MICROBIOLOGIA

ALEJANDRO PARI CH.

CARACTERSTICAS DEL MATERIAL GENTICO PROCARITICO,

EUCARITICO

El material gentico de los microorganismos est

compuesto por cidos nucleicos (ADN y ARN).
Cromosomas: Las bacterias y arqueas contienen
normalmente cromosomas cerrados, esto es, sin
extremos. El nmero de cromosomas es variable,
desde un nico cromosoma (Escherichia coli) a
varios. Se consideran cromosomas a aqullas
molculas de ADN que portan informacin gentica
imprescindible para que la bacteria pueda crecer y
multiplicarse.

 En cualquier caso, los procariontes son organismos

haploides porque slo tienen una copia de cada
uno de los cromosomas. En su ciclo biolgico
tampoco hay fases diploides.
Los cromosomas procariticos parecen tener un
nico origen de replicacin, a diferencia de los
eucariticos que tienen varios.

PLSMIDOS:
Las bacterias pueden contener plsmidos que son
molculas de ADN cerrado o abierto, con un nico
origen de replicacin, portadores de informacin
prescindible (pero necesaria para llevar a cabo
ciertas funciones metablicas, de produccin de
compuestos o de resistencia a antibiticos) cuyo
nmero es variable (plsmidos de bajo nmero de
copias con 1 2 por clula y plsmidos de alto
nmero de copias con decenas o centenas por
clula).

CPSULA
Por fuera de la pared, algunas bacterias presentan
una capa de polisacridos o de protenas que
puede ser gruesa o delgada, rgida o flexible, que es
una cubierta continua formada por un gel
hidroflico. Cuando la estructura es firme y tiene
bordes definidos, se habla de cpsula.
Esta est organizada en una matriz muy compacta
que excluye las partculas como las de tinta china

 La cpsula es un determinante de patogenicidad

para la bacteria ya que le da resistencia a la fagocitosis y a la lisis intracelular y le permite la adherencia a las mucosas del husped.
Tal es su importancia en la virulencia que se ha
visto que bacterias que pierden su cpsula se
vuelven avirulentas o no patgenas.

Cuando la estructura es amorfa y de bordes poco definidos e

irregulares se habla de glicoclix

LAS ESPORAS DE PROCARIONTES

Diversas bacterias Gram positivas pueden formar
una estructura latente, de especial resistencia,
denominada endospora.
Las endosporas se desarrollan dentro de clulas
bacterianas vegetativas de tan slo algunos gneros
como: Bacillus y Clostridium (bacilos), Sporosarcina
(cocos).

 Dichos microorganismos sufren un ciclo

de diferenciacin en respuesta a
condiciones ambientales: el proceso,
denominado
esporulacin,
es
desencadenado por el casi agotamiento
de
varios
nutrientes
(carbono,
nitrgeno o fsforo).

 Cada clula forma una espora interna nica

que es liberada cuando la clula madre sufre
autlisis. La espora es una clula en reposo,
muy resistente a la desecacin, al calor y a
los compuestos qumicos; cuando se
encuentra en condiciones nutricionales
favorables, se activa la espora, germina
para producir una clula vegetativa.

ESPORULACIN
El proceso de esporulacin inicia cuando las
condiciones nutricionales se tornan poco
favorables, hay casi agotamiento de las fuentes de
nitrgeno o de carbono (o ambas), lo que
constituye los factores ms significativos.
La esporulacin ocurre masivamente en cultivos
que han terminado su crecimiento exponencial
como consecuencia del casi agotamiento de los
nutrientes.

 La formacin de endosporas, esporognesis o esporulacin,

comienza normalmente cuando cesa el crecimiento debido
a una falta de nutrientes. Se trata de un proceso complejo y
puede dividirse en varias fases.
Primero se forma un filamento axial de material nuclear
(fase I).
Seguido de un plegamiento interno de la membrane celular
para englobar una de las hebras de DNA, formndose el
septo de la prespora (fase II).
La membrana contina creciendo y engloba a la endospora
inmadura con una segunda membrana (fase III).
A continuacin, se elabora el crtex en el espacio situado
entre las dos membranas, donde se acumulan tanto calcio
como cido dipicolnico (fase IV).
Despus, se forman las cubiertas de protenas (fase V)
Madura la endospora (fase VI).
Finalmente, las enzimas lticas destruyen el esporangio
liberando la endospora (fase VII).

