Qumica Analtica Instrumental

Gua de problemas N 8
METODOS ANALITICOS DE SEPARACION: INTRODUCCION A LOS METODOS CROMATOGRAFICOS
1. Los siguientes datos se aplican a una columna cromatografica de lquidos:
Longitud del empaquetado: 24.7 cm
Caudal: 0.313 ml/min
VM: 1.37 ml
VE: 0.164 ml
Un cromatograma de una mezcla de especies A,B,C y D da los siguientes datos:

No retenido
A
B
C
D

Tiempo de retencin (min)

3.1
5.4
13.3
14.1
21.6

Ancho de base de pico W, (min)

0.41
1.07
1.16
1.72

Calcular:
a) El numero de platos a partir de cada pico
b) El numero de platos en la columna
c) La altura de plato de la columna
d) El factor de capacidad para cada compuesto
e) El coeficiente de reparto para cada compuesto
2.- A partir de los datos del problema 1, calcular para las especies B y C
a) Resolucin
b) Factor de selectividad
c) La longitud y tiempo necesarios para separar las dos especies con una resolucin de 1.5
3.- La figura muestra el cromatograma de una mezcla de dos componentes en una columna
cromatogrfica de lquidos empaquetada, de 25 cm. La velocidad de flujo fue de 0.40 mL min-1.
a) Determina los factores de retencin para los dos componentes
b) Calcula la resolucin de los dos picos
c) Halla la altura media de plato
d) Qu longitud de la columna se necesitaria para alcanzar una resolucin de 1.75?
e) Supongamos que la longitud de la columna se ha fijado a 25 cm y que el material de
empaquetamiento est fijo. Qu medidas podra usted tomar a fin de incrementar la resolucin
para lograr la separacin en lnea base?
f) Hay alguna medida que usted pudiera usar para lograr una mejor separacin en menos tiempo
con la misma columna que en el apartado anterior?

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4.- Con Helio como gas portador y bajo una serie dada de condiciones, los trminos de la ecuacin
de Van Deemter fueron: A= 0.1 cm, B= 0.3 cm2/seg y C= 0.05 seg.
a) Graficar la ecuacin e indicar en el grafico la contribucin de cada termino
b) Calcular la altura de plato mnima de la columna y la velocidad optima del gas portador
5.- Las sustancias A y B tienen tiempos de retencin de 14.2 y 15.43 minutos, respectivamente, en
una columna de 30 cm. Una especie no retenida pasa a travs de la columna en 1.3 minutos. Los
anchos de pico en la base de A y B son 1.11 y 1.21 minutos, respectivamente. Calcular:
a) Resolucin de la columna
b) Numero medio de platos en la columna
c) Altura de plato
d) La longitud de la columna necesaria para obtener una resolucin de 1.5
e) El tiempo necesario para eluir la sustancia B en una columna ms larga

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Gua de problemas N 9
METODOS ANALITICOS DE SEPARACION: CROMATOGRAFIA GASEOSA
1.- El aldehdo cinmico es el compuesto del que depende el sabor de la canela. Tambin es un
antimicrobiano potente, que forma parte de ciertos aceites esenciales. La respuesta de la
cromatografa de gases (CG) con una muestra artificial que contiene seis componentes de aceites
esenciales y metilbenzoato como patrn interno se muestra en la siguiente figura:

La siguiente figura es una ampliacin de la regin cerca del pico del aldehdo cinmico.

Calcule:
a) el nmero de platos tericos para el compuesto de estudio.
b) La columna de slice fundida tiene 0.25 mm x 30 cm de dimetro y longitud de columna
respectivamente, y con un tamao de partcula de 0.25 m. Determina la altura de plato terico.
c) Se obtienen datos cuantitativos empleando metilbenzoato como patrn interno para los
compuestos aldehdo cinmico y timol tal y como se muestra en la siguiente tabla. Sabiendo que
los valores de rea relativas para cada compuesto se calculan dividiendo el rea del pico del
componente/rea del patrn interno, calcula: el rea relativa para los dos compuestos

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anteriormente mencionados, determine las ecuaciones de la curva de calibrado para cada

componente y a partir de los datos del apartado anterior determina qu componente tiene mayor
sensibilidad.

