Fioura 26-1 4 CAPITULO 26 Precursores det anillo purinico. Formiato 7 co, L Sg % e yp —Foriato CR SO \/ N amidico de Ja glutamina Glicina Biosintesis de los nucledtidos La biosintesis de los desoxirribonuclestidos y de los ribonu- cleétidos constituye un proceso fundamental en todas las células, puesto que los nucleétidos son los precursores directos del DNA y del RNA, y muchos de ellos participan también en el metabolismo como coenzimas. Un aspecto importante de la biosintesis de los nucleétidos lo constituye la ruta de formacién de sus bases, esto es, las pirimidinas y las purinas. Casi todos los organismos vivos, con la excepcién de algunas bacterias, son capaces de sintetizar dichas bases a partir de precursores sencillos. Las rutas biosintéticas que conducen a los nuclestidos estan sometidas a una regulacién estricta. Dado que los cuatro desoxirribonuclestidos principales y los cuatro ribonucleétidos fundamentales se hallan insertados en el DNA y en el RNA de las células segin relaciones molares especificas (cap. 31), dichos mecanismos reguladores son propulsados adecuada- mente para producir la apropiada «mezcla» de nucleétidos conveniente para cada tipo de Acido nucleico y para cada tipo de célula. Tanto los nucleétidos como sus bases nitroge- nadas se emplean con economia; de hecho en la gran mayoria de los organismos no se utilizan como fuentes de energia. Muchas células disponen incluso de mecanismos de salva- mento para recuperar las purinas y pirimidinas libres que re~ sultan de la degradacién hidrolitica de los nuclestidos. En este capitulo, se describen también los caminos biosin- téticos que conducen a los coenzimas nucleotidicos. Biosintesis de los ribonucleétidos purinicos Las primeras claves importantes respecto al origen biosinté- tico de las bases purinicas surgieron de los experimentos de J. M. Buchanan y colaboradores, Administraron a aves de laboratorio varios precursores isotépicos posibles, y determi- naron las posiciones en que se incorporaban los atomos eti- quetados en el ntcleo purinico. Para tales experimentos se escogieron precisamente aves, porque excretan nitrégeno prin- cipalmente en forma de Acido iirico, derivado de Ia purina que es facilmente aislable al estado puro (pag. 596). La degrada- cion quimica del Acido trico revelé el origen de los atomos del anillo de la purina. Tal como se ve en la figura 26-1, 739PARTE 3 BIOSINTESIS Y UTILIZACION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSEATO Fiourn 26.2 Biosintesis del dicido inosinico (IMP) (abajo y en Ia contrapagina). Los nombres de los enzimas aparecen en color. En la segunda reaccién, obsérvese la conversién de la configuracién @ a la B en el carbono 1 de la v-ribosa. @-p-Ribosa-5-fosfato ATP ehoz-fosatn amp} Pelestoasissn on HO—P—OCH, Acido 5-fosfo-a-p-ribosa- I L-pirofosférico je GH On Oa acal aca g OH OH oO Glutamina + 1,0 Glutamato +“ pirofosfato OH | HO-}—-0- OH 5'-Fosforribosil- glicinamida OH O# NN" Metentl FHS, s..fehosit-sicinanidor pe] montero 740 5'-Fosforribosil- N-formil-glicinamida ATP + ‘utamina + #0 fosfcribo-orait sag] Sikinamidositetata ADP + slutamato + P H NN, . HC CH 5'-Fosforribostl- I I N-formil- HIN]? C. 0 glicinamidina ATP we] re ADP +P, N 2 ee 5'-Fosforribosil- ce / S-aminoimidazol /N HN Ip Ribosa—) co, sea : cuboullss Acido 5'-Fosforribosil- 5-aminoimidazol 4-carboxilico Man ieiaclncciacachoxamidoe ATP + aspartato — | fosforrbositarsino- ADP +P, COOH 4-{N-succinocarboxamido) - S-aminoimidazol5'-Fosforribosil- 4-{N-succinocarboxamido)- 5-aminoimidazol Fumarato 4 senile shevinstoliage \, 5'-Fosforribosil- HH 4-carboxamido- an J 5-aminoimidazol N®.Bormil- FH, Hy | Ri a ios —® fosforcbosi-aminoimis ‘orboxamido-formil-traneferasa ZN 5'-Fosforribosil- TN 4carboxamido- PF S.formaminoimidazol Sw Capitulo 26 Biosintesis de los nuclestidos los atomos de nitrégeno 3 y 9 procedian del grupo amida de la glutamina, el nitrégeno 1 del aspartato, y el nitro- geno 7 de la glicina. Los atomos de carbono 4 y 5 también derivan de la glicina, indicando que el esqueleto de la molé- cula de la glicina se incorpora directamente en el nacleo puri- nico. Los atomos de carbono 2 y 8 los proporciona el formiato, y el carbono 6 el CO;, Sin embargo, han sido necesarios varios afios de investigaciones para aclarar las etapas enzimaticas implicadas en la biosintesis de los nuclestidos purinicos. Los laboratorios de Buchanan y el de G. R. Greenberg han pro- porcionado un mayor esclarecimiento sobre el tema. En contra de lo que primeramente se esperaba, esto es, que el anillo purinico se formaba en primer lugar y que des- pués se le unia la cadena lateral de la p-ribosa-fosfato, tlti- mamente se ha descubierto que el material de partida es una forma activada de la ribosa-5-fosfato, sobre el que se forma, Paso a paso, un nticleo purinico, lo que conduce directamente a la produccién de un nucleétido. La ruta biosintética de los acidos adenilico y guanilico comienza con la activacién de la «-D-ribosa-5-fosfato por pirofosforilacién enzimatica a expen- sas del ATP, para formar 5-fosfo-a-p-ribosa-1-pirofosfato (PRPP, fig. 26-2). Se trata de una reaccién extraordinaria en Ia que el grupo pirofosfato del ATP se transfiere intacto. Veremos mas adelante como el PRPP es también el precursor de los nucleétidos pirimidinicos. Para la regulacién de la biosintesis nucleotidica es significativo, el hecho de que la formacién del PRPP esté catalizada por un enzima alosté- rico, que es inhibido tanto por el ADP como por el GDP. En la etapa siguiente (fig. 26-2) el PRPP reacciona con la glutamina, de suerte que el grupo amino de la amida de la glutamina desplaza al grupo pirofosfato de la posicién 1 de la pentosa para formar 5-fosfo-B-p-ribosil-1-amina. E] ato- mo de nitrégeno amidico de la glutamina es el primer atomo del nécleo purinico que se introduce; corresponde al nitrége- no 9 del nticleo purinico completado. En esta etapa, que esta catalizada por un enzima que contiene hierro, el atomo de