FUNCIONES DE NUTRICIN EN LAS

BACTERIAS
La mayor parte de las bacterias son hetertrofas y deben
tomar el alimento orgnico sintetizado por otros
organismos. La obtencin del alimento la hacen por
diversos caminos:
Las bacterias de vida libre suelen ser saprfitas, viven
sobre materia orgnica muerta.
Muchas viven en relacin estrecha con otros
organismos. De ellas, la mayora son comensales y no
causan daos ni aportan beneficios a su husped;
algunas son parsitas (producen enfermedades) y otras
son simbiontes (establecen relaciones con otros
organimos con beneficio mutuo).

Otras bacterias son auttrofas y utilizan compuestos

inorgnicos para su nutricin:
Las auttrofas fotosintticas, como las bacterias
sulfurosas verdes y purpreas. No utilizan agua
como dador de electrones en la fotosntesis, sino
otros compuestos, como el sulfuro de hidrgeno, y
por lo tanto no producen oxgeno. Al poseer
pigmentos que absorben luz casi infrarroja, pueden
realizar la fotosntesis prcticamente sin luz visible.
Las auttrofas quimiosintticas, a diferencia de las
fotosintticas, utilizan la energa que desprenden
ciertos compuestos inorgnicos al oxidarse.

 Independientemente del tipo de nutricin,

las bacterias pueden necesitar el oxgeno
atmosfrico (bacterias aerobias) o no
(bacterias anaerobias).
Para algunas bactrias anaerobias el oxgeno
es un gas venenoso (anaerobias estrictas),
otras lo utilizan cuando est presente,
aunque pueden vivir sin l (anaerobias
facultativas).

CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS

Descripcin de las bacterias.

A la descripcin de las bacterias pertenece
la indicacin de sus caracteristicas
morfologicas, esto es, si se trata de un
coco, un bacilo, o un espirilo, si presenta
capsulas, si las celulas estan aisladas u
ordenadas en grupos (filamentos,
tetradas, paquetes), si disponen de
flagelos y como se insertan, si forman
endosporas, y si las celulas se tien con la
tincion de Gram.

La descripcion se completa citando las caractersticas

metabolico-fisiologicas mas importates. Hay que
indicar:
1. Las relaciones respecto al oxigeno, esto es, si las
ceIulas pueden crecer bajo condiciones
aerobicas, anaerobicas o ambas.
2. Si la obtencin de energia se realiza por
respiracin, fermentacin o por fotosfntesis.
3. La dependencia del crecimiento frente al pH, con
valores ptimos y limites de tolerancia.
4. nutrientes utilizables.
5. Habitat.

 6. Relaciones simbioticas o parasitarias.

7. Inclusiones celulares, pigmentacion y sustancias
capsulares.
8. Composicion de los componentes de la pared
celular (estructura del glucopeptido, Iiposacaridos,
acidos teicoicos);
9. Diferenciacion serologica (antigenos de
superficie, proteinas homologas).
10. Composicion de bases del DNA (mol % de GC);
11. Hibridaciones DNA-DNA, posibilidad de
transfomacion en transferencias interespecificas.
12. secuencia del RNAr 16S o del 5S;
13 sensibilidad frente a los antibioticos.

LA CLASIFICACIN, NOMENCLATURA E
IDENTIFICACIN
Constituyen
tres
reas
distintas
pero
interrelacionadas de la taxonoma bacteriana.
La clasificacin se basa en catalogar a los
organismos dentro de grupos taxonmicos.
Para la clasificacin de las bacterias se necesitan
tcnicas
tanto
experimentales
como
de
observacin; la razn es que a menudo se
requieren las propiedades bioqumicas, fisiolgicas,
genticas
y
morfolgicas
para
describir
correctamente a un taxn.

