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ello sea posible, una investigacin de especies individuales, por ejemplo Pseudomona
aeruginosa.
En la Tabla adjunta se recoge, a modo de ejemplo, un listado de las actividades laborales y los
parmetros de medicin a examinar.
ACTIVIDAD
LABORAL
Bacterias
IGL: Bacterias;
Plantas de tratamiento
de aguas residuales
IGR:
Eliminacin de residuos
Bacterias
Gram
(+),
Biotecnologa
I-tongos,
IGR:
Ventas
al
mayor/almacenes
Industria forestal
Produccin de alimentos
Manipuladores
Cuidado de la salud
Fuete: http://www.ehu.es/documents/2458096/2577739/apendice_03.pdf
El estudio de los posibles indicadores propuestos para la evaluacin de los riesgos asociados a
agentes biolgicos implicar, como paso previo, una toma de muestra de los mismos bien
para su determinacin directa como bioaerosoles, bien como contaminantes superficiales o
para la medida cuantitativa de productos, componentes o metabolitos de los agentes
biolgicos cuya concentracin sea representativa de la carga biolgica global a valorar.
Se pueden tomar por lo tanto tres opciones para la medida de agentes
biolgicos:
A pesar de estas limitaciones consideramos de gran utilidad este tipo de estudios ya que,
adems de dar informacin sobre la naturaleza de los agentes biolgicos (Anexo II), posibilitan
el estudio de situaciones especficas o la comparacin de stas, por ejemplo antes y despus de
la aparicin de quejas o patologas, comparacin de dos sistemas de limpieza, efectividad de un
desinfectante, repercusin de un cambio en el proceso productivo, repercusin de factores
fsicos, identificacin de focos de contaminacin, etc
2.
MTODOS PARA EL MUESTREO DE AGENTES BIOLGICOS
CULTIVABLES Y/O TOTALES
Estn proyectados para determinar la fuente, cantidad e identificacin de agentes biolgicos
transmitidos fundamentalmente por va area
Estn basados en la toma, recuperacin y subsiguiente cultivo de microorganismos. Estos
mtodos pueden ser clasificados de acuerdo con el procedimiento de toma de muestra o el
manejo de la muestra tomada, e incluyen: gravitacin, impactacin, centrifugacin, burbujeo y
filtracin.
2.1 Gravitacin o impactacin natural
Es la forma ms simple de toma de muestra de bioaerosoles, en la cual las partculas biolgicas
aerotransportadas son recogidas sobre una superficie adherente (agar en una placa Petri o
recubriendo un portaobjetos, placas RODAC,) por su capacidad de sedimentar por gravedad.
Es un mtodo econmico, que no necesita equipos auxiliares, si bien ha de tenerse especial
cuidado en donde se colocan dichas placas para evitar corrientes de aire. Las partculas de
mayor tamao pueden estar sobrerepresentadas. Este mtodo no es cuantitativo, es decir, la
muestra no se toma a partir de un volumen conocido de aire, por lo que las pruebas de
intercomparacin son dificultosas. Es un procedimiento til para estudios iniciales y para la
estimacin aproximada de la carga microbiolgica tanto desde el punto de vista cuantitativo
como cualitativo, si se eligen adecuadamente los medios de cultivo
2.2 Impactacin:
El aire, aspirado por una bomba de vaco que forma parte del muestreador, pasa a travs
de un orificio y es dirigido a la superficie del medio de cultivo contenido en una placa
adecuada. Las partculas con suficiente momento de inercia abandonan la corriente e impactan
sobre la superficie. El orificio de entrada puede consistir en una rendija o en un cabezal con un
elevado nmero de orificios de igual dimetro y el medio de recogida puede ser agar sobre una
placa Petri, RODAC o un portaobjetos El caudal de aspiracin vara en el rango de 10 a 180
L/min
Una vez tomada la muestra, y segn sea la naturaleza de los agentes biolgicos a
determinar, la placa se incuba a la temperatura adecuada, producindose el crecimiento
de dichos agentes mediante la formacin de una colonia en el punto de impacto.
Posteriormente se procede al recuento de dichas colonias y al clculo de su nmero referido a
3
un volumen fijo de aire de 1m , a partir de las colonias encontradas en el volumen de aire
3
muestreado, expresndose los resultados habitualmente como ufc/m (unidades formadoras de
colonias en un metro cbico de aire).
