Receptor Binding.

To obtain a better understanding of the direct effect of

ephedrine isomers on -ARs, the binding affinity of ephedrine isomers and closely
related analogs were compared on human 1- and 2-AR subtypes. The struc- tures
of all of the ephedrine isomers are provided in Fig. 1. With selected Ephedra
alkaloids of the 1R,2S-configuration, the rank order of competitive displacement
of radioligands on both 1A- and 2A-AR subtypes was nor ephedrin
Nmethylephedrine (Fig. 2). The comparative affinities of these Ephedra alkaloids
as displacing ligands were much lower those for than the standard agonist
analogs, L-phenylephrine and medetomidine. Calculated affinity val- ues of the
standard agonists and of all of the ephedrine alkaloids on 1A- and 2A-AR
subtypes are given in Tables 1 and 2. 1R,2S-Norephedrine, lacking an N-methyl
group as in 1R,2S-ephedrine, showed increased binding affinities at the subtypes
tested. The presence of an additional N-methyl group, as in 1R,2S-Nmethylephedrine, showed decreased binding affinities compared with 1R,2Sephedrine at the 1A-, 2A-, and 2C-AR. The rank order of affinity (Ki values) of
ephedrine isomers on human 1-AR in HEK293 cells was 1R,2R-pseudoephedrine
1R,2S-ephedrine 1S,2R-ephed- rine 1S,2S-pseudoephedrine at 1A-AR; 1S,2Rephed- rine 1R,2R-pseudoephedrine 1R,2S-ephedrine 1S,2S-pseudoephedrine
at 1B-AR; and 1R,2R-pseudoephedrine
1R,2S-ephedrine
1S,2R-ephedrine
1S,2S-pseudoephed-rine at 1D-AR. The affinities of 1R,2S-norephedrine and
1S,2S-norpseudoephedrine were similar to 1R,2S-ephedrine at the 1A-AR. The
rank order of affinity (Ki values) of ephed- rine isomers on human 2-AR in CHO
cells was 1R,2R- pseudoephedrine 1R,2S-ephedrine 1S,2R-ephedrine 1S,2Spseudoephedrine at 2A-AR; 1R,2R-pseudoephed- rine 1R,2S-ephedrine 1S,2Rephedrine
1S,2S-pseudo- ephedrine at 2B-AR; and 1R,2R-pseudoephedrine
1R,2S- ephedrine 1S,2R-ephedrine 1S,2S-pseudoephedrine at 2C-AR. As shown
in Tables 1 and 2, the 1R,2R- and the 1R,2S-ephedrine isomers had greater
affinities than the 1S,2R- and 1S,2S-isomers at all -ARs, except at the 1B-AR.
1S,2S-Pseudoephedrine displayed the lowest binding affinity at all -ARs.
Furthermore, the binding affinities of 1R,2S- norephedrine and 1S,2Snorpseudoephedrine were similar to that of 1R,2S-ephedrine on these subtypes.
Direct Agonist Effects of Ephedrine Alkaloids on -AR Subtypes. Cell-based
reporter gene assays were used to establish functional activity at the 1A-, 2A-,
and 2C-ARs. The direct agonist effects of ephedrine isomers on 1-ARswere
studied. As shown in Fig. 3, luciferase assay studies using the TRE-LUC plasmid
showed that 1R,2S-ephedrine, 1S,2R-ephedrine, 1R,2R-pseudoephedrine, 1S,2Spseudo- ephedrine, 1R,2S-norephedrine, 1R,2S-N-methylephedrine and 1S,2Snorpseudoephedrine had little effects on 1A-AR at the highest concentration
tested (0.3 mM). These isomers gave a response that was 12% of the Lphenylephrine max- imum. L-Phenylephrine activated 1A-AR, giving an EC50
value of 2.01 0.39 M. The agonistic effects of the ephedrine isomers on 2Aand2C-AR subtypes were examined for their abilities to reverse forskolin-induced
cAMP elevation measured using the 6 CRE-LUC reporter gene assay. The results
in Fig. 3 show that none of the ephedrine alkaloids (1R,2S-ephedrine, 1S,2Rephedrine,
1R,2R-pseudoephedrine,
1S,2S-pseudoephedrine,
1R,2Snorephedrine,
1R,2S-N-methylephedrine,
and
1S,2S-norpseudoephedrine)

reversed forskolin-induced cAMP elevations in the 2A- and 2C-AR subtypes.