 La nomenclatura se refiere al nombre asignado a

un organismo segn las reglas internacionales
(establecidas por un grupo reconocido de
profesionales ) segn sus caractersticas.
El trmino identificacin se refiere a la aplicacin
prctica de un esquema de clasificacin para:
1) aislar y distinguir a los organismos convenientes
de los perjudiciales.
2) verificar la autenticidad o propiedades especiales
de un cultivo en un contexto clnico.
3) aislar e identificar al organismo causal de una
enfermedad.

LAS CATEGORAS TAXONMICAS

Estas forman la base para organizar a las bacterias.
La taxonoma linneana o de Linneo es el sistema
que mejor conocen los bilogos.
Utiliza las categoras taxonmicas formales (en
orden) reino, tipo, clase, orden, familia, gnero y
especie.
Las categoras inferiores son aprobadas por un
consenso de expertos en la comunidad cientfica.
De estas categoras, la familia, gnero y especie
son las ms tiles

CRITERIOS PARA CLASIFICAR

A LAS BACTERIAS

CRECIMIENTO EN MEDIOS DE
CULTIVO
El cultivo general de la mayor parte de las
bacterias requiere un medio con abundantes
nutrientes metablicos. Estos medios por lo
general comprenden agar, una fuente de
carbono, y un hidrolizado cido o una fuente
de
material
biolgico
sometida
a
degradacin enzimtica (p. ej., casena).
Se denominan medios complejos.

1. Medios no selectivos
El agar sangre y agar chocolate constituyen
ejemplos de medios complejos no selectivos que
facilitan el crecimiento de diversas bacterias.
Los medios no selectivos son importantes para
aislar bacterias desconocidas en una muestra.
Por lo general se observan muchos tipos de
colonias bacterianas cuando las muestras clnicas
se inoculan en un medio no selectivo.

2. Medios selectivos
El fundamento de los medios
selectivos es la incorporacin de
una sustancia que inhibe de
manera selectiva el crecimiento
de las bacterias irrelevantes.

Algunos ejemplos de estas sustancias

son:
Azida de sodio: selecciona bacterias grampositivas
entre las gramnegativas.
Sales biliares (p. ej., desoxicolato sdico):
selecciona bacterias intestinales gramnegativas e
inhibe a las bacterias gramnegativas de la mucosa y
a la mayor parte de las grampositivas
Colistina y cido nalidxico: inhiben el crecimiento
de numerosas bacterias gramnegativas

 Dos ejemplos de medios selectivos

son el agar MacConkey (contiene
bilis),
que
selecciona
Enterobacteriaceae y el agar sangre
CNA (contiene colistina y cido
nalidxico)
que
selecciona
estafilococos y estreptococos.

3. Medios diferenciales
Al cultivarse, algunas bacterias producen
pigmentos caractersticos y otras se distinguen con
base en su complemento de enzimas
extracelulares; la actividad de estas enzimas se
identifica al observar zonas claras alrededor de las
colonias cultivadas en presencia de sustratos
insolubles (p. ej., zonas de hemlisis en un agar
que contiene eritrocitos).

 Por ejemplo, las cepas patgenas de Salmonella y

Shigella no fermentan lactosa y en el agar
MacConkey forman colonias transparentes,
mientras que los miembros de Enterobacteriaceae
que fermentan lactosa(p. ej., E. coli) forman
colonias rojas o rosas.

MICROSCOPIA BACTERIANA
Desde el punto de vista histrico, la tincin de
Gram, aunada a la visualizacin a travs del
microscopio ptico, es uno de los mtodos ms
informativos para clasificar a las bacterias.
Esta tcnica de tincin por lo general constituye el
primer paso para dividir en trminos generales a las
bacterias con base en una serie de diferencias
fundamentales en la estructura de sus paredes
celulares.