2.3. Centrifugacin:
Estos muestreadores de impactacin utilizan la fuerza centrfuga para ayudar a la separacin de
las partculas de la corriente de aire de aspiracin. Operan creando un remolino en el cual las
partculas con suficiente inercia dejan la corriente de aire para impactar sobre la superficie
(medio de cultivo) de recogida.
En el RCS Biotest se recoge el aire contra una tira de plstico que soporta una fina capa del
medio agar en el cual impactan las partculas aerotransportadas.
Opera a un flujo de 40 L/min.
Todos los mtodos descritos hasta ahora slo dan informacin de los agentes biolgicos
cultivables, es decir, con capacidad de reproducirse.
En un entorno laboral se est potencialmente sujeto a la exposicin a microorganismos
(cultivables, viables, no viables, que pueden producir tambin riesgos txicos o alergnicos;
formas de supervivencia, como esporas), sus componentes biolgicamente activos o productos
derivados de dichos microorganismos. Interesa por lo tanto la posibilidad de utilizar mtodos
de muestreo ms generales que permitan obtener una informacin ms amplia.
Entre estos mtodos que permiten la medida de agentes biolgicos totales destacan los de
burbujeo o impinger y de filtracin.
2.4 Burbujeo o impinger:
El aire a muestrear pasa a travs de un volumen conocido de lquido (suero salino, agua de
peptona con agentes humectantes, medios lquidos). Las partculas abandonan la corriente de
aire por impactacin en el lquido, quedando retenidas en el mismo. Posteriormente, y en el
medio de cultivo adecuado, se transfiere una alcuota del lquido de captacin, procedindose a
su cultivo, recuento y en su caso a su identificacin (viables o cultivables) (1).
A otra alcuota se adiciona naranja de acridina y se filtra, procedindose al recuento total
(viable y no viable) por microscopa de epifluorescencia directamente sobre el filtro.
La mayora de los muestreadores estn construidos en vidrio, con una cmara simple de
coleccin; por ejemplo, el AGI-30 opera a 12.5L/min. Y el Mini-impinger a 1L/min.
2.5 Filtracin:
El aire es aspirado a travs de un medio de filtracin en el cual las partculas se
depositan.
Su flujo es funcin del tipo de filtro, su tamao y de la bomba de aspiracin, oscilando
habitualmente entre 1-500L/min. El tipo de filtro ms utilizado es el de membrana de
policarbonato ya que las partculas pueden ser removidas fcilmente de su superficie por
agitacin en lquidos adecuados, procedindose a la posterior inoculacin de la suspensin
formada en los medios de cultivos especficos (2).
Un procedimiento similar es aplicable a la cuantificacin e identificacin de agentes biolgicos
presentes en muestras de polvo. Un peso conocido del mismo se extrae adecuadamente
por agitacin vigorosa con suero salino conteniendo 0.01% de Tween 80. Posteriormente se
inocula un volumen conocido en medios de cultivos especficos, procedindose a su posterior
recuento, expresado como ufc/g, y, en su caso, identificacin.
3.
MUESTREO DE SUPERFICIES
Adems del muestreo areo, puede tambin determinarse el nmero de agentes biolgicos
depositados en una superficie. Este tipo de muestreo es utilizado fundamentalmente en estudios
de higiene alimentaria, pero tiene otras aplicaciones como, por ejemplo, comprobar la eficacia
de los productos de desinfeccin o evaluar la presencia de agentes biolgicos en el interior de
los conductos de aire de un sistema de ventilacin/climatizacin, industria de la piel y cuero.
La toma de muestras se hace fundamentalmente mediante el empleo de torundas o por contacto
directo de la superficie a muestrear con una placa RODAC preparada con el medio de cultivo
adecuado y su posterior incubacin e identificacin, en su caso.
4.
MTODOS QUE PONEN DE MANIFIESTO LA PRESENCIA DE
ELEMENTOS CELULARES
Estos mtodos dan cuenta de elementos celulares de microorganismos tanto viables como no
viables o desintegrados, constituyentes de su estructura celular que pueden menoscabar
la salud del personal expuesto.
Entre estos elementos celulares cabe destacar las endotoxinas, glucanos y ergosterol.
