Repblica Bolivariana de Venezuela

Ministerio del Poder Popular para la Educacin Universitaria

Instituto Universitario de Tecnologa Dr. Federico Rivero Palacio
Regin capital
Departamento de Qumica
Mdulo: Bioqumica

ENDOCRINOLOGA Y EXCRECIN

Profesora:

Autores:

Carolina Prez

Erick Escobar
Mariangel Rodrguez

Caracas, de 2015

NDICE
P.p.
INTRODUCCIN.....4
1.

HEMATOLOGA BSICA5

1.1.

Definicin...5

1.2.

Morfologa de las clulas sangunea....5

1.3.

Muestras Biolgicas ...7

2.

TECNOLOGA PARA GENERAR COPIAS DE ADN (PCR).9

2.1.

ADN...........................................9

2.2.

Replicacin del ADN.........................................10

2.3

Transcripcin del ADN..11

2.4 Tcnica PCR...11

2.5 Aplicaciones de la PCR..12
3.

CATLISIS ENZIMTICA.13

3.1 Inhibicin de la Catlisis Enzimtica15

CONCLUSIONES......16
REFERENCIAS.........17

INTRODUCCIN

La hematologa es la especialidad mdica que se dedica al tratamiento de los

pacientes con enfermedades hematolgicas, para ello se encarga del estudio e
investigacin de la sangre y los rganos hematopoyticos (mdula sea, ganglios
linfticos, bazo, etc.) tanto sanos como enfermos (1).
En la sangre se encuentran los leucocitos o glbulos blancos que son las
clulas mviles del sistema inmunitario. Todos ellos difieren en cuanto a su funcin
y morfologa. Los leucocitos no desempean sus funciones cuando se encuentran
en sangre, sino cuando abandonan sta y entran a los tejidos linfoides o a las
zonas donde hay inflamacin intensa. En este sentido, la sangre es un medio de
transporte, que le permite a las clulas sanguneas recircular entre los diferentes
tejidos del cuerpo (2).
En 1984, Kary Mullis ide un ingenioso mtodo para amplificar secuencias
especficas de ADN que se denomina Reaccin en Cadena de la Polimerasa
(polymerase chain reaction, PCR). Mediante esta tcnica se puede amplificar un
segmento especfico de ADN hasta millones de veces en pocas horas in vitro (3).
Las reacciones catalticas se pueden clasificar en homogneas, enzimticas y
heterogneas. Las homogneas se producen en una sola fase, gaseosa o lquida
y en ellas el catalizador se encuentra disperso uniformemente. La catlisis
heterognea, tiene lugar en sistemas de reaccin polifsicos, donde la reaccin se
produce en la interfase. Normalmente el catalizador es slido y los reactivos
gases, vapores o lquidos. La catlisis enzimtica, que ocurre en las reacciones
bioqumicas, posee caractersticas propias de las dos anteriores aunque
mecansticamente se asemeja ms a la catlisis heterognea (4).

1. HEMATOLOGA BSICA

1.1 Definicin
Es la rama de la ciencia mdica que se encarga del estudio de los elementos
formes de la sangre y sus precursores, as como de los trastornos estructurales y
bioqumicos de estos elementos, que puedan conducir a una enfermedad (1).
Las enfermedades hematolgicas afectan la produccin de sangre y sus
componentes, como los glbulos rojos, glbulos blancos, la hemoglobina, las
protenas plasmticas, el mecanismo de coagulacin (hemostasia), etc (1).
La hematologa indica que existen personas que pueden presentar trastornos
sanguneos en diferentes campos que se estableces en lneas celulares llamadas
lnea eritroide, granulocitaria, megacarioctica, por lo que emplea la prueba de
laboratorio llamada biometra hemtica para:
Recuento de eritrocitos (y valor hematocrito).
Recuento de leucocitos.
Determinacin de hemoglobina.
Frmula leucocitaria (recuento diferencial de leucocitos) (1).
1.2 Morfologa de las clulas sanguneas
1.2.1 Eritrocitos
Son clulas anucleadas en forma de disco bicncavo, y las clulas ms
abundantes en sangre; su nmero vara en funcin de la edad, el sexo y la altura
del hbitat. Por trmino medio:
4,5- 6 106 /mm3 en el varn
4- 5 106 /mm3 en la mujer
5,9 106 /mm3 en el recin nacido.
Su funcin bsica es el transporte de hemoglobina. El principal factor que
determina la eritropoyesis es la oxigenacin de los tejidos. Cuando por cualquier

