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GUA PRCTICA
OBJETIVOS ESPECFICOS
1. Aplicar las tcnicas de anlisis para la determinacin de glcidos y protenas en leche y
derivados lcteos.
2. Establecer conclusiones acerca de los resultados del anlisis fsico qumico de la leche.
3. Reconocer diferentes causas en que una muestra de leche puede presentar valores
alterados de glcidos y protenas.
PARTE I.
DETERMINACIN DE GLCIDOS
Los glcidos de la leche estn representados casi exclusivamente por lactosa, diholsido
reductor 4-(beta-D-galacto-piranosil)-D-glucopiranosa, cuya concentracin es de 4,8 % en
promedio. Estudios cromatogrficos han establecidos la presencia de trazas de otros
glcidos como son la glucosa (7,5 mg/100 mL) y la galactosa (2 mg/100 mL) (Jen- NessPatton,1959; Webb et al 1974). Algunos productos lcteos son adicionados de cantidades
considerables de sacarosa (leche condensada) o de algunos ingredientes ricos en diversos
glcidos (helados).
Las normas COVENIN no establecen lmites legales para la concentracin de glcidos en
leche, y la determinacin de este componente no es una prueba de rutina en los laboratorios
de control de calidad de las industrias lcteas. Sin embargo, su anlisis cobra importancia
en trabajos de investigacin sobre caracterizacin de la leche de determinada especie o
raza, o en determinadas situaciones donde se sospecha de adulteraciones complejas de la
leche, difciles de determinar con los anlisis rutinarios. Valores anormales de lactosa por lo
general se asocia a problemas patolgicos del animal o adulteracin por adicin de agua.
La determinacin de glcidos en la leche puede hacerse por numerosos mtodos, a
continuacin se sealan los ms importantes.
Mtodos Polarimtricos: estn fundamentados en la propiedad que tienen los glcidos
en solucin, de rotar el plano de vibracin de la luz polarizada, en virtud de ser sustancias
pticamente activas, siendo la magnitud de esa rotacin proporcional a su concentracin
bajo condiciones especiales. La lactosa en la leche puede determinarse por ese mtodo,
previa precipitacin de las protenas y la materia grasa (AOAC, 1975; MIF, 1964).
Mtodos Qumicos: Se basan en las propiedades reductoras de los glcidos, debidas a la
presencia de funciones aldehdicas o cetnicas libres. Aplicable en el mtodo de MunsonWalker que se estudiar en detalle durante la ejecucin de la actividad prctica.
PARTE II.
DETERMINACIN DE PROTENAS
El contenido promedio de protenas totales en la leche es de 3,4%. En esta fraccin se
incluyen las casenas, las cuales por si solas representan un 80% del contenido proteico
total (2,7 %),el resto est integrado por las protenas sricas, que incluyen la lactoglobulina (0,3%), la -lactoalbmina (0,15%), una albmina similar a la seralbmina
indicador mixto compuesto por una mezcla de rojo de metilo y azul de metileno, el cual en
medio cido se presenta de color morado y en medio alcalino de color verde.
Resumen de las reacciones qumicas en el mtodo Micro-Kjeldahl
Donde:
V = mL de HCl gastados en la titulacin.
N = normalidad de la solucin de HCl (0,02 N).
E = equivalente del nitrgeno (14).
a = gramos de muestra.
P = protena total.
Materiales y Aparatos
Este mtodo se fundamenta en la titulacin de Sorensen, en la cual los grupos amino de los
aminocidos constituyentes de las protenas (-NH2), son bloqueados con formaldehdo
neutralizado, para luego titular los grupos carboxilo (-COOH) con una solucin de lcalis
valorada. Las reacciones involucradas son las siguientes:
Al aplicar este mtodo a la leche, 9 mL de la muestra se neutralizan con NaOH 0,1 N hasta
el punto de viraje del indicador fenolftalena y luego de le adiciona formaldehdo
neutralizado. La acidez que se desarrolla por el bloqueo de los grupos bsicos, hace virar de
nuevo la fenolftalena a incolora. Seguidamente se re-titula nuevamente con NaOH hasta la
reaparicin del color rosa permanente. El porcentaje de casena de la muestra est dado por
el producto de multiplicar el nmero de mL de NaOH 0,1 N gastados en la segunda
titulacin (9 mL de muestra) por el factor 1,63, el cual es emprico y depende del cociente
casena/protenas sricas y de la tcnica empleada.