4.1 Endotoxinas:
Son polisacridos termoestables de alto peso molecular (LPS), formados por un componente
lipdico caracterstico, lpido A, unido covalentemente a un polisacrido. Las endotoxinas son
componentes integrales de la membrana exterior de las bacterias Gramnegativas. La presencia
de endotoxinas se relaciona con la posibilidad de reacciones txicas, procesos inflamatorios
muy intensos, fiebre, bronquitis. Desde el punto de vista de enfermedades relacionadas con el
trabajo slo las endotoxinas aerotransportadas son relevantes. Se producen en el manejo de
material orgnico. Los materiales contaminados por bacterias y las heces de animales son las
fuentes principales de polvo que contribuir a la liberacin de endotoxinas.
La agricultura y las industrias relacionadas proporcionan las fuentes de exposicin profesional
ms habituales: granjas de cerdos, pollos, vacas y caballos; industrias del algodn;
procesado de la patata, caa azucarera, cerveza; mataderos de aves; tratamiento de aguas
residuales, basuras y compostaje; sistema de humidificacin de aire de edificios y procesos
industriales con reciclaje de agua; emulsiones formadas en los fluidos de corte en metalurgia,
El anlisis de los niveles de ATP en las muestras es rpido e indicativo del metabolismo
de la actividad microbiana. Existe una relacin entre los niveles de ATP y el nmero de
agentes microbianos, por lo que este mtodo (8) es a menudo utilizado junto con el muestreo
de superficies en la investigacin de todos los problemas de higiene relacionados con la
industria alimentaria.
5.6 Micotoxinas:
Son metabolitos secundarios de bajo peso molecular de origen fngico, producidos en
condiciones especiales de crecimiento en cosechas almacenadas y alimentos. Algunas
micotoxinas pueden causar efectos sistmicos en especial en el hgado y el sistema nervioso.
Entre las micotoxinas ms importantes destacan:
Aflatoxinas, producidas por Aspergillus flavus y A. parasiticus
Ocratoxina A, producida por Penicillium verrucosum y Aspergillus alutaceus (A.
ochraceus).
Tricoticenos y Fuminosinas, producidas por Fusarium spp
Se ha demostrado que las aflatoxinas y otras micotoxinas, por ejemplo, el cido Dsecalnico,
pueden aerotransportarse en elevadas concentraciones en determinadas tareas como en el
procesamiento de cacahuetes, pistacho y maz causando efectos txicos y carcinognicos.
Los mtodos analticos para su determinacin utilizan bien tcnicas cromatogrficas (9) o bien
lneas celulares para ensayar su citotoxicidad (10).
En las tablas adjuntas se propone un esquema para la eleccin de mtodo de muestreo as como
un estudio comparativo de caractersticas, ventajas e inconvenientes de los mtodos de
muestreo ambiental ms comunes.
1: Frotis
8: Filtracin alto caudal (5500 L/min)
2: Placas de contacto
9: Impinger multietapas (55 L/min)
3: Colocacin de placas abiertas
10: Impactador en cascada, 6 etapas, Andersen
4: Filtracin a bajo caudal (1-2 11: RCS, muestreador centrfugo (40 L/min)
5: Mini-impinger (1 L/m)
12: SAS, impactacin directa (90 L/min)
6: Impactador en cascada MAY (10 13: Muestreador Casella de rendija (30-700
7: Impinger (12.5 L/min)
14: Impactador Andersen monoetapa (28.5
Algunos muestreadores se denominan por sus nombres comerciales slo para ayudar a su
identificacin, sin que esto suponga su recomendacin, o que no existan otros de anlogas
prestaciones.
TABLA: MUESTREO AMBIENTAL PARA AGENTES BIOLGICOS
MTOD
O
DE
MUEST
*IMPACTACIN
SOBRE
LQUIDO (AGI)
PROCES
O
VELOCI
DAD Y
TIEMPO
DE
BURBUJEO
DEL AIRE A 12,5/30
TRAVS
DE
UN
MEDIO
VENTAJAS
INCONVENIE
NTES
*
ADECUADO *
PARA
GRAN DISPERSIN
VARIEDAD DE
DE ESPORAS
MICROORGAN
IMOS
*IMPACTACIN
SOBRE
AGAR
(ANDERSEN)
*IMPACTA
CIN EN
*IMPACT
ADOR
CENTRF
UGO
*FILTRACIN
EN MEMBRANA
RECOGIDA
DEL AIRE A
TRAVS
28/1-5
DE ORIFICIOS
DE
RECOGIDA
DEL AIRE A 90/0,5-3
TRAVS
DE
RECOGIDA
40/0,5
DEL AIRE EN
TIRAS
DE
RECOGIDA
1-2/15-60
DEL AIRE EN
FILTROS
PLACAS DE
*SEDIMENTACI AGAR
?
