Conceptos Bsicos y Experiencias con Especies Amaznicas injertos la
enfermedad presente en el patrn puede pasar a la yema injertada, como sucede en los ctricos donde enfermedades virales pueden afectar ambiciosos planes de propagacin vegetativa. Se han desarrollado varios mtodos sofisticados eliminar estos patgenos de las plantas, como la termoterapia, quimioterapia y micro injerto de pice caulinares o las combinaciones de stos. Estos mtodos normalmente estn disponibles en los laboratorios de biotecnologa. La estrechez gentica de las poblaciones propagadas vegetativamente suele convertirse en un problema, pues este tipo de reproduccin no permite la recombinacin gentica que favorece la evolucin y adaptacin de las especies. En caso de implementarse masivamente este mtodo, debe ser una norma, la bsqueda constante de clones elite con caractersticas deseables pero provenientes de diferentes ambientes, que permitan llevar a su vez la variabilidad gentica de sus sitios de origen. MTODOS DE SIEMBRA El mtodo de siembra a emplear depender de los objetivos que se pretendan alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva, mientras que en otras resulta indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxgeno, los mtodos de siembra ms empleados son los siguientes: 1. Siembra por estras. 2. Siembra por puncin. 3. Siembra volumtrica. 4. Siembra masiva. Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o micrn, deben ser calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo, antes y despus de realizar la siembra, con el objetivo de destruir a los microorganismos contaminantes de la superficie del instrumento. Con independencia del tipo de medio y el mtodo de siembra a emplear sta debe realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor emanado reduce el nmero de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder asptico. SIEMBRA POR ESTRAS
Este mtodo de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo
slidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cua. (Slam) Instrumentos de siembra a emplear. Para la siembra por estra se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas ocasiones, como explicaremos ms adelante, se utilizan ambos instrumentos en la misma siembra. SIEMBRA POR PUNCIN Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear ser la aguja de platino y el medio de cultivo slido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este mtodo, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo. SIEMBRA VOLUMTRICA Este mtodo de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo slidos o lquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduacin, sin embargo, la orina empleadas en el uro cultiv o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que ser sembrado. SIEMBRA MASIVA Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la esptula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la esptula por toda la superficie del medio de cultivo slido imprimiendo un movimiento en espiral. La siembra masiva tambin se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo lquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar. VENTAJAS DE LA PROPAGACIN La propagacin vegetativa es una tcnica que Ha adquirido gran importancia en la multiplicacin y Conservacin de especies en peligro de extincin o Amenazadas, principalmente de especies arbreas Tropicales. Con la propagacin vegetativa se pretende: Valorar genticamente material vegetal, incluyendo Estudios de interaccin genotipo ambiente, Manifestaciones juveniles y maduras de una misma Caracterstica, etc. Preservar genotipos y complejos genticos en bancos
Clnales y arboretos. Acortar ciclos reproductivos para acelerar procesos De
cruzamiento y prueba. Conservar genotipos superiores que determinan caractersticas genticas favorables (resistencia a plagas y/o enfermedades, crecimiento, produccin, calidad de frutos, tolerancia a condiciones extremas de humedad sequa, etc.). Estas caractersticas se pueden perder por el cruzamiento gentico en la propagacin sexual. Ser ms eficiente cuando la reproduccin sexual no es el mtodo ms viable o eficaz. Propagar especies que sus semillas presentan problemas de germinacin o de almacenamiento o que son de ciclo reproductivo largo. Aprovechar las caractersticas genticas favorables de dos plantas en una sola planta. Manejar las diferentes fases del desarrollo de las plantas. Obtener plantaciones uniformes o la produccin de un determinado nmero de individuos con identidad gentica. Mantenimiento de genotipos superiores: La mayora de especies arbreas tropicales son de polinizacin abierta, lo cual significa que hay recombinacin de genes durante la reproduccin sexual, esta situacin puede repercutir en la siguiente generacin porque muchas caractersticas deseables no se expresaran; por tal razn, cuando se identifica un individuo con caractersticas superiores, la informacin gentica puede ser fi jada en la Prxima generacin mediante la propagacin vegetativa. Problemas de almacenamiento de semillas: Muchas especies de rboles tropicales producen semillas recalcitrantes que requieren procedimientos de manejo especial, a menudo complicados; otras producen escasos frutos, no los producen o simplemente no tienen semillas; de igual manera es comn en el trpico la condicin de embrin inmaduro de la semilla que limita la propagacin sexual de algunas especies; en estos casos, la propagacin vegetativa es una alternativa adecuada para la reproduccin de estas especies. Ciclo reproductivo corto: Aunque no es una norma general, la propagacin vegetativa puede acortar el ciclo vegetativo y acelerar la entrada del rbol o planta en la etapa reproductiva, esto es especialmente til cuando los productos deseados son flores, frutas o semillas. Combinacin de genotipos: La enjertacin es un mtodo de propagacin vegetativa que permite combinar las caractersticas deseables de dos o ms plantas en una sola. Pueden unirse yemas de un rbol con caractersticas deseables de fruto con las de un rbol (patrn) con otras caractersticas deseables, como resistencia a nematodos, sequa, enfermedades, etc. Otra posibilidad es injertar ms de una yema en el mismo tallo, por ejemplo para ampliar el perodo de produccin por injerto de variedades precoces y tardas en un solo rbol o la enjertacin de unas ramas polinizadoras en un rbol hembra. Manejo y control de las fases de desarrollo de la planta: Las plantas durante su ontogenia presentan diversas fases que pueden resumirse en etapa vegetativa y reproductiva, la primera asociada al crecimiento inicial y la segunda a la madurez. En plantas perennes despus de
llegar a la primera etapa reproductiva, se alterna la condicin vegetativa y
reproductiva, dependiente eso s de las condiciones ambientales. En general las plantas jvenes son vigorosas, tienen dominancia apical fuerte y se regeneran fcilmente por propagacin vegetativa. Las plantas maduras no son vigorosas, ramifican fuertemente debido a la prdida de dominancia apical por la diferenciacin de los meristemos apicales en reproductivos (inflorescencias y frutos) y no se regeneran fcilmente por la propagacin vegetativa. El grado de madurez tambin puede ser definido y mantenerse mediante la propagacin vegetativa de la planta madre. El mantener esta fase de desarrollo puede traer beneficios econmicos, como en los rboles frutales, que al injertarlos con yemas provenientes de un rbol maduro, florecen poco despus de ser injertados o en los rboles maderables que conservan su vigor DESVENTAJAS Una limitante de la propagacin vegetativa a tener en cuenta es la dispersin de enfermedades, especialmente bacteria les y virales. Una vez una planta se infecta con un virus a menudo a travs de los insectos chupadores como los filos o mediante el uso de herramientas, puede transmitirse rpidamente dentro del sistema de la planta. De tal manera que si se obtiene un esqueje (estaca, yema, etc.) ste tambin llevar consigo la enfermedad.