carbono anémero 1 de la p-ribosa experimenta su inversién, pasando de la configuracién @ a la 8. Esta configuracién B se conserva en los productos nucleétidos purinicos finales. Dicha reaccién constituye un punto de control secundario de la biosintesis purinica, y es inhibible por los nucledtidos purinicos. Tal como se muestra mas adelante, esta etapa es también inhibida por el antibiético azaserina. En la tercera etapa, el grupo carboxilo de la glicina reac- ciona con el grupo amino de la 5-fosforribosil-amina for- mando un enlace amida entre la glicina y el amino-azticar; como fuente energética se requiere ATP, y el producto es la 5'-fosfo-B-p-ribosil-1-glicinamida, junto con ADP y fosfato. Después, el niicleo purinico se construye alrededor de la porcién de glicinamida, que ya posee los atomos 4, 5, 7 y 9 del anillo (fig. 26-2). Los tomos restantes se introducen uno a uno. La etapa siguiente consiste en la adicién del grupo monocarbonado formilo al grupo a-amino libre de la 5’-fosfo- rribosil-glicinamida, formando el que sera el carbono 8 del anillo de la purina (fig. 26-2). El grupo formilo es donado por el portador de grupos formilo, N®,N®-metenil-tetrahidro- folato, que deriva del N*,N-metilén-tetrahidrofolato (pagi- na 353). La fuente biolégica normal del atomo de carbono 741PARTE 3 BIOSIVTESIS Y UTILIZAGION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO formilo es el carbono £ de la serina (pag. 353), pero el grupo formilo puede también proceder de formiato endégeno o ad- ministrado, por la via de previa formacién de N-formil-tetra- hidrofolato (pag. 353). La siguiente etapa de la biosintesis de nucleétidos purinicos implica la introduccién del atomo de nitrégeno 3, el cual pro- cede del grupo amido de la glutamina (fig. 26-2), y conduce ala formacién de la 5'-fosforribosil-N-formil-glicinamida, La transferencia del grupo amino de la glutamina requiere un aporte de energia del ATP, que se escinde en ADP y fosfato. La azaserina también bloquea esta etapa. El producto de esta reaccién posee ya los cinco atomos del anillo imidazélico perteneciente al niicleo de la purina. En la reaccién siguiente se cierra el anillo del imidazol por eliminacién de una molécula de agua, formandose el forribosil-5-amino-imidazol, reaccién que también requiere ATP El dtomo de carbono 6, que procede del CO; (fig. 26-1), es el que ahora se introduce, en una reaccién de carboxilacién. En este momento sélo faltan por introducir un nitrégeno y un carbono. El atomo de nitrégeno es el primero en incorpo- rarse en la que sera la posicién 1 del nucleo purinico (fig. 26-1); este nitrégeno procede del Acido aspartico. Se incorpora la molécula del acido aspartico completa para formar 5’-fosforri- bosil-4-(N-succinocarboxamida) -5-aminoimidazol, del cual, a continuacién, se elimina dcido fumarico. El enzima que cata- liza la ultima reaccién es, probablemente, idéntico a la adenilo- succinato-liasa, que cataliza una reaccién posterior, en Ia biosintesis del acido adenilico (véase mas adelante). El carbono que falta en el anillo purinico (el nimero 2) se introduce ahora por transferencia del grupo formilo del N'-formil-tetrahidrofolato al grupo 5-amino del ribonucleétido casi completo, el 5’- rribosil-4-carboxamida-5-formamido- imidazol. La porcién pirimidinica del nicleo purinico se cierra, entonces, por eliminacién de agua, formando el ribonucledtido acido inosinico (IMP), que es el primer producto de esta tuta biosintética con un nticleo purinico completo. Este cierre de anillo, a diferencia del anillo imidazélico, no requiere ATP. En conjunto, para la formacién del acido inosinico a partir de la p-ribosa-5-fosfato, se han utilizado seis grupos fosfato de alta energia del ATP, si se tiene en consideracién que el grupo pirofosfato desplazado del 5-fosforribosil-1-pirofosfato resulta finalmente hidrolizado a ortofosfato por la pirofos- fatasa, En la secuencia reaccional que va desde la p-ribosa-5-fosfato al acido inosinico, existen tres etapas que son inhibidas de modo caracteristico por agentes antibacterianos especificos. Tal como ya se ha descrito anteriormente, al antibiético aza- serina (fig. 26-3), producido por una especie de Streptomyces, Bloguea las dos transferencias enzimaticas del grupo amido de la glutamina, Este antibiético es un andlogo estructural de Ia glutamina y compite con ella (fig. 26-3). Parece ser que la azaserina bloquea a los grupos —SH esenciales de las transferasas que catalizan esta reaccién. Los agentes antibacterianos de la clase de las sulfonamid: (fig. 26-4), utilizados ampliamente en medicina porque inhiben el crecimiento de muchas bacterias, impiden la formacién de Acido félico (pg. 352) en los organismos susceptibles, y asi, 742 Fioura 26-3 Azaserina, antibidtico anélogo de la ‘glutamina, I oe NH, Azaserina Ficura 26-4 Sulfanilamida, competidor del cido p-aminobenzoico en la biosintesis del acido Folico. i wr i Sulfanilamida Acido p-aminobenzoicoFicura 26-5 Ruta desde el acido inosinico al acido adenilico. HN ge Ce Aci ni y OF Nou Acido, inosinico (IMP) HO MP) | Ribosa—(P) Grp + aspartato >) adenito-suceinato- ee HOOG —Cily ~EH—COOH NH I Acido AEX -N adenilosuccinico f Sx _ Ribosa—® sulentlo-succinato- “ido fumarico |" N’ I Acido adenilico Capitulo 26 Biosintesis de los nucleétidos al inhibir indirectamente la iiltima etapa, o sea la formilaci6n del 5’-fosforribosil-4-carboxamida-5-aminoimidazol, impiden la biosintesis purinica. La sulfonamidas son analogos estructura- les del Acido p-aminobenzoico (fig. 26-4), que es uno de los sillares de construccién del Acido félico. La sulfanilamida y otras sulfonamidas impiden la incorporacién del acido p-amino- benzoico durante la biosintesis del acido félico por inhibicién competitiva. Como consecuencia, se acumula el 5’-fosforribosil- 4-carboxamida-5-aminoimidazol en el medio de cultivo de los microorganismos susceptibles, Rutas desde el dcido inosinico a los cidos adenilico y guanilico El acido inosinico (IMP) es