motivo disminuye la cantidad de oxgeno que llega a los tejidos, se produce un

rpido incremento en el nmero de eritrocitos circulantes. Para llevar a cabo esta
modificacin en el ritmo de respuesta eritropoytica, se produce ante la falta de
oxigenacin en las clulas renales la secrecin de factor eritropoytico renal que al
unirse a una globulina plasmtica sintetizada en el hgado forman la eritropoyetina.
En la regulacin de la eritropoyesis tambin intervienen los niveles de vitamina
B12 (cianocobalamina), cido flico y de Fe. La carencia de estos factores
determina un incorrecto desarrollo de la eritropoyesis (5 pgs. 1-2).

1.2.2 Leucocitos
Son una parte importante del sistema inmunitario y de defensa del organismo.
Actan sobre todo fuera de los vasos sanguneos, en los tejidos. As pues, los
leucocitos que se encuentran en la sangre circulante estn en trnsito entre sus
distintos lugares de accin. Los valores normales de leucocitos estn entre 4.500 y
11.500 clulas por mm. Los leucocitos se dividen en dos grupos principales:
Granulocitos
Se llaman as porque contienen llamativos grnulos citoplasmticos de secrecin
(6).

Neutrfilos: son el tipo ms corriente de leucocitos. Su

funcin

principal

es

la

de

ingerir

destruir

los

microorganismos invasores en los tejidos (6).

Eosinfilos: son clulas fagocticas mviles y constituyen la
primera lnea defensiva frente a los parsitos. Representan

el 1-6% de los leucocitos de la sangre circulante (6).

Basfilos: contienen proteoglucanos, histidina y muchos
otros mediadores de los procesos inflamatorios (respuesta

inmune ante las infecciones parasitarias) (6).

Leucocitos mononucleares

Linfocitos: son las clulas ms pequeas de la serie

blanca. Tienen un papel central en todos los sistemas de

defensa inmunolgica (6).

Monocitos: Son las clulas blancas de mayor tamao. Se
caracterizan por un ncleo grande excntrico que se tie
con menor intensidad que el de otros leucocitos (6).

1.3 Muestras Biolgicas

1.3.1 Definicin
Es un depsito de informacin sobre las caractersticas genticas del individuo.
Investigadores, laboratorios clnicos y de investigacin tienen almacenadas
muestras biolgicas, unas veces obtenidas fruto de la asistencia (bien sean
excedentes o reservadas para revisin diagnstica o validacin de nuevas
tcnicas), o sobrantes de muestras recabadas con fines de investigacin para
algn proyecto especfico (7 pg. 4).

1.3.2 Tipos
El personal de enfermera, generalmente, es el responsable de la obtencin y
recogida de las muestras biolgicas (8).

Muestras de orina
Muestras de sangre.
Muestras de heces.
Muestras de vmitos.
Muestras de esputo.
Muestras de lquido cefalorraqudeo (LCR).
Muestras de contenido gstrico duodenal.
Muestras de lquido seminal.
Muestras de piel, pelo y uas.
Muestras de exudados:
Exudado nasal
Exudado farngeo.
Exudado conjuntival

Exudado tico.
Exudado uretral.
Exudado vaginal.
Exudado de heridas (8).

1.3.3 Uso de la muestra biolgica:

El personal debe estar capacitado en Buenas Prcticas Clnicas, Normas
de Bioseguridad y tener experiencia en la realizacin de las pruebas e
interpretacin de las mismas (9).
Se debe verificar los protocolos de procedimientos de las pruebas
analticas relacionadas al ensayo clnico (9).
La muestra biolgica solo es utilizada para incrementar el conocimiento en
relacin al producto en investigacin o la enfermedad estudiada dentro del
ensayo clnico en el cual ser obtenida la muestra (9).
1.3.4 Informacin generada de los resultados de las muestras
biolgicas:
Se debe garantizar la proteccin de la confidencialidad de los datos
personales del sujeto de investigacin que participa en el ensayo clnico (9).
En el supuesto de que los datos obtenidos del sujeto en investigacin
pudieran revelar informacin de carcter personal de sus familiares. Se
requiere el consentimiento expreso y escrito de todos los interesados (9).
Se prohbe la utilizacin de datos relativos a la salud de las personas con
fines distintos a aqullos para los que se prest el consentimiento (9).
2. TECNOLOGA PARA GENERAR COPIAS DE ADN (PCR)
En las ltimas dcadas la tecnologa de recombinacin del ADN tambin
conocida como ingeniera gentica, o ms acertadamente recombinacin gentica
in vitro, ha revolucionado la biologa. El campo de la salud es uno de los ms
beneficiados con el desarrollo de esta tecnologa. Las investigaciones que se

realizan en esta rea estn enfocadas al diagnstico oportuno de enfermedades,

as como su posible tratamiento a travs de la terapia con molculas
recombinantes e introduccin de genes (3).
2.1 ADN
El ADN es una macromolcula constituida por unidades repetitivas de
nucletidos. Cada nucletido consta de una base nitrogenada (adenina (A), timina
(T), citosina (C) o guanina (G)), una pentosa (desoxirribosa) y un grupo fosfato. El
ADN es una molcula de doble cadena de nucletidos, las dos cadenas se
mantienen unidas mediante puentes de hidrgeno entre sus bases nitrogenadas
(10).
El apareamiento de las bases ocurre siempre en una forma especfica: la
adenina siempre se aparea con la timina y la citosina siempre se aparea con la
guanina, debido a esto la secuencia de bases de una cadena determina la
secuencia de la otra, a esto se le denomina complementariedad. Esta propiedad
es importante porque permite la replicacin de la molcula de ADN conservando
fielmente la informacin. Para que este apareamiento sea posible ambas cadenas
estn orientadas en direccin opuesta, una con respecto a la otra, a eso se le dice
que son antiparalelas (10).
De la misma manera la informacin contenida en el ADN puede ser copiada por
partes, en molculas especficas de ARN denominadas ARN mensajeros (ARNm),
este proceso se denomina transcripcin. La informacin codificada en el ARNm
es luego traducida en una secuencia especfica de aminocidos que forman una
protena. Este ltimo proceso se denomina traduccin (10).
La funcin principal del ADN consiste en transmitir los genes, es decir los
caracteres biolgicos de un individuo determinado (11).
La estructura del ADN fue descubierto en 1869 por Friedrich Meister, el papel
bsico del ADN en la transmisin de los caracteres genticos fue definido en 1944

por Avery, Macleod y MacCarty, quienes demostraron que el ADN de bacterias

muertas podra influir en el material gentico de las materias vivas (10).
Pero el descubrimiento de la estructura en doble hlice del ADN y el mecanismo
por el cual se autoduplica y as transmite a cada clula hija la informacin gentica
fue llevado a cabo por los bilogos Crick y Watson en un laboratorio de
investigacin de Cambridge (10).
2.2 Replicacin del ADN
Una molcula original de ADN de doble cadena es convertida en dos molculas
hijas de ADN idnticas. La clave para entender esta replicacin del ADN es la
estructura complementaria de las secuencias de los pares de bases en las dos
cadenas del ADN, una cadena sirve de molde para la produccin de la otra.
Cuando comienza la replicacin, las dos cadenas se desenrollan y se separan una
de otra en un pequeo segmento de la molcula. Los nucletidos libres presentes
en el citoplasma de la clula se unen a las bases expuestas del fragmento de ADN
de cadena simple expuesto de la molcula original. Donde hay T en la cadena
original se incorporar una A, y donde hay G se incorporar una C (10).
2.3 Transcripcin del ADN
El paso de la informacin gentica contenida en el ADN al ARN se denomina
transcripcin. Se conocen tres tipos fundamentales de ARN, el ARN mensajero
(ARNm), el ARN de transferencia (ARNt) y el ARN ribosmico (ARNr), todos ellos
productos de la transcripcin del ADN. La transcripcin de la informacin gentica
del ADN al ARN es llevada a cabo por una enzima llamada ARN-POLIMERASA o
TRANSCRIPTASA. Una de las ARN polimerasas mejor estudiadas es la de la
Escherichia

coli;

esta

enzima

est

constituida

por

cinco

sub-unidades

polipeptdicas denominadas: , ', dos pptidos , y . La subunidad sigma () no

10

est fuertemente unida y se disocia con facilidad, originndose lo que se

denomina el ncleo de la enzima mnima.
2.4 Tcnica PCR
En 1985, el qumico Kary Mullis desarroll la tcnica de la reaccin en cadena
de la polimerasa (PCR). Este mtodo permite la amplificacin exponencial de una
molcula de ADN, generando millones de copias de un fragmento. Esto se lleva
acabo con oligonucletidos que contienen un grupo extremo 3 libre, que es
complementario con la cadena molde de ADN. Los oligos funcionan como punto
de inicio para la adicin de nucletidos y para copiar la cadena molde en el PCR.
Una vez que el oligonucletido se une a su blanco, la polimerasa de ADN puede
seguir extendiendo la hebra complementaria. En una reaccin tpica de PCR se
usan dos oligonucletidos que flanquean la regin de ADN que se desea
amplificar. El nmero de copias del fragmento de ADN que se encuentra entre los
dos oligonucleotidos se amplifica con varios ciclos de reaccin. Cada ciclo de una
reaccin de PCR consta de tres pasos (12). (Ver figura N 1).

11

Figura N 1: La reaccin de PCR consiste en varios ciclos de 3 pasos. Las

temperaturas y los tiempos indicados son ejemplos y varan dependiendo de
las caractersticas del ADN que se desee amplificar (12 pg. 24).
2.5 Aplicaciones de la PCR
En biologa molecular para amplificar secuencias de DNA que luego son
fcilmente clonadas y/o secuenciadas. Generar mutaciones aleatorias o
dirigidas. Identificar genes expresados de forma diferencia, etc (13).
En biotecnologa, para la identificacin rpida y temprana de animales y
plantas transgnicos (13).

12

 En gentica general, de poblaciones y evolutiva, se emplea para

cartografiar genes mediante estudios de ligamiento (13).
En mejora de plantas y animales. De este modo pueden distinguirse
especies, variedades (13).
En espectrometra mutacional, toxicologa y tratamiento del cncer, para
amplificar y detectar mutaciones y translocaciones cromosmicas (13).
En salud pblica humana y veterinaria, para la deteccin de grmenes en
aguas, suelo, alimentos, plantas, animales, etc (13).
En medicina resulta muy valiosa para el diagnstico precoz de
enfermedades infecciosas como el SIDA, el sexo antes del nacimiento, o la
posible existencia de enfermedades hereditarias en el embrin o adultos
(13).
En microbiologa,

botnica

zoologa,

para

la

identificacin

de

microorganismos, plantas y animales, ya que usando los cebadores

apropiados pueden amplificarse secuencias especficas que generan
patrones de bandas tpicos de cada especie e incluso de cada individuo
(13).
En medicina forense y lucha contra el crimen y determinacin precisa de la
paternidad, ya que a partir de un pelo, un espermatozoide o restos de
huesos es posible inculpar o exonerar a un presunto asesino o violador.
Asimismo, pueden identificarse restos humanos y asignar o descartar
presuntas paternidades, prcticamente con total certeza (13).

