ESTUDIO DE ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE EXTRACTOS FENOLICOS PROCEDENTES DE

ALGUNOS RESIDUOS AGROINDUSTRIALES

Angela Mara Gonzlez Pita*, Henry I. Castro Vargas, Fabin Parada Alfonso
Grupo: Estudio de los cambios qumicos y bioqumicos de los alimentos frescos y procesados.
Departamento de Qumica. Facultad de Ciencias. Universidad Nacional de Colombia. Ciudad
Universitaria. Bogot, Colombia.
*amgonzalezpi@unal.edu.co

RESUMEN
Epicarpios de once frutas colombianas se evaluaron para establecer su actividad antioxidante y el
contenido de fenoles libres. La actividad antioxidante se evalu por los mtodos DPPH, ABTS
(capacidad de transferencia de electrones), FRAP (ferric reduction potencial antioxidant) y
decoloracin de -caroteno para actividad lipofilica. Los valores de actividad antioxidante para
DPPH, ABTS, FRAP y decoloracin de -caroteno estn entre 2,86 a 62,8 mol Trolox / g
epicarpio, 2,21 a 56,5 mol Trolox / g epicarpio, 7,18 a 151,4 mol Trolox / g epicarpio y 0,027 a
0,860 mol -tocoferol / g epicarpio respectivamente, y el contenido de fenoles libres cuantificado
por el mtodo de Follin-Ciocalteu est entre 2,54 a 71,6 g ac. glico / g epicarpio. Los extractos
metanolicos de epicarpio que presentan mayor capacidad antioxidante tanto hidrofilica como
lipofilica son papaya y mango en sus variedades tommy y de azcar, mientras que el extracto que
presenta mayor contenido de polifenoles libres es el capacho de la uchuva.
Palabras Clave: Frutas, epicarpio, actividad antioxidante, fenoles totales.
ABSTRACT

Key words: Fruits, peel, antioxidant activity, total phenols.

1. INTRODUCCION
Colombia es un pas tropical y diariamente se
producen gran cantidad de desechos en las
diferentes
agroindustrias,
residuos
principalmente frutcolas que no se emplean
de ninguna forma.
2. PARTE EXPERIMENTAL

2.1 Material vegetal

Los residuos de epicarpio (en la uchuva se
empleo el capacho que cubre el fruto) de las
11 frutas colombianas (Tabla 1) se obtuvieron
por concepto de donacin en las empresas
alimentos SAS, despulpadora JAVILU y
exportaciones OCATI S.A., provenientes de

diferentes partes del pas. Como son

residuos Agroindustriles primero en el
momento de la recepcin fueron clasificados
y se les realizo una limpieza para as retirar
toda la pulpa que tuviese. Todo el estudio se
realizo en las instalaciones de la Universidad
Nacional de Colombia.
Nombre comn
Nombre cientfico
Pia
Anans comosus L.
Lulo
Solanum quitoense
Caf
Coffea arabica L.
Uchuva
Physalis peruviana L.
Naranja
Citrus aurantium var
Papaya
Carica papaya L.
Maracuy
Passiflora edulis
Guanbana
Anona muricata L.
Mango Tommy
Mangifera indica L. var
Tomate de rbol
Solanum ebtaceum
Mango de azcar
Mangifera indica L.
Tabla 1. Nombre de las frutas Colombianas.

2.2 Reactivos
Los
reactivos
DPPH
(2,2-difenil-1pricrilhidracilo),
ABTS
(2,2-azinobis-(3etilbenzotiazolina-6-acido sulfonico)) y TPTZ
(2,4,6-(tri-(2-piridil-s-triazina)))
fueron
adquiridos en SIGMA Chemicals Co. El
reactivo TROLOX (acido-6-hidroxi-2,5,7,8
tetrametilcromato-2-carbolxilico) fue adquirido
de ALDRICH. El reactivo de Follin-Ciocalteu,
el sulfato ferroso hexahidratado, as como los
dems reactivos fueron adquiridos de DC
PANREAC. Todos fueron grado analtico.
Falta b-caroteno, tween 40 y omega 3
2.3 Extraccin de fenoles y compuestos
con actividad antioxidante.
Los epicarpios totalmente libres de pulpa
fueron lavados con agua corriente y luego se
dejaron secar al sol durante 24 horas y
finalmente para su almacenamiento se
trituraron en pequeos trozos de 0,5 * 0,5
cm. Los extractos se obtuvieron realizando
una extraccin Soxhlet a presin reducida
durante 8 horas, con metanol a 35C,
colocando aproximadamente entre 7 y 10g
de epicarpio seco, dependiendo de la fruta.
Luego de la extraccin se evaporo el
solvente mediante rota evaporacin a 40C y