el precursor de los acidos ade- nilico y guanilico (AMP y GMP). La conversién del acido inosinico en adenilico (fig. 26-5) requiere tan sélo la sustitu- cién del grupo hidroxilo en posicién 6 por un grupo amino. Sin embargo, este cambio se verifica de forma tortuosa median- te una reaccién del Acido inosinico con el Acido aspartico, que rinde écido adenilosuccinico, y que va acompafiada de la esci- sién de GTP a GDP y P,. Entonces se elimina Acido fumarico y se produce el acido adenilico por la accién de la adenilo- succinato-liasa, que es el mismo enzima responsable de la eliminacién de Acido fumétrico del 5’-fosforribosil-4-(N-succi- nocarboxamida)-5-aminoimidazol en la ruta que conduce al Acido inosinico. Para formar acido adenilico a partir de la p-ri- Figura 26-6 Ruta desde al cido inosinico al Acido guanilico. Acido inosinico NAD? + HO NADH 9 i N. HN@ Sc \__— Acido xantilico I I (xantosina-5’- oy, fosfato Ho Ribosa —P) HO + ATP + glutamina (0 NH) GMP sinttasa AMP + PP, + glutamato Acido_guanilico (GMP) 743PARTE 3 BIOSIVTESIS Y UTILIZACIGN DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO bosa-5-fosfato se requiere siete grupos fostato de elevada energi En la formacién del acido guanilico (fig. 26-6), el acido inosinico es primeramente deshidrogenado a dcido xantilico, que es un nucleétido de la base xantina en una teaccién ligada al NAD. Después, el acido xantilico es aminado para formar Acido guanilico, gracias a una reaccién en la que la glutamina actia como donador de amino y que requiere ATP. Dado que esta reaccién implica la escisién pirofosfatolitica del ATP. (pag. 420) con hidrélisis final del pirofosfato para convertir el Acido inosinico en guanilico, se sacrifican dos grupos fosfato de alta energia del ATP. Por tanto, para transformar la p-ribosa-5-fosfato en Acido guanilico se requieren, en total, ‘ocho grupos fosfato de elevada energia. La conversién de los acidos adenilico y guanilico en ATP y GTP, respectivamente, tiene efecto por medio de dos trans- ferencias sucesivas de grupos fosfato de energia elevada del ATP, catalizadas por la nucledsido-monofosfai la nucledsido-difosfato-quinasa, respectivamente: GMP + ATP == GDP + ADP GDP + ATP == GTP + ADP Regulacién de Ja biosintesis de los nucleétidos purinicos En E. coli existen dos niveles de control regulador de la biosintesis de nucleétidos purinicos (fig. 26-7). El primero implica la regulacién del camino conducente al acido inosinico, lo que proporciona un control comin de la biosintesis de todos los nuclestides purinicos. El segundo ejerce la regula- cién de las rutas ramificadas que van desde el Acido inosinico a los acidos adenilico y guanilico, y sirve para controlar la abundancia relativa del AMP y del GMP. La regulacién de la produccién de Acido inosinico se ejerce sobre la segunda etapa de la secuencia reaccional, basada en la transferencia de un grupo amino a la 5-fosforribosa-1-pi- rofosfato. La amidotransferasa que cataliza esta reaccién es un eazima regulador bivalente (pag. 240), el cual es inhibido por el ATP, ADP o AMP, o por el GTP, GDP o GMP, cada uno de cuyos dos tipos de nucledtidos se unen al enzima sobre centros alostéricos distintos. La inhibicién es acumula- tiva, de suerte que cuando ambos tipos de nuclestidos de puri- na estan presentes a elevado nivel, la inhibicién del enzima es mayor que cuando sélo existe uno de dichos tipos. La regulacién de las sendas ramificadas que van al AMP y al GMP se consigue de dos maneras. La primera es poco corriente. Obsérvese que el camino que conduce desde el Acido xantilico al guanilico (GMP) requiere ATP como reactivo, mientras que el que va del Acido inosinico al acide adenilico requiere GTP. Por tanto, un exceso de ATP acelera la pro- duccién de acido guanilico; de modo semejante, todo exceso de GTP incrementa la sintesis de Acido adenilico. Estas accio- nes reciprocas contribuyen a equilibrar las velocidades de formacién del AMP y del GMP. Un segundo tipo de coordinacién entre los niveles de AMP y de GMP lo proporcionan dos retroinhibiciones: la de la conversién del écido inosinico en adenilosuccinico ejercida por 744 Ficura 26-7 Regulacién de tas rutas conducentes a los nucledtidos purinicos. 5.Fosforribosa-1-pirofosfato 5-Fosforribosilamina Acido inosinico \ Acido xantilicoFigura 26-8 Acido orético (6-carboxiuracilo). Hi 9 I G, of H Ne 43H C2 1 SC—COOH N Capitulo 26 Biosintesis de los nuclestidos el AMP, y la de la transformacién del acido inosinico en xantilico provocada por el GMP. El primero de los procesos de regulacién del AMP sobre los niveles de GMP es de ace- leracién, pues la sintesis de GMP resulta acelerada cuando los niveles de AMP son elevados, mientras que el segundo proceso es de retraso, ya que, segin él, el AMP y el GMP retrasan sus propias sintesis. Biosintesis de los nuclestidos pirimidinicos La ruta biosintética que conduce a los nucleétidos pirimidi- nicos es mucho més sencilla que la de los nucleétidos purini- cos. Difiere de la ruta purinica en que el resto de D-ribosa-5- fosfato (también derivado del PRPP) se engarza al nicleo de la purina después de la previa formacién de éste a partir de sus precursores de cadena abierta. Si bien los primeros expérimentos realizados con is6topos revelaron que el CO; y el amoniaco son precursores del anillo pitimidinico, el primer avance importante de nuestros conoci- mientos sobre la biosintesis pirimidinica proceden del estudio de unos mutantes de Neurospora crassa deficientes en su ca- pacidad de sintetizar pirimidinas, y por tanto, incapaces de crecer en medios carentes de citosina o de uracilo. Tales mutan- tes pitimidino-disminuidos pueden, sin embargo, desarrollarse normalmente en presencia de un derivado pirimidinico, el écido orético (fig. 26-8), hallado por primera vez en la leche de vaca (del griego oros, suero de la leche). Experimentos reali- zados con Acido orético isotépico mostraron que éste es un precursor pirimidinico inmediato en Neurospora asi como en