N
EN PLACAS ABIERTAS
COLOCADAS
*
SEPARACIN
POR TAMAO
*
POCA
MANEJABILIDA
D
*
*
ESCASA
MANEJABILIDAD EFICIENCIA
-------------------
MICROORGANI
SMOS TOTALES
*
EFICIENCIA
DESCONOCIDA
*
DESECACIN
DE
MICROORGANI
*
FCIL
DE *
DATOS
UTILIZAR
NO
ECONMICO
COMPARABLES
6.
6.1 CLASIFICACIN DEL DAO: Para la clasificacin del dao que puede causar cada
agente biolgico, se ha considerado el nmero de das de baja que supondra padecer la
enfermedad, as como la posibilidad o no de que sta deje secuelas, siguiendo un tratamiento
adecuado.
SECUELAS
DAO
PUNTUACIN
Con secuelas
I.T. mayor de 30 das
4
Fallecimiento
5
1
Directa
1
Area
3
La puntuacin final se obtiene sumando las cifras correspondientes a las diferentes vas de
transmisin que presenta cada agente biolgico, en el supuesto de que tenga ms de una va. A
la va de transmisin area se le ha asignado una puntuacin mayor, por resultar mucho ms
fcil el contagio.
A continuacin se definen las tres posibles vas de transmisin, segn el manual para el
control de las enfermedades transmisibles de la OMS:
Transmisin directa. Transferencia directa e inmediata de agentes infecciosos a una puerta de
entrada receptiva por donde se producir la infeccin del ser humano o del animal. Ello puede
ocurrir por contacto directo como al tocar, morder, besar o tener relaciones sexuales, o por
proyeccin directa, por diseminacin de gotitas en las conjuntivas o en las membranas mucosas
de los ojos, la nariz o la boca, al estornudar, toser, escupir, cantar o hablar. Generalmente la
diseminacin de las gotas se circunscribe a un radio de un metro o menos.
Transmisin indirecta. Puede efectuarse de las siguientes formas:
Mediante vehculos de transmisin (fmites): Objetos o materiales contaminadoscomo
juguetes, ropa sucia, utensilios de cocina, instrumentos quirrgicos o apsitos, agua, alimentos,
productos biolgicos inclusive sangre, tejidos u rganos. El agente puede o no haberse
multiplicado o desarrollado en el vehculo antes de ser transmitido.
Pormedio de un vector: De modo mecnico (traslado simple de un microorganismo por medio
de un insecto por contaminacin de sus patas o trompa) o biolgico (cuando se efecta en el
artrpodo la multiplicacin o desarrollo cclico del microorganismo antes de que se pueda
transmitir la forma infectante al ser humano).
Transmisin area: Es la diseminacin de aerosoles microbianos transportados hacia una va
de entrada adecuada, por lo regular la inhalatoria. Estos aerosoles microbianos estn
constituidos por partculas que pueden permanecer en el aire suspendido largos periodos de
tiempo. Las partculas, de 1 a 5 micras, penetran fcilmente en los alvolos pulmonares. No se
considera transmisin area el conjunto de gotitas y otras partculas que se depositan
rpidamente.
6.3 TASA DE INCIDENCIA DEL AO ANTERIOR: La tasa de incidencia de una
enfermedad es un dato de gran relevancia para decidir qu microorganismo debe o no incluirse
en el listado propuesto en el presente manual, as como para poder valorar correctamente el
riesgo de sufrir contagio la poblacin laboral a estudio, en el desarrollo de su actividad.
Por tales motivos es conveniente conocer la tasa de incidencia de las distintas enfermedades en
un periodo de tiempo determinado. En el presente caso se toma siempre el ao anterior,
calculndose segn la siguiente expresin
1
-9
2
10
- 99
3
100
- 999
4
1000
5
PORCENTAJE
PUNTUACIN
Raramente: < 20 % del tiempo
1
Ocasionalmente: 20 - 40 % del tiempo
2
Frecuentemente: 41 - 60 % del tiempo
3
Muy frecuentemente: 61 - 80 % del tiempo
4
Habitualmente > 80 % del tiempo
5
7.
MEDIDAS HIGINICAS ADOPTADAS
Para evaluar la influencia de las medidas higinicas se ha elaborado un formulario especfico
que recoge 40 apartados. Para cumplimentarlo, deber realizarse previamente un trabajo de
campo, investigando los aspectos recogidos en l por el mtodo observacional directo y
recabando informacin de los trabajadores evaluados, as como de sus supervisores. Igualmente
la persona que evale debe decidir qu apartados no son aplicables al puesto o seccin
estudiada.
Al formulario de las ediciones anteriores se han aadido 3 cuestiones referentes a la
disponibilidad y uso de equipos de bioseguridad para ser utilizados ante la exposicin a agentes
biolgicos de transmisin parenteral.
Para la comprobacin de la eficacia de estas cuestiones se tomaron los resultados obtenidos en
la evaluacin del puesto de AUXILIAR DE QUIRFANO, dentro del SECTOR
HOSPITALARIO, uno de los ms implicados y sensibles en lo que concierne a medidas de
bioseguridad.
Una vez realizada la evaluacin, primeramente sin tener en cuenta las tres nuevas variables de
bioseguridad en el listado de medidas higinicas y en segundo lugar, considerando las tres
variables en cuestin, el test t de Student para datos apareados, con un nivel de significacin de
0,05 y 17 grados de libertad, revel que las diferencias observadas son estadsticamente
significativas (t = 2.65; p = 0.0185):
Estas diferencias las aportan principalmente, aquellos microorganismos que se transmiten por
va parenteral, es decir, virus de la Hepatitis B, virus de la Hepatitis C y otros virus hepticos, y
virus VIH, sobre los que las tres nuevas variables de bioseguridad incluidas en la tabla de
medidas higinicas tienen una influencia favorable en la reduccin del riesgo biolgico (RB).
Cabe sealar tambin que, segn la informacin aportada, tendran una influencia del mismo
orden de magnitud que los anteriores, las diferencias aportadas por el Mycobacterium
tuberculosis y la Neisseria meningtidis, aunque su va de transmisin preferente es la area
El formulario en cuestin es el siguiente
MEDIDA
S
NO
NO APLICABLE
1
0
Dispone de Epis
1
0
Uso de Epis
1
0
Se dispone de aseos
1
0
Se dispone de duchas
1
0
Se prohbe fumar
1
0
trabajo
MEDIDA
S
NO
NO APLICABLE
1
0
* La Directiva 201/32/UE del Consejo de 10 de mayo, que aplica el acuerdo marco para la
prevencin de las lesiones causadas por instrumentos cortantes y punzantes en el sector
hospitalario y sanitario, obliga al empresario a que los equipos de trabajo cortopunzantes estn
equipados con dispositivos de bioseguridad.
Tcnica de Prevencin 875 y que son los siguientes:
a) Fase 1: Define tres criterios indispensables que deben reunir los dispositivos de bioseguridad:
Criterio 1: El mecanismo de seguridad debe estar integrado en el equipo cortopunzante, no
siendo nunca un accesorio aadido.
Criterio 2: El mecanismo de seguridad ha de ser irreversible, no se podr desactivar.
Criterio 3: El mecanismo de seguridad debe manifestar su correcta activacin al usuario
mediante una seal sonora o visual.
Si incumple uno de estos tres criterios, ser considerado NO ACEPTABLE
Una vez obtenida esta puntuacin, se restar al valor estimado de los parmetros sobre los que
influira la adopcin de estas medidas, que son: dao y va de transmisin de cada agente
biolgico, con lo cual estaremos reduciendo el riesgo en funcin de las medidas higinicas
aplicadas en cada caso. No obstante, por definicin metodolgica, el valor mnimo de esta
diferencia ha de ser 1 mayor que 1 en todos los casos determinados, no admitindose nunca
valores de 0 o negativos.
CONCLUSIONES
Se ha estudiado los diferentes mtodos de evaluacin de riesgos biolgicos en los
distintos lugares de trabajo
Se hall un nivel de accin biolgica (12) y un lmite de exposicin biolgico (17) para
personas que estn sujetas a este tipo de ambiente laboral
9.
RECOMENDACIONES
Incrementar el tiempo de dedicacin para esta catedra, ya que esta materia es de gran
ayuda para la vida profesional de y personal de los estudiantes
LINKOGRAFIA:
[1]
http://www.ehu.es/documents/2458096/2577739/apendice_03.pdf
[2]
http://www.revista.ingenieria.uady.mx/volumen10/emision.pdf
[3]
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/Fichas
Tecnicas/NTP/Ficheros/401a500/ntp_409.pdf
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/Fichas
Tecnicas/NTP/Ficheros/601a700/ntp_609.pdf
[4]