2.- Una columna cromatografica de 45.7 m de longitud es operada en condiciones tales que el
hexanoato de metilo presenta un factor de capacidad de 0.18 y el octanoato de metilo de 0.12
a) Determinar en qu grado se resuelven los picos de cada compuesto cuando el nmero de platos
tericos es de 40000
b) Calcular cuntos platos tericos se requieren para tener una resolucin Rs= 1.5
c) Qu altura equivalente de platos se obtiene?
d) Qu resolucin se obtiene si la longitud de la columna se duplica?
3.- Con un cromatografo gas-liquido con una columna de relleno de 40 cm se obtuvieron los
siguientes datos:
Compuesto
Aire
Metilciclohexano
Metilciclohexeno
Tolueno

Tiempo de retencin (min)

1.9
10.0
10.9
13.4

Ancho de base de pico, W (min)

0.76
0.82
1.06

Calcular:
a) El numero de platos promedio
b) La altura promedio de plato para la columna
c) La resolucin para:
iMetilciclohexeno y metilciclohexano
iiMetilciclohexeno y tolueno
iiiMetilciclohexano y tolueno
4.- Suponga que los tiempos de retencin sin ajustar de un cromatograma son: para aire 0.5 min,
n-octano 14.3 min, para un desconocido 15.7 min, y para n-nonano 18.5 min. Calcule el ndice de
Kovats para el compuesto desconocido.
5.- Los tiempos de retencin ajustados para los alcoholes etlico, n-propilico y n-butilico
empleando una columna de relleno recubierto de aceite de silicona son 0.69, 1.51 y 3.57
respectivamente. Predecir los tiempos de retencin para los dos miembros siguientes de la serie
homologa.

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6.- En la siguiente tabla se muestran las reas relativas de pico obtenidas para los picos de 5
esteroides separados por cromatografa gaseosa as como tambin las respuestas relativas del
detector a los 5 compuestos. Calcular el porcentaje de cada compuesto en la mezcla.
Compuesto
Dehidroepiandrosterona
Estradiol
Estrona
Testosterona
Estriol

rea relativa de pico

27.6
32.4
47.1
40.6
27.3

Respuesta relativa del detector

0.70
0.72
0.75
0.73
0.78

7.- Los factores de respuesta para el p-xileno y el tolueno(relativos al benceno, al cual se le asigna
el valor unitario) fueron 0.57 y 0.792 respectivamente. Calcular el porcentaje de cada componente
en dos muestras de tres solventes, cuyos cromatogramas arrojaron las siguientes alturas de picos
en mm:
Muestra
1
2

Benceno
98
85

p-xileno
87
35

Tolueno
86
42

Las mediciones se efectuaron en base a las alturas de los picos.

8.- Explicar qu efecto causara cada una de las siguientes variaciones en la altura de plato de una
columna:
a) Incremento de la cantidad relativa de fase estacionaria respecto del relleno de la columna
b) Disminucin de la velocidad de inyeccin de la muestra
c) Incremento de la temperatura de la cmara de inyeccin
d) Incremento de la velocidad de flujo
e) Reduccin del tamao de partcula del relleno
f) Disminucin de la temperatura de la columna.

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Gua de problemas N 10
METODOS ANALITICOS DE SEPARACION: CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION,
HPLC

1.- En una columna de fase inversa, la dopamina tiene un tr de 31.3 minutos, mientras que el
tiempo muerto, determinado con NaNO2 a 254 nm, es 0.48 minutos para una fase mvil
compuesta de 30%(en volumen) de metanol y 70% de agua. Calcular:
2.1- El factor de capacidad, k, y diga si este valor es apropiado para una determinacin
cromatografica de rutina.
2.2- Que porcentaje de metanol en la fase mvil se necesita si se desea hacer el anlisis en
menos de 8 minutos.
2.- La quercetina es un pigmento vegetal que tiene propiedades antihistamnicas y
antiinflamatorias. Se desea determinar este pigmento en un extracto natural, se conoce que es
insoluble en hexano y prcticamente insoluble en agua y soluble en acentonitrilo e isopropanol.
Adems, pKa(1)= 7.03 y pKa(2)= 9.15
a-) Sugiera que modo (normal o inverso) seria el mas apropiado para su determinacin por HPLC
b-) Se inyecto este soluto en una columna ODS de 15 x 0.46 cm, empleando 30% de acetonitrilo y
70% de agua como fase mvil; y no se observo elusin del soluto. Sugiera que pudo haber
ocurrido.
c-) A qu valor de pH se debera haber trabajado en la fase mvil para lograr una retencin
aceptable del pigmento?

Quercetina
3.- La fuerza del solvente, , indica la habilidad de la fase mvil para eluir productos de una
columna. Diferentes mezclas de solventes orgnicos con agua pueden tener la misma fuerza para
eluir un soluto dado. Aproximadamente la fuerza del solvente se puede calcular como:
= A A + B B , donde A y B son los solventes en la fase mvil y es la fraccin volumtrica del
solvente. En la siguiente tabla de solventes orgnicos miscibles con agua, se muestran los valores
de para HPLC de fase reversa y sus respectivos puntos de corte al UV.
Solvente
Metanol
Acetonitrilo
Acetona
Dioxano
Etanol
2-propanol
Tetrahidrofurano

3.0
3.1
3.4
3.5
3.6
4.2
4.4

Punto de corte (nm)

205
190
330
215
210
205
212

a-) Qu mezcla producir valores de kmenores: una de 30% tetrahidrofurano: agua o una de 40%
metanol: agua?

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b-) Si una separacin se realizo con una fase mvil 20% acetonitrilo: agua pero de los 5
componentes quedaron 2 sin separarse completamente, qu cambios en la fase mvil podra
hacer para aumentar la resolucin sin cambiar la fuerza del eluyente?
c-) Que inconveniente tiene el empleo de acetona en la fase mvil si se desea efectuar el anlisis
de surfactantes no inicos (esteres no aromticos) empleando un detector UV-VIS?
5.- Una mezcla de fenil metil cetona, nitrobenceno, benceno y metil benceno se separa en una
columna C18 con una fase mvil metanol: agua 60:40. En estas condiciones la cetona eluye
primero.
a- En qu orden eluyen los otros solutos?
b- Cmo se puede cambiar la composicin de la fase mvil para cambiar el tiempo de retencin de
los solutos?
c- Cmo se afectara el tiempo de retencin de los solutos si se usa una columna ligada con grupos
fenilos en lugar de C18?
6.- Una mezcla conocida de los compuestos C y D produce los siguientes resultados en HPLC:
Compuesto

Concentracin (mg.mL-1)
en la mezcla

rea del pico (cm2)

1.03

10.86

1.16

4.37

Se prepara una solucin mezclando 12.49 mg de D ms 10,00 mL de un problema que slo contiene
C y se diluye a 25,00 mL. La reas de los picos son de 5.97 y 6.38 cm2 para C y D respectivamente.
Hallar la concentracin de C (mg.mL-1) en el problema.
7.- Las siguientes aseveraciones se refieren a los distintos modos de HPLC. Indique si las mismas
son verdadera (V) o falsas (F).
a- En cromatografa de adsorcin la fase mvil es no polar.
b- Molculas polares pueden ser fcilmente separadas por cromatografa de adsorcin.
c-El tiempo de retencin de los solutos en cromatografa de exclusin puede ser alterado cambiando
la polaridad de la fase mvil.
d- La exclusin molecular se usa slo para separar molculas grandes.
e- En cromatografa reversa la fase mvil es ms polar que la fase estacionaria.

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