de Puerto Cabello, indican la
adaptabilidad de estos microorganismos a ambientes modificados por actividades
antrpicas. Sus potencialidades biotecnolgicas se reflejan en sus capacidades para
vivir en tales ambientes, con capacidades para la absorcin y resntesis de
hidrocarburos a compuestos ms simples, como Chlorella spp. y Scenedesmus spp.
(Albarracn 2007). Se conoce tambin la gran produccin de pigmentos fotosintticos
(carotenoides) de Dunaliella salina y D. viridis, especies de gran valor en la industria
de colorantes y en la produccin de vitamina A, con poblaciones ubicadas en salinas
de Paraguan y Laguna Boca Chica, isla de Margarita, respectivamente. Ambientes
marinos costeros no perturbados, como la baha de Mochima, tambin ofrecen en su
diversidad algunas especies de gran valor biotecnolgico para produccin de
biocombustibles, Isochrysis galbana, Nitzschia valens y Chaetoceros spp.
Existe una gran variedad de ecosistemas terrestres y acuticos en el pas, producto de
su ubicacin tropical y variedad de relieves, desde sistemas montaosos con alturas
importantes que modifican el clima, hasta llanuras continentales y costeras, vastos
territorios selvticos, depresiones, sistemas deltaicos y un gran frente marino. La
cuenca del ro Orinoco sintetiza las tres grandes formas de relieve que existen en la
naturaleza: por un lado macizos antiguos y escudos, cordilleras de levantamiento
reciente (es decir, del Terciario) por el otro, y depresiones tectnicas y cuencas o
llanuras de acumulacin, en tercer lugar. Para un pas con estas caractersticas
geomorfolgicas, y ms si se encuentra en la zona intertropical, tal variedad ambiental
representa una gran ventaja ecolgica y econmica. Slo Canad y los Estados
Unidos, adems de Venezuela y Colombia, que en su territorio tiene una parte
reducida del escudo guayans, presentan una disposicin geolgica similar
(http://es.wikipedia.org/wiki/Ro_Orinoco). Tal multiplicidad de ambientes produce una
gran complejidad de hbitats dulceacucolas, salobres, martimos y extremos, que
unida a la condicin de pas megadiverso, permite la exploracin de comunidades
biolgicas con un banco gentico muy importante de especies promisorias para el
desarrollo de la biotecnologa en campos como la alimentacin, produccin de
biocombustibles, biorremediacin, farmacologa, cosmtica, colorantes, etc.

126

9. Conclusiones
1. Se obtuvieron dos medios de cultivo ptimos para el crecimiento de Arthrospira
platensis, uno en condiciones controladas (medio 1 = medio Parra (2005)) y otro en
condicin natural (tratamiento 36, medio central), lo que inicia el aprovechamiento
biotecnolgico de la especie a diferentes escalas.
2. La dinmica de crecimiento poblacional de Arthrospira platensis muestra
densodependencia logstica, con evidencia de una estructura de tallas que vara
conforme la poblacin crece y alcanza un equilibrio.
3. El crecimiento diferencial de poblaciones de Arthrospira platensis mostrado en
tratamientos con combinaciones aleatorias y centrales de nutrientes en un
experimento factorial fraccionado, seala que esta especie crece en condiciones
altamente selectivas.
4. La mayora de los tratamientos con tiempos de duplicacin, tg, ms cortos (y por
ende tasas de crecimiento per cpita, r, ms elevadas) se constituyeron en los
ms productivos en biomasa.
5. La profundidad de la lmina de agua en sistemas de tanques circulares a cielo
abierto influye en la dinmica de crecimiento poblacional y produccin de biomasa
de Arthrospira sp.
6. Se encontraron especies de cianobacterias (Arthrospira spp., Spirulina subsalsa,
Lyngbya spp., Oscillatoria spp. y Anabaena spp.) y microalgas eucariticas
(Scenedesmus spp., Isochrysis galbana, Chlorella sp., Chaetoceros sp., Navicula
platalea, Dunaliella salina y D. viridis) de gran inters biotecnolgico en diferentes
lugares de la geografa variada del pas, lo que conduce a la idea de que
Venezuela cuenta con un potencial gentico importante en su biodiversidad para la
biotecnologa.

