Clasificacin de los mtodos cromatogrficos en columna

(4) Cromatografa lquido slido:

permeacin en geles

Principios:
Se basa en los diferentes tamaos de
las molculas cuando pasan a travs de
una columna rellena con un gel
Poros del gel

Clasificacin de los mtodos cromatogrficos en columna

(5)lquido slido: Cromatografa por afinidad

La separacin depende de la interaccin

reversible de las molculas con el
ligando especfico que se encuentra en la
fase estacionaria
Las molculas del analito se distribuyen
entre un lquido (fase mvil) y una
superficie enlazada (fase estacionaria)

Equipo de cromatografa
lquida

Depsito de fase mvil:

Generalmente estn equipados con
contienen uno o ms depsitos de 500
ml para el solvente. A menudo se
incluyen accesorios para eliminar os
gases disueltos y partculas es
suspensin. Pues los gases producen
dispersin en las bandas y las
partculas interfieren con el
funcionamiento del detector.

Sistema de bombeo:
Las exigencias que deben cumplir las bombas
que se utilizan en cromatografa de lquidos
son:
posibilidad de presin de hasta 480 atm,
salida libre de pulsaciones,
caudales entre 0,1 y 10 ml/min,
reproducibilidad de caudales de 0,5%
resistencia a la corrosin debida a los
solventes.

Sistema de inyeccin
Se puede inyectar la muestra mediante
una jeringa a travs de un diafragma,
pero este sistema no es muy
reproducible. Otro sistema es usar
dispositivos con un bucle de bombeo que
inyecta la muestra directamente en la
cabeza de la columna.

Columnas:
se construyen generalmente con tubos de acero
inoxidable, a veces de vidrio de paredes resistentes a
presiones menores de 48 atm. Tiene una longitud de
10 a 30 cm y un dimetro de 4 a 10 mm. Los
empaquetamientos tpicos de columna son de un
tamao de partcula de 5 a 10m. Tienen generalmente
40000 a 60000 platos/m.
Tambin existen microcolumnas que tienen un
dimetro de 1 a 4,6 mm y una longitud de 3 a 7 cm, con
empaquetamientos de 3 a 5 m y tienen 100000
platos/m, son ms ventajosas por su rapidez y bajo
consumo de solvente. Los empaquetamientos pueden
ser de slice, almina, partculas de polmeros porosos
que se recubre con una fina pelcula orgnica que se
una qumica o fsicamente a la superficie.

Detectores:
no hay detectores universales, como en
cromatografa gaseosa, el sistema de
deteccin depende de la naturaleza de la
muestra.
Los ms empleados:
UV-visible
Indice de refraccin
Florescencia
Infrarrojo
Amperomtrico
conductimtrico

Aplicaciones

Conservantes antioxidantes
Carbohidratos en bebidas
Ismeros de carotenoides
Flavonoides y fenoles
Lpidos
Surfactantes no inicos
Nutrientes liposolubes

Cromatografa plana
Papel poroso o capa delgada de slido
poroso activo y la fase mvil lquida
asciende por capilaridad o desciende por
gravedad mantenindose el sistema
dentro de una cmara cerrada
Capa fina
Papel

Cromatografa en lecho abierto

Capa fina
Fase estacionaria es una capa o pelcula de
milmetros de espesor. Formada por partculas
unidas a una placa o soporte (aluminio, vidrio o
plstico)
Una ventaja de esta tcnica es que permite
analizar diversas muestras y estndares en
forma simultnea.
Para muestras difciles de resolver se puede
trabajar en sentido perpendicular: desarrollo
bidimensional

Cromatografa en lecho abierto

Capa fina
El anlisis cualitativo se es el factor de
retencin o ndice de retencin
Rf = =

dis tan cia del origen a la mancha

dis tan cia del origen al frente del solvente

Cromatografa en lecho abierto

Capa fina
Los valores de Rf dependen de la
composicin de la fase estacionaria,
temperatura, compuestos. Por lo general
se corren estndares sobre la misma
placa para facilitar la identificacin.
Se usan reveladores para identificar