CURSO DE BIOQUIMICA

FOTOCOLORIMETRIA
N 1
MESA N7

FECHA DE ENTREGA 02/04/15

LIMA PERU
2015

INTRODUCIN
Se denomina Mtodo Fotocolorimetria a mtodo ptico de absorcin
molecular que nos permite cuantificar sustancias y est basado en la
medicin de la intensidad de la luz monocromtica transmitida a
travs de una solucin coloreada, ya sea que se trate de sustancias
naturalmente coloreadas o que se han hecho de tal calidad mediante
reacciones qumicas adecuadas.
Por lo general los cuerpos en solucin tienen una capacidad de
absorcin selectiva sobre determinadas radiaciones luminosas,
cuando esta absorcin se ejecuta la zona espectral visible, se
observa la soluciones de un color que es generado por las radiaciones
que no han sido absorbidas.
Cuando un haz de luz, Luz incidencia (lo) atraviesa una solucin, una
parte de la radiacin queda absorbida por las molculas del soluto
coloreado, sufriendo una reduccin de intensidad Luz Transmitida (I t),
proporcional a la capacidad de absorcin de dichas molculas, otra
parte de la radiacin se pierde por fenmenos fsicos como reflexin,
refraccin y difraccin de la luz.
La longitud de onda en la que las molculas de dicha sustancia
absorbe con mayor intensidad la luz, se denomina Longitud de
mxima absorcin o Lambda Mxima.
Si consideramos que cada molcula absorbe una determinada
cantidad de luz, la intensidad de la luz transmitida por una solucin
disminuir
en relacin con el nmero de molculas que se
interpongan entre la fuente luminosa y el observador .Este nmero
vara de acuerdo con la concentracin del soluto y el espesor del
recipiente que contiene la solucin, estos factores estn considerados
en la Ley de Lambert y Beer que rige los principios de la
calorimetra.

OBJETIVOS
1. El alumno tendr la capacidad de construir e interpretar una
curva de calibracin
1. Determinar la longitud de onda mxima absorbancia para
soluciones de una solucin
2. Reconoce los 2 mtodos para la determinacin de la
concentracin de una solucin coloreada.
3. Determine la concentracin de una muestra problema haciendo
uso de los dos mtodos.
TUBOS
Absorbancia a
=525 nm

T1
0.07
5

T2
0.16
1

T3
0.271

T4
0.36
2

PROCEDIMIENTOS
En cinco tubos de ensayos respectivamente se marcaron con
nmeros de 1,2,3 , 4 y el ltimo fue de Mp.
SOLUCIN STOCK: Permanganato de potasio (KMnO4)
TUBOS N

ml KMnO4 5mg/dl
ml Agua Destilada

1.0
9.0

8.0

3
2.0

4
3.0

7.0

4.0
6.0

En cada tubo se agrega el ml

KMnO4 y agregando agua
destilada las cantidades como
se muestra en el grfico.

Se agita los tubitos para que

despus sea leda por el
espectrofotmetro.

 Despus de ello se prosigui a la

lectura de las Absorbancias de los
4 tubos a la longitud de onda de
525 nm

Debido a que se trabaj con una sola absorbancia que fue la onda
optima del KMnO4 que fue 525 ya que esta onda tiene mayor
absorbancia que las ondas 425 y 625 .
Ejemplo aqu se puede observar las absorbancias de las tres ondas en
estudio y claramente se observa que la onda optima es de 525 .

Con los datos obtenidos: construir en un papel milimetrado las

grficas
de
absorbancias
versus
concentraciones
de
permanganato de potasio para las longitudes de onda y en una
sola grfica. Con estas graficas elegir la longitud de ptima.
Determinar la concentracin por el mtodo de calibracin.
Para poder hallar la concentracin de la muestra problema se
tuvo que dilucin Mp en 1/10

1ml
MP

4ml agua

5 Fd

La Mp al diluirlo 1/5
Abs Mpd =0.119

CiVi=CFVF
C2V2=CFVF
5mg /dl 1=cf10
2=cf10

5mg /dl

0.5mg/dl=cf
1mg/dl=cf

C3V3=CFVF
C4V4=CFVF
5mg /dl 3=cf10
4=cf10
1.5mg/dl=cf
1mg/dl=cf

5mg /dl

 Obtener el factor de calibracin (Fc) promedio con las soluciones

Standard utilizadas para construir las curvas de calibracin,
utilizacin las absorbancias de la longitud de onda de mxima
absorcin de luz.
Determinar la concentracin de la muestra problema por el mtodo
del Factor de calibracin.
RESULTADO

TUBOS N

ml KMnO4 5mg/dl

1.0

2.0

3.0

4.0

ml Agua Destilada

9.0

8.0

7.0

6.0

0.5mg%

1mg%

1.5mg%

2mg%

Concentracin de KMnO4
mg/dl
Absorbancia a =465 nm

Absorbancia a = 525 nm

0.075

0,161

0.271

0.362

Absorbancia a = 625 nm
Longitud de Onda Optima ( )

=525nm

Factor de Calibracin

6.667

Factor de calibracin (Fc)

promedio

6.211

5.535

Fc=5.9845 mg/dl

FC=
Absst

Standard

Donde:
Fc = Factor de Calibracin
Absst= Absorbancia del Standard
Standard = Concentracin de Standard

FC= Standard
Fc1=

0.5 mg
0.075

Fc2=

1 mg
0.161

Fc3=

1.5 mg
0.271

Fc4=

3 mg
o .362

=6.667
=6.211
=5.535
=5.525

Absst

5.525

Fcn
n

Fc=

Fc=

6.667 +6.211+5.535+5.525
4

MP

=5.9845

= Absmp Fc Fd

MP

=0.1195.98455

MP

=3.56Omg%

Interpretacin se Resultados

525

T1

T2

T3 mg

T4

1mg%

mg%

mg%

0.0
75

0.16
1

0.2
76

0.3.
62

Fc

MP

5.984 3.56Omg%
5

DMP

Fd

1/5

Se observa que que al momento de realzar la solucin se agreg ms

agua que el stock por ello la absorbancia sali menor a la diferencia
de los dems grupos como se puede observar en la tabla 1, pero a
pesar de ello la concentracin de la muestra problema sali un
resultado cercano a lo que se esperaba. Y que las absorbancia se
encuentran en una succin.
En el grafico se puede observar como las absorbancia van con una
secuencia de 5.

Se interpreta que 3.560 mg de soluto de KMnO4 que hay en 100 ml

de la solucin. En una dilucin de 1/5.

TABLA 1

CONCLUCIONES
Que la longitud mxima se encuentra en donde las
absorbancias son mayores en esta prctica seria la longitud de
onda 525.
En la curva de calibracin si la absorbancia resulta un resultado
mayor o menor con respecto a las absorbancias ledas se
recomienda diluir la solucin hasta que la absorbancia dad se
encuentre en el rango de las otras.
Que mediante vamos aumentando las concentraciones las
absorbancia tambin va aumentando.

RECOMENDACIONES

 Se debe pipetear adecuadamente para que los clculos no se

alteren
Se debe pipetear con el dedo ndice y l el menisco tiene que
estar tangente a la lnea de referencia
Se bebe mezclar adecuadamente para que las sustancias se
combinen

BIBLIOGRAFA