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MODULO REPRODUCCION ANIMAL AVANZADA
EDWIN MANUEL PAEZ BARON

Mdico Veterinario Zootecnista
Esp. en Sanidad Animal
MSc en Educacin Superior
Estudiante Doctorado en Desarrollo Sostenible
Universidad Nacional Abierta y a Distancia

Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
CEAD TUNJA
2012
TABLA DE CONTENIDO
UNIDAD 1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD REPRODUCTIVA.

CAPITULO 1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD OVARICA.
Leccin 1. Ovognesis.
Leccin 2. Foliculognesis.
Leccin 3. Ondas de desarrollo folicular. Reclutamiento.
Leccin 4. Seleccin.
Leccin 5. Dominancia
CAPITULO 2. INDUCCIN Y SINCRONIZACIN DE CELO.
Leccin 6. Tcnicas de sincronizacin del celo
Leccin 7. Induccin y sincronizacin del celo en bovinos.
Leccin 8. Induccin y sincronizacin del celo en equinos.
Leccin 9. Induccin y sincronizacin del celo en ovinos.
Leccin 10. Induccin y sincronizacin del celo en porcinos.
CAPITULO 3. PROGRAMAS DE INSEMINACON ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO

Leccin 11. Aspectos generales
Leccin 12. Protocolo de sincronizacin de celo mediante el uso de GnRH
(ovsynch).
Leccin 13. Variantes del protocolo Ovsynch.
Leccin 14. Protocolo de sincronizacin de celo mediante el uso de dispositivos
intravaginales.
Leccin 15. Protocolo de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin para
una segunda IATF.
UNIDAD 2. INSEMINACION ARTIFICIAL Y TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
CAPITULO 1. COLECTA Y EVALUACION DE SEMEN.

Leccin 16. Aspectos generales.
Leccin 17. Evaluacin de la libido.
Leccin 18. Colecta y evaluacin de semen.
Leccin 19. Colecta y evaluacin de semen bovino y ovino.
Leccin 20. Colecta y evaluacin de semen porcino.
CAPITULO 2. INSEMINACION ARTIFICIAL.

Leccin 21. Historia de la inseminacin artificial
Leccin 22. Tcnica de Inseminacin artificial.
Leccin 23. Tcnica de Inseminacin artificial en equinos.
Leccin 24. Tcnica de Inseminacin artificial en ovinos.
Leccin 25. Tcnica de Inseminacin artificial en porcinos.
CAPITULO 3. TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

Leccin 26. Seleccin y manejo de donantes y receptoras.
Leccin 27. Colecta y evaluacin de embriones
Leccin 28. Transferencia de embriones
Leccin 29. Criopreservacin de embriones.
Leccin 30. Transferencia de embriones en equinos.
UNIDAD 3. ULTIMAS BIOTECNOLOGIAS REPRODUCTIVAS APLICADAS A LA

PRODUCCION ANIMAL.
CAPITULO 1. FERTILIZACION IN VITRO.

Leccin 32. Obtencin de ovocitos.
Leccin 33. Maduracin de ovocitos in vitro
Leccin 34. Fertilizacin in vitro.
Leccin 35. Maduracin y transferencia de embriones.
CAPITULO 2. CLONACION Y TRANSGENESIS.

Leccin 37. Mtodos de clonacin.
Leccin 38. Tcnica de clonacin.
Leccin 39. Transgnesis.
Leccin 40. Tcnicas de obtencin de animales transgnicos.
CAPITULO 3. SEXAJE DE SEMEN, QUIMERAS, ICSI, CELULAS MADRE

Leccin 42. Sexaje de semen.
Leccin 43. Produccin de quimeras.
Leccin 44. Inyeccin intracitoplasmtica de semen.
Leccin 45. Produccin de clulas madre
LISTADO DE FIGURAS
Fig 1. Folculo primordial.

Fig. 2. Folculo primario.
Fig. 3. Folculo secundario.
Fig. 4. Folculo terciario.
Fig 5. Dinmica folicular durante un ciclo estral bovino.
Fig. 6. Protocolo Ovsynch.
Fig. 7. Protocolo Cosynch.
Fig. 8. rganos internos del aparato reproductor masculino.
Fig. 9. La libido representa el impulso sexual del macho.
Fig. 10. La evaluacin morfolgica del semen.
Fig. 11. Anormalidades espermticas.
Fig. 12. Medicin de la concentracin espermtica.
Fig. 13. Hemotocitmetro o cmara de Neubauer.
Fig. 14. Colecta de semen de carnero.
Fig. 15. Colecta de semen del verraco.
Fig. 16. Determinacin del tiempo de monta o inseminacin.
Fig. 17. Seleccin de la pajilla.
Fig. 18. Proceso de inseminacin artificial.
Fig. 19. Seguimiento ecogrfico de la ovulacin.
Fig. 20. Inseminacin artificial en la yegua.
Fig. 21. Inseminacin artificial en la oveja.
Fig. 21. Inseminacin artificial laparoscpica en la oveja.
Fig. 22. Inseminacin artificial laparoscpica en la oveja.
Fig. 23. Inseminacin artificial en la cerda.
Fig. 24. Lubricacin del catter.
Fig. 25. Insercin del catter.

Fig. 26. I.A en la Cerda.
Fig. 27. Diversos tipos de catter utilizados en la I.A porcina.
Fig. 28. Termos de inseminacin.
Fig. 29. Ovarios superovulados.
Fig. 30. Proceso de colecta de embriones.
Fig. 31. Embriones en diferentes etapas de desarrollo.
Fig. 32. Embriones colectados.
Fig. 33. T.E en equinos.
Fig. 34. Proceso de FIV.
Fig. 35. Proceso de clonacin.
Fig. 36. Clonacin por transferencia nuclear.
Fig. 37. Enucleacin.
Fig. 38. Transferencia nuclear.
Fig. 39. Ovocito con ncleo.
Fig. 40. Electrofusin.
Fig. 41. Cultivo.
Fig. 42. Transferencia embrionaria.
Fig. 43. Clonacin en las diferentes especies.
Fig. 44. Oveja Dolly y su creador.
Fig. 45. Lady, la primera ternera clonada.
Fig. 46. Pampa mansa.
Fig. 47. Manuel.
Fig. 48. Victoria.
Fig. 49. Prometea y su progenitora.

Fig. 50. Snuppy.
Fig. 51. El primer cachorro clonado comercial.
Fig. 52. Caninos clonados.
Fig. 53. Citmetro de flujo.
Fig. 54. Citometra de flujo en la produccin de semen sexado.
Fig. 55. Inyeccin del espermatozoide.
Fig. 56. ICSI.
Fig. 57. Produccin de clulas madre.
LISTADO DE TABLAS
Tabla 1. Protocolo Ovsynch.

Tabla 2. Protocolo Cosynch.
Tabla 3. Protocolo Cosynch 72 horas.
Tabla 4. Protocolo para novillas.
Tabla 5. Protocolos para vacas en lactancia.
Tabla 6. Dispositivo intravaginal + GnRH.
Tabla 7. Protocolos de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin
Novillas.
Tabla 8. Protocolos de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin Vacas
en lactancia.
Tabla 9. Protocolos de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin de los
retornos al celo para una segunda IATF Novillas.
Tabla 10. Protocolos de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin de los
retornos al celo para una segunda IATF Vacas en lactancia.
Tabla 11. Protocolo de superovulacin y sincronizacin del celo (vacas).
Tabla 12. Protocolo de superovulacin y sincronizacin del celo (Novillas).
Tabla 13. Protocolo de superovulacin con eCG.
Tabla 14. Desarrollo del embrin.
Tabla 15. Escala de clasificacin embrionaria.
Tabla 16. Avances de la transgnesis.
INTRODUCCION
El curso de reproduccin avanzada comprende el conocimiento de las

biotecnologas de la reproduccin aplicada a la produccin de las especies
domesticas. Se hace un recorrido desde los inicios de la biotecnologa con los
procesos de conocimiento de la fisiologa ovrica y su manipulacin, pasando por
la inseminacin artificial, la sincronizacin de celo, la transferencia de embriones,
la fertilizacin in vitro y las ltimas biotecnologas disponibles en el mercado, tales
como el semen sexado, la inyeccin intracitoplasmtica de semen, la clonacin, la
transgnesis y la produccin de clulas madre embrionarias.
El objetivo del curso es que el estudiante conozca, aplique y verifique las diversas
tcnicas disponibles para el mejoramiento de la eficiencia y la rentabilidad de las
explotaciones pecuarias.
Se pretende brindar un conocimiento acerca de la
evolucin de las biotecnologas y su aplicacin en los diversos campos de la

produccin animal, en este sentido, el estudiante debe conocer las herramientas
disponibles y con base en su propio criterio definir cules pueden ser aplicadas en
la produccin animal.
El estudiante es el responsable de su proceso de aprendizaje, y en tal sentido el

curso brinda las herramientas necesarias para el desarrollo de las habilidades y
destrezas que requiere para su futuro desempeo como profesional de las
ciencias pecuarias. El curso involucra actividades individuales y grupales,
desarrollas en las tres fases de aprendizaje (reconocimiento, profundizacin y
transferencia) que permitirn al estudiante explotar sus diversas capacidades y
habilidades de conocimiento con el fin de dar solucin prctica a los casos que va
a tener que enfrentar en su vida profesional.
Es importante sealar que la educacin a distancia involucra la participacin de

mltiples medios y mediaciones pedaggicas, entre las cuales se destacan: los
videos,
las presentaciones, las animaciones, los encuentros sincrnico y
asincrnico (foros, chat), las prcticas pedaggicas, las visitas, las lecciones, los
cuestionarios, entre otros.
El curso pretende brindar al estudiante la gua para desarrollar su proceso de

aprendizaje, y con base en este pueda investigar, conocer, aplicar y desarrollar un
conocimiento profundo en las biotecnologas de la reproduccin aplicadas a la
produccin animal.
UNIDAD 1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD REPRODUCTIVA
OBJETIVOS
Comprender los cambios fisiolgicos ocurridos en el ovario y sus

estructuras durante el ciclo estral.
Identificar las hormonas y los elementos que producen dichos cambios
durante el ciclo estral.
Identificar los protocolos y productos utilizados en los programas de
sincronizacin de celo e inseminacin artificial a tiempo fijo.
ESTRUCTURA
CAPITULO 1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD OVARICA.
Leccin 2. Foliculognesis.
Leccin 3. Ondas de desarrollo folicular. Reclutamiento.
Leccin 4. Seleccin.
Leccin 5. Dominancia
CAPITULO 2. INDUCCIN Y SINCRONIZACIN DE CELO.
Leccin 6. Tcnicas de sincronizacin del celo
Leccin 7. Induccin y sincronizacin del celo en bovinos.
Leccin 8. Induccin y sincronizacin del celo en equinos.
Leccin 9. Induccin y sincronizacin del celo en ovinos.
Leccin 10. Induccin y sincronizacin del celo en porcinos.
CAPITULO 3. PROGRAMAS DE INSEMINACON ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO
(ovsynch).
Leccin 13. Variantes del protocolo Ovsynch.
Leccin 14. Protocolo de sincronizacin de celo mediante el uso de dispositivos
intravaginales.
Leccin 15. Protocolo de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin para
una segunda IATF.
UNIDAD 1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD REPRODUCTIVA

