Pruebas bioqumicas

INDOL
Introduccin

El indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido

triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de
hidrolizar y desaminar el triptofano con produccin de indol, cido pirvico y
amonaco. La produccin de indol es una caracterstica importante para la
identificacin de muchas especies de m.o.

Principio

La prueba de indol est basada en la formacin de un complejo rojo cuando

el indol reacciona con el grupo aldehdo del p-dimetilaminobenzaldehdo.
Este es el principio activo del reactivo de Kovacs descrito ms adelante. El
medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.

Medios y reactivos
Caldo triptofano

Peptona o digerido pancretico de casena

Cloruro de sodio

0,5 g

Agua destilada

100 ml

Reactivo de Kovacs

Alcohol amlico o isoamlico

150 ml

p-dimetilaminobenzaldehdo

10 g

HCl conc.

2g

50 ml

Procedimiento

Inocular el caldo triptofano con el m.o. en estudio e incubar a 35C durante

18 a 24 horas. Al finalizar este perodo, aadir 5 gotas de reactivo por la
pared interior del tubo.
Interpretacin

El desarrollo de un color rojo intenso en la interfase del reactivo y el caldo,

segundos despus de aadir el reactivo indica la presencia de indol y un
resultado de la prueba positiva.

Controles
Escherichia coli: positivo
Klebsiella pneumoniae: negativo (mayora de las cepas)

ROJO DE METILO - VOGES-PROSKAUER (RM VP)

Principio

Una de las caractersticas taxonmicas que se utilizan para identificar los

diferentes gneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporcin
de productos de fermentacin que se originan por la fermentacin de la
glucosa. Se conocen dos tipos generales: la fermentacin cido-mixta y la
fermentacin del 2,3 butanodiol. En la fermentacin cido mixta se forman
fundamentalmente lctico, actico y succnico, adems de etanol, H 2 y CO2.
En la va del butanodiol se forman cantidades menores de cido (acetato y
succinato) y los principales productos son el butanodiol, etanol, H 2 y CO2.
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo de viraje entre 6,0
(amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la produccin de cidos
por la va de fermentacin cido mixta.
El acetil-metil-carbinol (o acetona) es un producto intermediario en la
produccin de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxgeno la
acetona es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol
dando un color rojo-fucsia

Medios y reactivos
Caldo RM/VP

Peptona

7g

Glucosa

5g

Fosfato dipotsico 5 g
Agua destilada

1L

pH = 6,9 0,1

Indicador de pH rojo de metilo

Rojo de metilo

0,1 g en 300 mL de etanol 95

Agua destilada

200 ml

Revelador VP

alfa-naftol (solucin al 5% en etanol 95)

Solucin de KOH al 40% en agua destilada

Procedimiento

Inocular el caldo RMVP con un cultivo puro de no ms de 24 horas del m.o.

en estudio. Incubar a 35C durante 48 horas. Luego de finalizado el tiempo
de incubacin transferir 1 mL del caldo a un tubo limpio para VP. En el caldo
restante revelar RM agregando unas 4 - 8 gotas del indicador rojo de metilo.
Para revelar VP agregar 0,6 ml (10 gotas) de alfa-naftol al 5% y 1 gota de
KOH al 40%. Agitar cuidadosamente para exponer el medio al oxgeno
atmosfrico y dejarlo reposar durante 10 a 15 minutos.

Interpretacin

La prueba RM es positiva si se desarrolla un color rojo estable. Esto indica

que la produccin de cido es suficiente para producir el viraje del indicador
y el m.o. ferment la glucosa por la va de cido mixta. Un color anaranjado,
intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.
La prueba VP es positiva si se desarrolla un color rojo-fucsia luego de 15
minutos, que indica la presencia de diacetilo, producto de oxidacin de la
acetona.

Controles
RM positivo, VP negativo: Escherichia coli
RM negativo, VP positivo: Enterobacter aerogenes

UTILIZACIN DE CITRATO
Introduccin

La utilizacin de citrato como nica fuente de carbono es una prueba til en

la identificacin de enterobacterias.

Principio

La utilizacin de citrato como nica fuente de carbono se detecta en un

medio de cultivo con citrato como nica fuente de carbono mediante el

crecimiento y la alcalinizacin del medio. Este aumento de pH se visualiza

con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6.