se re disolvi con la menor cantidad de agua

y bao de ultrasonido para retirar el extracto
del baln, se coloco en tubos Falcn tapado
con parafilm y se llevo a liofilizacin, se peso
el extracto obtenido para determinar el
rendimiento y se reconstituyo a 100ml con
metanol, estos extractos se almacenaron a
-10C en frascos color mbar y se estableci
la concentracin final de cada uno.
2.4. Contenido de fenoles libres.
Los compuestos fenlicos libres se
cuantificaron
empleando
el
mtodo
espectrofotomtrico de Follin-Ciocalteu (1,2).
Los
extractos
se
llevaron
a
una
concentracin final de 10mg/ml y se mezclo
100 L de cada uno de estos y de los
patrones (BHT, BHA, TBHQ y acido glico)
de concentracin 10 mg/mL, con 750 L del
reactivo de Follin-Ciocalteu al 10% en agua
deshionizada, se incubo a temperatura
ambiente durante 5 min y se adicionaron 750
L de carbonato de sodio (Na2CO3) al 6% en
agua, se agito fuertemente y se dejo en
reposo durante 90 minutos a temperatura
ambiente y en la oscuridad, se midi la
absorvancia
a
765
nm
en
un
espectrofotmetro Genesys 10 UV (Madison
WI 53711, USA); la curva de calibracin se
preparo con acido glico (1, 2, 4, 6, 8, 10, 12,
15
g/mL)
y
siguiendo
el
mismo
procedimiento que para los extractos. Los
resultados se expresaron como equivalentes
de acido glico (g ac. Glico / g epicarpio).
Todas las medidas se realizaron por triplicado
y en la oscuridad empleando Falcn color
mbar.
2.5. Capacidad antioxidante
La capacidad antioxidante se valu por
triplicado por cuatro mtodos diferentes
DPPH, ABTS, FRAP y decoloracin del caroteno, con algunas modificaciones(1,2,3,4).
Los mtodos DPPH y ABTS actan sobre
polifenoles donores de electrones a radicales
oxidantes, estabilizndolos y disminuyendo
as su poder oxidante, el mtodo FRAP acta
sobre polifenoles capaces de donar
electrones
reduciendo
intermediarios

oxidados (como el Fe3+), mientras que el

mtodo de decoloracin del -caroteno acta
deslocalizando y estabilizando los electrones
recibidos de un radical libre.
2.5.1. Ensayo DPPH(2,5)
El ensayo se realizo preparando una solucin
de DPPH (2,2-difenil-1-pricrilhidracilo) 5 mM
en metanol y una dilucin diaria para obtener
una concentracin final de 0,1 mM con
absorvancia de 1,0 1,1 a 515 nm. Se
incubaron 975 L de la solucin de DPPH a
temperatura ambiente durante 7 minutos y se
midi la absorvancia inicial, se agregaron 25
L de cada uno de los extracto de
concentracin 10 mg/mL y de los patrones
(BHT, BHA, TBHQ y acido glico) de
concentracin 0,1 mg/mL y se tomaron
medidas de absorvancia cada 10 min durante
2 horas, las medidas se efectuaron en un
espectrofotmetro Genesys 10 UV (Madison
WI 53711, USA). La curva de calibracin se
preparo con Trolox en metanol (100, 500,
1000, 2000, 3000, 4000 y 5000 mM), se
agregaron 25 L de los diferentes patrones
de la curva de calibracin a los 975 L de
solucin de DPPH y se midi la absorvancia
final luego de 7 min. Los resultados se
expresaron como equivalentes de Trolox
(mol Trolox / g epicarpio). Todas las
medidas se realizaron por triplicado y en la
oscuridad empleando Falcn color mbar.
2.5.2. Ensayo ABTS(1,2,6)
Se debe generar el ABTS+, mezclando una
solucin
de
ABTS
(2,2-azinobis-(3etilbenzotiazolina-6-acido sulfonico)) 7 mM
con persulfat de potasio (K 2S2O8) 2,5 mM en
agua, se dejo en agitacin durante 16 horas
a 4C, y en la oscuridad, la solucin se
conservo a -20C y diariamente se realizo
una dilucin para que la absorvancia a 734
nm fuese 0,700 0,2 nm. Se tomaron 1000
L de la solucin de ABTS+ que se incubaron
a 30C durante 5 min, tiempo tras el cual se
midi la absorvancia y luego se adicionan 10
L del extracto metanolico de los residuos de
fruta y de los patrones (BHT, BHA, TBHQ y
acido glico) de concentracin 0,1 mg/mL, se