CAPITULO 1. OVOGNESIS Y DINMICA FOLICULAR .
La ovognesis consiste en el proceso de formacin y desarrollo del ovocito. Este
proceso inicia en las fases tempranas de la vida fetal de la hembra bovina,
aproximadamente entre los 120 y 140 das de gestacin y finaliza con la formacin
de un determinado nmero de folculos primordiales. La ovognesis involucra tres
fases: una fase proliferativa en que las ovogonias (OO) se dividen activamente,
una fase meitica que permite la formacin de los ovocitos primarios y una tercera
fase de intensa degeneracin de las clulas germinales primordiales (CGP). Los
ovocitos que sobreviven a sta fase degenerativa son detenidos en el estado de
diploteno de la primera divisin meitica y estn rodeados por una simple capa de
clulas de la granulosa (CG), sta estructura recibe el nombre de folculo
primordial (Pea, Gngora y Estrada, 2007). De acuerdo a lo reportado por Gigli,
Russo y Agero (2006), las ovogonias se diferencian en ovocitos cuando
comienzan la meiosis, en embriones de ratn la divisin por mitosis comienza
alrededor del da 14-16 de gestacin y culmina el da 20, dando lugar a la divisin
meitica; en el bovino se observan figuras meiticas a partir del da 82 de
gestacin; en el equino, la multiplicacin de las ovogonias por mitosis comienza
alrededor del da 50 de gestacin y contina hasta el da 150-160. A partir del da
102 se observan en el ovario de embrin equino todos los estadios de divisin
meitica si bien son pocos los folculos primordiales que se forman, ya que la
mayora de los ovocitos se degeneran antes de rodearse de las clulas de la
granulosa.
Por otro lado, Fernndez (2003) plantea que en casi todas las especies de
mamferos no se produce divisin mittica de la clula germinal femenina despus
del nacimiento, de manera que, el nmero de ovocitos presentes al nacimiento
representa el total disponible durante la vida del animal. A diferencia del macho
en el cual se puede producir celular sexuales en la vida posnatal. En el feto

bovino, la ovogonia se desarrolla de las clulas primordiales germinales que han
migrado hasta el ovario durante la embriognesis temprana y prolifera alrededor
del da 50 hasta el da 130 de la gestacin. Un proceso de degeneracin ovogonial
comienza alrededor del da 95 de la vida fetal y la mayora de los ovocitos
producidos durante este perodo (60% o ms) son eliminados del ovario antes del
parto. Un segundo evento de desarrollo se inicia a los 80 das de la vida fetal
cuando la ovogonia inicia la meiosis. Este proceso se detiene en todos los
ovocitos en el estadio diploteno de la profase meitica. Acompaando estos
cambios nucleares estn la formacin del folculo primordial, la diferenciacin de
una capa de clulas aplanadas que lo envuelven conocida como clulas de la
granulosa, el establecimiento de una lmina basal rodeando la granulosa y la
diferenciacin de una capa de clulas de teca exteriores a la lmina basal. La
poblacin de folculos primordiales puede considerarse como una cuenta en la
cual la foliculognesis es un retiro, comenzando al inicio de la vida fetal y
continundose en la pubertad y en los perodos reproductivos de la vida del animal
(Fernndez, 2003).
Leccin 2. Foliculognesis
La foliculognesis o desarrollo folicular es un proceso continuo que se da en las
hembras de todas las especies domsticas, y que da como resultado la ovulacin
de un folculo maduro o la regresin o involucin del mismo. Este proceso es el
resultado de la interaccin de mltiples componentes celulares que constituyen el
folculo y de mltiples factores que son producidos en el ovocito, en las clulas de
la granulosa (CG) o en las clulas de la teca (CT), y que son controlados bajo el
influjo de diferentes factores autocrinos, paracrinos o endocrinos (Velsquez y
Mendieta, 1999).
En la foliculognesis, un folculo primordial entra al grupo de crecimiento, y es
conducido a uno de dos hechos:
la degeneracin por atresia (sufrida por el 99%
o ms) o la ovulacin alcanzada por muy pocos (menos del 1%). El periodo de
tiempo que se requiere desde la activacin de un folculo primordial durmiente
hasta su ovulacin, es de aproximadamente 180 das en los bovinos.
Los
folculos primordiales, se caracterizan por el ovocito I detenido en la profase de

su primer divisin meitica (diploteno) rodeado por una capa plana de clulas de la
granulosa. Estos folculos forman la reserva gametognica o poblacin de folculos
de reserva, que una hembra va a utilizar en toda su historia reproductiva, a partir
de estos folculos de reserva se originan los folculos de crecimiento, en las
potrancas se estima la existencia de entre 36.000-46.000 folculos primordiales en
el ovario, en los bovinos de 25.000 a 42.000 folculos primordiales (Gigli, Russo y
Agero 2006).
Fig 1. Folculo primordial. Este se encuentra rodeado por una capa plana de clulas de la
granulosa.
Fuente: http://www.telmeds.org/AVIM/Aembrio/Imagenes/Foliculo%20primordial.jpg
Posteriormente el folculo primordial contina su desarrollo a los denominados

folculos preantrales: folculo primario y folculo secundario. En el folculo
primario las clulas planas de la granulosa antes de comenzar a dividirse por
mitosis se diferencian en una capa de clulas de forma cbica que rodea al
ovocito I y la teca interna comienza su diferenciacin. El folculo secundario, es
aquel en el cual se completa la proliferacin de las clulas de la granulosa y las

mismas aumentan de tamao.
Fig. 2. Folculo primario. Las clulas planas se convierten en clulas de forma cubica.
Fuente: http://virtual.ujaen.es/atlas/ovario/ova rio100x1foliculos1.jpg
Fig. 3. Folculo secundario. En este las clulas de la granulosa aumentan de tamao.

Fuente: http://lh4.ggpht.com/_1tDfjMtTyDc/Ro76fLp5srI/AAAAAAAAABQ/dq3 -PMEe-cA/ foliculo+primario2.jpg
Posteriormente, se produce la formacin de la cavidad del folculo, y el folculo se

denomina antral o terciarios, estos folculos antrales se pueden encontrar en el
ovario bovino con dimetros comprendidos en el rango de 0.1 a 20 mm
(Fernndez, 2003). Los folculos terciarios se caracterizan por estar rodeados de

varias capas cbicas de clulas de la granulosa que comienzan a secretar un
trasudado que se denomina lquido folicular, que al acumularse produce un
reordenamiento de las mismas en clulas del cmulo y murales (Gigli, Russo y
Agero 2006).
Fig. 4. Folculo terciario. Las clulas de la granulosa comienzan a secretar un trasudado que
se denomina lquido folicular.
Fuente: http://www.telmeds.org/AVIM/Aembrio/foliculo_de_De_Graaf.gif
Por ltimo se encuentran los folculos preovulatorios o folculos de De Graaf,

los cuales son los folculos que se encuentran listos para ovular. En la yegua el
folculo preovulatorio es mayor a 35 mm, en la vaca entre 10 a 20 mm y en la
llama entre 10 a 18 mm (Gigli, Russo y Agero, 2006).
En los mamferos, la hembra cuenta con una reserva de ovocitos que han
interrumpido su crecimiento en los folculos primordiales, nica fuente de ovocitos
para ser ovulados durante su vida reproductiva. Los folculos primordiales se
forman durante la vida fetal en bovinos (130 das), ovinos y porcinos (70 das), o
alrededor del nacimiento en roedores (Espinoza y col, 2007).
Dentro de este marco, es vlido sealar que gracias
a la utilizacin de la
ultrasonografa, se logr determinar que el desarrollo folicular se produce de

manera peridica en las denominadas ondas de desarrollo folicular.
Leccin 3. Ondas de desarrollo folicular
Una onda de desarrollo folicular
se define como el desarrollo armnico y
simultneo de un pool de folculos antrales (terciarios) pequeos, en promedio 24

por onda con un rango de 8 a 41, funcionando en tres fases a saber:
reclutamiento, seleccin y dominancia folicular (Fernndez, 2003). En los
bovinos durante un ciclo estral normal se puede observar la presencia de dos o
tres ondas foliculares por ciclo.
A continuacin se detallan las fases que
componen las ondas de desarrollo folicular:

Reclutamiento:
Esta
fase
es un proceso regulado por
la Hormona
foliculoestimulante (FSH), consiste en que un conjunto de folculos antrales

tempranos (2-3 mm de dimetro) comienzan a crecer en un medio con suficiente
soporte gonadotrfico que les permita progresar a la ovulacin. El reclutamiento
folicular se refiere a la formacin de una poblacin de folculos antrales de donde
uno o varios, dependiendo de la especie (monotoca o politoca), es seleccionado
para la ovulacin. En cada ciclo ovrico es reclutado un grupo de folculos
primordiales que crecen de manera continua debido a los incrementos en las
concentraciones de FSH. Cuando la FSH alcanza el pico de concentracin, los
folculos ms grandes de la onda tienen un dimetro de aproximadamente cuatro
(4) mm (Espinoza, et al, 2007).
Leccin 4. Seleccin.
En este proceso uno de los folculos que ha iniciado su crecimiento, evade la
atresia y adquiere la competencia para alcanzar la ovulacin. La seleccin folicular
ocurre al final de la fase comn de crecimiento. El folculo dominante crece a una
tasa constante y el resto de los folculos subordinados sufren atresia o
temporalmente crecen a una velocidad menor y posteriormente dejan de hacerlo.
A este fenmeno se le ha denominado desviacin. La desviacin durante la oleada
folicular en bovinos empieza con una reduccin en la tasa de crecimiento de los
folculos subordinados; en contraste, se presenta una tasa de crecimiento
constante en el folculo dominante (Espinoza, et al, 2007).
Leccin 5. Dominancia.
En esta fase el folculo seleccionado inhibe o impide el reclutamiento de una
nueva serie de folculos. La dominancia folicular en la vaca se caracteriza por dos
fenmenos: la divergencia en el crecimiento entre el folculo mayor y el segundo
mayor; y una disminucin del nmero de folculos perqueos correlacionada con el
crecimiento del folculo mayor.
Fuente: http://www.scielo.org.ve/img/fbpe/inci/v32n2/art06fig1.jpg
Fig. 5. Dinmica folicular durante un ciclo estral bovino
El desarrollo folicular es controlado por diversas hormonas y protenas

provenientes de la hipfisis, el cuerpo lteo y de los folculos. De acuerdo con B
(2006), se ha observado que cada onda folicular est siempre precedida por un
pico de FSH, razn por la cual se cree que este pico es fundamental para que los
folculos antrales pequeos ingresen al pool de folculos grandes que se observan
en la onda folicular. Una vez se ha dado inicio a la onda, el folculo dominante
comienza a producir grandes cantidades de estradiol e inhibina que actuarn a
nivel hipotalmico-hipofisiario inhibiendo la liberacin de FSH, con poca FSH
circulante los folculos subordinados comienzan a regresar. Al mismo tiempo, el
folculo dominante puede seguir creciendo debido a que es ms eficiente en la
utilizacin de la baja FSH circulante y la adquisicin de receptores de Hormona
luteinizante (LH) en las clulas de la granulosa (adems de los que se encuentran
en la teca).
CAPITULO 2. INDUCCIN Y SINCRONIZACIN DE CELO EN LAS

ESPECIES DOMSTICAS.
Leccin 6. Tcnicas de sincronizacin de celo.
El conocimiento de la dinmica folicular es importante para la aplicacin y el xito

de sincronizacin de celos. Actualmente existen tres (3) tipos de tcnicas de
sincronizacin: Prostaglandina F2 alfa (PGF2) y sus anlogos; Progesterona o
progestgenos sintticos combinados con estrgenos y gonadotropina corinica
equina (eCG o PMSG); Hormona liberadora de Gonadotropinas (GnRH).
Tcnicas de sincronizacin mediante el uso de prostaglandinas y sus
anlogos. Las tcnicas de sincronizacin de celos con PGF2 o sus anlogos; se
emplean rutinariamente en las diversas especies domsticas. Se basan en la
capacidad de las prostaglandinas para provocar la regresin morfolgica y
funcional del cuerpo lteo del ciclo (luteolisis); como consecuencia de su accin
slo se puede aplicar en animales cclicos y durante la fase luteal del ciclo.
(Fernndez, 2003). El tiempo que tarda en producirse el celo y la ovulacin desde
que baja el nivel de progesterona es inversamente proporcional al tamao del
folculo dominante en el momento de aplicacin de la prostaglandina.
Tcnicas de sincronizacin mediante el uso de progestgenos. Este mtodo

de induccin y sincronizacin de celos se desarroll a principios de los aos
setenta, mucho antes de tener un conocimiento exacto de la dinmica folicular. La
mayora de productos viene en forma de dispositivo (Intravaginal o auricular). Su
mecanismo de accin se basa en la simulacin de la accin del cuerpo lteo, por
ende, el progestgeno o progesterona tiene como misin producir un bloqueo del
hipotlamo, de manera que impedir, independientemente de la existencia de un
cuerpo lteo, que se produzcan ovulaciones mientras que los animales conserven
el dispositivo. Adems provoca una replecin de gonadotrofinas hipofisarias que

se liberan bruscamente al retirarlo.
Tcnicas de sincronizacin mediante el uso de GnRH. La propuesta bsica de

este mtodo consiste en lograr sincronizar eficientemente una onda folicular para
llevarla a la ovulacin en un momento esperado, permitiendo inseminar los
animales an sin presencia de celo evidente, ya que lo que interesa es tener un
vulo en el tero y no un celo en el animal (Fernndez, 2003).
A continuacin se describen los programas de sincronizacin de celo en las

principales especies domsticas.
Leccin 7. Sincronizacin de celo en bovinos.