diversas bacterias. La ruta de los nuclestidos pirimidinicos que pasa por el acido orético, que fue trazada por A. Kornberg y colabora- dores, conduce primero al dcido uridilico (UMP), del cual derivan tanto el Acido citidilico (CMP) como el desoxitimidi- lico ((TMP). El anillo de la pirimidina se forma por con- densacién del acido aspartico, que aporta tres carbonos y un nitrégeno, con el carbamil-fosfato aportado por el carbono y el nitrégeno restantes. En esta reaccién, catalizada por el enzima alostérico aspartato-carbamil-transferasa, mas conoci- da por su antiguo nombre de aspartato-transcarbamilasa, el grupo carbamilo del carbamil-fosfato es transferido al aspar- tato formando N-carbamil-aspartato. Esta reaccién constituye la etapa determinante de 1a biosintesis pirimidinica. El carba- mil-fosfato requerido se produce mediante la reaccién 2ATP + glutamina + CO; + HO —> 2ADP + P, + glutamato + carbamil-fosfato catalizada por la carbamil-fosfato-sintasa (glutamina). En los eucariotas, este enzima se encuentra en el citosol, en contraste con la carbamil-fosfato-sintasa (amoniaco) (pag. 593), que es un enzima mitocondrial implicado principalmente en la pro- duccién de urea (pag. 591). La carbamil-fosfato-sintasa (glu- tamina) funciona primordialmente produciendo el carbamil- fosfato para la biosintesis pirimidinica. En la segunda etapa de la biosintesis pirimidinica, el anillo se cierra por pérdida de agua procedente del N-carbamil- 745,PARTE 3. BIOSINTESIS Y UTILIZACIGN DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO aspartato, gracias a la accién de la dihidro-orotasa, rindiendo acide t-dihidro-orético, Este compuesto es, posteriormente, oxidado por la flavoproteina orotato-reductasa, que produce Acido orético, segiin una reaccién extraordinaria que utiliza al NAD‘ como aceptor electrénico final. Esta muy compleja des- hidrogenasa contiene, a la vez, FAD y FMN, asi como varios centros con hierro y azufre. Llegado a este punto, al Acido orético se engarza la cadena lateral p-ribosa-5-fosfato proporcionada por la 5-fosforribosa- L-pirofosfato, y gracias a la accién de la orotato-fosforribosil- transferasa, produciéndose el acido orotidina do orotidilico. Entonces, el acido orotidilico se descarboxila para rendir Acido uridilico (fig. 26-9). Se cree que en ciertos organismos las dos tiltimas etapas son catalizadas por una misma proteina enzimatica. El acido uridilico (UMP) es el precursor de los nucleétidos citidinicos. Esta conversién requiere que el uridilico sea pri- meramente fosforilado a uridina-trifosfato (UTP) por las si- guientes reacciones sucesivas ueledsido-monofosfatowquinasa UMP + ATP UDP + ADP rucledsldo-difosfato quinass UDP + ATP: UTP + ADP Después, el UTP experimenta su aminacién por el amoniaco (bacterias) 0 por la glutamina (animales), en la posicién 4 del anillo pirimidinico, rindiendo citidina-5’-trifosfato o CTP. (fi- gura 26-10). En esta reaccién, el ATP se escinde en ADP rdtica es una enfermedad genética de la biosin- tesis pirimidinica en el hombre, en la cual se acumula acido orético en la sangre, que es excretado por la orina. En los nifios en los que se ha observado esta anomalia, se observa un menguado crecimiento asi como ciertos fallos de la for- macién normal de eritrocitos. Este estado patolégico puede remediarse por administracién de uridina o citidina por via oral. Regulacién de la biosintesis de los nucledtidos pirimidinicos La regulaci6n de la velocidad de biosintesis de nucleétidos piri- midinicos ha sido objeto de serias investigaciones, especial- mente las iniciadas por A. B, Pardee y sus colaboradores. Estos cientificos descubrieron que la aspartato-transcarbami lasa de £. coli, que cataliza la primera reaccién de la secuencia (la condensacién del carbamil-fosfato con el acido aspartico, que rinde Acido carbamil-aspartico), resulta inhibida por el CTP, que es el producto final de esta secuencia reaccional (fig. 26-11). Esta inhibicién la evita el ATP. La aspartato- transcarbamilasa de E. coli es, tal vez, el enzima alostérico estudiado de un modo mas completo; su cinética y su estruc- tura molecular (pags. 245 y 247) se conocen con gran detalle. Los estudios comparativos realizados sobre el comporta- miento de la aspartato-transcarbamilasa han revelado que sus propiedades reguladoras difieren ampliamente de unos organis- mos a otros. El tipo de regulacién que se ha descrito, cuyo 746 Ficura 26-9 Biosintesis del cido uridilico {abajo y en a contrapagina). Acido carbamil- fosférico Acido aspartico Acido | Necarbamil- O=C__HC—COOH ——aspartico wi q idcoortasa Acido ~ CH -dihidro-orético HC—COOH N NAD [FAD.FMN] NADH Acido orético PREPS esforbost- pp, tales oH C—coon Orotidina- S'-fosfato écido orotidilico)Orotidina-5'-fosfato {acido orotidilico) | exci CO, Ficura 26-11 Regulacién de la ruta biosintética del CTP por la inhibicién de producto final de la aspartato-transcarbamilasa. El efecto inhibidor del CTP es anulado por el ATP. Carbamil-fosfato Acido aspartico | Acido N-carbamil-aspartico | | | Capitulo 26 Biosintesis de los nucledtidos Ficura 26-10 Aminacién det UTP a CTP por la CTP- sintetasa de las bacterias. Ribosa-PPP Uridina-trifosfato (UTP) Citidina-trifosfato (CTP) modulador inhibidor es el CTP, tiene lugar en las bacterias E. coli y Aerobacter aerogenes. Sin embargo, en la bacteria Pseudomonas fluorescens, el principal modulador inhibidor es el UTP, mientras que en algunas plantas superiores lo es el UMP. Por otra parte, en algunos microorganismos como Bacillus subtilis, la aspartato-transcarbamilasa no es inhibi- da por ninguno de dichos compuestos, seguramente por care- cer de las subunidades reguladoras. Hay que hacer subrayar de nuevo que el 5-fosfo-a--ribosa- L-pirofosfato es un precursor comin tanto de los nucleétidos purinicos como de los pirimidinicos, y que el enzima que cataliza su formacién, la ribosafosfato-pirofosfo-quinasa (fig. 26-2) es un enzima alostérico inhibible por los moduladores ADP y GDP. Ademis, la sintesis de este enzima es reprimida por los nuclestidos de la pirimidina. Biosintesis de los desoxirribonuclestidos Dado que los desoxirribonuclestidos difieren de los ribonu- cleétidos tan sélo en que contienen 2-desoxirribosa en vez de Ficura 26-12 Efecto del CTP y del ATP sobre la reaccién de la transcarbamilasa. Obsérvese cémo las concentraciones crecientes de CTP, que es ef producto final de la ruta global, hacen incrementar el valor de la concentracion de sustrato que produce a mitad de la velocidad maxima; desde 10 mM a 23 mM, aproximadamente, efecto que es invertido por el ATP. Vents 0,2 mM CTP + Curva normal (sin CTP) Velocidad de reaccién —> 10 20 30 (Aspartato), mM TATPARTE 3. BIOSIVTESIS Y UTILIZACIGN DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO ribosa como pentosa, se supuso que se debian formar por una ruta similar a la antes descrita para los ribonucledtidos sola- mente con la sustitucién de la ribosa fosforilada precursora por un 2-desoxiderivado anélogo. La investigacién inicial se centré por ello, en su mayor parte, sobre el mecanismo de biosintesis de la 2-desoxi-p-ribosa. A pesar de conocerse una ruta enzimatica de formacién de la 2-desoxirribosa-5-fosfato libre a partir de precursores sencillos, la cual de hecho existe en algunas células, se sabe ahora que normalmente los desoxi- rribonuclestidos no se sintetizan a partir de la desoxirribosa como elemento de construccién, sino que se forman por reduc- cién directa del carbono 2’ de los correspondientes ribonu- clestidos. Un importante experimento que apoya esta con- clusién fue levado a cabo por I. A. Rose y B. S. Schweigert, con una citidina etiquetada con C¥ tanto en el anillo pirimidi- nico como en Ia ribosa, Al ser ofrecida a células animales o bacterianas, este compuesto se incorporé a los restos de acido citidilico del RNA, asi como a los de Acido desoxicitidilico del DNA. Las proporciones de isétopo contenidas en las porcio- nes pirimidinicas y de ribosa (0 desoxirribosa) resultaron ser idénticas a las presentes en los restos de los dcidos citidilicos y desoxicitidilicos. Este descubrimiento indicaba que la por- cién de ribosa no se desligaba del anillo citosinico de la citi- dina etiquetada con anterioridad a la formacién de los restos del acido desoxicitidilico del DNA. Si la ribosa se hubiera separado en primer lugar, hubiera resultado diluida por la ribosa o desoxirribosa no isotépicas con anterioridad a la for- macién del desoxirribonucleétido, con el correspondiente cambio de relacién de C entre los restos de pentosa y de pirimidina. Otros ensayos directamente realizados con is6to- pos y con extractos bacterianos exentos de células confirmaron que los ribonuclestidos etiquetados, de hecho se convierten directamente en los correspondientes desoxirribonuclestidos. Para la reduccién directa de los ribonucleétidos existen dos rutas distintas, que dependen de las especies. P. Reichard y sus colegas han demostrado que en E. coli, los cuatro ribonucleésido-difosfatos (ADP, GDP, UDP y CDP) son directamente reducidos a los correspondientes desoxi-analogos dADP, dGDP, dUDP y dCDP, respectivamente, por un sis- tema enzimtico multiple. En el proceso global, la reduccion del resto de ribosa a 2-desoxirribosa requiere un par de 4tomos de hidrégeno que son donados finalmente por el NADPH y el H+, Sin embargo, el donador electrénico inmediato no es el NADPH, sino la forma reducida de una pequeiia proteina termoestable (contiene 108 restos aminoacidos) denominada tiorredoxina, que posee dos grupos —SH libres pertenecientes a dos restos de cisteina. La tiorredoxina puede ser éxidorre- ducida de modo reversible, Su forma oxidada o de disulfuro, que contiene un resto de cistina, es reducida a la forma de ditiol por el NADPH + H*, segiin una reaccién catalizada por la tiorredoxina-reductasa: Liorredoxina sedetnea Tiorredoxina (-S—S—) + NADPH + H+ tiorredoxina (-SH). + NADP* La tiorredoxina-reductasa es una flavoproteina con un peso molecular de 68 000; contiene dos moléculas de FAD ligadas. 748Figura 26-13 Metilacién del dUMP a desoxitimidilato, i Desoxirribosa-P Acido desoxiuridilico (aUMP) timdilato-sntetasa N'N"-Metilén- tetrahidrofolato Dihidrofolato Desoxirribosa-P Acido desoxitimidilico (aTMP) A continuacién se muestean las esteucturas det dihidrofolato asi como de los firmacos aminopterina y ametopterina, que inhiben la formacién de timidilato por su accién sobre la dihidrofolato- reductasa. Glu es ef simbolo del resto de dcido glutimico. tol Acido dihidrofolico (sustrato normal) on (‘+ a oO Aninopterina NH, Gee Glu n7 “Span, 4 St A 4) 1a SNOW Ametoptrina Capitulo 26 Biosintesis de los nuclestidos Los equivalentes de reduccién de la tiorredoxina reducida que se ha formado son después transferidos al aceptor ribonucle6- sido-5'-difosfato (NDP) por la ribonucledsido-difosfato- reductasa: Tiorredoxina (~SH)2 + NDP —> tiorredoxina (—S—S—) + dNDP + H,O Esta reaccién es bastante compleja, y ademas de magnesio requiere dos proteinas o subunidades. El sistema completo puede reducir a cualquiera de los cuatro ribonucledsido-5’- difosfatos produciendo los correspondientes 2-desoxi-p-ribosa analogos. En otros varios microorganismos, entre los que se cuentan los Lactobacillus, Rhizobium, Euglena y Clostridium, existe, sin embargo, una ruta diferente, la cual en muchos casos requiere a los ribonucleésido-5’-trifosfatos en vez de los difos- fatos. Ademas necesita del coenzima By, y puede utilizar como agente reductor o bien a la tiorredoxina o bien al acido dihi- drolipoico (pag. 353). Dado que el coenzima By es capaz de actuar como portador intermedio de hidrégeno, para el cam- bio de un tomo de hidrégeno unido a un carbono por un grupo sustituyente de un carbono vecino (pag. 356), el me- canismo de reduccién de la porcién de ribosa a 2-desoxirribosa en Lactobacillus es posible que implique no solamente al Atomo de carbono 2, sino también a un carbono adyacente. Formacién del cido desoxitimidilico El DNA contiene timina (5-metiluracilo) en vez del uracilo presente en el RNA. El acido desoxitimidilico ({TMP) se forma a partir del Acido desoxiuridilico (UMP) por la accién de la timidilato-sintetasa, que cataliza la metilacién del resto uracilo en una reaccién que requiere la participacién de un Acido félico como coenzima, el N,N-metilén-tetrahidrofolato (fig. 26-13), que actéa como donador de metilo, La formacién de timidilato y, por tanto, la del DNA, resulta fuertemente retrasada por las drogas aminopterina y ametopterina (figu- ra 26-13). Estos agentes, que se denominan medicamentos antifélicos, retardan Ja proliferacién de algunos tipos de can- cer, especialmente de las leucemias. Debido a su semejanza estructural con el dihidrofolato, son inhibidores competitivos de la conversién del dihidrofolato en tetrahidrofolato por la dihidrofolato-reductasa: NADPH + Ht + dihidrofolato —> NADP» + tetrahidrofolato La formacién del timidilato es especialmente sensible a los niveles disminuidos de tetrahidrofolato. De esta suerte, la sintesis del DNA resulta inhibida en Ja rapida divisién de los leucocitos malignos. Regulacién de la biosintesis de los desoxirribonuclestidos Una serie de mecanismos alostéricos que regulan la biosin- tesis de desoxirribonuclestidos en E. coli (fig. 26-4) com- prende la reaccién entre la tiorredoxina reducida y los NDPs, 749PARTE 3. BIOSINTESIS Y UTILIZACION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO ATP \ | > iosintesis de los desoxirribonuclessido-5'- Ace aS nee a) eo trifosfatos. El ATP, ef dGTP y ef dTTP son importantes moduladores estimulantes, _ dTTP |] |GTPs, dGTP || |aTTPA, jareSar| saienteas que el dATP es un inhibidor 1 J J 3 general. | « ¢ seecovshs aATP { 7 y a 1 : tt 1 | 7 ' | {| depp | dupP cpr ' i ' Hoot of | | | {| duMP dcrP | | {| aTMP : 1 i i | | | aTDP | 1 | Ll dTTP catalizada por el sistema de la ribonucleésido-difosfato-reduc- tasa, antes descrito. La reduccién del CDP a dCDP y la del UDP a dUDP por este enzima, resulta muy acelerada por el ATP, mientras que la reduccién del ADP a dADP y del GDP a dGDP es estimulada por el dGTP y el dTTP. Por otra parte, el dATP actia como retroinhibidor de la reduccién de todos los ribonucledsido-5-difosfatos. Dado que la 5-fosforribosa-1-pirofosfato es la fuente origi+ nal de los restos de pentosa, tanto de los ribonuclestidos como. de los desoxirribonucledtidos, la regulacién de la ribosa-fos- fato-pirofosfo-quinasa por los inhibidores alostéricos ADP y GDP (véase mas atrs), es también importante en la bio- sintesis de los desoxirribonucleétidos. Degradacién de las purinas En los animales superiores, los nucleétidos resultantes de la degradacién de los acidos nucleicos por la accién de las nucleasas (pag. 329), experimentan generalmente, su hidré- lisis enzimatica hasta rendir finalmente las bases purinicas y pirimidinicas libres. Si no son recuperadas y reutilizadas (vase mas adelante), las bases libres son ulteriormente degradadas y sus productos finales excretados. En algunos vertebrados, incluidos los primates, el perro dalmata, las aves y algunos reptiles, el producto final de la degradacién de las purinas es el dcido tirico, mientras que en otros mamiferos y reptiles, asi como en los moluscos, el producto final es la alantoina. En los peces, la alantoina es escindida en dcido alantoico y urea. En los invertebrados acuaticos, el amoniaco es el principal producto final del catabolismo purinico. Curiosamente, es la guanina la forma excretoria de las purinas en la arafia y en el cerdo, Las reacciones que se muestran en la figura 26-15 esbozan las etapas principales de la degradacién de las purinas. La degradacién de las purinas a acido trico, producto meta- bélico final en ef hombre, ha sido objeto de intensos estudios, 750Ficura 26-15 Degradacién de las purinas a productos nitrogenados de excrecién. 0 Me au derazinass | Adenosina fee eee Inosina PP, hipoxantina- “a Karon Hipoxantina Ht FO, 1) satin-onidasa HY Or oO I HAO, O: >) csotinacoxidasa Ht, Oy Acido rico (véase a la derecha) Capitulo 26 Biosintesis de los nucledtidos ou Acido trico (forma enélica) wen oN excretado por los lL E—OH primates, perros dalmatas, Hoe ny ete, H 10,4 #,0 ‘ co, On Alantoina, excretada por yyy AN otros mamiferos, tortugas y I I c=0 moluscos. o=C, C. Nyt HOO #0 Acido alantoico. excretado por algunos o, peces. “os Urea, excretada por la 2HAN—F— NH mayoria de peces Acerca) anfibios. S coon | ‘Acido qliniiko 6-H ya que se conocen aberraciones genéticas de esta ruta. Las purinas principales, adenina y guanina, se convierten primero en xantina (fig. 26-15), la cual es entonces oxidada a dcido iirico por la compleja flavoproteina xantin-oxidasa: Xantina + H,O + O, —> acido tirico + Or Superéxido El radical superéxido (pag. 514) experimenta su conversion en perdxido de hidrégeno por accién de la superéxido-dismu- tasa (pag. 514). Los estudios isotépicos practicados con verte- brados que excretan acido tirico han revelado que éste procede de &cidos nucleicos exégenos y endégenos. Aunque en una persona normal, se forman, diariamente hasta 5 g de purinas libres, sdlo se excretan aproximadamente 0,5 g de Acido rico; evidentemente, la mayor parte de las purinas libres es recupera- da o reciclada por la ruta que se describe mas adelante. El acido rico se encuentra en la sangre principalmente en forma de urato monosédico; tanto el acido libre como sus sales, los aePARTE 3. BIOSINTESIS Y UTILIZACION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO uratos, son relativamente insolubles en agua, lo cual provoca que en algunos individuos el acido arico precipite y cristalice en la orina formando calculos renales y lesionando al rifién. En los tejidos cartilaginosos pueden formarse también dep6- sitos de acido iirico, provocando la enfermedad denominada gota, la cual se produce, al parecer, por una superproduccién de Acido tirico. Esta enfermedad puede aliviarse por trata- miento con el férmaco lamado alopurinol (fig. 26-16), que es un analogo de la hipoxantina, El alopurinol inhibe a la xantina-oxidasa y haciendo asi disminuir la formacién de acido firico. Recuperacién de las purinas Las purinas libres formadas a partir de los nucledtidos (fi- gura 26-15) son recuperadas en los vertebrados para su reutili- zacién en la biosintesis de nucleétidos y de Acidos nucleicos, El mecanismo principal de este proceso reside en la accién de la adenina-fosforribosil-transferasa y en la de la guanina- (0 hipoxantina-) fosforribosil-transferasa: Adenina + 5-fosforribosa-1-pirofosfato = AMP + PP, Guanina + 5-fosforribosa-1-pirofosfato = GMP + PP; Estos importantes enzimas convierten a las purinas libres en sus correspondientes purino-nucledsido-5’-fosfatos, que son reutilizables. Otra ruta de recuperaci6n resulta provocada por la accién secuencial de la purino-nucledsido-fosforilasa: Purina + ribosa-1-fosfato = purino-nucleésido + P, y la de nucleésido-quinasas tales como la adenosina-quinasa: Adenosina + ATP —+» AMP + ADP Dado que hasta el 90% de las purinas libres formadas por el hombre son recuperadas y recicladas, estas rutas de recu- peracién, especialmente la descrita en primer lugar, son de la mayor importancia por lo que se refiere a la economia de las purinas en los vertebrados. La deficiencia de alguno de estos procesos de recuperacién provoca el sindrome de Lesch-Nyhan, rara enfermedad genética en la que se observa una deficiencia del enzima guanina-(hipoxantina-) fosforribosil-transferasa. Este enzima cataliza la transferencia de un grupo ribosa-fos- fato desde el PRPP a la guanina (véase arriba) o bien a la hipoxantina: Hipoxantina + 5-fosforribosa-1-pirofosfato —> Acido inosinico + PP; Cuando hay deficiencia de este enzima, la guanina y la hipo- xantina no son recuperadas, siendo entonces degradadas a 4cido rico. Los individuos aquejados con el sindrome de Lesch-Nyhan muestran sintomas mentales como un compor- tamiento muy agresivo y una extrafia tendencia a la automu- tilacién, asi como un depésito masivo de acido trico en los rifiones, con lesién renal final. ae Ficura 26-16 Alopurinol, inhibidor de la xantina-oxidasa. Es un andlogo de la xantina que tiene invertidas las posiciones 7 y 8 del tomo de nitrégeno.Ficura 26-17 Degradacién de las bases pirimidinicas. HuN~G-NH~CHCH,COOH H,0. A-ureldo-propionsta H,N—CH,CH,COOH + NH, & co, Dihidrouracilo Acido B-ureido- ropiénico f-Alanina Capitulo 26 Biosintesis de los nuclestidos Degradacién de las pirimidinas En la mayoria de las especies animales las pirimidinas son degradadas a amoniaco y urea. Pueden ser también utilizadas como precursores en la biosintesis de la 8-alanina, y por tanto del coenzima A. La principal ruta de degradacién de la cito- sina y del uracilo se muestra en la figura 26-17. Una senda similar conduce a la formacién del acido B-aminoisobutirico a partir de la timina. Ciclo de los nucleétidos purinicos Dos de las reacciones comprendidas en la biosintesis del acido adenilico (AMP) participan en un mecanismo ciclico descrito por J. Lowenstein para la desaminacién del aspartato en el tejido muscular; este ciclo interviene en importantes funciones reguladoras. Ell ciclo de los nuclestidos purinicos consiste en la siguiente secuencia de reacciones: adenilat AMP + H,O fumarato + NH; + GDP + P, EI resultado neto de este ciclo consiste en la desaminacién del aspartato para producir amoniaco que tiene lugar en el miisculo esquelético, el cual no contiene cantidades significa tivas de glutamato-deshidrogenasa, que es el enzima clave en el higado y en otros tejidos para la desaminacién de los aminoacidos (pag. 577). El ciclo de los nuclestidos purinicos sirve también para generar fumarato y por tanto otros inter- mediarios del ciclo de los acidos tricarboxilicos en el misculo, el cual no contiene otros enzimas capaces de catalizar reaccio- nes anapleréticas (pag. 474). Biosintesis de coenzimas nucleotidicos Tanto el flavin-adenin-dinuclestido como los nucleétidos piri- dinicos y el coenzima A son derivados del acido adenilico. E] flavin-mononucleétido (FMN), que no es un verdadero nucleétido y que se denomina, con mayor exactitud, riboflavina- fosfato (pag. 345), es sintetizado por el enzima riboflavina- quinasa a partir de la riboflavina libre (vitamina B;) y del ATP, segin la reaccién Riboflavina + ATP —= riboflavina-5’-fosfato + ADP entonces, a partir del FMN se forma FAD por la accién de la FMN-adenilil-transferasa: Riboflavina-5’-fosfato + ATP ——> flavin-adenin-dinuclestido + PP 753PARTE 3. BIOSINTESIS Y UTILIZACIGN DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO Fiura 26-18 Biosintesis del coenzima A. QR Gh OH ATP. pentotenatonguinasa ADP ve ee Ce ct tecoce CH; CTP + cisteina | tetramer OH O P+ cpp of sseisincasa Ch CH CNH CHC P 0 cH, NH Acido pantoténico Acido 4’-fosfopantoténico 4'-Fosfopantotenoil-cisteina l HC—CH,—SH cooH fesfopantotenoi- cistelna-descarborilass co, oH =O HO— | oe Hy fBNCiCt ‘0 CH NH I CH, I CH SH ATP) panieteinafostatoe Seenilranafecans PP, Desfosfo-CoA ATP desfoxt-CoA- ADP A esinase Coenzima A 754 4'-FostopantoteinaCapitulo 26 Biosintesis de los nuclestidos En las bacterias, el NAD es sintetizado a partir del Acido nicotinico libre segiin la siguiente serie de reacciones: Acido nicotinico + 5-fosfo-a-p-ribosa-1-pirofosfato = acido nicotinico-mononucleétido + PP, Acido nicotinico-mononuclestido + ATP = desamido-NAD* + PP; Desamido-NAD* + glutamina + ATP + H,O = NAD+ + Acido glutamico + ADP + P, En el metabolismo bacteriano, el grupo amido del NAD se inserta después de construido el analogo del NAD con Acido nicotinico, el desamido-NAD. En los mamiferos, sin embargo, la nicotinamida libre puede ser utilizada directamente, via nicotinamida-mononuclestido, en vez de acido nicotinico libre y Acido nicotinico-mononuclestido. El NADP* se forma a par- tir del NAD* por la reaccién NAD+ + ATP = NADP + ADP El coenzima A se ensambla a partir de la vitamina dcido pantoténico libre, segin la secuencia reaccional que aparece en la figura 26-18, En la altima de las reacciones se introduce un grupo fosfato en el grupo 3’-hidroxilo del resto de adeno- sina de la desfosfo-CoA para formar la molécula completa del coenzima A. Resumen La biosintesis de los ribonuclestidos purinicos acido adenilico y acido quanilico, comienza con la introduccién de un grupo amino en la posicién 1 del 5-fosfo-o-ribosa-I-pirofosfato, con pérdida de pirofosfato. Entonces Ja glicina se une a la funcién amina para formar un derivado de glici- namida, Las sucesivas adiciones de un grupo formilo y de un grupo amino a la porcién glicinamida son seguidas por el cierre del anillo imidazélico. En las reacciones subsiguientes se ensambla y se cierra el segundo anillo del nucleo purinico, produciendo el nuclestido Acido inosinico, que es el primer producto que contiene purina. Este acido inosinico es el precursor del Acido adenilico por Ia via del acido adenilo-succinico y del Acido quanilico pasando por el Acido xantilico. La biosintesis del AMP y del GMP es alostéricamente inhibible en su primera etapa por dichos nucles- tidos de la adenina y de la guanina. Los ribonuclestidos pirimidinicos se forman con arreglo a un esquema algo diferente. El anillo pirimidinico es sintetizado en forma de écido orético antes de que se le adhiera la ribosa-5-fosfato. Entonces se pro- duce el acido uridilico y se fosforila a UTP. El UTP es el precursor directo del CTP. La primera etapa de la biosintesis pirimidinica, que esté catalizada por el enzima alostérico aspartato-transcarbamilasa, es en algu- ‘nos organismos inhibible por el CTP. Los ribonucledsido-5'-difosfatos son reducidos directamente a los correspondientes 2-desoxirribonucledsido-5'-difosfatos. En B. coli, los electrones son transferides desde el NADPH + H’ a la forma oxidada de la proteina tiorredoxina, que contiene un resto de cistina, convirtiéndola en su forma de ditiol, la tiorredoxina reducida, que es el reductor inme- diato para Ia conversion de los NDPs en los correspondientes dNDPs. En algunas especies, los 5'-trifosfatos 0 difosfatos de los nucledsidos son reducidos a los correspondientes desoxi-compuestos mediante una reaccién que requiere al coenzima Bn. El acido desoxitimidilico se forma por meti« Tacién del Acido desoxiuridilico. Las purinas y pirimidinas libres que se forman en la degradacion de los Acidos nucleicos son recuperadas y reutilizadas para las sintesis de nu- cleétidos y de acidos nucleicos, o bien pueden experimentar su degradacién a productos nitrogenados finales, que son excretados. Las purinas son, Finalmente, degradadas a acido rico por el hombre, y a alantoina y otros productos finales por otros vertebrados determinados. El exceso de pro- duccién de Acido rico y su depésito en los cartilages humanos constitu- rei!PARTE 3. BIOSINTESIS Y UTILIZACIGN DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO ye la enfermedad denominada gota. El fallo genético de 1a recuperacion de ja guanina y de la hipoxantina provoca el sindrome de Lesch-Nyhan. La biosintesis de los coenzimas nucleotidicos FAD, NAD, NADP y coenzima A ademas de sus correspondientes precursores, requiere la parti- cipacién del ATP, Bibliografia Libros DAGLEY, S., y D. E. NICHOLSON: An Introduction to Metabolic Pathways, ‘Wiley, Nueva York, 1970. GREENBERG, D. M. (ed.): Metabolic Pathways, vol. IV, Academic, Nueva York, 1970. HENDERSON, J. F.: Regulation of Purine Biosynthesis, Am. Chem. Soc. Monog. 170, Washington, D. C., 1972. HENDERSON, J. Fy A: R. P. PATERSON: Nucleotide Metabolism, Academic, Nueva York, 1972. REICHARD, P.: Biosynthesis of Deoxyribose, Wiley, Nueva York, 1967. STANBURY, J. B., J. B. WYNGAARDEN y D. S, FREDRICKSON: The Metabolic Basis of Inherited Disease, 3." ed., McGraw-Hill, Nueva York, 1972. Describen con detalle las alteraciones genéticas del metabolismo de las purinas y de Jas pirimidinas. Articulos BUCHANAN, J. Mi: «The Amidotransferasess, Adv. Enzymol,, 39: 91-183, (1973). Estos enzimas participan en la biosintesis de purinas y pir midinas. FREDKIN, M: . Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol, 7: 303-347 (1967). Munnay, A. w.: , Ann. Rev. Biochem., 50: 811-826 (1971). O'DONOVAN, G. A. y J. NEUHARD: «Pyrimidine Metabolism in Microorgar nisms», Bacterial Rev., 34: 278-343 (1970). Problemas 1. En qué atomos del dcido adenilico aislado a partir de un hidrolizado de RNA hepatico podria esperarse hallar los 4tomos que se indican de los siguientes precursores: a) el carbono carboxilico del acetil-CoA, b) el atomo de carbono 3 de la p-glucosa, c) el dtomo de car- bono a de la serina, d) el nitrégeno aminico del Acido aspartico, y e) el nitrégeno amidico de la glutamina? 2. {En qué atémos del Acido citidilico del RNA de higado de rata, cabria esperar se encontraran los 4tomos que se indican de los sie guientes precursores: a) el atomo de carbono f-carboxilico del Acido oxalacético, 6) el Stomo de nitrégeno del amoniaco, y c) el tomo de nitrogeno del Acido glutamico? 3. Calcular el numero de enlaces fosfato de elevada energia recuperados © ¢ahorrados> por una célula al practicar la recuperacién de una molécula de adenina, reutilizéndola para la sintesis de dcido nucleico. 4, Escribir una reaccién igualada para la formacién de CTP en E. coli a partir de CO;, NH;, ATP, ribosa-5-fosfato y Acido oxal- acético. ;Cuantos enlaces de alta energia hacen falta por cada CTP sintetizado? {Cudntas moléculas de D-glucosa tendré que oxidar por completo una célula para obtener el ATP suficiente pata poder sinte- tizar una molécula de CTP? 5. Escribir una reaccién igualada de formacién de NADP partiendo de Acido nicotinico, ATP, glicosa y amoniaco. 6. 1Qué productos finales etiquetados cabria esperar resultasen de la degradacién en el hombre de una adenina marcada en las posiciones siguientes: a) el dtomo de nitrégeno 3, 6) el stomo de carbono 5, y.¢) el atomo de nitrégeno del grupo amino 67 iId. id. en la tortuga? ud. id. en Jos anfibios? 756