Espectrofotometria UV Visvel

A espectrofotometria pode ser definida como toda tcnica analtica que usa a luz para medir
as concentraes das solues, atravs da interao da luz com a matria.
A palavra espectro de origem grega foi empregada para nomear raios luminosos em virtude
de na antiguidade as pessoas sepultarem seus mortos em covas rasas, e o simples fato de
algum desavisado pisar em cima, de uma dessas sepulturas fazia com que o gs metano
fosse expelido, visto que corpos em decomposio liberam diversos gases, entre eles o
metano, que apresenta uma propriedade de auto inflamar-se apresentando um aspecto
luminoso intenso. Quando algum era surpreendido por uma bola gasosa dessa ficava
assustado e dizia estar sendo assustado por um fantasma que em grego espectro.
FUNDAMENTO DA ESPECTROFOTOMETRIA

A luz de uma maneira geral mais bem descrita como sendo uma radiao eletromagntica
em virtude de sua natureza dualstica. Ou seja, ela existe e tem um comportamento de
campos eltricos e magnticos oscilantes como a figura abaixo representa:

Onde:
O comprimento de onda () distancia em metros, de um pico ao outro da onda;
A frequncia (v) o grau de oscilao das ondas, em funo da velocidade da luz no vcuo
que representada pela constantec (c=2, 998108m. s-1). De modo que:
.v=c
ESPECTRO
ELETROMAGNTICO
REPRESENTANDO
ONDA CORRESPONDENTE A CADA RADIAO

OS

COMPRIMENTOS

DE

A tcnica espectroscpica baseada na no aumento de energia em funo do aumento da

frequncia da radiao incidida. Quando uma espcie qumica absorve energia na forma de
ftons, seus eltrons ficam excitados e ocorre uma transio de um orbital de mais baixa
energia para outro de maior energia. Um exemplo disso so compostos qumicos que
apresentam duplas ligaes C=C no benzeno e C=O, a carbonila, por exemplo.
Benzeno
As cetonas da ligao peptdica

O aumento de energia representado pela condio de frequncia de Bohr:

E = hv
Onde:
E a energia que aumenta em funo da frequncia, e h a constante de Plank h=6,6261034
J.s.
A transio eletrnica de duplas ligaes, ocorre em virtude de uma ligao dupla ser formada
por um orbital sigma () e um orbital (), de modo que o eltron que est no orbital pi ligante
vai para o orbital pi antiligante que tem maior energia. A transio nas C=C na C=O
representada na figura abaixo, essa espcies qumicas so denominadas cromforos ou
substncias que trazem a cor:

Para C=C : -*
Para C=O : (orbital no-ligante) n-*

Aminocidos como a Fenilalanina, Tirosina e Triptofano so os principais responsveis pela

absoro de luz das protenas em virtude de possurem o anel benznico em sua estrutura
qumica, alm da ligao peptdica listada acima. A luz absorvida na faixa de 280nm.
LEI DE LAMBERT-BEER

A fora vital da espectrofotometria est fundamentada na lei de Lambert-Beer, que

estabelece:
A absorbncia diretamente proporcional a concentrao da soluo de amostra.

Ou:
Log(I/I0)=cl
A= cl
Onde :
A a absorbncia,
o coeficinte de extino molar e
l o comprimento da cubeta.
Os componentes principais de um espectrofotometro, so apresentados e suas respectivas
funes:
Fonte de Luz: composta por uma lmpada de deutrio e uma lmpada de tungstnio,
(semelhante lmpada de carro). A lmpada de deutrio emite radiao UV e a de tungstnio
emite luz visvel.
Monocromador: alguns espectrofotmetros ainda possuem um prisma como monocromador,
porm os mais modernos possuem dispositivos eletrnicos que transformam a luz incidida em
vrios comprimentos de onda, em um s comprimento, ou seja, a luz monocromtica.

Cubetas utilizadas em espectrofotometria. Geralmente usa-se cubeta de 1 cm, a fim de

facilitar os clculos da Lei de Lambert-Beer.
Cubeta: o recipiente propcio para conter a amostra que ser utilizada na anlise, as
cubetas podem ser de quartzo, vidro e acrlico, porm recomenda-se que seja usada uma
cubeta de quartzo por que o vidro e o plstico absorvem UV e causa a reflexo da luz visvel.
Detector: o detector um dispositivo que detecta a frao de luz que passou pela amostra e
transfere para o visor e para o computador acoplado ao aparelho.
ANLISE ESPECTROFOTOMTRICA

Passo 1: a amostra deve ser preparada com a quebra da amostra por mtodos mecnicos,
qumicos ou fsicos;
Passo 2: a amostra solubilizada no solvente escolhido em um balo Volumtrico limpo e
seco;

IMPORTANTE: o solvente na maioria das vezes gua, porm, quando tratar-se de amostras
apolares que precisam ser diludas em solvente orgnico nunca utilize alcenos, alcinos,
cetonas ou qualquer outro que tenha ligaes C=C ou C=O ou triplas.
Passo 3: em uma cubeta colocado o solvente puro e lido no comprimento de onda o mesmo
que ser lida a amostra, esse procedimento chamado leitura em branco, e tem como
finalidade minimizar os erros causados, pela absoro luz ocasionados pelo vidro e pela
gua;
Passo 4: a amostra filtrada em uma membrana de 0,2 m, por que a soluo deve estar
totalmente lmpida a fim de diminuir ao mximo o erro causado por partculas em suspenso,
a cubeta contendo o branco e retirado do equipamento e sua absoro anotada. Aps esse
processo a soluo de interesse lida, e dessa absorbncia subtrado a leitura do branco.
CUIDADOS EM ESPECTROFOTOMETRIA

imprescindvel que o equipamento seja calibrado e manuseado de acordo com as

instrues do fabricante, por ele j traz a margem de erro que o aparelho tem;
Evitar erros de leitura certificar-se de que o equipamento esteja fechado. Antes da
leitura a luz do ambiente pode interferir no resultado;
Manter sempre limpo e fechado a fim de evitar o acumulo de partculas de poeira que
interferem na anlise. Em hiptese alguma toque a cubeta com as mos sem luvas, a nossa
mo contm gorduras e interferem na leitura.
S podem ser analisados por espectrofotometria de absoro compostos que
absorvem luz.
Em caso de solues fortemente coloridas como permangantos, complexos altamente
coloridos, dicromatos, cromatos e outros compostos com cores altamente acentuadas
devero ser feitas no mnimo 5 diluies de concentrao conhecida e lidas no
espectrofotmetro e uma curva analtica dever ser traada afim de determinar o coeficiente
de extino molar. Solues muito concentradas tendem provocar erros de leitura por que
existem muitas molculas prximas umas das outras.