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http://es.wikipedia.org/wiki/Barlovento_(Venezuela)
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http://es.wikipedia.org/wiki/Cuenca_del_Orinoco
http://es.wikipedia.org/wiki/Ro_Orinoco
http://es.wikipedia.org/wiki/Mantecal
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http://www.disfrutevenezuela.com/Municipio-Peninsula-de-Macanao-Mapa.html
http://www.mochima.org/
http://www.tuplaya.com/paginasfalcon/salinas/lascumaraguas.htm
http://www.ipapc.gov.ve/
http://es.wikipedia.org/wiki/Puerto_Cabello
http://es.wikipedia.org/wiki/Nudo_(unidad)

135

136

Apndice 1
Medios de cultivo para microalgas
f/2 Medium (Guillard 1975)
Fuente: http://www-cyanosite.bio.purdue.edu/media/table/f2.html
NaNO3 (75.0 g/L dH2O)

1.0 ml

NaH2PO4H2O (5.0 g/L dH2O) 1.0 ml

Na2SiO39H2O (30.0 g/L dH2O) 1.0 ml
f/2 Trace Metal Solution

1.0 ml

f/2 Vitamin Solution

0.5 ml

Filtered seawater to

1.0 L

Autoclave after all additions.

Note: f/2 Medium contains extensive silica precipitate and should be used only when
growing diatoms. For other algal groups use f/2-Si Medium.
f/2 Trace Metal Solution:
FeCl36H2O

3.15 g

Na2EDTA2H2O

4.36 g

CuSO45H2O (9.8 g/L dH2O)

1.0 ml

Na2MoO42H2O (6.3 g/L dH2O) 1.0 ml

ZnSO47H2O (22.0 g/L dH2O)

1.0 ml

CoCl26H2O (10.0 g/L dH2O)

1.0 ml

MnCl24H2O (180.0 g/L dH2O) 1.0 ml

Distilled water to

1.0 L

Autoclave.
f/2 Vitamin Solution:
Vitamin B12 (1.0 g/L dH2O) 1.0 ml
Biotin (0.1 g/L dH2O)

10.0 ml

Thiamine HCl

200.0 mg

Distilled water to

1.0 L

Filter sterilize into plastic vials and store in refrigerator.

Note: Vitamin B12 and Biotin are obtained in a crystalline form. When preparing the Vitamin B12 Stock
Solution allow for approximately 11% water of crystallization (For each 1.0 mg of Vitamin B 12 add 0.89
ml dH2O). When preparing the Biotin Stock Solution allow for approximately 4% water of crystallization
(For each 1.0 mg of Biotin add 9.6 ml dH2O).

137

Fuente:
Vera, A., M. Martnez, K. Morillo y S. Montes. 2011. Cultivo discontinuo de Chlorella
sp. en medios enriquecidos con el exudado gomoso de Acacia macracantha. En:
http://revistas.luz.edu.ve/index.php/bcib/article/viewFile/90/3326.

138

Medio Chu-13 modificado por Dayananda (2007)

Modified CHU13 Medium, one liter [3]

Compound
mg/L
KNO3
400
K2HPO4
80
CaCl2 dihydrate
107
MgSO4 heptahydrate
200
Ferric Citrate
20
Citric acid
100
CoCl2
0.02
H3BO3
5.72
MnCl2 tetrahydrate
3.62
ZnSO4 heptahydrate
0.44
CuSO4 pentahydrate
0.16
Na2MoO4
0.084
0.072 N H2SO4
1 drop
The remaining volume is pure, de-ionized water.
Fuente: http://en.wikipedia.org/wiki/Chu_13

139

Medio Bristol UTEX

Bristol Medium
Directions
H.C. Bold's modification of Bristol's recipe (Bold 1949). General purpose freshwater
medium and as bristol's solution, an essential component of other media--see Bold 1NV,
Bold 3N, Bristol-NaCl, LDM, Proteose, Soil extract, and Trebouxia.
For 1 L Total
1. To approximately 900 mL of dH2O add each of the components in the order specified
while stirring continuously.
2. Bring total volume to 1 L with dH2O.
*For 1.5% agar medium add 15 g of agar into the flask; do not mix.
3. Cover and autoclave medium.
4. Store at refrigerator temperature.
# Component
1
2
3
4
5
6