However, the agonist medetomidine significantly reversed forskolin- induced
cAMP elevations in the 2A- and 2C-AR subtypes with EC50 values of 79.8 3.5 and
78.3 7.3 nM (Fig. 3). These data indicate that the ephedrine alkaloids do not act
as direct agonists on these AR subtypes.
Antagonistic Effects of Ephedrine Alkaloids on -AR Subtypes. Studies were
undertaken to examine the antag- onistic effects of ephedrine alkaloids on 1A-,
2A-, and 2C-AR subtypes in HEK293 and CHO cells (Table 3; Fig. 4).
The results showed that ephedrine isomers and analogs an- tagonized the effects
of the agonists, L-phenylephrine on 1- ARs (Fig. 4a) and medetomidine on 2-ARs
(Fig. 4b). In Table 3, it was noteworthy that the antagonistic potencies of ephedrine isomers on the 2A- and 2C-AR subtypes were consid- erably higher (5- to 24fold) than those for the inhibition of the 1-AR. Similar to the rank order found in
binding studies, 1R,2S- and 1R,2R-pseudoephedrine showed greater antago- nist
activity than 1S,2R- and 1S,2S-pseudoephedrine (com- pare data in Tables 1 and
3). No difference was noted in the antagonist potencies of the primary and
secondary amines of 1R,2S-norephedrine and ephedrine, respectively. However,
1S,2S-norpseudoephedrine (the primary amine analog) was more potent than
1S,2S-pseudoephedrine as an antagonist on the three -AR subtypes, and its
potency was the same as that of the 1R,2S-isomers of ephedrine and
norephedrine on these ARs. It appears that the orientation of the 1R-hydroxyl
substituent and the methylation state (primary versus sec- ondary amine) in the
ephedrine alkaloids are important for -AR activity. The antagonistic activities of
all ephedrine isomers were consistent with their binding affinities.
TERJEMAHAN
Reseptor Binding. Untuk mendapatkan pemahaman yang lebih baik dari efek
langsung dari isomer efedrin pada -ARs, afinitas pengikatan isomer efedrin dan
analog terkait erat dibandingkan pada manusia 1 dan 2-AR subtipe. Pada
struktur dari semua isomer efedrin disediakan pada Gambar. 1. Dengan memilih
Ephedra alkaloid dari 1R, 2S-konfigurasi, urutan peringkat perpindahan
kompetitif radioligands di kedua 1A- dan 2A-AR subtipe norephedrine
ephedrin > N-methylephedrine (Gbr. 2). Afinitas komparatif alkaloid Ephedra ini
sebagai menggusur ligan jauh lebih rendah mereka untuk dibandingkan dengan
analog agonis standar, L-phenylephrine dan medetomidine. Nilai-afinitas
dihitung-nilai dari agonis standar dan semua alkaloid efedrin pada 1A- dan 2AAR subtipe diberikan dalam Tabel 1 dan 2. 1R, 2S-Norephedrine, kurang
kelompok N-metil seperti pada 1R, 2S- efedrin, menunjukkan peningkatan
afinitas mengikat pada subtipe diuji. Kehadiran kelompok N-metil tambahan,
seperti dalam 1R, 2S-N-methylephedrine, menunjukkan penurunan afinitas
mengikat dibandingkan dengan 1R, 2S-efedrin di 1A-, 2A-, dan 2C-AR. Urutan
peringkat dari afinitas (nilai Ki) isomer efedrin pada manusia 1-AR di sel HEK293
adalah 1R, 2R-pseudoefedrin> 1R, 2S-efedrin>1S, 2R-ephedrine>1S, 2Spseudoefedrin di 1A-AR; 1S,2Rrine-ephedrine 1R, 2R pseudoefedrin 1R, 2Sefedrin 1S, 2S-pseudoefedrin di 1B-AR; dan 1R, 2R-pseudoefedrin1R, 2S-efedrin
1S, 2R-efedrin 1S, 2S pseudoephed-rine-di 1D-AR.