Este mtodo se utiliza para estandarizar la leche que va a procesarse para la obtencin de
quesos, permitiendo estimar el rendimiento y por lo tanto la masa de queso a procesar.
Reactivos:
NaOH 0,1N.
Fenolftalena al 1% en etanol.
Solucin de formaldehdo al 40% neutralizada con NaOH hasta el punto de viraje de la
fenolftalena.
Procedimiento:
1. Transferir 9 mL de la muestra preparada a un vaso de precipitado. Adicionar 1 mL de
solucin alcohlica de fenolftalena al 1%.
2. Colocar la solucin de NaOH 0,1 N en una bureta de 50 mL y adicionarla a la muestra
hasta que aparezca el primer color rosado permanente.
3. Agregar 2 mL de solucin de formaldehdo.
4. Enrasar la bureta a 50 mL o leer la posicin del menisco antes de continuar con la
titulacin.
5. Titular la muestra de leche hasta que aparezca el primer color rosado nuevamente, en ese
momento medir exactamente el nmero de mL de la solucin de NaOH 0,1N empleados en
esta segunda titulacin.
6. Calcular el porcentaje de casena en la muestra multiplicando el nmero de mL de NaOH
0,1 N gastados en la segunda titulacin por el factor 1,63.
cada caso de 2,5 a 5 cm. de los extremos) y las otras tres muestra en punto localizados en el
centro de los tringulos formados por las dos lneas indicadas.
Estas seis muestras se deben tomar con una sonda metlica, que llegue hasta el fondo del
tambor, en direccin vertical. La norma COVENIN 938-83 recomienda una sonda limpia y
seca, de acero o aluminio, para recolectar 3 columnas de aproximadamente 222g, que
tomaran unos 300 a 500g de muestra.
Las muestras se transfieren a un envase limpio seco y hermtico que se cierra
inmediatamente. Antes de abrir este envase, debe homogenizarse ya sea por agitacin o
mediante un movimiento de rodamiento e inversin alternada.
La preparacin de la muestra debe hacerse en un local con humedad relativa baja. Se hace
pasar a travs de un tamiz No 20, dejndolo caer sobre un papel grande, golpeando el tamiz
si es necesario. El residuo no tamizado se puede moler en un mortero. Desechar las
partculas de madera u otro material que no pueden molerse. Tamizar dos veces mas,
mezclando bien en cada oportunidad. Este proceso debe hacerse rpido para evitar la
absorcin de humedad y la muestra preparada se debe guardar en un recipiente hermtico
hasta el anlisis.
La ADMI (1965) recomienda que las muestras individuales sean por lo menos de 120g (4
onzas) y en caso de tomas muestras individuales, ni de diferentes lotes, ni de diferentes das
de elaboracin.
DETERMINACIN DE HUMEDAD, SLIDOS TOTALES Y CENIZAS EN
PRODUCTOS LCTEOS CONCENTRADOS (MTODO DE LA AOAC)
Este mtodo tiene su fundamento, en la evaporacin del agua contenida en una muestra de
peso conocido, mantenida en estufa a 100 2 C. Se procede como para leche fluida;
utilizando 2-3g de muestra preparada. Para leche evaporada emplear 4-5g de la muestra
preparada y para leche evaporada condensada utilizar 10ml de la muestra preparada. En
ambos casos aplicar el procedimiento indicado para leche fluida. Hacer las correcciones
segn la dilucin empleada.
HUMEDAD EN LECHE EN POLVO (MTODO DE DESTILACIN CON
TOLUENO)
Este mtodo se fundamenta en la separacin de la humedad presente en una muestra de
peso conocido, mediante destilacin con reflujo, empleando un solvente inmiscible, de
menor punto de ebullicin y de menor peso especfico al del agua, tal como el tolueno,
heptano, xileno, etc. Por calentamiento, el agua y el solvente orgnico se evaporan para
luego condensarse en un refrigerante de reflujo ubicado en la parte superior, y caer en un
tubo especial graduado en mL. Dada la mayor densidad del agua esta se va al fondo del
tubo colector mientras que el solvente orgnico se mantiene formando una capa sobre la
anterior, desde donde cae de nuevo al baln de destilacin. Cuando toda el agua ha
destilado su volumen puede leerse directamente en la escala graduada del tubo colector.