3. CATLISIS ENZIMTICA

Las enzimas son protenas que catalizan las reacciones bioqumicas en los
organismos vivos con una gran especificidad. Existen algunas enzimas con
especificidad absoluta, es decir, que slo son vlidas para catalizar una
determinada reaccin, como la ureasa, que cataliza la hidrlisis de la urea. Las
hay que presentan especificidad de grupo, como las enzimas proteolticas, que

13

catalizan la hidrlisis de pptidos con ciertas caractersticas estructurales. O

enzimas con especificidad estereoqumica, ya que catalizan reacciones de un
estereoismero de una determinada molcula y no del otro. Esta actividad
cataltica, para la mayora de las enzimas est restringida a una zona pequea de
la molcula denominada centro activo (4).
La molcula sobre la que acta la enzima, denominada sustrato, se enlaza al
centro activo formando un complejo enzima-sustrato. Mientras est enlazado a la
enzima, el sustrato se transforma en el producto, momento en el que se libera de
la enzima. El caso ms simple de catlisis enzimtica es aquel en el que hay un
nico sustrato (4).
El mecanismo sera:

Figura N 2: Mecanismo simple de catlisis enzimtica (14).

Donde E y S son la enzima y el sustrato, P el producto y ES el complejo de
adicin enzima-sustrato (4).
En la catlisis enzimtica, tanto el pH como la temperatura tienen una gran
influencia en la velocidad de la reaccin, existiendo unos valores ptimos para los
que la velocidad de reaccin es mxima. As, las enzimas se desactivan
rpidamente cuando la temperatura aumenta por encima de los 35C, debido a la
desnaturalizacin de las protenas (prdida de la estructura terciaria). Lo mismo
ocurre cuando las disoluciones son fuertemente cidas o bsicas (4).
3.1 Inhibicin de la Catlisis Enzimtica
La inhibicin puede ser reversible o irreversible.

14

3.1.1 Reversible
El inhibidor no modifica las regiones funcionales de la enzima. Puede lograrse
mediante 2 mecanismos: competitivo y no-competitivo. Un inhibidor competitivo
es el que compite con el sustrato por el mismo sitio activo de la enzima, ya que el
inhibidor y el sustrato poseen una estructura qumica similar. La velocidad de
catlisis del sustrato se reduce dado que la cantidad de sustrato que se une a la
enzima es menor (15).
Un inhibidor no-competitivo es el que puede unirse a la enzima en un sitio
diferente al sitio activo. As, tanto el sustrato como el inhibidor pueden unirse
simultneamente a la molcula de enzima. La accin del inhibidor no-competitivo
es disminuir el nmero de recambio de una enzima (15).

3.1.2 Irreversible
El inhibidor modifica la molcula de enzima y se une tan fuertemente a ella que
la disociacin de ambas es muy lenta o nula. Varios venenos que actan sobre el
sistema nervioso, incluyendo insecticidas, lo hacen como inhibidores irreversibles
de la actividad enzimtica (15).

CONCLUSIONES

15

 La hematologa como disciplina cientfica comprende el diagnstico,

tratamiento y pronstico, hasta la prevencin de las enfermedades de la
sangre y rganos hemticos.
A travs de la Morfologa de las clulas sanguneas se encontr que la
funcin bsica de los eritrocitos es el transporte de la hemoglobina ya que
su citoplasma contiene mayoritariamente esta protena encontrndose en
una concentracin aproximada del 35 %, as como los leucocitos
desempean el papel defensivo del sistema inmunolgico.
Por otro lado, una muestra biolgica contiene informacin sobre las
caractersticas genticas del individuo.
Las aplicaciones la PCR son muy amplias. Puesto que es una tcnica que
permite amplificar una secuencia que constituye menos de la millonsima
parte del ADN total de un organismo superior. La PCR puede descubrir la
presencia de virus latentes como los de la hepatitis B y C y el de
inmunodeficiencia humano (HIV) en el genoma de los individuos infectados
que no han desarrollado respuesta inmune a dichos patgenos.
Las enzimas son protenas que catalizan las reacciones bioqumicas en los
organismos vivos y las sustancias que disminuyen la velocidad de una
reaccin enzimtica se les conoce como inhibidores.

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