Afinitas dari 1R, 2S-norephedrine dan 1S, 2S-norpseudoephedrine yang mirip

dengan 1R, 2S-efedrin di 1A-AR. Urutan peringkat dari afinitas (nilai K i)
isomer rine ephed- pada manusia 2-AR dalam sel CHO adalah 1R, 2Rpseudoefedrin> 1R, 2S-efedrin> 1S, 2R-efedrin> 1S, 2S-pseudoefedrin di 2AAR; 1R, 2R rine-pseudoephedrine> 1R, 2S-efedrin = 1S, 2R 1S-efedrin> 1S,2Spseudoephedrine dalam 2B-AR; dan 1R, 2R-pseudoefedrin> 1R,2S-efedrine>
1S,2S-pseudoefedrin di 2C-AR.
Seperti ditunjukkan dalam Tabel 1 dan 2, 1R, 2R- dan 1R, isomer 2S-efedrin
memiliki afinitas lebih besar dari 1S, 2R- dan 1S, 2S-isomer sama sekali -ARs,
kecuali di 1B-AR. 1S, 2S-Pseudoephedrine ditampilkan afinitas mengikat
terendah di semua -ARs. Selanjutnya, afinitas mengikat dari 1R, norephedrine
2S- dan 1S, 2S-norpseudoephedrine yang mirip dengan 1R, 2S-efedrin pada
subtipe ini.
Efek Agonist langsung Ephedrine Alkaloid pada -ar Subtipe.
Reporter tes gen-sel berbasis digunakan untuk membangun aktivitas fungsional
di 1A-, 2A-, dan 2C-ARS. Efek agonis langsung isomer efedrin atas 1-Ars telah
dipelajari. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 3, penelitian uji luciferase
menggunakan plasmid TRE-LUC menunjukkan bahwa efedrin 1R, 2S-efedrin, 1S,
2R-efedrin, 1R, 2R-pseudoefedrin, 1S, 2S-pseudo, 1R, 2S-norephedrine, 1R, 2S-N
1S -methylephedrine dan, norpseudoephedrine 2S- memiliki efek kecil di 1A-AR
pada konsentrasi tertinggi yang diuji (0,3 mM). Isomer ini memberikan respon
yang <12% dari max imun L-fenilefrin. L-Phenylephrine diaktifkan 1A-AR,
memberikan nilai EC50 2,01 0,39 M.
Efek agonis dari isomer efedrin pada 2A- dan 2C-AR subtipe diperiksa untuk
kemampuan mereka untuk membalikkan elevasi cAMP forskolin diinduksi diukur
dengan menggunakan 6 CRE-LUC assay gen pelapor. Hasil pada Gambar. 3
menunjukkan bahwa tidak ada alkaloid efedrin (1R, 2S-efedrin, 1S, 2R-efedrin,
1R, 2R-pseudoefedrin, 1S, 2S efedrin-pseudo, 1R, 2S-norephedrine, 1R, 2S-Nmethylephedrine, dan 1S, 2S-norpseudoephedrine) terbalik forskolin-diinduksi
peningkatan cAMP di 2A- dan 2C-AR subtipe. Namun, agonis medetomidine
signifikan terbalik forskolin- diinduksi peningkatan cAMP di 2A- dan 2C-AR
subtipe dengan EC50 nilai 79,8 3,5 dan 78,3 7,3 nM (Gbr. 3). Data ini
menunjukkan bahwa alkaloid efedrin tidak bertindak agonis sebagai langsung
pada AR subtipe ini.
Efek antagonis dari Efedrin Alkaloid pada -AR Subtipe.
Studi yang dilakukan untuk meneliti efek onistic antag- alkaloid efedrin pada
1A-, 2A-, dan subtipe 2C-AR di HEK293 dan CHO sel (Tabel 3; Gambar 4.). Hasil
penelitian menunjukkan bahwa isomer efedrin dan analog an- tagonized efek
dari agonis, L-phenylephrine pada 1- ARS (Gambar. 4a) dan medetomidine atas
2-ARS (Gambar. 4b). Pada Tabel 3, itu dicatat bahwa potensi antagonis isomer
ephedrine pada 2A- dan 2C-AR subtipe yang pertimbangan relable lebih tinggi (5
sampai 24 kali lipat) dibandingkan untuk penghambatan 1-AR. Serupa dengan
urutan peringkat ditemukan dalam studi mengikat, 1R, 2S- dan 1R, 2Rpseudoefedrin menunjukkan aktivitas NIST antagonis lebih besar dari 1S, 2R- dan
1S, 2S-pseudoephedrine (com- pare data dalam Tabel 1 dan 3). Tidak ada
perbedaan tercatat dalam potensi antagonis dari amina primer dan sekunder 1R,
2S-norephedrine
dan
efedrin,
masing-masing. Namun,
1S,
2S-

norpseudoephedrine (analog amina primer) adalah lebih kuat dari 1S, 2Spseudoefedrin sebagai antagonis pada tiga -AR subtipe, dan potensinya sama
seperti yang dari 1R, 2S-isomer dari efedrin dan norephedrine pada ARS
ini. Tampak bahwa orientasi substituen 1R-hidroksil dan negara metilasi (primer
dibandingkan detik- amina ondary) di alkaloid efedrin yang penting untuk
kegiatan -AR. Kegiatan antagonis dari semua isomer efedrin konsisten dengan
afinitas mengikat mereka.