PRUEBAS BIOQUMICAS
La prueba de la oxidasa, se emplean para
diferenciar a los microorganismos con base en la
presencia o ausencia de una enzima respiratoria, el
citocromo C, cuya ausencia diferencia a las
Enterobacteriaceae de otros bacilos gramnegativos.
La actividad de la catalasa, por ejemplo, para
diferenciar entre los cocos grampositivos.
Tambin se puede utilizar la sensibilidad
antimicrobiana (p. ej., colistina y/o cido
nalidxico).

 Por ltimo, existen numerosos ejemplos

de pruebas bioqumicas que permiten
buscar ciertas funciones metablicas
caractersticas y utilizarlas para agrupar
a las bacterias en un taxn especfico.

PRUEBAS INMUNOLGICAS:
SEROTIPOS, SEROGRUPOS Y
SEROVARIEDADES

La designacin sero simplemente indica el uso de

anticuerpos (policlonales o monoclonales) que
reaccionan con estructuras especficas de la superfi
cie celular bacteriana como los lipopolisacridos
(LPS), los flagelos o los antgenos capsulares.
Los
trminos
serotipo,
serogrupo
y
serovariedad, para fines prcticos, son idnticos;
todos ellos utilizan la especificidad de estos
anticuerpos para subdividir a las cepas de una
especie bacteriana.

INESTABILIDAD GENTICA
Los avances en la biologa molecular permiten
ahora investigar la relacin de genes o genomas
comparando secuencias de diversas bacterias. Para
estos casos, la inestabilidad gentica hace que
ciertos rasgos sean muy variables dentro de un
grupo biolgico o incluso dentro de un grupo
taxonmico.

 Por ejemplo, los genes que confieren

resistencia antimicrobiana o los genes
que codifican enzimas (utilizacin de
lactosa, etc.), se transportan en
plsmidos o bacterifagos), elementos
genticos extracromosomales que
pueden ser transferidos entre bacterias
distintas o que pueden ser integrados
en un subgrupo de cepas bacterianas
que son idnticas en los dems
sentidos.

SISTEMAS DE CLASIFICACIN

Clasificaciones artificiales
Las primeras clasificaciones bacterianas se
basan en la ordenacin con fines prcticos
de las diferentes especies creadas por la
agrupacin de cepas caracterizadas por su
igualdad o semejanza de algunas
caractersticas bsicas:

 Propiedades visibles. forma, color, tamao, tincin,

movilidad, presencia de cpsula y morfologa de las
colonias.
Caractersticas metablicas
Formacin de productos qumicos caractersticos
Nutricin
Presencia de macromolculas artificiales (
antgenos )
Relaciones ecolgicas: produccin de
enfermedades, parasitismo...

Clasificacin numrica
Consiste en determinar un gran nmero de
caractersticas independientes, 100 a 120, de todas
las cepas en estudio y se establece por
comparacin de los datos obtenidos un coeficiente
de semejanza que en el caso de dos cepas idnticas
ser del 100 %. Gracias a los ordenadores esta
tcnica se ha simplificado mucho y con ella se han
confirmado la mayora de las especies consideradas
como tales por los mtodos clsicos.

 La taxonoma numrica (tambin llamada fentica o

taxomtrica) se populariz durante el decenio de 1970.
Estos esquemas de clasifi cacin utilizan un gran
nmero (a menudo mayor de 100) de caractersticas no
ponderadas tiles desde el punto de vista taxonmico.
El Analytical Profile Index (API) es un mtodo que se
utiliza a menudo para identificar un espectro amplio de
microorganismos. El API consta de varias tiras de
plstico, cada una de las cuales tiene 20
compartimientos miniatura que contienen reactivos
bioqumicos. Los resultados de las pruebas con el API
permiten identificar a casi todos los grupos de bacterias
que se pueden cultivar y a ms de 550 especies. Estos
sistemas de identificacin cuentan con bases de datos
extensas de reacciones bioqumicas microbianas.

