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1 Crecimiento de
poblaciones
Captulo 5. Crecimiento Microbiano
5.2 Curva de
crecimiento
CAPITULO
Crecimiento
microbiano 5.5 Cultivo continuo:
Quimiostato
5.6 Efectos
ambientales sobre
el crecimiento
microbiano
5.7 Control del
crecimiento
microbiano
5.8 Control fsico del
crecimiento
microbiano
5.9 Control qumico
del crecimiento
microbiano
5.10 Referencias
bibliogrficas
Figura 5.5 Procedimiento para contar clulas viables utilizando diluciones de la muestra.
Figura 5.6 Turbidez: determinacin de la masa microbiana por la medida de absorcin de luz.
5.5 Cultivo continuo: Quimiostato
Cultivo continuo es un sistema abierto, con volumen constante al que se aade
continuamente medio fresco y del que se retira continuamente medio con clulas a una
velocidad constante. Una vez que se alcanza el equilibrio en el sistema, el nmero de clulas y
el estado metablico permanecen constantes y se dice entonces que el sistema est en equilibrio
(Figura 5.7).
El aparato ms comn que se utiliza para obtener un cultivo continuo es el quimiostato,
que controla la densidad de la poblacin celular y la velocidad de crecimiento del cultivo de
modo independiente. En el quimostato se puede obtener cualquier velocidad de crecimiento
deseada simplemente variando la velocidad de dilucin y anlogamente la densidad de
poblacin puede definirse variando la concentracin de un nutriente conocido como factor
limitante. Si se eleva la concentracin de este nutriente en el medio entrante, manteniendo la
velocidad de dilucin, la densidad celular aumentar.
Tubo con la
Detector
Lmpara
suspensin
bacteriana
y la presin de vapor del agua pura a la misma temperatura. Los valores de a w varan entre
0 y 1 (actividad de agua de terrenos agrcolas: 0,90 a 1; Streptococus y Escherichia en
sangre: 0,995; Pseudomonas y Vibrio en agua de mar : 0,980; Penicillum en pastel : 0,800;
Halococcus en pescado salado : 0,750).
El agua difunde desde una regin con alta concentracin (baja concentracin de
solutos) hasta una regin con menor concentracin de agua (mayor concentracin de
solutos) per el proceso denominado smosis. En la mayora de los casos el citoplasma tiene
una concentracin de solutos mayor que el medio, por lo que el agua tiende a entrar en la
clula, dicindose entonces que existe un balance de agua positivo; sin embargo, cuando una
clula est en un medio con baja actividad de agua, existe una tendencia del agua a salir de la
clula.
El agua de mar contiene aproximadamente 3 % de cloruro de sodio adems de
pequeas cantidades de minerales y elementos. Los microorganismos marinos tienen una
dependencia del ion sodio, adems de tener un crecimiento ptimo al valor de actividad de
agua propio del agua de mar. Tales microorganismos se llaman halfilos discretos y
halfilos moderados, con requerimientos bajos (1- 6 %) y moderado (6-15 %) de NaCl
respectivamente.
La mayora de microorganismos son incapaces de existir en ambientes con actividad
de agua muy baja y mueren, o se deshidratan y pasan a un estado de latencia en tales
circunstancias. Los organismos halotolerantes (Staphylococcus aureus) pueden soportar
alguna reduccin en el valor de aw del medio, pero generalmente crecen mejor en ausencia de
solutos aadidos. Por el contrario, algunos organismos se desarrollan con muy baja actividad
de agua, y stos son de gran inters desde el punto de vista aplicado en la industria
alimentaria, donde solutos como la sal y sacarosa se emplean frecuentemente como
conservantes para inhibir el crecimiento microbiano. Los organismos capaces de crecer en
ambientes muy salinos se llaman halfilos extremos (Halobacterium salinarium) y segn la
especie requieren 15 a 30 % de NaCl para su crecimiento ptimo. Los organismos capaces
de crecer con alta concentracin de azcares se denominan osmfilos y aquellos que pueden
crecer en ambientes muy seos se llaman xerfilos.
d. Oxgeno
Los microorganismos son muy variados en cuanto a la necesidad o tolerancia al
oxgeno. Los aerobios (Micrococcus luteus) son especies capaces de crecer a tensiones de
oxgeno normales (21 % del aire es oxgeno). Los microaeroflicos, (Spirillum volutans)
son aerobios que pueden usar el oxgeno, slo cuando est presente en niveles ms bajos
que en el aire. Muchos aerobios son facultativos (Escherichia coli), lo que significa que en
condiciones nutritivas y de cultivo apropiadas pueden crecer tanto en condiciones aerobias
como anaerobias.