NaNO3 (Fisher
BP360-500)
CaCl22H2O (Sigma
C-3881)
MgSO47H2O
(Sigma 230391)
K2HPO4 (Sigma P
3786)
KH2PO4 (Sigma P
0662)
NaCl (Fisher S271500)

Amount

Stock Solution
Concentration

Final
Concentration

10 mL/L

10 g/400mL dH2O

2.94 mM

10 mL/L

1 g/400mL dH2O

0.17 mM

10 mL/L

3 g/400mL dH2O

0.3 mM

10 mL/L

3 g/400mL dH2O

0.43 mM

10 mL/L

7 g/400mL dH2O

1.29 mM

10 mL/L

1 g/400mL dH2O

0.43 mM

Fuente: http://web.biosci.utexas.edu/utex/mediaDetail.aspx?mediaID=29

140

Medio Serpa y Caldern (2005)

Fuente:
Serpa, R.F. y A. Caldern. 2006. Efecto de diferentes fuentes de nitrgeno en el
contenido de carotenoides y clorofila de cuatro cepas de Dunaliella salina TEOD.
Ecologa Aplicada 5(2): 93 99.

141

Apndice 2
ENSAYO Nro. 2: Optimizacin en botellones
Factorial 26-1 con 5 ptos. centrales Desing Expert
St.