La sincronizacin de celo en bovinos, ha sido un tema de varios estudios
encaminados a estandarizar una tcnica que permita la manipulacin del ciclo
estral con el objetivo de programar los eventos reproductivos del hato o de la
explotacin y con ello contribuir a mejorar la eficiencia reproductiva.
Los primeros intentos y ensayos de manipulacin del ciclo estral en bovinos fueron
realizados en 1948, en ese entonces Christian y Casida utilizaron la progesterona
con el fin de bloquear la funcin reproductiva de los animales tratados, una vez
suspendieron su aplicacin, un gran nmero de los animales presentaron
sntomas de celo Posteriormente, Wiltbank y Kasson en el ao de 1968,
adicionaron
al inicio del tratamiento con progesterona, la aplicacin de un
estrgeno: el Valerato de estradiol, el cul cumplia una funcin de efecto

luteoltico, con lo cual se increment el porcentaje de presentacin de celos en los
animales tratados, adems de permitir una reduccin en el tiempo de aplicacin de
la progesterona (Becaluba 2007).
Posteriomente, en el ao de 1972, Rowson y col. (citado por Becaluba, 2007)

ensayaron un protocolo para la
sincronizacin de celo en bovinos utilizando
Prostaglandina F2, la cual gracias a un efecto luteoltico inducia la regresin del

cuerpo lteo, y permita el inicio de un nuevo ciclo estral.
Con base en estos estudios previos, es que se han establecido una gran variedad
de protocolos encaminados a la manipulacin del ciclo estral y a su duracin, ya
sea acortando la fase luteal (agentes luteolticos) o alargando la fase luteal
(agentes progestgenos).
Sincronizacin con Prostaglandina F2. La utilizacin de la PGF2 y sus

anlogos en los programas de sincronizacin de celo, ha sido ampliamente
desarrollada en los ltimos aos, en gran parte debido a los bajos costos que
representa su uso. Su efecto fisiolgico consiste en causar la regresin del Cuerpo
lteo (CL) a partir del da 5 del ciclo estral y su efecto luteoltico es mximo entre
los das 12 y 17 del ciclo. Sin embargo, el estadio del folculo dominante en el
momento de la aplicacin de la PGF2 va a producir una variacin del momento
del celo y la ovulacin de 2 a 7 d.
Los tratamientos tradicionales con PGF2
utilizan dos dosis con 11 a 14 das de intervalo y deteccin por 5-7 das despus
de la segunda aplicacin de PGF2. Tericamente, estas dos aplicaciones de
PGF2 son efectivas cuando hay una gran proporcin de hembras ciclando y un
80% de ellas deberan ser observadas en celo, pero los problemas de deteccin
de celos hace que el porcentaje real de hembras detectadas en celo, no superen
el 50% (B, et al, 2004).
Sincronizacin con GnRH y PGF. Protocolo Ovsynch. La utilizacin de GnRH

ha sido un tratamiento hormonal muy popular de control del desarrollo folicular en
los ltimos tiempos. Se ha demostrado que la GnRH inducir la ovulacin del
folculo dominante presente al momento del tratamiento, y se han desarrollado
protocolos que utilizan GnRH y PGF2 para IATF en ganado de carne o leche.
Este protocolo es conocido con el nombre de Ovsynch, y se explicar en en
capitulo de Inseminacin a tiempo fijo (IATF).
Sincronizacin con Progestgenos. Los progestgenos son compuestos

similares a la progesterona que estn en el mercado desde hace varios aos y se
usan para sincronizar el celo en programas de IATF. El uso de estrgenos y
progestgenos para controlar el desarrollo folicular se basa en el potente efecto de
la combinacin de estos esteroides sobre las gonadotrofinas. El protocolo ms
utilizado, consiste en administrar 2 mg de benzoato de estradiol (BE) por va
intramuscular (IM) en el momento de la insercin del dispositivo intravaginal con
progesterona (P4; da 0), para sincronizar el desarrollo folicular. En el da 7 se
retira el dispositivo intravaginal y se administra PGF2 (para inducir la lutelisis), y
en el da 8 se coloca 1 mg de BE para sincronizar la ovulacin. Se realiza la IATF
entre las 52 y 56 h del retiro del dispositivo ya que la mayora de los animales
ovulan en promedio a las 66 h (B, et al, 2004).
Leccin 8. Induccin y sincronizacin de celo en equinos.
En los equinos la sincronizacin de celo, se realiza con el fin de suprimir el estro

en aquellas yeguas de exposicin o competencia. As como para inducir en celo,
en yeguas con problemas de anestro o celos silentes.
Sincronizacin de celo mediante el uso de progestgenos. La sincronizacin
de celo en las yeguas se puede hacer mediante el uso de progestgenos de usos
oral, uno de los progestgenos ms utilizados es el altrenogest, la dosis a
administrar es de 0.044 mg/kg una vez al da. La duracin del tratamiento depende
del objetivo que se quiera lograr mediante el mismo (Intervet, 2009).
Si se desea adelantar o acelerar la presentacin del celo regular, la yegua debe

estar en celo contar con uno o varios folculos de 20 mm o ms de dimetro en
alguno de sus ovarios, si esto es as, se suministra altrenogest, durante un periodo
de 15 das. Para la sincronizacin del celo en yeguas cclicas, se debe suministrar
altrenogest, durante 10 das, posteriormente
al da 11 se aplica una dosis de
prostaglandina con el fin de causar la lisis de algn cuerpo lteo que produzca
progesterona endgena. Si se desea suprimir la presentacin del celo, en yeguas
que van a participar en
eventos deportivos (salto, carreras, etc.). Existen dos
protocolos de tratamiento:
1. Administrar altrenogest durante 15 das y luego permitir a la yegua entrar en
calor. Despus de la ovulacin, se presenta el diestro, que dura aprox. 2
semanas y durante el cual no se requiere la administracin de altrenogest.
Despus de transcurridas las 2 semanas se inicia nuevamente el
tratamiento durante 15 das. Este tratamiento puede adaptarse a cada
yegua en particular.
2. Si
se
quiere
suprimir
el
celo
una
sola
vez:
Se debe iniciar el tratamiento por lo menos 4 das antes de la competencia

(0.044
mg/kg
p.v.)
interrumpirlo
despus
de
la
misma.
O se puede administrar altrenogest durante 60 das seguidos e interrumpir

el tratamiento para permitir a la yegua entrar en calor. Una vez terminado
ste,
se puede iniciar nuevamente la administracin del producto.
El tratamiento puede iniciarse en cualquier da, sin importar si la yegua est

en calor o no. Si la yegua esta en calor cuando se empieza a administrar
altrenogest, tardar por lo menos 3 das despus de iniciado el mismo, en
salirse de calor (Intervet, 2009).
Sincronizacin de celo mediante el uso de dispositivos intravaginales. Se

han realizado diversos estudios para evaluar el uso de dispositivos intravaginales
en los programas de sincronizacin de celo en yeguas, y estos han tenido diversos
resultados. Uno de los protocolos ms utilizados es aquel en el que se utiliza el
dispositivo intravaginal de uso bovino que contienen progesterona de lenta

liberacin (PRID, DIV-B, TRIUB) ya que no existen comercialmente
dispositivos para uso en equinos. El dispositivo debe insertarse via vaginal de la
manera ms higinica posible, y se mantiene por un tiempo de doce (12) das, al
cabo al cabo de los cuales es retirado. El celo puede observarse a partir de las 24
hasta las 94 horas despus del retiro del dispositivo (Wilde, De la Vega y Cruz,
2002).
Leccin 9. Induccin y sincronizacin de celo en ovinos
En Colombia, la explotacin ovina se ha desarrollado de una manera tradicional,

con un manejo de tipo extensivo y poco tecnificado, sin embargo, gracias al
avance de la biotecnologa y a la bsqueda de nuevas alternativas y nuevos
mercados, este tipo de explotacin ha adquirido gran
importancia durante los
ltimos aos, conllevando a las bsqueda de alternativas para incrementar la

eficiencia y productividad de la explotacin.
En este sentido, la sincronizacin de celo se constituye en una herramienta

biotecnolgica que recin se est implementando en nuestro pas, aunque est es
una prctica tradicional en otros pases con vocacin ovina, tales como Uruguay y
Mxico.
A continuacin se describen los principales mtodos de sincronizacin de celo en

ovinos.
Sincronizacin mediante el uso de prostaglandinas. Consiste en la aplicacin

de dos dosis de prostaglandina F2alfa (PGF2) con un intervalo de 10 das entre
la primera y la segunda aplicacin. La presentacin del celo se puede dar entre las
40 y 70 horas posteriores a la ltima dosis aplicada (Raso, Buratovich y Villa,
2004).
.
Sincronizacin mediante el uso de progestgenos. Consiste en la aplicacin

intravaginal
de
dispositivos
esponjas
impregnados
con
acetato
de
medroxiprogesterona (MAP), el cual es un analgo sinttico de la progesterona,

estos se deben dejar durante 12 das consecutivos, al cabo de los cuales se retira
el dispositivo y se aplican 300 Unidades internacionales (UI) de Gonadotropina
corinica equina (eCG o PMSG). La presentacin del celo se dar entre las 24 y
72 horas posteriores a la aplicacin de la eCG (Raso, Buratovich y Villa, 2004). En
nuestro pas no se encuentran disponibles comercialmente este tipo de
dispositivos, por lo cual muchas veces son elaborados con espuma y niln, y luego
son impregnados con el MAP.
Leccin 10. Induccin y sincronizacin de celo en porcinos
La sincronizacin de celo en cerdas se pretende utilizar al mximo las

instalaciones de una granja porcina, sobre todo en aquellas de ciclo completo, ya
que al sincronizar en celo y por ende que entren en calor un grupo de cerdas para
que se les de servicio, permitir conocer con anticipacin algunos eventos tales
como: fecha probable de parto, fecha probable de destete, fecha probable de
venta (ngeles, 1999). A continuacin se sealan algunos de los protocolos de
induccin de celo en las cerdas:
Sincronizacin de celo mediante el uso de progestgenos por va oral. En los

programas de sincronizacin de celo en cerdas prepuberes se ha utilizado el
altrenogest, el cual es un progestgeno sinttico de uso oral (Mazarri, 1984). En
cerdas nulparas que se encuentren ciclando la dosis a suministrar es de 20 mg
diarios durante 18 das consecutivos, al cabo de los cuales se suspende su
suministro y se dar lugar a la presentacin del celo de 3 a 5 das despus. En
cerdas multparas el tratamiento se inicia en el momento del destete,
suministrando 20 mg diarios durante 5 das consecutivos, el celo se podr

presentar entre los 2 y 3 das despus de que se suspende el tratamiento.
Es importante sealar que la presentacin del celo podr variar de acuerdo a las
condiciones medioambientales y al manejo productivo y reproductivo de cada
explicacin (Intervet, 2009).
Sincronizacin de celo mediante el uso de agentes luteolticos. El uso de la

prostaglandina como sincronizador de celo en los porcinos es muy limitado. Lo
anterior, debido a que en la cerda, el cuerpo lteo solo es sensible a la
prostaglandina a partir del da 12. Si se aplica prostaglandina en cerdas la
respuesta depender de la fase del ciclo estral en la que se encuentre el animal.
Sincronizacin de celo mediante el uso de gonadotropinas. Para la

sincronizacin del celo en cerdas tambin se pueden utilizar productos de origen
esteroidal, tales como eCG o PMSG (gonadotropina corinica equina) que
contiene FSH (Hormona folculo estimulante). La dosis es de 400 UI por va
parenteral y 96 horas despus se aplican 200 UI (misma va) de hcG
(gonadotropina corinica humana que contiene LH (hormona luteinizante) . La
presentacin del estro ocurrir de 40 a 42 horas despus del tratamiento (ngeles,
1999). Otro protocolo mediante el uso de gonadotropinas, se realiza mediante la
aplicacin de 1250 Unidades Internacionales (UI) de gonadotropina corinica
equina (eCG) (Folligon; Novormon) 24h despus del destete. Posteriormente, a
las
72 horas de aplicacin de esa primera inyeccin se administran 750UI de
Gonadotropina Corinica Humana (hCG). A partir de los dos das despus de la

inyeccin con eCG se procede a detectar el celo. (Martnez y cols. 2002)
CAPITULO 3. PROGRAMAS DE INSEMINACION ARTIFICIAL A