Este mtodo tiene las siguientes ventajas: es econmico y rpido, comparado con los
mtodos de evaporacin, requiere poca atencin despus que se ha iniciado la destilacin,
no incluye en los resultados los errores de los mtodos de evaporacin por perdida de
sustancias voltiles ya que estas por lo general no pasan al extracto acuoso, por esta razn,
en ciertas ocasiones los resultados obtenidos son menores comparados con los mtodos de
evaporacin. Por otra parte con este mtodo se previene la oxidacin de las grasas, la
descomposicin de los azcares y se puede mantener una temperatura constante de
deshidratacin, sin necesidad de aparatos complicados. El mtodo resulta especialmente
adecuado para las determinaciones en productos que tienen bajo grado de humedad.
Materiales, Equipos y Reactivos:
Baln de destilacin o erlenmeyer de 300 mL
Tubo colector (trampa 4 ml graduada en 0,1mL)
Condensador
Manta de calentamiento elctrica
Powerstat
Cepillo para condensador o bureta
Balanza analtica
Tolueno libre de humedad
Procedimiento:
1. Tomar las muestras por debajo de la superficie del producto y prepararlas en un ambiente
con humedad relativa normal, mezclndola rpidamente y tomando las previsiones para
evitar que absorba humedad.
2. Transferir rpidamente 50 g de la muestra al baln de destilacin, el cual debe estar
escrupulosamente seco y limpio, para evitar que gotas de agua se adhieran a la superficie
interna.
3. Adicionar inmediatamente suficiente tolueno para cubrir la muestra (75-150 mL). Agitar
bien.
4. Conectar el baln al tubo de destilacin, adaptando a su vez un condensador de reflujo
fijado aun soporte universal. Abrir la llave del agua.
5. Antes de iniciar el calentamiento llenar el tubo de destilacin con tolueno, el cual se
coloca por la boca superior del destilador.
6. Conectar el cordn elctrico de la manta de calentamiento al Powerstat y este a su vez al
suministro elctrico, e iniciar la destilacin asegurando que el polvo no se adhiera a las
paredes del baln ni que se queme en el fondo por el calor directo, lo cual pudiera ocasionar
errores en el resultado.
7. Al comenzar la ebullicin, reducir la intensidad del calor aplicado hasta obtener una
velocidad de condensacin de tolueno equivalente a aproximadamente 4 gotas por segundo.
8. Las gotas de agua adheridas a la pared del condensador o del tubo colector se llevan al
fondo por adicin de tolueno, por la parte superior, o bien limpiando las paredes con un
cepillo para buretas saturado con tolueno, al mismo tiempo que se agrega solvente para
arrastrarlas hasta la parte inferior.
9. Apagar el aparato y dejar que el tubo se enfre. Seguidamente recolectar las gotas de agua
remanentes en las paredes del condensador y el tubo, forzndolas a descender con el cepillo
saturado con tolueno en la forma indicada anteriormente o utilizando un alambre de cobre
con una banda de goma.
10. Leer el volumen de agua destilada en la escala del tubo. Este valor multiplicado por 2
representa el porcentaje de humedad en la muestra, asumiendo que la densidad del agua es
de 1,000.
ACIDEZ EN PRODUCTOS LCTEOS CONCENTRADOS (ADMI, 1965)
La acidez de la leche en polvo puede ser determinada, a partir de una muestra reconstituida,
siguiendo el mismo procedimiento que para leche fluida.
Materiales y Reactivos:
Los mismos empleados para el caso de leche cruda.
Procedimiento:
1. Para la leche en polvo mezclar 13g de muestra preparada, 10g si es leche en polvo
descremada en 100ml de agua destilada.
2. Mezclar con la ayuda de una licuadora elctrica. Dejar en reposo 1 hora.
3. Agitar suavemente y titular como en la leche.
4. Expresar la acidez en mL. NaOH. 1N/100g demuestra. Pesar 40g. NaOH para 1N/1litro.
SOLUBILIDAD DE LA LECHE O SUERO EN POLVO
La leche constituye, ms que una solucin, un sistema complejo en el cual los glbulos
grasos se encuentran emulsionados, la casena se presentan en suspensin coloidal y la
lactosa, sales minerales y algunas vitaminas se mantienen en solucin. Por lo tanto, cuando
se habla de la solubilidad de la leche en polvo, realmente se trata de indicar su capacidad
para generarse cuando se mezclan con agua, formando un producto similar a la leche
natural.