tomaron medidas de absorvancia cada 10

minutos
durante
2
horas
en
el
espectrofotmetro Genesys 10 UV (Madison
WI 53711, USA), para la curva de calibracin
se adicionan 10 L de las soluciones patrn
de Trolox en metanol (100, 500, 1000, 1500,
2000, 2500 M) a los 1000 L solucin de
ABTS+ y la lectura final de absorvancia se
realiza a los 6 minutos. Todo el procedimiento
fue realizado en la oscuridad, por triplicado y
el blanco de reactivos corresponde a
metanol.
2.5.3. Ensayo FRAP(1,2,7)
El reactivo de FRAP debe ser preparado
todos los das mezclando 2,5 mL de TPTZ
(2,4,6-(tri-(2-piridil-s-triazina)))
10
mM
preparada en acido clorhdrico (HCl) 40 mM
con 2,5 mL cloruro frrico (FeCl3) 20 mM en
agua desionizada, esto se agito hasta
obtener una solucin azul y se adicionaron
25 ml de buffer acetatos 300 mM y pH 3,6.
900 L de este reactivo se incubaron a 37C
durante 4 min y se midi la absorvancia
inicial a 593 nm, luego se agregaron 90 L de
agua y 30 L de cada uno de los extractos
metanolicos de epicarpio de concentracin 1
mg/mL y de los patrones (BHT, BHA, TBHQ y
acido glico) de concentracin 0,01 mg/mL,
se incubaron a 37C y se midi la
absorvancia cada 10 min durante 2 horas.
Las curvas de calibracin se prepararon con
Trolox (250, 500, 750, 1000, 1250 y 1500 M)
y sulfato de hierro (FeSO 4) (250, 500, 750,
1000, 1250, 1500 y 2000 M), se agregaron
90 L de agua y 30 L de cada uno de los
patrones a 900 L de reactivo FRAP, la
absorvancia final se midio a los 4 min. Todo
el procedimiento se realizo en la oscuridad y
por triplicado, el blanco empleado es reactivo
FRAP.
2.5.4. Ensayo de decoloracin del caroteno(3,4,5,8)
Con este mtodo se realizo la cuantificacin
de la actividad antioxidante lipofilica.
Se tomaron 500 L de una solucin de caroteno en acetona 1,2 mg/mL, se
colocaron en un tubo Falcn de 50 mL y se

evaporo la acetona a temperatura ambiente,

se adicionaron 200 L de Tween 40, 20 L de
acido linoleico (pastillas de omega 3), 50 mL
de agua desionizada que ha sido
previamente saturada con oxigeno durante
12 horas y 200 L del extracto metanolico del
epicarpio de las diferentes frutas de
concentracin 10 mg/mL y de los patrones
(BHT, BHA, TBHQ y acido glico) de
concentracin 10 mg/mL, luego de una
agitacin fuerte se llevan a bao de
ultrasonido durante 10 min y se toma la
primera lectura de absorvancia a 470 nm, se
incuban en termostato a 50C, con agitacin
constante y con varios periodos de 2 min de
bao de ultrasonido, se midi la absorvancia
durante 2 horas cada 10 min. Se debe
realizar un blanco que no contiene caroteno y un control para observar el
proceso de decoloracin del -caroteno que