 La limitante de este mtodo es que es un sistema

esttico que no toma en cuenta la evolucin de las
bacterias ni el descubrimiento sistemtico de
bacterias patgenas nuevas.

Claves
Las claves organizan los rasgos bacterianos
de una manera que permite la identificacin
eficaz de los organismos. El sistema ideal
debe contener el nmero mnimo de
caractersticas
necesarias
para
una
clasificacin correcta. Los grupos se dividen
en subgrupos ms pequeos con base en la
presencia (+) o ausencia () de una
caracterstica diagnstica.

TAXONOMIA
Taxonoma: (taxis = orden, rango). Es la rama de la
biologa que se ocupa de la clasificacin de los
seres vivos.

 El GNERO est formado por un grupo de especies

relacionadas .Un grupo de gneros estrechamente
relacionados constituyen una FAMILIA.
Las categoras taxonmicas superiores se definen
de igual manera y son las siguientes: ORDEN,
CLASE, DIVISIN Y REINO.
En ocasiones existen subclasificaciones de estas
categoras taxonmicas bsicas como por ej
subfamilia suborden.

 En taxonoma bacteriana, cuando se da nombre a

una nueva especie, una cepa concreta se designa
como cepa tipo. Las cepas tipo se conservan en
colecciones de cultivos y es importante con fines
de nomenclatura, ya que el nombre especfico va
ligado a ella.

 En la ordenacin taxonmica las distintas especies

se van agrupando sucesivamente en una serie de
categoras de orden superior gnero, familia,
orden, clase y divisin ( phylum). Esta es la
llamada ordenacin jerrquica porque cada
categora, en la serie descendente, agrupa un
nmero cada vez mayor de unidades taxonmicas,
basndose en un nmero cada vez menor de
propiedades compartidas.

Categoras taxonmicas

Reino
Divisin
Clase
Orden
Familia
Gnero
Especie

Procaryotae
Gracillicutes
Scotobacteria
Spirochaetales
Leptospiraceae
Leptospira
Leptospira interrogans

Clasificaciones con base gentica

La primera utilizada tiene en cuenta la proporcin
de bases nitrogenadas del ADN cromosmico
bacteriano: G-C y A-T. Si dos especies bacterianas
difieren en su contenido G+C en ms de un 10 % no
pueden considerarse afines.
Ms adecuado para precisar pequeas diferencias
de unas especies bacterianas a otras, es el mtodo
de hibridacin molecular. Este mtodo permite
establecer el grado de homologa en la secuencia
de bases del ADN y los datos obtenidos se
emplearon en la clasificacin adoptada en la ltima
edicin (1984) del Manual de Bergey .

Manual de Bergey de bacteriologa

sistemtica
La obra defi nitiva sobre la organizacin taxonmica
de las bacterias es la ltima edicin del Bergeys
Manual of Systematic Bacteriology. Fue publicado
por primera vez en 1923 y esta publicacin clasifica
desde el punto de vista taxonmico a las bacterias
conocidas que han sido o no cultivadas o bien
descritas, en forma de una clave.
Otro volumen, el Bergeys Manual of Determinative
Bacteriology, ayuda a identifi car a las bacterias que
han sido descritas y cultivadas

 El Bergeys Manual of Systematic Bacteriology es

un tratado que se ocupa de la clasificacin,
taxonoma e identificacin de las bacterias. Se
divide en cuatro volmenes y las bacterias se
distribuyen en secciones. Las distintas secciones se
han constituido sobre la base de caracteres
descriptivos morfolgicos y metablicos, por
ejemplo: espiroquetas, cocos y bacilos aerobios
gramnegativos, cocos grampositivos etc.

 Las bacterias est situadas en el Manual Bergey en

el reino Procaryotae, en el que se reconocen cuatro
divisiones: Gracillicutes (procariotas con pared
celular gramnegativa), Firmicutes (procariotas con
pared grampositiva), Tenericutes (sin pared celular)
y Mendosicutes (procariotas filogenticamente
anteriores a las divisiones anteriores, como las
Arquebacterias y otras)