Id

Run

Block

Type

NaHCO3 Na2CO3 K2HPO4 NaCl K2SO4 NH4NO3

mg/L

mg/L

10207,5

3022,5

Fact

13610

33

1 Block 1

Center

28

28

2 Block 1

mg/L
375

mg/L

mg/L

mg/L

750

750

1764

4030

250 1000

1000

1176

3 Block 1

Fact

13610

2015

250

500

500

2352

11

11

4 Block 1

Fact

6805

4030

250 1000

500

1176

14

14

5 Block 1

Fact

13610

2015

500 1000

500

2352

25

25

6 Block 1

Fact

6805

2015

250 1000

1000

1176

30

30

7 Block 1

Fact

13610

2015

500 1000

1000

1176

22

22

8 Block 1

Fact

13610

2015

500

500

1000

2352

9 Block 1

Fact

13610

2015

500

500

500

1176

10 Block 1

Fact

6805

4030

500

500

500

1176

27

27

11 Block 1

Fact

6805

4030

250 1000

1000

2352

12 Block 1

Fact

6805

4030

250

500

500

2352

34

13 Block 1

Center

10207,5

3022,5

375

750

750

1764

14 Block 1

Fact

13610

4030

250

500

500

1176

31

31

15 Block 1

Fact

6805

4030

500 1000

1000

1176

10

10

16 Block 1

Fact

13610

2015

250 1000

500

1176

12

12

17 Block 1

Fact

13610

4030

250 1000

500

2352

24

24

18 Block 1

Fact

13610

4030

500

500

1000

1176

19 Block 1

Fact

6805

2015

500

500

500

2352

18

18

20 Block 1

Fact

13610

2015

250

500

1000

1176

23

23

21 Block 1

Fact

6805

4030

500

500

1000

2352

29

29

22 Block 1

Fact

6805

2015

500 1000

1000

2352

35

23 Block 1

Center

10207,5

3022,5

375

750

750

1764

24 Block 1

Fact

13610

4030

500

500

500

2352

26

26

25 Block 1

Fact

13610

2015

250 1000

1000

2352

13

13

26 Block 1

Fact

6805

2015

500 1000

500

1176

20

20

27 Block 1

Fact

13610

4030

250

500

1000

2352

21

21

28 Block 1

Fact

6805

2015

500

500

1000

1176

29 Block 1

Fact

6805

2015

250

500

500

1176

30 Block 1

Fact

6805

2015

250 1000

500

2352

17

17

31 Block 1

Fact

6805

2015

250

500

1000

2352

15

15

32 Block 1

Fact

6805

4030

500 1000

500

2352

32

32

33 Block 1

Fact

13610

4030

500 1000

1000

2352

16

16

34 Block 1

Fact

13610

4030

500 1000

500

1176

19

19

35 Block 1

Fact

6805

4030

250

500

1000

1176

36

36 Block 1

Center

10207,5

3022,5

375

750

750

1764

37

37 Block 1

Center

10207,5

3022,5

375

750

750

1764

142

Design-Expert Software

Interaction
E: K2SO4

Biomasa

2.4

Design Points
E- 500.000
E+ 1000.000

Actual Factors
B: Na2CO3 = 3022.50
C: K2HPO4 = 375.00
D: NaCl = 750.00
F: NH4NO3 = 1764.00

Biomasa

X1 = A: NaHCO3
X2 = E: K2SO4

1.6

1.2

0.8

6805.00

8506.25

10207.50

11908.75

13610.00

875.00

1000.00

A: NaHCO3

Design-Expert Software

Interaction
F: NH4NO3

Biomasa

2.4

Design Points
F- 1176.000
F+ 2352.000

Actual Factors
A: NaHCO3 = 10207.50
B: Na2CO3 = 3022.50
C: K2HPO4 = 375.00
E: K2SO4 = 750.00

Biomasa

X1 = D: NaCl
X2 = F: NH4NO3

1.6

1.2

0.8

500.00

625.00

750.00

D: NaCl

143

Design-Expert Software

Interaction
B: Na2CO3

Biomasa

2.4

Design Points
B- 2015.000
B+ 4030.000

Actual Factors
C: K2HPO4 = 375.00
D: NaCl = 750.00
E: K2SO4 = 750.00
F: NH4NO3 = 1764.00

Biomasa

X1 = A: NaHCO3
X2 = B: Na2CO3

1.6

1.2

0.8

6805.00

8506.25

10207.50

11908.75

13610.00

11908.75

13610.00

A: NaHCO3

Design-Expert Software

Interaction
E: K2SO4

Biomasa

2.4

Design Points
E- 500.000
E+ 1000.000

Actual Factors
B: Na2CO3 = 3022.50
C: K2HPO4 = 375.00
D: NaCl = 750.00
F: NH4NO3 = 1764.00

Biomasa

X1 = A: NaHCO3
X2 = E: K2SO4

1.6

1.2

0.8

6805.00

8506.25

10207.50

A: NaHCO3

144

Design-Expert Software
Biomasa
Design points above predicted value
Design points below predicted value
2.3555
2.5

0.838
X1 = A: NaHCO3
X2 = E: K2SO4

Biomasa

Actual Factors
B: Na2CO3 = 3022.50
C: K2HPO4 = 375.00
D: NaCl = 750.00
F: NH4NO3 = 1764.00

2.175

1.85

1.525

1.2
1000.00
6805.00

875.00
8506.25

750.00

10207.50
11908.75

A: NaHCO3

E: K2SO4

625.00
13610.00

500.00

Design-Expert Software
Biomasa
Design points above predicted value
Design points below predicted value
2.3555
2.36

0.838
X1 = D: NaCl
X2 = F: NH4NO3

Biomasa

Actual Factors
A: NaHCO3 = 10207.50
B: Na2CO3 = 3022.50
C: K2HPO4 = 375.00
E: K2SO4 = 750.00

2.12

1.88

1.64

1.4
2352.00
500.00

2058.00
625.00

1764.00

750.00

1470.00

875.00

D: NaCl

1000.00

145

1176.00

F: NH4NO3

Design-Expert Software
Biomasa
Design points above predicted value
Design points below predicted value
2.3555
2.5

0.838
X1 = A: NaHCO3
X2 = B: Na2CO3

Biomasa

Actual Factors
C: K2HPO4 = 375.00
D: NaCl = 750.00
E: K2SO4 = 750.00
F: NH4NO3 = 1764.00

2.175

1.85

1.525

1.2
4030.00
6805.00

3526.25
8506.25

3022.50

10207.50

2518.75

11908.75

A: NaHCO3

146

13610.00

2015.00

B: Na2CO3

Apndice 3
Fuente: http://bellman.ciencias.uniovi.es/d_experimentos/d_experimentos_archivos/sr.pdf

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148

149

150