DPPH

ABTS

no contiene extracto. La curva de calibracin

se realiza con el mismo procedimiento, los
patrones son de -tocoferol (1, 5, 10, 15, 20
mg/mL). Todo el procedimiento se realiza por
triplicado y en la oscuridad.
2.6. Anlisis de datos
Todos los ensayos se realizaron por triplicado
y estos datos se analizaron estadsticamente
mediante
ANOVA y
las
diferencias
significativas entre ellas, fueron separadas a
travs del modelo de Fisher (LSD); se
considero
p-valor
<
0,05
como
estadsticamente significativo. Se utilizo el
programa
estadstico
STATGRAPHICS
Centurin XVI.

3. RESULTADOS Y DISCUSIN

FRAP

FRAP

FRUTAS

(mol
Trolox/g epicarpio)

(mol
Trolox/g epicarpio)

(mol
Trolox/g epicarpio)

(mol
FeSO4/g epicarpio)

Pia

6,63 0,01

7,23 0,02

15,9 0,03

30,4 0,06

Caf

6,92 0,01

3,86 0,28

8,02 0,20

16,1 0,37

Lulo

12,9 0,05

6,91 0,03

24,9 0,05

47,3 0,10

Uchuva

2,86 0,02

2,90 0,08

52,0 0,03

98,9 0,06

Naranja

11,7 0,12

16,0 0,07

27,2 0,09

52,6 0,17

Papaya

39,2 0,79

56,5 0,77

63,1 0,57

125,1
1,07

Maracuya

5,05 0,02

5,82 0,04

10,9 0,07

20,8 0,13

22,7 0,10

13,7 0,01

30,9 0,12

59,1 0,23

62,8 0,10

44,1 0,15

143,5
0,23

273,6
0,43

4,18 0,01

2,21 0,01

7,18 0,02

13,6 0,03

44,8 0,03

23,6 0,02

3222
0,65
10666
0,68
12895
0,34

18861
133
12189
111
8775
99,0

151,4
0,80
14660
145
12649
145

298,6
1,50
29023
273
25236
273
19872
316

Guanaban
a
Mango
tomy
Tomate
arbol
Mango
azucar
BHT
BHA
TBHQ

9800 168

caroteno
(mol Trolox/g
epicarpio)

0,096
0,005
0,044
0,009
0,083
0,002
0,032
0,004
0,166
0,018
0,504
0,063
0,056
0,001
0,090
0,012
0,634
0,023
0,027
0,002
0,860
0,017
3,34
0,135
2,34
0,157
2,42
0,087

F-C (g ac.
glico/g epicarpio)
5,95 0,10
9,60 0,10
14,7 0,38
71,6 0,27
13,0 0,14
58,6 0,01
4,72 0,18
10,5 0,10
31,2 0,61
2,54 0,03
55,7 0,38
1400
47,0
546,2
22,6
985,6
5,39

27899
24295
28707
55477
2,58
--0,66
18,9
256
482
0,062
Tabla 2. Capacidad antioxidante (DPPH, ABTS, FRAP y decoloracin del -caroteno y contenido de fenoles
totales en epicarpios de algunas frutas Colombianas.
Ac. Galico.

Conclusiones
Al comparar la actividad antioxidante de los
extractos metanolicos del epicarpio de las 11
diferentes frutas se estableci que los
extractos de mango variedad azcar y
variedad tommy as como del epicarpio de la
papaya, presentan la mayor capacidad
antioxidante para los cuatro mtodos
evaluados.

AGRADECIMIENTOS
A la Universidad Nacional de Colombia, al
director de mi trabajo profesor Fabin Parada
Alfonso a Henry Castro, a la Profesora Luz
patricia Restrepo y a todo el grupo de
Estudio de los cambios qumicos y
bioqumicos de los alimentos frescos y
procesados y a todas las empresas que
donaron los residuos para el estudio.

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