TIEMPO FIJO
El entorno actual en el que se desarrolla la ganadera, con la globalizacin de los

mercados y el alto grado de competitividad, exigen al productor el mejoramiento
en sus condiciones de productividad y eficiencia. Asimismo, la declaracin de pas
libre de aftosa, da lugar a la apertura de nuevos mercados y por consiguiente es
necesaria la bsqueda de alternativas para mejorar e incrementar la rentabilidad
de las explotaciones. De acuerdo a lo sealado por Cutaia (2006), la optimizacin
de la eficiencia reproductiva es uno de los principales factores que contribuyen
para mejorar las ganancias. A pesar de haber consenso general entre los
productores y tcnicos de que la Inseminacin Artificial (IA) es la tcnica ms
apropiada para acelerar el avance gentico, el porcentaje de las explotaciones
bovinas incluidas en estos esquemas en el mundo contina siendo bajo. Las
principales limitaciones para el empleo de la IA en el ganado manejado en
condiciones extensivas son fallas en la deteccin de celos, anestro posparto y
pubertad tarda.
Ventajas de la IATF
LA IATF presenta muchas ventajas entre las cuales se resaltan (Ben, Goitia y
Mujica, 2006):
Una concentracin del trabajo reproductivo y mayor aprovechamiento del
personal de manejo en otras labores.
Manejo de lotes homogneos al mercado.
Proyeccin y programacin de partos.
Permite la utilizacin de toros de alta gentica
Permite la disminucin del nmero de reproductores a tener en la
ganadera.
Evita las labores de deteccin de celo y las perdidas consecuentes por la

falla en la deteccin del mismo.
Disminucin del pisoteo de los potreros y del movimiento de los lotes.

(protocolo Ovsynch).
Uno de los protocolos de sincronizacin e IATF de mayor uso a nivel mundial es el

Ovsynch, el cul se basa en la utilizacin de GnRH.
Tabla 1. Protocolo Ovsynch
DIA 0
Aplicacin GnRH
DIA 7
Aplicar 1 dosis de PGF2
DIA 9
Aplicacin GnRH
DIA 10
IATF (16 a 24 horas de la segunda aplicacin de GnRH

retirado el dispositivo)
GnRH: Hormona liberadora de gonadotropinas
La primera dosis de GnRH se da para inducir la ovulacin y promover la formacin

de un nuevo cuerpo lteo (CL) y una nueva onda folicular, es decir, lo que se hace
es devolver a la vaca al comienzo de un nuevo ciclo estral. La prostaglandina
suministrada el da 7, causa la luteolisis o regresin de ese CL, y la GnRH
suministrada la da 9, induce la ovulacin del nuevo folculo. La inseminacin se
lleva a cabo alas 16 o 24 horas posteriores a la ltima dosis de GnRH (Lpez,
2007).
El protocolo Ovsynch ha sido ms eficaz en vacas lecheras en lactancia que en
novillas, siendo an desconocida la causa de estas diferencias pero la ovulacin
en respuesta a la primera aplicacin de GnRH ocurri en el 85% de las vacas y en
solo el 54% de las vaquillas (Pursley et al., 1995, citado por Huanca, 2001). Sin
embargo, este protocolo de sincronizacin ha sido ampliamente usado en diversos

establecimientos ganaderos de EEUU y de Amrica latina.
Fuente: http://www.abspecplan.com.br/upload/imagens/06-02-2007_iatf_figura01.jpg
Fig. 6. Protocolo Ovsynch
Con el protocolo Ovsynch, la mayora de los animales no muestran celo durante el

tratamiento.
Leccin 13. Variantes del protocolo ovsynch
Se han realizado diversos estudios para evaluar las tasas de preez, mediante la
modificacin del tiempo en que se realiza la IATF, uno de estos es el denominado
protocolo Cosynch, en el cual la IATF se realiza al tiempo que se aplica la
segunda dosis de GnRH al da 9. Sin embargo, las tasas de preez obtenidas
mediante este protocolo han sido menores, que las obtenidas con el protocolo
Ovsynch.
Tabla 2. Protocolo Cosynch
DIA 0
Aplicacin GnRH
DIA 7
DIA 9
Aplicacin GnRH e IATF
Asimismo se ha evaluado, otra variante del Cosynch, con la aplicacin de la

inseminacin y la segunda dosis de GnRH 72 horas despus de la aplicacin de la
Prostaglandina. El objetivo es dar lugar a un da mas para el desarrollo del folculo
y dar lugar a una mayor maduracin del ovocito y la ovulacin de un folculo mas
grande. Sin embargo se debe estar en observacin de los animales que entren en
celo durante el protocolo para proceder a inseminarlos.
Tabla 3. Protocolo Cosynch 72 horas
DIA 0
Aplicacin GnRH
DIA 7
DIA 10
Aplicacin GnRH e IATF (72 horas despus de la PGF2
Fuente: http://www.abspecplan.com.br/upload/imagens/06-02-2007_iatf_figura04.jpg
Fig. 7. Protocolo Cosynch
Leccin 14. Protocolo de sincronizacin de celo, mediante el uso de

dispositivos intravaginales.
Existe en el mercado una gran variedad de dispositivos intravaginales, los cuales

varan en forma, concentracin de progesterona, y numero de usos. Algunos son:
DIV-B, TRIUB, CIDR, PRID. Asimismo se han experimentado mltiples
portocolos, sin embargo, datos reportados en la bibliografa indican son dos los
protocolos que han arrojado mejores resultados a la IATF en vacas en lactancia
(Veneranda et al., 2006, citado por Cutaia, 2006).
Tabla 4. Protocolo para novillas.
DIA 0
Dispositivo + 2mg de BE + 1 dosis de PGF2
DIA 8
Retirar dispositivo + 1 dosis de PGF2
DIA 9
1 mg de BE
DIA 10
IATF (52 a 56 horas de retirado el dispositivo)
DIA 28
Inicio de la deteccin de celos e I.A
DIA 38
Fin de la deteccin de celos
DIA 42
Diagnstico de preez a las que no retornaron al celo

(reinicio del tratamiento a las que quedaron vacas)
BE: Benzoato de estradiol
Resultados Esperados:
Porcentaje de preez esperado a la IATF:
50 a 60 %
Porcentaje de retorno/vacas:
60%
Porcentaje de concepcin 2da IA:
50%
Porcentaje de Preez General (2 ciclos):
70 a 80 %
Das destinados a la deteccin de celos:
10
Tabla 5. Protocolos para vacas en lactancia.
DIA 0
Dispositivo + 2mg de BE
DIA 8
Retirar dispositivo + 1 dosis de PGF2 + 400 UI eCG
DIA 9
1 mg de BE
DIA 10
DIA 28
Inicio de la deteccin de celos e IA
DIA 38
DIA 42


eCG: Gonadotropina corinica equina.
35 a 45 %
40%
40%
45 a 55 %
Das destinados a las deteccin de celos:
10
Otro protocolo experimentado hace uso de la GnRH.

Tabla 6. Dispositivo intravaginal + GnRH.
DIA 0
DIA 7
DIA 9
Aplicar GnRH y 12 horas despus I.A
DIA 27
DIA 37
DIA 41

GnRH: Hormona liberadora de Gonadotropinas
30 a 40 %
40%
40%
40 a 50 %
10
Protocolos de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin de los

retornos al celo.
Tabla 7. Protocolos de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin Novillas
DIA 0
DIA 7
DIA 9
Aplicar 1 mg de BE
DIA 10
DIA 23
Reinsercin del Dispositivo
DIA 30
Retirar dispositivo
DIA 31
DIA 35
DIA 42

50 a 60 %
80%
50%
75 a 85 %
Tabla 8. Protocolos de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin Vacas en

lactancia.
DIA 0
DIA 7
DIA 9
Aplicar 1 mg de BE
DIA 10
DIA 23
Reinsercin del Dispositivo + 1 mg de BE
DIA 30
Retirar dispositivo
DIA 31
DIA 35
DIA 42


35 a 45 %
50%
40%
50 a 55 %
Das destinados a la deteccin de celos:
Leccin
15.
Protocolos
de
sincronizacin
de
celo
para
IATF
resincronizacin de los retornos al celo para una segunda IATF.

Tabla 9. Protocolos de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin de los retornos
al celo para una segunda IATF Novillas
DIA 0
DIA 8
DIA 9
Aplicar 1 mg de BE
DIA 10
DIA 26
DIA 31
GnRH
DIA 38
Diagnstico de preez por Ultrasonografa + 1 dosis de

PGF2 a las novillas vacas
DIA 40
GnRH + IATF (12 horas despus de la GnRH)

50 a 60 %
100%
Porcentaje de preex 2da IATF:
50%
75 a 85 %
Tabla 10. Protocolos de sincronizacin de celo para IATF y resincronizacin de los retornos
al celo para una segunda IATF Vacas en lactancia.
DIA 0
DIA 8
DIA 9
Aplicar 1 mg de BE
DIA 10
DIA 26
DIA 31
Aplicacin de GnRH
DIA 38
DIA 40
Diagnstico de preez por Ultrasonografa + 1 dosis de

PGF2 a las novillas vacas
DIA 42
GnRH + IATF (12 horas despus de la GnRH)

35 a 45 %
100%
40%
65 a 65 %
Por ltimo, es importante sealar que la sincronizacin de celo en ganado bos

indicus, muestra resultados muy variables, tal como lo reporta Salgado, Gonzlez
y Simanca (2007),
segn los cuales los porcentajes de preez mediante IATF
pueden variar desde 31,4% hasta 62%. Lo anterior, debido a la intervencin de

mltiples variables (Tcnica, operario, animales, etc) que pueden afectar el
resultado final del programa de sincronizacin.
UNIDAD 2. INSEMINACION ARTIFICIAL Y

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
OBJETIVOS
Identificar el proceso de colecta y evaluacin del semen.

Conocer y aplicar el proceso de inseminacin artificial en las principales
especies domsticas.
Comprender las tcnicas, los procesos, las ventajas, las desventajas, los
elementos y los procesos de la transferencia de embriones.
ESTRUCTURA

Leccin 17. Evaluacin de la libido.
Leccin 18. Colecta y evaluacin de semen.
Leccin 19. Colecta y evaluacin de semen bovino y ovino.
Leccin 20. Colecta y evaluacin de semen porcino.
CAPITULO 2. INSEMINACION ARTIFICIAL.
Leccin 21. Historia de la inseminacin artificial
Leccin 22. Tcnica de Inseminacin artificial.
Leccin 23. Tcnica de Inseminacin artificial en equinos.
Leccin 24. Tcnica de Inseminacin artificial en ovinos.
Leccin 25. Tcnica de Inseminacin artificial en porcinos.
Leccin 27. Seleccin y manejo de donantes y receptoras.
Leccin 28. Tcnica de transferencia de embriones.
Leccin 29. Criopreservacin de embriones.
Leccin 30. Transferencia de embriones en equinos.
UNIDAD 2. INSEMINACION ARTIFICIAL Y

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
Los programas de inseminacin artificial fundamentan su tcnica en la
transferencia de semen (fresco, congelado o refrigerado) al tracto reproductivo de
la hembra. En tal sentido, se requiere de una adecuado proceso de colecta y
evaluacin de la calidad del semen, con el fin de garantizar que el mismo pueda
lograr la fertilizacin del ovulo de la hembra.
Todo programa de colecta de semen, requiere la evaluacin del reproductor

(evaluacin Androlgica), con el fin de descartar problema de tipo sanitario y
reproductivo que puedan disminuir o afectar el xito del programa reproductivo.
La evaluacin androlgica
involucra tres pasos fundamentales: la evaluacin
fsica (conformacin general, rganos sexuales internos y externos), la evaluacin

de la libido, y la colecta y evaluacin de semen.
Evaluacin fsica
El examen fsico incluye la observacin del toro en movimiento, la conformacin
de las patas y la condicin corporal general. Una vez que el toro es confinado, la
evaluacin fsica contina con una observacin general y un examen de los
rganos sexuales internos y externos de los ojos. Durante la poca reproductiva,
los machos tendrn que caminar mucho (especialmente los toros cebuinos
manejados en explotacin extensiva), por lo que la sanidad de las patas y manos
es esencial para una monta exitosa o para un proceso de colecta adecuado.
(Larson, 2007).
Ojos. Los ojos son otro factor importante en el proceso de evaluacin, ya que el
macho, especialmente el toro, se gua por el estimulo visual para identificar las
hembras en celo.
Saco escrotal y cordn espermtico. Se debe observar la forma e integridad del
escroto, su suavidad al tacto, verificar la presencia de cicatrices que evidencien
traumatismos o daos severos causados por garrapatas o gusaneras. El cordn
espermtico se debe palpar en toda su longitud,
no debe ser muy corto de
manera que acerque los testculos al abdomen ni tan largo y colgante que los
predisponga a constantes traumatismos. Lo recomendable es que el fondo del
escroto no sobrepase la lnea de los corvejones (Vilanova y Ballalares, 2005).
Testculos y epiddimos. Se exploran mediante palpacin minuciosa. Los
testculos deben mostrarse lisos y firmes al tacto, no presentar focos de
endurecimiento ni reblandecimiento, y su exploracin no debera causar molestias
al animal. Se debe comprobar su capacidad de desplazarse hacia arriba y abajo
dentro del saco escrotal, lo cual descarta adherencias y demuestra una buena
regulacin de la temperatura testicular. Este aspecto es muy importante ya que
testculos sometidos durante ciertos perodos a temperaturas elevadas como
resultado de infecciones crnicas febriles podran desarrollar un cuadro de
degeneracin testicular, lo cual podra ser motivo de descarte del macho. Con
relacin a los epiddimos, se deben verificar y examinar cuidadosamente sus tres
porciones (cabeza, cuerpo y cola), las cuales debern presentar una consistencia
firme y homognea. Debe descartarse la presencia de calor, dolor, aumentos de
volumen, adherencias, etc (Vilanova y Ballalares, 2005).
Medidas testiculares. Estn representadas por el permetro escrotal o

circunferencia escrotal y la altura testicular. Ambas medidas representan un
elemento muy importante a la hora de seleccionar un toro, ya que el tamao de los
testculos ha sido asociado positivamente con la produccin de espermatozoides.

El tamao testicular medido a travs de la circunferencia escrotal se constituye en
el principal elemento para la seleccin de los toros. El tamao de los testculos se
correlaciona positivamente con la produccin espermtica e influye en la
maduracin sexual ms temprana de sus hijos (machos y hembras), lo que
determina que sea el factor de mayor importancia en evaluacin y seleccin de
reproductores. En este sentido, las hembras hijas de machos con un mayor
tamao testicular, alcanzarn ms temprano la pubertad, tendrn un parto con una
edad menor y por ende llegaran ms temprano a la produccin. la bolsa escrotal
debe observarse para identificar que no haya lesiones o traumatismos.
Pene y prepucio. El pene se explora por palpacin bajo la piel del abdomen,
desde la insercin del escroto y en direccin al ombligo, siendo muy importante
observarlo directamente en el momento de la ereccin o cuando se exterioriza
para la coleccin de semen. Se debe observar la conformacin del prepucio, lo
ideal es que o est muy penduloso, ya que puede lesionarse y causar problemas
de infeccin o inflamacin que pueden causar el cierre del orifico prepucial
causando irritacin por acumulacin de la orina.
Posteriormente debe realizarse un examen de los rganos sexuales internos,

mediante
palpacin rectal.
Mediante
este examen es posible identificar
anormalidades en las estructuras internas palpables (uretra pelviana, prstata,

vesculas seminales). En estos rganos deber descartarse la presencia de focos
de endurecimiento o reblandecimiento, as como calor o aumentos de tamao
dolorosos o no a la palpacin
(Vilanova y Ballalares, 2005). Cuando existen
problemas infecciosos (actinomyces, brucelosis, entre otras) a nivel reproductivo,

casi siempre se produce inflamacin de las vesculas seminales (vesiculitis). Es
necesario identificar este tipo anormalidades y en caso de confirmarse con un
examen de laboratorio debe tratarse medicamente o eliminarse estos animales.
Fuente: Boletn informativo del Serida N 2
Fig. 8. rganos internos del aparato reproductor masculino.
Asimismo se debe realizar la toma de muestras para el envo al laboratorio, con el

fin de descartar enfermedades que puedan afectar la reproduccin, tales como:
leucosis,
brucelosis,
Diarrea viral bovina, Rinotraqueitis infecciosa bovina,
tricomoniasis, leptospirosis, neospora, etc. Para esto se toma una muestra de

sangre en un tubo sin anticoagulante, y se hace un lavado prepucial
(tricomoniasis, vibriosis), estas muestras deben ser enviadas al laboratorio antes
de 8 horas para evitar el dao de las mismas y falla en el diagnstico.
Leccin 17. Evaluacin de la libido
La evaluacin de la libido se realiza en animales que van a servir como

reproductores para monta directa. Es necesario con el fin de evaluar sin el macho
va a servir para montar a las hembras en celo.
Fuente: http://www.serbiotec.com.ar/images/Celo.JPG
Fig. 9. La libido representa el impulso sexual del macho.
La libido impulso sexual, es una caracterstica de comportamiento que se puede

medir. Las pruebas se basan generalmente en la explotacin de varias ms de
los siguientes hallazgos (Chenowet, 2003):
1. La libido en toros tiene un gran componente gentico.
2. Los toros son polgamos y tienden a distribuir sus servicios entre
hembras receptivas.
3. El ms grande estmulo nico para que un toro trate de montar y
servir es el tren posterior inmvil de una hembra, algo que el
perciba como similar.
4. La preestimulacin de los toros incrementa su respuesta sexual.

5. La competencia entre toros puede incrementar su respuesta sexual.
La prueba reportada por Chenowet (2003), est conformada por los siguientes
pasos:
En un corral dos hembras se sujeta un grupo con hembras atadas, que no
se encuentren en celo.
La proporcin toro: vaca es de 5:2 5:3.
Se dejan en el corral por por 40 a 60 minutos.
Se califica con base en los servicios realizados durante el perodo de
observacin.
De acuerdo a lo observado en la prueba, los toros son clasificados en cuatro

grupos:
Grupo 1: Toros que sirven satisfactoriamente
Grupo 2: Toros que hicieron intentos de monta pero no culminaron en servicio,
debido a inexperiencia, falta de tcnica de apareamiento o factores patolgicos.
Grupo 3: Toros que montaron pero que no llegaron al servicio debido a falta de
cooperacin de la hembra. Puede reflejar factores tales como inexperiencia baja
libido o uso de una hembra inadecuada.
Grupo 4: Toros en los que no existe registro de habilidad de monta debido a falta
de suficiente actividad para hacer una estimacin.
Leccin 18. Colecta y evaluacin de semen
Colecta de semen.
La tercera fase en el proceso de evaluacin androlgica es la colecta y la
evaluacin del semen, una vez finalizada la exploracin genital se procede a la
recoleccin de semen, la cual puede hacerse por medio de una vagina artificial o
por electroeyaculacin. La vagina artificial es el mtodo de preferencia, aunque
para usarla es necesario que el toro haya sido entrenado previamente, este es un
mtodo fisiolgico ya que imita el proceso de la monta natural. Se debe contar con
vaginas artificiales en muy buen estado de higiene y conservacin, lo cual
garantiza por una parte la calidad de la muestra recogida, y por la otra, que el toro
no rechace este mtodo. En equinos, este es el nico mtodo de colecta
disponible. En ovinos, caprinos y bovinos es muy comn el uso de este mtodo de
colecta.
El otro mtodo es a travs del electroeyaculador, el cual es un aparato que consta
de un electrodo de uso transrectal (llamado bala) conectado a una batera que
genera pequeos pulsos elctricos, los cuales estimulan los rganos genitales
internos produciendo la emisin del semen. Antes de aplicar la electroeyaculacin
se deben eliminar las heces presentes en el recto y seguidamente introducir el
electrodo debidamente lubricado. Las descargas elctricas deben ser aplicadas
rtmicamente cada 3 a 5 segundos, seguidas de un reposo de otros 3 a 5
segundos. Debe tenerse presente que la respuesta de cada animal a la
electroeyaculacin es muy particular, la cual se observa en el tiempo de
estimulacin y en la cantidad de pulsos elctricos necesarios para recolectar el
semen (Vilanova y Ballalares, 2005).
Evaluacin del semen.
Una vez se ha colectado el semen se procede a realizar el anlisis en laboratorio,

en el mismo se evalan algunas caractersticas macroscpicas y microscpicas.
Caractersticas macroscpicas
Olor: No debe tener mal olor, si lo hubiese puede ser indicativo de algn
tipo de infeccin.
Color: Vara de acuerdo a la concentracin espermtica: puede ir desde un
lquido blanquecino claro, hasta un lquido lechoso oscuro.
Volumen: Vara de acuerdo a la especie, en los bovinos puede obtenerse

de 2 a 12 ml por eyaculado, en los porcinos, hasta 350 ml, en
Caractersticas microscpicas
Motilidad: masal e individual
Morfologa
Concentracin
Motilidad: La motilidad es uno de los parmetros ms importantes de la analtica

seminal. Hasta hace pocos aos el estudio de la motilidad espermtica se haca
exclusivamente mediante mtodos semicuantitativos. Estos mtodos evalan el
porcentaje
de espermatozoides mviles, as como el tipo de movimiento que
presentaba la media de una poblacin espermtica. (Hidalgo, Tamargo y Diez,

2006).
La motilidad masal se observa colocando una pequea gota de semen sobre una
placa portaobjetos a temperatura de 37C y observndola en el microscopio en
aumento de 10X o 40X, all se observa la formacin de olas. Esta motilidad est
directamente relacionada con la concentracin espermtica, as a mayor cantidad
de espermatozoides, se formara una mayor cantidad de olas. Se expresa en una
escala de calificacin de 1 a 5.
La motilidad individual se determina colocando una pequea gota de semen
sobre una placa portaobjetos y sobre ella se coloca una placa cubreobjetos, y
observndola en el microscopio, en aumento de 40X. La motilidad individual mide
el porcentaje de espermatozoides que presentan un movimiento rectilneo y
continuo. El valor se expresa en porcentaje, el valor mnimo aceptado es de 50%.
Hoy en da tambin existen sistemas automticos de medicin de imgenes, los
cuales se basan en la captura sucesiva de espermatozoides en movimiento
provenientes de un microscopio. Estas imgenes se digitalizan identificando las
clulas espermticas que contienen la primera imagen. Luego se procede al
seguimiento de estas clulas en imgenes sucesivas y al establecimiento de

trayectorias
definitivas.
Las
trayectorias
se
procesan
matemticamente,
obteniendo as resultados numricos precisos (Hidalgo, Tamargo y Diez, 2006).
Morfologa y viabilidad:
El anlisis morfolgico de los espermatozoides es uno de los principales
componentes de la evaluacin de las caractersticas de una muestra seminal. La
valoracin de la morfologa del espermatozoide se basa en la relacin directa que
haya entre la proporcin de espermatozoides anormales en el eyaculado, el tipo
de defecto morfolgico y su relacin con la fertilidad in vivo de los machos
(Hidalgo, Tamargo y Diez, 2006). La evaluacin se realiza a travs de una tincin
con eosina-nigrosina o con tinta china.
Fuente: http://www.ansc.purdue.edu/swine/porkpage/repro/sp200204.jpg
Fig. 10. La evaluacin morfolgica del semen.
En la evaluacin morfolgica es necesario determinar la cantidad y el tipo de

anormalidades, se aceptan mximo un 30% de anormalidades.
Fuente: http://www.ivf.com/images/mb61.gif
Fig. 11. Anormalidades espermticas.
Concentracin: Existe una alta correlacin significativa entre el nmero de

espermatozoides inseminados y la fertilidad del toro. La presencia de un mayor
nmero de espermatozoides, siempre y cuando sus caractersticas sean normales,
incrementa la posibilidad de fertilizacin. Existe una variabilidad muy grande en la
concentracin de un eyaculado a otro, y de un toro a otro, siendo importante
conocer el nmero de espermatozoides por eyaculado, ya que de este parmetro
depende el nmero de hembras a inseminar (Hidalgo, Tamargo y Diez, 2006).
La concentracin puede medirse por varios mtodos: la espectrofotometra, la

colorimetra, la citometra de flujo y el uso de cmara de recuento celular, como
las de Brker, Neubauer o Thoma. En nuestro pas el mtodo mas utilizado es el
de la cmara de Neubauer.
Fuente: www.thepigsite.com/.../09-03SwineConf5.jpg
Fig. 12. Medicin de la concentracin espermtica.
Fuente: www.digilablaboratorio.com.br/.../neubauer2.jpg
Fig. 13. Hemotocitmetro o cmara de Neubauer
Leccin 19. Colecta y evaluacin del semen bovino y ovino

Colecta de semen por vagina artificial
La vagina artificial es una imitacin de la vagina de la vaca y de la oveja, que
proporciona el estimulo trmico y mecnico para la ereccin del pene del macho y
que son, igualmente, necesarios para producir la eyaculacin. La vagina artificial
consiste de una caperuza externa (de 50 cm x 5,5 cm para el toro, de 20 x 5,5 cm.
para el carnero y 15 x 5,5 cm. para el macho cabro) fabricada con goma fuerte,
plstico u otro material sinttico que tenga propiedades aislantes, y un conducto
interno fabricado de goma o material sinttico apropiado. Despus de cada uso se
debe lavar, enjuagar con agua destilada y secarla profundamente; si se pasa, por
el interior, una delgada pelcula de alcohol al 70% en agua destilada, se secar,
luego, mejor. A continuacin se llena la mitad del depsito con agua a 48-50, a
travs del tampn colocado en el lateral y con la ayuda de un embudo o jeringa de
100 ml (el calor del agua contribuir a evaporar el alcohol). Si se llena demasiado
de agua, se saldr, cuando se deje la vagina en posicin vertical. Se debe evitar
que el agua penetre en el tubo interno ya que puede ser la causa de mortalidad de
los espermatozoides. La temperatura de la vagina artificial, deber ser de 42-45
C, lo que se puede controlar mediante la insercin de un termmetro limpio. Si la
vagina se encuentra demasiado fra, se debe rellenar con agua ms caliente con
el fin de evitar el shock por frio.
Fuente: http://www.agrovetmarket.com/Library/Images/sawdc.jpg
Fig. 14. Colecta de semen de carnero.
Antes de la recogida de semen, se debe limpiar, cuidadosamente, el prepucio del

macho, para evitar cualquier contaminacin de aquel, en los bovinos se realiza un
lavado prepucial con solucin salina.
En los ovinos y caprinos, los movimientos vigorosos hacia arriba y hacia delante
significan que se ha producido la eyaculacin. Se debe dejar que el macho retire el
pne de la vagina antes de intentar retirar esta (Bearden y Fuquay, 1982;
Salamn, 1990). En el bovino, se produce el denominado golpe de rin, el cual
es indicativo de que la eyaculacin se produjo.
Colecta de semen por electroeyaculador (estimulador elctrico)
Existen diferentes tipos de electroeyaculadores, El aparato ms comnmente

utilizado en nuestro pas es el electrojac. Se trata de un estimulador accionado
por bateras que proporciona una salida de 10 15 voltios. Para la coleccin de

semen, el macho ovino y caprino se debe colocar en decbito lateral, sobre una
mesa o en el suelo, siempre que este limpio. Se deben cortar el pelo o lana que
bordee la vaina y el prepucio se debe limpiar correctamente. La sonda se
humedece o lubrica con vaselina y se inserta en el recto a una profundidad de 1520 cm. procurando no lesionar la mucosa (Bearden y Fuquay, 1982; Salamn,
1990; Mejia y Hernndez, 1996). En los bovinos, el macho debe inmovilizarse en
un brete y se debe realizar el lavado prepucial, la zona o bala se introduce va
rectal.
En ovinos y caprinos el pene se debe extender por enderezamiento de la flexura
sigmoidea de tal forma que el glande del pne se pueda sujetar con la mano,
limpia, y liberar el pne del prepucio. Por detrs del glande se coloca una pieza de
gasa y se introduce el glande y el proceso uretral en un tubo de ensayo estril. Lo
mejor es sujetar el pne y el tubo de ensayo con la misma mano dejando la otra
libre para dar masaje en el pne en direccin hacia delante entre para cada
estimulo elctrico (Bearden y Fuquay, 1982; Salamn, 1990; Mejia y Hernndez,
1996). Un ayudante debe presionar sobre la sonda hacia el suelo de la pelvis,
aplicndose luego cortos estmulos (3-8 segundos) a intervalos de 15-20
segundos. Despus de unos cuantos estmulos fluir la secrecin de las glndulas
accesorias y luego el semen. Cuando se obtenga inicialmente grandes cantidades
de liquido claro, se deben desechar para evitar diluciones innecesarias del semen
(Bearden y Fuquay, 1982; Salamn, 1990; Mejia y Hernndez, 1996).
Leccin 20. Colecta y evaluacin del semen porcino.
Se debe contar con una rea de 9 a 15 metros cuadrados para la extraccin del
semen, este lugar debe estar alejado de las instalaciones de alojamiento de los
otros animales, se debe evitar los factores de distraccin para el animal. Asimismo
debe existir una superficie no deslizante para evitar golpes y fracturas de los
reproductores (IMV (2000).
Se debe utilizar el potro de monta, lo suficientemente robusto para soportar el

peso del animal. Este puede untarse con secreciones vaginales de la hembra con
el fin de estimular la monta.
Una vez el macho realiza la monta se debe tomar el pene y sostenerlo de una
manera firme y con presin, sin llegar a causar lesiones en el mismo. Para esto el
operario debe utilizar guantes de vinilo o plstico, y no utilizar guantes de caucho o
ltex, porque estos tienen efecto espermicida.
Fuente: http://cdn.wn.com/o25/ph//2009/05/01/ddb84ae6fac97f10ed67095f347727e6-grande.jpg
Fig. 15. Colecta de semen del verraco.
La recogida del semen se debe hacer en un termo o recipiente con filtro, para
evitar la mezcla del material seminal con la fraccin postespermtica. Una vez
acaba la extraccin, el material debe ser enviado al laboratorio para su evaluacin.
La criopreservacin
de semen porcino no es una tcnica nueva; sin embargo,
esta tecnologa reproductiva no se ha desarrollado lo suficiente como para estar

disponible a nivel comercial como en la ganadera bovina. Esto ha sido causado
por diversos factores entre los cuales se encuentran: escasos rendimientos
reproductivos,
elevada variabilidad entre verracos en la respuesta a la
congelacin, y alta concentracin espermtica en las dosis de inseminacin

(Martn, 2000, citado por Roa et al, 2005).
El proceso de criopreservacin y descongelacin del semen se ha adoptado una

tecnologa que presenta pocas modificaciones, por lo que varios investigadores
(Fuentes, 2000; Pacheco, 2001 y Echegaray, 2003, citados por Roa et al, 2005),
aseguran que la base de los protocolos actuales de congelacin siguen siendo las
siguientes:
Proceso de criopreservacin.
Colecta de semen, tomando la fraccin rica del eyaculado y mezclando con
diluyente a 32 C.
Evaluacin de la calidad y concentracin seminal (a partir de esta cifra, las
dosis que se pueden obtener del eyaculado y cantidad de diluyente de
congelacin a emplear).
Equilibrio previo a la centrifugacin (23 C y 15 C).
Centrifugacin a 800 revoluciones por 10 minutos en centrifuga refrigerada
a 15 C.
Resuspensin y eliminacin de plasma seminal.
Adicin de diluyente a 15 C para evitar shock trmico.
Equilibrio trmico a 5 C (Durante un periodo de 3 horas).
Adicin de diluyente con 3% de glicerol.

Envasado.
Congelacin.
Almacenamiento en nitrgeno lquido a - 196 C.
Proceso de Descongelacin:
Junto con el proceso de descongelacin, es necesario restituir el volumen de las
dosis antes de la inseminacin, para lo cual se utiliza un diluyente capaz de
proteger las clulas espermticas de daos durante la descongelacin y proveer
de sustancias que aumenten la supervivencia, viabilidad y poder fecundante (Roa,
2005)
CAPITULO 2. INSEMINACION ARTIFICIAL

Leccin 21. Historia de la inseminacin artificial.
Los primeros reportes no registrados de la inseminacin artificial datan de los

rabes,
de
quienes
se
dice
utilizaban la
inseminacin artificial
desde
aproximadamente el ao 1300, a travs de la inseminacin de las yeguas con

semen que robaban de garaones de tribus vecinas.
Posteriormente, en Europa,
se encuentra el primer reporte escrito, el fisilogo
italiano Lzaro Spallanzani, hacia el ao de 1780 realiz el experimento de

colectar semen de un perro y depositarlo en el tracto reproductor de la hembra,
con lo cual obtuvo la preez de la misma. En 1782, Rossi y un profesor llamado
Branchi repitieron con xito el experimento de Spallanzani (Hafez y Hafez, 2000).
Hacia el ao de
1900, en Rusia se empezaron a realizar experimentos de
inseminacin en animales domsticos. El Dr. Ivanoff inici sus experimentos en

equinos, sin embargo, fue el primero en inseminar con xito a los bovinos y a los
ovinos. Asimismo, se realizaron trabajos de inseminacin en yeguas en Japn
hacia el ao de 1913. En el ao de 1936 en Dinamarca se form la primera
asociacin cooperativa de inseminacin artificial.
La inseminacin artificial en los porcinos tuvo su desarrollo en Rusia a comienzos

del siglo XX, posteriormente entre los aos 1956 y 1966 se difunde esta tcnica,
gracias al desarrollo del catter en forma de espiral por Melrose y Cameron (Calle,
et al, 2006). Sin embargo, es hasta la dcada de los 90 del siglo pasado que se
difunde de manera comercial, gracias a la aparicin de la evaluacin seminal,
dando lugar a la implementacin comercial de esta biotecnologa.
Hoy en da la inseminacin artificial es una prctica comn sobre todo en los

pases industrializados, en donde su utilizacin puede alcanzar hasta el 95% en el
ganado bovino y el 80% en los porcinos (Calle, et al, 2006).
La I.A en Colombia se inici en el ao de 1937 con los doctores Jos Velsquez y
Milciades
Martnez,
quienes
inseminaron
perras
con buenos
resultados.
Posteriormente, en el ao de 1946 el Ministerio de Economa Nacional adelanto

trabajos de inseminacin artificial en la granja de la Picota y prepar el primer
grupo de
profesionales en esta disciplina. A partir de esta poca se empez a
inseminar ganado en diferentes regiones del pas. El promedio nacional de

inseminacin artificial es de un porcentaje del 4%, siendo las zonas de Antioquia,
altiplano Cundboyacense y Eje Cafetero las de mayor implementacin de la
tcnica y los llanos orientales y costa atlntica las de menor utilizacin (Alvarado,
2008).
Ventajas y desventajas de la inseminacin artificial

Ventajas:
La inseminacin artificial presenta diversas ventajas entre las cuales se
encuentran:
Rpido mejoramiento gentico, mejorando los rendimientos al utilizar
reproductores sementales de alto valor gentico.
Disminucin del riesgo de transmisin de enfermedades infectocontagiosa
por va de transmisin sexual.
Permite la utilizacin de machos de alta calidad gentica que se encuentran
en reas geogrficas lejanas (Utilizacin de semen de toros alemanes o
franceses de alta gentica, utilizacin de semen de garaones de las zonas
de vocacin equina, como por ejemplo, Antioquia y Cundinamarca).
Disminucin de los costos de manejo y operario por mantenimiento de los

reproductores en la explotacin y por la disminucin de los mismos.
Produccin de lotes homogneos al mercado.
Permite prescindir de machos difciles de manejar.
Es til para realizar test o pruebas de progenie en machos.
Evita la introduccin de machos de otras explotaciones los cuales pueden
trasmitir enfermedades infectocontagiosas.
Desventajas:
Algunas de las desventajas que se menciona son:
Se requiere de personal capacitado en las tcnicas y los procedimientos a
desarrollar en la inseminacin artificial.
Los costos iniciales pueden ser elevados, estos incluyen la adquisicin del
equipo de inseminacin, el termo de mantenimiento del material seminal,
las pajillas, el nitrgeno lquido, entre otros.
Si el material seminal utilizado no fue colectado y evaluado, se puede correr
el riesgo de transmitir enfermedades de tipo infectocontagioso.
Es necesario establecer un programa para la deteccin del celo.
Cuando la intensidad de la seleccin es muy alta pueden surgir problemas
de consanguinidad.
Leccin 22. Tcnica de inseminacin artificial.

Tcnica de inseminacin artificial en bovinos.
La inseminacin artificial solo ser efectiva si el espermatozoide se encuentra en
"el lugar adecuado en el momento oportuno". Es necesario que en el momento
que ocurra la ovulacin, existan espermatozoides disponibles para fertilizar el
vulo. El celo, tiene una duracin promedio de 6 a 10 horas. La ovulacin en la
vaca ocurre aproximadamente entre 10 a 14 horas luego de la finalizacin de los
signos del celo y el vulo puede sobrevivir infrtil por 6 a 12 horas. A diferencia
del espermatozoide, el cual
puede vivir hasta 24 horas en el aparato
reproductivo de la vaca (Infocarne, 2005). Por lo anterior, lo ideal es que la

inseminacin se realice entre las 8 y 12 horas despus del inicio del celo.
Fuente: http://www.infocarne.com/bovino/inseminacion_artificial2.asp
Fig. 16. Determinacin del tiempo de monta o inseminacin
Una prctica comn para el mejor momento de realizar la inseminacin artificial

es la regla de "maana-tarde": En esta, las vacas observadas en celo en la
maana se inseminan la misma tarde, y vacas observadas en celo durante la
tarde se inseminan la maana siguiente. Este protocolo es muy utilizado en
ganaderas bos taurus, sin embargo en ganadera bos indicus puede
no
funcionar con la misma eficiencia, explicado por el hecho de que en este tipo de
ganado, los celos generalmente son ms cortos, y por ende la viabilidad del
ovocito disminuye mas rpidamente. Por lo general en este tipo de ganaderas se
utilizan animales receladores (machos desviados, hembras androgenizadas,
machos con vasectoma) para determinar el celo, y una vez la vaca deje de
manifestar la sintomatologa del celo, es inseminada.
La tcnica de inseminacin ms utilizada en la vaca es la rectovaginal, los pasos

que involucra esta tcnica son (CENIAP, 1999):
Identificar el animal que est apto para la inseminacin.

Inmovilizar la vaca a un brete o manga. Revisar los registros del animal
con el fin de identificar y seleccionar el materila seminal a utilizar.
Ubicar el semen a utilizar. Preparar el termo de descongelacin con agua
potable a 35 a 37C. Extraer la pajilla de semen congelado del termo y
sumergirla en el agua del termo de descongelacin inmediatamente (all
debe permanecer por un tiempo de 40 segundos). Extraer y secar
cuidadosamente la pajilla con una toalla de papel desechable (se debe
eliminar cualquier resto de humedad, porque el agua es espermicida).
Fuente: http://park.org/Netherlands/pavilions/typical_dutch/cows/cattle/nrs/picture s/plaat4.gif
Fig. 17. Seleccin de la pajilla.
Preparar la pistola de inseminacin, la misma se debe frotar con una toalla

de papel (esto con el fin de que la misma, se encuentre a una temperatura
similar a la del semen, es decir 37, y con ello evitar el choque trmico y la
consecuente mortalidad espermtica). Asimismo se debe retirar el mbolo
de la pistola hacia atrs (15 a 20 cm).
Se debe cortar el extremo de la pajilla, e insertar la misma en la pistola
(debe evitarse el corte que deje puntas en la pajilla, porque estas puede
lacerar el aparato reproductor de la hembra). Puede utilizarse fundas
plsticas protectoras para evitar la contaminacin del semen, durante su
paso por el tracto reproductor de la hembra.
Proteger la pistoleta cargada, del sol y del medio ambiente, envolviendo el
extremo con una toalla de papel desechable (evitar la mortalidad
espermtica).
Colocarse un guante de plstico desechable sobre el brazo de palpar
(comnmente el izquierdo). Lubricar ligeramente el guante de plstico, con
lubricante, agua o estircol de la misma vaca.
Introducir la mano enguantada va rectal con los dedos en forma de cua.

Eliminar el exceso de estircol para limpiar el recto sin sacar la mano del
recto, ya que de lo contrario se llenara de aire. Si esto ocurre tratar de
formar un pliegue del recto (mucosa) y proceder a halarlo hacia el ano.
Localizar el crvix, limpiar la zona vulvar una o ms toallas de papel
desechable (secas). Slo en caso necesario lavar con agua, ya que el agua
tiene efecto espermicida.
Separar los labios vulvares, presionando hacia abajo y hacia atrs con el
antebrazo desde el recto. Introducir la punta de la pistoleta de inseminacin
a travs de la vulva en ngulo de 45, dirigindola haca el techo de la
vagina, evitando penetrar por error el divertculo suburetral o la uretra,
ubicada en el piso del vestbulo vulvo-vaginal.
Deslizar la pistola horizontalmente hacia delante, siguiendo la direccin de
la vagina. Con la mano que se fija el cervix empujar sta hacia adelante
para estirar y eliminar los pliegues de la mucosa vaginal hasta llegar a la
cervix.
Localizar el orificio posterior de la cervix, cerrar los dedos (pulgar, ndice y
medio) en forma de crculo por detrs de la cervix, sirviendo como embudo,
ubicndose el orificio hacia el centro, evitando los fondos del saco ciego
alrededor del orificio del cervix. Si el mtodo descrito falla, asegurar la
cervix con sus dedos ndice, medio y anular, abajo sobre el piso de la
cavidad (sobre el pubis) o hacia el lado derecho (ileon). Usar el dedo pulgar
para ubicar el orificio, sentir con el dedo la punta de la pistoleta, retirar el
dedo e introduzca la pistola en el cervix.
Al penetrar el cervix, se puede retraer el brazo con el cervix hacia atrs y
manipularlo. No mover la pistola y mantenerla fija con una ligera presin,
aplicar movimientos suaves de rotacin al cervix para vencer los anillos
internos (3-5 anillos), los cuales pueden sentirse al paso de la pistola.
El punto blanco del inseminador puede ser fcilmente ubicado, colocando la
yema del dedo ndice por delante de la cervix y en el orificio anterior, donde
podr sentirse la punta de la pistola, una vez pasados los distintos pliegues
de la cervix. Este punto se localiza a un centmetro de la salida del crvix,

en el cuerpo del tero.
Se deposita el semen en el punto blanco del inseminador, presionando
lentamente el mbolo de la pistoleta, teniendo cuidado de no halarla. Si el
animal se mueve, esperar hasta que se tranquilice y asegrese que la
pistoleta se encuentre en el blanco del inseminador antes de proseguir
depositando el semen.
Fuente: http://www.partners-in-reproduction.com/images/ai.jpg
Fig. 18. Proceso de inseminacin artificial.
Retirar la pistola, mantener el cervix con la mano y retirar la pistola

suavemente. Inspeccionar la pistola y asegurarse que la pajilla est
completamente vaca, que no tenga trazas de sangre, pus o suciedad y que
la identificacin de la pajilla corresponda al toro asignado para el servicio de
la vaca.
Anotar el servicio, asegurndose que la fecha, identificacin de la vaca, el
semen utilizado y cualquier otra observacin queden correctamente
anotadas.
Leccin 23. Tcnica de inseminacin artificial en equinos
La tcnica de inseminacin artificial en equinos, debe contar con la participacin

de personal capacitado que determine el momento preciso en el cual se debe
realizar la inseminacin. Para esto se debe realizar el seguimiento ecogrfico al
desarrollo folicular
con el fin de determinar el momento exacto para realizar la
inseminacin.
Fuente: http://albeitar.portalveterinaria.com/noticia.asp?ref=728
Fig. 19. Seguimiento ecogrfico de la ovulacin. En la izquierda se puede observar el

folculo, 24 horas antes de la ovulacin, en el centro el folculo ovulando, y en la derecha 24
horas despus de ocurrida la ovulacin.
Lo anterior es muy importante debido a que es muy difcil conseguir
semen
criopreservado de garaones, debido a la alta tasa de variabilidad
en los
resultados del proceso de criopreservacin, razn por la cual, se utiliza el semen

refrigerado la mayora de veces. Este semen refrigerado puede sobrevivir hasta 72
horas, en el medio de dilucin, por lo tanto es necesario conocer el momento
exacto de la ovulacin con el fin de hacer el respectivo pedido y garantizar la
llegada del material seminal a la explotacin.
Cuando
se
decide
realizar
la
inseminacin
artificial
la
yegua
es sometida a un examen reproductivo previo con el fin de valorar la integridad

anatmica y funcional de su aparato reproductor y descartar aqullas que
presenten alteraciones que reduzcan la fertilidad. En los programas de IA se
deber ser ms estricto en este sentido, para as obtener todos los beneficios que
conlleva la tcnica. As, se deben descartar las hembras con anomalas
congnitas o adquiridas, como las que presenten alteraciones del tero
(Rodrguez, 2009).
Es conveniente, contar con
instalaciones adecuadas que permitan el manejo
adecuado y seguro de la yegua, para esto se debe contar con un brete de