Algunos microorganismos no pueden respirar oxgeno y se les llama anaerobios,
distinguindose dos clases: los anaerobios aerotolorenates (Streptococcus pyogenes), que
crecen
en su presencia aunque no pueden usarlo y los anaerobios estrictos
(Methanobacterium formicium) que son inhibidos o incluso mueren en su presencia.
Para conocer cules son los requerimientos de oxgeno de un microorganismo en
laboratorio, se aade a un medio caldo de tioglicolato un agente reductor tioglicolato,
capaz de reaccionar con el oxgeno y reducirlo (agua). Despus que el tioglicolato reacciona
con el oxgeno a lo largo del tubo, el oxgeno atmosfrico slo puede penetrar en la parte
superior donde el medio contacta con el aire. Los aerobios estrictos crecern slo en la
parte superior del tubo, los facultativos crecern en todo el tubo, pero con preferencia en la
parte superior. Los microaeroflicos lo harn cerca del extremo superior, pero no en la
superficie del tubo y los anaerobios crecern fundamentalmente cerca del fondo del tubo,
donde el oxgeno no penetra
(Figura 5.8). Es frecuente aadir al medio un colorante
indicador redox como la resarzurina, que cambia de color en presencia de oxgeno y por lo
tanto seala el grado de penetracin del oxgeno en el medio de cultivo.
Aerobio estricto
Facultativo
Aerotoloerante
anaerobio
Anaerobio
estricto
Microaerfilo
b. Pasteurizacin
La pasteurizacin es un proceso que reduce la poblacin microbiana en leche y otros
alimentos sensibles al calor. Impide la transmisin de patgenos como algunas especies de
Salmonella y Escherichia coli 0157:H7 a travs de fuentes comunes como leche y zumos. La
pasteurizacin tambin impide el crecimiento de organismos alterantes e incrementa
considerablemente la vida media de los lquidos perecederos. La pasteurizacin de la leche se
realiza a 71 C durante 15 segundos, seguida de un enfriamiento rpido (pasteurizacin alta).
Tambin se puede realizar a 63-66 C durante 30 minutos (pasteurizacin baja), aunque el
proceso es menos satisfactorio porque la leche debe mantenerse a temperaturas altas por largos
perodos de tiempo.
d. Filtracin
La esterilizacin por filtracin consiste en la eliminacin de microorganismos vivos en
muestras lquidas. Los filtros de membrana se utilizan generalmente para esterilizar volmenes
pequeos de muestras termosensibles en el laboratorio.
5.9 Control qumico del crecimiento microbiano
Un agente antimicrobiano es un compuesto qumico, natural o sinttico, que mata o inhibe el
crecimiento de los microorganismos. Los agentes que matan se denominan agentescida, con
un prefijo que indica el tipo de microorganismo que mata. As tenemos, agentes bactericidas,
fungicidas y viricidas. Un agente bactericida mata bateras, aunque puede matar o no otros
microorganismos. Los agentes que no matan pero inhiben el crecimiento se denominan agentesestticos, as se habla de agentes bacteriostticos, fungistticos y virustticos.
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Los antispticos son aquellos agentes qumicos que matan o inhiben el crecimiento de los
microorganismos y pueden aplicarse en tejidos vivos dada su escasa toxicidad .La mayora de
los compuestos que se encuentran en esta categora se utilizan en el lavado de manos para tratar
heridas superficiales. Los desinfectantes son productos qumicos que matan microorganismos y
se usan en objetos inanimados. Los agentes esterilizantes son desinfectantes que en
condiciones apropiadas, matan todos los tipos de vida microbiana, y se usan para esterilizar
objetos inanimados y superficies. Los desinfectantes qumicos frecuentemente denominados
microbicidas tienen una gran aplicacin en los casos en donde no se puede usar calor o
radiacin.
La esterilizacin fra se lleva a cabo en dispositivos cerrados parecidos a los autoclaves, pero
emplean un agente qumico como el xido de etileno, formaldehido, cido per-actico o
perxido de hidrgeno. El agua se desinfecta con leja o con derivados de cloro, a fin de
eliminar los organismos potencialmente patgenos.
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