La solubilidad de los productos lcteos desecados (leche completa, leche descremada, suero
en polvo) tiene gran importancia comercial. Esta propiedad depende, entre otros factores,
del mtodo de elaboracin, la temperatura de secado, la acidez. La leche obtenida por el
mtodo de nebulizacin presenta una solubilidad de casi 100%, mientras que el obtenido
por el mtodo de tambor tiene una solubilidad menor, de aproximadamente 80-95%.
La determinacin de la solubilidad de la leche en polvo corrientemente se hace por mtodo
empricos que consiste en mezclar una determinada cantidad de la muestra con un volumen
estipulado de agua, bajo condiciones especiales, luego determinar el residuo insoluble por
medicin volumtrica, por pesada, o bien determinando los slidos totales disueltos en la
fase acuosa.
SOLUBILIDAD DE LA LECHE EN POLVO (MTODO DEL INSTITUTO
AMERICANO DE LA LECHE DESECADA). (ADMI, 1965) (COVENIN 1115)
Materiales, Equipos y Reactivos:
Tubos de centrfuga especiales: forma cnica, graduados en divisiones de 0,5ml de 0,0 a
0,5ml, dcimas desde 0,5 a 1ml, divisiones de 0,2ml desde 1a 2ml divisiones de 0,5ml
desde 2 a 10ml, divisiones de 1ml desde 10 hasta 20ml y con enrase a 50ml marcada a no
menos de media pulgada (1,27cm) del borde superior.
Centrfuga.
Recipiente para mezcla (ADMI).
Mezcladora (ADMI).(Centro Solubility Index Mixer).
Sifn de Vidrio.
Balanza analtica (Sensibilidad mnima 0,1g).
Agente antiespumante: diglicol- laureatato S o alcohol isoamilitico.
Procedimiento:
1. Pesar 13g de leche en polvo completa (o 10g de leche descremada en polvo) y transferir
al recipiente especial para mezcla, contenido 100ml de agua destilada a 241C.
2. Adicionar 3 gotas del agente antiespumante, cuando se trata de un producto obtenido por
el mtodo tambor; de lo contrario, esta adicin no es indispensable.
3. Mezclar en el aparato diseado para tal fin por exactamente 90 segundos. Dejar en
reposo hasta lograr la separacin de la espuma (no ms de 15 minutos) que puede
eliminarse con una cuchara.
4. Mezclar la solucin con la cuchara por 5 segundos e inmediatamente llenar un tubo de
centrfuga hasta la marca (50 ml).
5. Centrifugar el tubo durante 5 minutos a la velocidad empleada para determinaciones de
grasa por el mtodo de Babcock (Cuadro 2.1).
6. Decantar el liquido separado con ayuda del sifn, teniendo cuidado de mantener el
extremo de este por lo menos 5 cm por encima del sedimento
7. Adicionar aproximadamente 25 mL de agua destilada a 24C y agitar suavemente el tubo
para suspender el sedimento. Puede utilizarse un alambre si se desea. Llenar el tubo hasta la
marca (50 mL) con agua a la misma temperatura y mezclar bien.
8. Centrifugar de nuevo durante 5 minutos a la misma velocidad.
9. Medir el volumen de sedimento en el tubo en mL, mantenindolo contra una fuente
luminosa fuerte. Reportar el resultado como ndice de solubilidad.
II PARTE.
ANLISIS DE QUESOS
INTRODUCCIN
La Norma COVENIN define al queso como el producto fresco o madurado, slido o
semislido que se obtiene:
se haya disuelto por completo, continuar la agitacin por 10 a 15 segundos, para asegurar la
total digestin.
4. Invertir el butirmetro varias veces para mezclar el cido remanente en el cuello.
5. llevar los butirmetros a la centrifuga a 1000 rpm, por 5 min. La centrifuga debe estar
calentada a no menos de 55C
6. Retirar los butirmetros y leer inmediatamente el porcentaje de grasa, haciendo coincidir
la base de la columna con el cero, por medio del ajuste del tapon.
7. Expresar los resultados en porcentaje de grasa en el extracto seco (%GES) y clasificar el
queso de acuerdo a la norma COVENIN: