UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE

DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

M.SC PRISCILA SANTANA PEREIRA

Introduo a Virologia
Marinha: Caractersticas
e Importncia Ambiental

A Vida surge de outra vida....

Koch Organismo vivo pode
causar doenas.

VRUS NO
ERAM
CONHECIDOS!

Fonte: Raoult & Forterre, 2008

1898
Vrus foram
descobertos
(filtro de
0,22m,
porcelana.

1937
Criao do
Microscpio
eletrnico

1946
1915
Bacterifago Primeiro
Vrus
(Vaccinia)
Marinho

Os vrus no eram considerados seres

vivos, mas sim biomolculas ou
partculas proteinadas ( 0,2 m) que
no fazem diviso binria, no so
autnomas e possuem cido nucleico
(elemento infeccioso).
Lwoff, 1957

O que so vrus?
Vrus = Veneno, latim;
So nicos na natureza;
Estrutura celular convertidas em maquinrio (Beijerink);
Vrus so capazes de se adaptar a mudanas ambientais;
Viso mais difundida Vrus NO so entidades vivas;

Como so constitudos os vrus???

ICTV: CIDO NUCLEICO, ESTRUTURA VIRAL, ESTRATGIA

DE REPLICAO E SEQUENCIA NUCLEOTDICA.
73 famlias 9 subfamlias
287 gneros 1950 espcies virais

Classificao dos vrus

Classificao dos vrus

1940
Descoberta dos
vrus marinhos
(1946)

1970
Divulgada a
hiptese da ala
microbiana (1974)

Desenvolvimento
de mtodo de
contagem direta de
micro-organismos
marinhos (1976)

1980
Primeiro fago
marinho cultivado
(1980)

Partculas virais
encontradas em alta
abundncia na gua
do mar (1986)

1990

2000

Hipotetizada a
contribuio viral
para os ciclos
biogeoqumicos
(1990)

Primeiro genoma Inicia-se os estudos

viral marinho
do virioplanckton
sequenciado (2002)
no Brasil - UFF
(2010)
Genes da
fotossntese
Descoberta do
Desenvolvimento
encontrados em
Samba Virus no rio
do mtodo de
cianfagos (2003)
da floresta
contagem viral com
Amaznica (2011)
SYBR Green
Descoberta de vrus
(1998)
gigantes
Determinao da
possuidores do
presena de vrus
maior genoma,
marinhos em
Megavirus chilensis
Arraial do Cabo,
(2003)
Bzios e Baa de
Guanabara/RJ
(2014)
Vrus so descritos
como as entidades
biolgicas mais
abundantes dos
oceanos - 1030
(2005)
Virosfera marinha
global explorada
(2006)

2010

1974- Descrita a importncia dos virus na ecologia marinha;

1986 - (107-108 particulas/mL na superfcie dgua);

Estudos dos vrus

satlites - Sputnicks
e Mavirus (2009)

Fonte: Arslan, D. et al., 2011, Forest Rohwer & Rebecca Vega Thurber - Nature 459, 207-212 (14 May 2009) - adapted

Seus tamanhos podem variar de 20 m at 750 m.

Maior abundncia (108 109 partculas virais/ml) na

superfcie e 1030 partculas virais/ml nos oceanos.

Oceanos:

Cobrem 70% da Terra

Abrigam 90% da biomassa de microrganismos

Viriosfera: lise de 20% - 40% dessa biomassa/dia maior

reserva de diversidade gentica da Terra.

Vasta distribuio

Qual a importncia da comunidade viral?

Controle da abundncia de
Procariontes e Eucariontes
Distribuio e biodiversidade
de espcies
Mediar transferncia de genes

Grande parte do fluxo total de

matria e energia da cadeia
alimentar marinha atravs dos
vrus se torna MOD
Agentes patognicos????
NOVA PERSPECTIVA
VIRAL!!!!

Ciclagem de nutrientes
Fonte: Furhman, 1999; Wilhem & Suttle, 1999; Thingstand, 2000; Brussard, et. al, 2008; Breitbart, 2012.

Shunt viral

MOP(viva)
MOD

Dissulfeto (DMS)
Ferro
Mineralizao do N em NH4
CO2

MOP(morta)
Bomba Biolgica

A quantidade e a composio de material que liberado atravs da lise viral afeta a

comunidade microbiana e os ciclos biogeoqumicos.
(Shelfford et al, 2012)

Altera:
a estrutura e diversidade das comunidades fitoplanctnicas e produo da
matria orgnica
da estrutura de populaes e comunidades hetertrofas marinhas
Bloom Algas

Exportao de C e nutrientes maior em

relao ao afluxo de novos nutrientes

 Ciclo do Carbono
- C: decisivo para a quantificao de nutrientes e de fluxo de energia
- MOD: reciclado atravs da comunidade microbiana (ala microbiana)
- MOP: transferido para nvel trfico dos herbvoros

Fonte: Wilhelm & Suttle, 1999

A lise celular mediada por vrus intensifica um desvio do carbono de MOP

para MOD

This model is a revision of the steady-state model of Jumars et al. (1989)

 Nitrognio e Fsforo
- Disponibilidade de N e P: regula produo primria.
- Lise viral: liberao de cidos nucleicos e aminocidos
Fonte de nutriente para bactrias partir de produtos de lise de fitoplncton

Elementos-trao : Ferro
- Limitao do crescimento do fitoplncton.
- Gobler et al. (1997): Estudo examinou a liberao de elementos-trao por lise viral em
A.anophagefferens.
Liberao de ferro dissolvido durante a lise viral, seguido de uma rpida transferncia de
ferro para a fase de partculas, como resultado de uma rpida assimilao por bactrias
heterotrficas
A lise de plncton marinho por vrus provavelmente fornece uma rota direta pela qual o
ferro organicamente complexado liberado de volta para a comunidade microbiana.
Fonte: Wilhelm & Suttle, 1999

Source: Clokie et. al., 2011, adapted; ICTV - EC 45, Edinburgh, July 2013/Email ratification 2014

Famlia:
Alloherpesviridae (Peixes) Diversos :
Batrachovirus
Cyprinivirus
Ictalurivirus
Salmonivirus

Sub famlia:
Alphaherpesvirinae Gnero Scutavirus
(Tartarugas)

Ambiente

Ecossistema

Vrus

Bactria

Referncia

0.2x106

Bergh (1989)

0.7x105 a 1.5x105

Helda & Gunnar

(1991)
Heldal &
Gunnar(1991)

Dulccola

Raunefjorde,
9.9x106
Noruega
Raunefjorde,
1.1x107 a 3.5x107
Noruega
Golfo do Mxico,
28.3x107
EUA
Golfo de Bothnia,
1.7-5.2x107
Sucia
Baa deTampa ,
0.2x108
Florida, EUA
Lago Donghu,
5.8x108 a 1.9x109
China
Lago Constance,
10-40x106
Alemanha
Lagos de Quebec,
41-250x106
Canada
Lagos da Antartica
4.2-33.5x106

Marinho

Mar Mediterrneo

5-30x106

Dulccola

Lago Erie, EUA

0.3-3.7x108

1.8-4.6x106

Marinho
Dulccola
Marinho
Marinho
Marinho
Marinho
Dulccola
Dulccola

Dulccola
Dulccola
Marinho
Dulccola
Dulccola
Marinho

Lago Skarlen,
1.2x107 a 2.4x107
Sua
Diama Dam, frica
1.5x107
Baa de
1.1x106
Chesapeake, EUA
Lago Druzhby,
1.6-15.6x108
Leste da Antartica
Lago Batata,
0.2-1.7x107
Oriximin, Brasil
Mar de Sargasso,
6-12x109
Atlntico Norte

3.5106
0.56x10

Cochlan (1993)
7

8.3x106 a 5.1x107
0.02-14x106
4.3x14x106

Jiang & Paul (1995)

Hennes (1995)
Hennes & Simon
(1995)
Maranger & Bird
(1995)
Kepner (1998)
Guixa-Boixereu
(1999)
Wilhelm & Smith
(2000)

0.2x106 a 1.1x106

Ansio (2004)

1.1x106

Bettarel (2006)

3.2x105

Liu (2006)

1-2.4x108

Swastrow (2007)

1-3.4x106

Barros (2010)

3.5-6.5x108

Parsons (2012)

Abundncia de vrus
(partculas.mL-1)
e
bactrias (clula.mL-1)
em diversos ambientes
aquticos.

NUCLEO-CYTOPLASMA

1. Vrus liga a receptores na

clula.
2.Migrao do core do DNA
para o ncleo
3.Replicao do genoma .

4.Sntese de protenas
precoces.
5. Sntese das protenas tardias
e montagem de novos virions
no citoplasma

Phycodnaviridae
Caractersticas do genoma
DNA dupla fita

250.000-350.000 nucleotideos
G+C 40-52%
Simetria: Icosadrica

Gneros:
Chlorovirus
Coccolithovirus
Prasinovirus
Prymnesiovirus
Phaevirus
Raphidovirus

 Emiliania huxleyi cocolitforo + abundante

Capaz de formar floraes com extenso at 10.000 km2.

O vrus pertence ao gnero Coccolithovirus.

Genoma completo sequenciado 407.339 pb codificar 472 seqncias
codificantes de protenas (cds).

o maior Phycodnavirus sequenciado at o momento (wilson et al., 2005b).

Famlia Herpesviridae
1. Herpesvrus Salmonis (Herpesvrus disease of Salmonidis)
HPV-1 Comum em trutas
Sintomas: Exoftalmia
Abdmen aumentado
Edema

HPV-2 : Trutas arco Iris

Salmo prateado
Salmo kokanee
Salmo masou
Salmo chum
Sintomas: letargia
perda de apetite
escurecimento da pele
pigmentao sanguinolenta
*
Animais desenvolvem cncer de pele, barbatanas e maxilar

Channel Catfish Virus (Herpesvrus de bagre)

Caractersticas: Persistncia na gua a 25C /2dias e 28dias a 4C

Comum em recm nato e Larvas de peixe Vero /Temp. H2O=22-30C
Sintomas: Diminuio no apetite
Distrbios na locomoo
Hiperatividade
Letargia
Exoftalmia
Esplenomegalia
Pontos hemorrgicos na pele e nos rins
Mec. Transmisso: Contato direto: peixe peixe (Horizontal)
Via gua contaminada
Vertical: Ovos ou smen
Preveno e Controle:

Reduo do stress ambiental (poluio)

Reduo da temperatura da gua
Quarentena para animais novos

Diagnstico laboratorial: Isolamento em Cultivo de clulas de ovrio de peixe

Famlia

Nome

Hospedeiro

Transmisso

Sintomas

Preveno

Herpesviridae

Epiteliom
a
papillossu
m (fish
pox)

Carpa chinesa
gua gelada

Peixe-peixe
gua contaminada

Verrugas
brancas/cinzas/rosas

Orthomyxoviri
dae

Isavrus
Anemia
do salmo

Linguado, Salmo,
truta

Horizontal

Rhabdoviridae

Septicemi
a
hemorrgi
ca

Carpa
Ciprindeos
Bacalhau
Salmo
ardinha

Horizontal (peixepeixe)
Vertical (Ovos)
Parenteral
(Parasitos
sanguneos)

Distrbios na locomoo
Exoftalmia
Hemorragia
Esplenomegalia

Iridoviridae

Vrus da
Necrose
Hematop
oitica
Epizootic
a

Salmo
Linguado
Truta
Garoupa

Horizontal (peixepeixe)
Vertical???

Distrbios na locomoo
Letargia
Exoftalmia e hemorragia
Esplenomegalia
Cianose

Vrus da
necrose
infecciosa

Trutas, Linguado,
salmo

Peixe-peixe
Vertical?

Exoftalmia e hemorragia
Esplenomegalia
Pancreatite

Birnaviridae

Famlia Parvoviridae
Gnero Brevidensovirus.
Doena: Hepatopancreatic parvovirus disease.
Hospedeiro - Penaeid shrimp. (Camaro)

Mec. Transmisso- Contato direto: Horizontal

gua contaminada
Vertical

Diagnstico Laboratorial PCR , ME ,Imunohistoquimica.

http://homepage.ntu.edu.tw/~daaseven/doc
/Tim/VIRAL1-Taipei%2008-color.pdf

- Famlia

: Nimaviridae

- Gnero : Whispovirus

- Espcie: White spot Sndrome baculovrus complex

Genoma: DNA dupla fita

Ampla faixa de hospedeiros

Extremamente virulento: 100%mortalidade

Transmisso
Horizontal: gua contaminada

Vertical
No infecta humanos
No tem tratamento

Famlia Myoviridae

Famlia siphoviridae

Famlia Podoviridae

Hospedeiros
Enterobactrias
Micobacterium

Hospedeiros
Enterobactrias
Pseudomonas

Salmonelas
Vibries
Estafilococo
Estreptococo

SIDERASTREA STELLATA

Fonte: Disponvel em IUCN http://www.iucnredlist.org. Acesso em 07/01/2014. Cites II; Santos et al., 2004; Hetzel & Castro, 1994; Leo
et al., 1985. Foto: Santana-Pereira, P. 2014.

Genoma ssRNA +

Famlia Leviviridae
Hospedeiros
Enterobactrias;
Pseudomonas;
Acinetobacter

Famlia Microviridae

Famlia Inovoridae
Hospedeiros
Enterobactrias
Pseudomonas
Vibrio
Xanthomonas

Hospedeiros
Clamydias
Enterobactrias

Genoma ssDNA

Genoma ssDNA

 Revoluo darwiniana
Revoluo gentica
Proposta de diagnosticar o parentesco dos seres
vivos (organismos celulares) pela anlise de
sequncias do rnar (16S) para a construo da
rvore filogentica universal.
Criao dos domnios archaea, eubactria e
eukarya (woese, et al, 1990)

Qual o domnio dos vrus?

Fonte: Raoult & Forterre, 2008)

DESAFIO PARA A DEFINIO

DE VRUS ENTIDADES
VIVAS!

So parasitas intracelulares obrigatrios

Infectam organismos de todos os 3 domnios.

Podem at mesmo parasitar outros vrus (Coinfeco)

Representao da nova proposta rvore
filogentica Universal:
Organismos que conseguem codificar
capsdeos inclusos nos trs domnios da vida
que se desenvolveram a partir de um ancestral
universal comum.
Organismos que conseguem codificar
ribossomos nos trs domnios com ribossomos
e sem capsdeos.
Outros elementos infecciosos no so mostrados.

Megavirus chilensis (2003)

Descoberto na Costa do
Acanthamoeba polyphaga.

Chile

infectando

Possui 680nm de tamanho e 1,25 milhes de

pares de base codificando 1120 protenas.

O genoma do M. chilensis se assemelha ao do Mimivrus, incluindo a

presena de genes celulares, mas 258 protenas do Megavirus no so
encontradas nos Mimivrus. Estas observaes sugerem que Megavirus
e Mimivrus surgiram a partir de um ancestral comum celular - um que
poderia realizar a sntese de protenas - e perdeu os genes que no
eram mais necessrios.
Por isso h uma grande necessidade do isolamento de outros vrus
gigantes DNA

SAMBA VRUS (SMBV) - 2011

- Biodiversidade Amaznia brasileira.
- Poucos estudos.
- Coleta: outubro de 2011 Rio Negro.

Samba Vrus: maior e primeiro Mimivirus do Brasil

SAMBA VRUS (SMBV)

SMBV particle visualized by transmission electronic microscopy

Possuem mais genes que muitas

bactrias e desempenham funes
que, normalmente, ocorrem
somente em organismos celulares.

Detail of the star-gate structure (visualized by electronic microscopy),

which is also present in APMV.

Vrus Cafeteria roenbergensis

Genoma DNA 730.000 pb

Hospedeiro
Bactria Cafeteria roenbergensis

Micro organismo unicelular predador:

1. Bactrias
2. Outros microorganismos no oceano

Sputnik (Vrus Satlite)

Realiza uma co-infeco em Acanthamoebas. Sputnik

aproveita as protenas do Mamavirus ou Mimivirus
para produzir rapidamente novas cpias de si mesmo.
Ele contm genes capazes de infectar todos os trs
domnios da vida:. Eukarya, Archaea e Bacteria.
uma das mais convincentes evidncias de mistura
de genes.
Estudos sobre evoluo viral sugerem que a
transferncia de genes entre os Mimivrus e Sputnik
ocorre durante a infeco de Acanthamoeba.
Portanto, provvel que o virifago controla a
transferncia lateral de genes entre vrus gigantes.

Vrus "gigante" pode mudar a rvore da vida

- Descoberta de dois novos vrus desafiam viso do no-vivo.
- Grus
- H 10 anos atrs:
Mimivirus: 1.18 milhes de bases continham 900 genes putativos
SUPOSIO

Mimivirus descende de uma clula de vida livre, que foi gradualmente

perdendo a maior parte de seus e outros genes at se tornar um parasita.
Seu precursor: ramo desconhecido, anterior aos 3 domnios.

Pennisi, E. Science, Vol 341,19. JUL 2013

A procura de vrus com genoma

maiores uma maneira de voltar
no tempo e encontrar um
postulado ancestral.
Pandoravirus
- Aparentou ser bactria
- Vrus: Incapacidade de produzir
protena por conta prpria .

Faltam genes para produo da protena da capsdeo e alguns

genes-chave.
Uma nova famlia para si mesmos.
Science, Vol 341,19. JUL 2013

TRUC:
Things Resisting Uncomplete Classification
Virus
gigantes

Micrbios
eucariontes

TRUC

Bactrias

Fonte: Raoult, 2013 Science, Vol 341, 19

Archea

METODOLOGIAS DE ANLISE

Anlise
quantitativa

Anlise
qualitativa
determinando
morfologia,
estrutura e
tamanho

Anlise
molecular:
PCR, PCR-Q,
Sequenciamen
to

Caracterizao especfica das partculas virais

METODOLOGIAS PRELIMINARES

Ultrafiltrao
Concentrao

Floculao
VFF
TFF

DETERMINAO DA ABUNDNCIA

M. EPIFLUORESCNCIA
Fluorocromos:

CITOMETRIA
Medio robusta

Syber Green 1, 2

Quantitativa

YO Pro

Complexidade estrutural

Laranja de Acridina
DAPI

Tamanho da partcula

MICROSCOPIA ELETRNICA DE TRANSMISSO

AVALIAR:
Estrutura
Tamanho

Uniforidade
Quantificao (-)

ANLISE MOLECULAR

PCR
PCR-Q
RT-PCR

SEQUENCIAMENTO
Determinao de
sequncias alvo

Mutiplex

Anlise de similaridade

Nested

Anlise de caractersticas
especficas

...

Comparaes
Determinao sp.

ANLISES

METAGENMICA

PURIFICAO POR
ULTRACENTRIFUGAO

MICROSCOPIA DE FORA
ATMICA

CULTIVO EX SITU

ELISA

SHOTGUN

PERSPECTIVAS NA VIROLOGIA
MARINHA
PRODUTOS NATURAIS COM ATIVIDADES BIOLGICA
CARREADORES DE NANOPARTCULAS
ESTMULADORES DA EXPRESSO GNICA
INDUTORES
BIORREMEDIAO

INTERVENO EM PROCESSOS BIOLGICOS

A descoberta do Pandoravirus e Mimivirus torna

cada vez mais claro que os domnios da vida so
um conceito arcaico. Essa descoberta faz com que
os vrus sejam mantidos no seu lugar de direito na
histria da evoluo da vida.
Curtis Suttle, University of British Columbia, Vacounver.

Falkowski, P. G. The Oceanss Invisible Forest. Marine phytoplankton play a critical role in regulating the earths climate.
Could they also be usedto combat global warming?. SCIENTIFIC AMERICAN. AUGUST 2002.
Danovaro, R. et al. Marineviruses and global climate change. FEMS Microbiol Rev. 142. 2010.
Campos, R.K. et al. Samba virus - A novel mimivirus from a giant rain forest, the Brazilian Amazon. Virology Journal. 2014.
Pennisi, E.Ever-bigger viruses shake tree of life. Science, Vol 341.19. JUL 2013.

Serronha, A.M., Loureno, J. & Vera Sobral, V. Vrus Marinhos e seus efeitos Ecolgicos e Biogeoqumicos Universidade de
vora - Virologia Biologia. 2004/2005
Wilhelm,S.W., Suttle, C.A.Viruses and Nutrient Cycles in the Sea - Viruses play critical roles in the structure and function of
aquatic food webs. BioScience Vol. 49 No. 10. 1999.

Lwoff, A. 1957. J. The Concept of Virus . Gen. Microbiol. 17:239253.

Raoult,D and Forterre, P. Redefining viruses: lessons from Mimivirus. Nature Reviews Microbiology 6, 315-319 (April 2008).
La Scola,B., Audic, S ., Robert,C., Jungang,L., Lamballerie,X., Drancourt, M., Birtles, R., Claverie, J.M., Raoult, D. 2003.
Science. 299:2033.

Arslan et al. 2011. Distant Mimivirus relative with a larger genome highlights the fundamental features of Megaviridae.
PNAS. vol. 108 | no. 42.
Suttle, 2005. Nature 437:356-361.
Suttle, 2007. Marine viruses Major players in the global ecosystem, Nature Publishing Group, October 2007

OBRIGADA!!!
psantanabio@gmail.com