inmovilizacin que permita desarrollar el proceso de seguimiento ecogrfico y de
inseminacin de la yegua.
Una vez se ha determinado el momento ptimo para la inseminacin (este
depender del tipo de material seminal utilizado, con semen refrigerado se realiza
normalmente por exploracin rectal ecogrfica del aparato reproductor para
identificar en un ovario la presencia de un folculo preovulatorio (FP), de tal
manera que si est en celo y/o tiene un FP se insemina por primera vez y se repite
a las 24 horas hasta que termine el celo o se observe la ovulacin. Si el material
utilizado es semen congelado conviene que la dosis se deposite en el tero entre
las 6-8 horas anteriores a la ovulacin o las 6 posteriores a la misma) se deben
realizar los siguientes pasos para la tcnica de inseminacin vaginal:
Inmovilizar a la yegua, para evitar que se lesione durante el proceso de la
I.A.
Se debe limpiar la totalidad del rea vulvar, para ello se puede utilizar
toallas de papel humedecidas o agua y papel peridico.
El inseminador toma una manga de plstico y se aplica lubricante estril no
espermicida, a lo largo del guante.
Tomar el catter o la pipeta de inseminacin (generalmente se utilizan

catteres rgidos de plstico unidos a una jeringa o botella). Introducirlo va
vaginal en direccin al techo de la vagina, con el fin de evitar que se dirija al
meato urinario y se contamine el material seminal. Con el dedo ndice se
gua el catter hasta el crvix.
En la entrada del crvix se introduce el dedo aproximadamente 0.5 a 1 cm,
con el fin de guiar el recorrido del catter, luego se introduce el catter
aproximadamente 5 a 10 centmetros mas hasta llegar al cuerpo del tero.
All se debe depositar el semen mediante la presin de la botella del
material seminal o la insercin con la jeringa.
Fuente: http://inseminacionequina.com/images/tecnicadeinseminacion.jpg
Fig. 20. Inseminacin artificial en la yegua
Actualmente existe otra tcnica de inseminacin, y es la variante
intrauterina
profunda, esta tcnica permite incrementar los porcentajes de fertilidad y reducir la

concentracin de espermatozoides de la dosis. Esta variante de inseminacin est
ms indicada cuando se emplea esperma congelado. En este caso se pueden
emplear catteres largos semirigidos de pequeo volumen o se puede usar un

endoscopio flexible adaptado que permite regar la papila tubrica con la dosis
(Rodrguez, 2009).
Leccin 24. Tcnica de inseminacin artificial en ovinos

La inseminacin de la oveja puede ser vaginal, cervical intrauterina. Estos
mtodos presentan variaciones e cuanto su complejidad y tasas de preez.
La oveja presenta un ciclo estral con una duracin aproximada de 17 das y la
ovulacin ocurre aproximadamente de 24 a 27 horas despus del inicio del celo
(Mejia y Hernndez, 1996, citado por Bedoya et al, 2005). Cuando se deba
inseminar artificialmente, por va vaginal o cervical, se obtendrn mejores
resultados si la inseminacin se hace lo ms cercano a la ovulacin, por lo cual se
recomienda que el
momento ptimo para inseminar ovejas es 12-18 horas
despus de la aparicin del estro (Hafez y Hafez, 2000).
Inseminacin vaginal. La inseminacin vaginal en los ovinos consiste en la

deposicin del semen en la vagina anterior sin ningn intento de localizar el cervix.
Los pasos que involucra esta tcnica son:
Inmovilizacin de la oveja y limpieza del rea vulvar, esto con el fin de evitar
la contaminacin de la vagina al introducir la pipeta de inseminacin.
La pistola, pipeta o jeringa con catter, se debe cargar con la dosis de
semen requerida, luego de dejar una cmara de aire de 0,2 ml en la jeringa.
La cmara de aire sirve que para las dosis completas de semen sea
depositada en la vagina durante la inseminacin.
La punta de la pistola o catter se introduce en la vagina a lo largo de la
pared superior facilitando su entrada por la apertura suave de la vlvula con
la mano libre.
Se deposita el semen en la vagina.
Inseminacin cervical. En la inseminacin cervical, la disposicin del semen se

realiza en el cervix hasta una profundidad de 3 cm. Los paso a seguir son los
siguiente:
Inmovilizacin de la oveja, limpieza del rea vulvar.
Se introduce un vaginoscopio hasta una profundidad de 10-13 cm. Una vez
que el cervix es localizado, la pistola de inseminacin se introduce hasta la
mayor profundidad posible, sin forzarla.
Antes de descargar el semen, se retirara un poco el vaginoscopio hacia
atrs a fin de facilitar el cierre de la vagina anterior evitando que el semen
se derrame. Posteriormente se retirara primero la pistola y luego el
vaginoscopio.
Es importante limpiar la vagina de contaminacin o mucus antes de
depositar el semen.
Fuente: http://www.cuencarural.com/img/varias/img7373.jpg
Fig. 21. Inseminacin artificial en la oveja
Inseminacin intrauterina. Cuando se va a realizar la inseminacin intrauterina

por laparoscopia, se debe realizar un ayuno de 12 horas o ms (generalmente por
una noche). Esto reduce el contenido del rumen, y facilita la localizacin de los
ovarios y los teros, evitando adems la regurgitacin desde el rumen durante la

laparoscopia. Los pasos a seguir son:
La oveja se presenta al inseminador, con el tren posterior levantado y la
camilla inclinada de un ngulo de 45 grados.
En primer lugar se introduce en la cavidad peritoneal el trocar de 7 ml y
cnula a la izquierda de la lnea media. Se debe tener especial cuidado de
no perforar ningn rgano ni vena principal.
Antes de introducir el trocar y cnula a la derecha de la lnea media, es
conveniente insuflar aire dentro del abdomen. La cavidad abdominal puede
examinarse con posterioridad retirando el trocar y reemplazndolo por el
endoscopio. El tero se localiza justo delante de la vejiga.
A travs de la cnula de 5 ml. se introduce la pistola de inseminacin, con
una cmara de aire de 0,3 ml. y el volumen requerido de semen.
Fuente: http://www.inta.gov.ar/actual/ant/2004/insemina_1g.jpg
Fig. 21. Inseminacin artificial laparoscpica en la oveja
Fuente: http://www.ceniap.gov.ve/ceniaphoy3/articulos/n9/arti/vasquez_b/imagen/image014.jpg
Fig. 22. Inseminacin artificial laparoscpica en la oveja
Leccin 25. Tcnica de inseminacin artificial en porcinos.

El ciclo del estro en cerdos promedia 21 das, pero puede estar entre 17 a 25 das.
El primer da cuando la cerda es receptiva al macho y se queda parada para ser
montada es lo que llamamos da 0. A los dos o tres das en que la hembra es
sexualmente receptiva se le llama Celo. Aunque la ovulacin (liberacin de los
vulos de los folculos del ovario) ocurre generalmente de 23 a 48 horas despus
de la iniciacin del estro, este acontecimiento es extremadamente variable. En
realidad, una cerda puede ovular antes de que ocurra el estro. Por esta razn es
que los productores suelen inseminar a las hembras ms de una vez.
Inseminacin artificial tradicional. La inseminacin artificial en los porcinos es
una tcnica relativamente fcil, en la misma se debe garantizar todas las medidas
de higiene con el fin de evitar la contaminacin del material seminal. Los pasos a
seguir para realizar esta tcnica son (Calle, et al, 2006):
El inseminador debe ubicarse sobre el dorso de la hembra con el fin de

hacer presin y realizar un masaje en el flanco, para imitar la accin del
macho durante la cpula. Esto permite que la hembra aumente sus
contracciones uterinas, y con ello mejora el transporte del semen. Tambin
es posible conseguir en el mercado, dispositivos manos libres, los cuales
se componen de dos mochilas laterales que ejercen la funcin de la presin
en los flancos y el dorso, y cuentan con un dispositivo para el sostn de la
botella o bolsa con el material seminal.
Fuente: www.avparagon.com/.../anatomia_aplicada _inseminacion_artificial.pdf
Fig. 23. Inseminacin artificial en la cerda
Se debe limpiar la totalidad del rea vulvar, para ello se puede utilizar
toallas de papel humedecidas o agua y papel peridico.
Tomar el catter o la pipeta de inseminacin y aplicar lubricante no

espermicida en el extremo, se debe tener cuidado de no obstruir el orificio
del catter con el lubricante.
Fuente: www.avparagon.com/.../anatomia_aplicada_inseminacion_artificial.pdf
Fig. 24. Lubricacin del catter. Se debe aplicar lubricante no espermicida en la punta del
catter.
Introducir la pipeta o el catter va vaginal, en ngulo de 45% dirigido hacia

el techo de la vagina dirigindolo hasta el crvix, esto con el fin de evitar
que la pipeta o el catter se vayan a travs del meato urinario y se
contamine con la orina.
Fig. 25. Insercin del catter. El catter debe insertarse en un ngulo de 45 dirigido hacia el
techo vaginal.
Al llegar al crvix, se debe hacer una rotacin del cateter en el sentido contrario a
las agujas del reloj, esto permitir que el mismo penetre en el crvix. Par
comprobar que est en el crvix, se puede halar suavemente hacia atrs el catter
y all se comprobar cierta resistencia.
En este momento se debe conectar al catter o pipeta la bolsa o botella que
contiene el semen diluido, previa dilucin del mismo con fin de homogenizar el
material seminal. Luego se debe descargar lentamente el material seminal. En un
comienzo puede ser necesario oprimir ligeramente la botella o bolsa para iniciar el
proceso, pero despus se debe dejar que el semen sea extrado por las
contracciones del tero.
El proceso de inseminacin puede tardar entre 3 y 8 minutos. Si el material
seminal es depositado de una manera rpida, puede causarse reflujo con la
consecuente prdida del semen, aunque generalmente se puede observar la
prdida de una pequea cantidad de semen durante la I.A. En caso de que se

observe la prdida de una gran cantidad de semen, se debe verificar que la pipeta
o el catter este correctamente introducido en el crvix.
Fig. 26. I.A en la Cerda. El proceso de inseminacin puede tardar entre 3 y 8 minutos.
Todo el proceso de inseminacin debe hacerse con el menor estrs
hacia la
cerda, porque esto puede influir en los resultados finales de las tasas de preez y
en la prolificidad.
Una vez se haya depositado todo el semen, se debe extraer el cateter o la pipeta
hacindola girar en el sentido de las agujas del reloj mientras se hala suavemente.
Una vez se ha extrado el catter se debe mantener a la hembra en un sitio
tranquilo por 20 a 30 minutos, lejos de factores estresantes.
Fig. 27. Diversos tipos de catter utilizados en la I.A porcina
Inseminacin artificial postcervical (IPC) intrauterina profunda (IIP). Gracias a

los avances de la biotecnologa en los ltimos aos, se han desarrollado nuevos
sistemas de inseminacin artificial en la especie porcina. Esto ha permitido la
reduccin de las dosis a utilizar en los proceso de inseminacin artificial,
contribuyendo a la obtencin de un nmero mayor de dosis por colecta y con ello
mejorar la productividad de las explotaciones.
La inseminacin post-cervical (IPC) consiste en la introduccin de una cnula
transcervical a travs del cervix para alcanzar la porcin anterior del cuerpo del
tero, donde los espermatozoides son depositados (Watson y Behan, 2002, citado
por Calle, et al, 2006). La dosis inseminante en el caso de esta tcnica es de
aproximadamente 750- 1000 millones de espermatozoides.
La inseminacin intrauterina profunda consiste en la deposicin del semen en la
parte anterior del cuerno uterino, en proximidades de la unin tero-tubrica. Este
tipo de inseminacin permite disminuir la cantidad de espermatozoides utilizados
por I.A, asimismo disminuyendo la prdida de material seminal por
reflujo. La
dosis inseminante en el caso de esta tcnica es de aproximadamente 150 millones

de espermatozoides (Cceres, 2008).
Por ltimo es necesario hacer unas recomendaciones referentes al manejo de los

termos de conservacin de las pajillas de semen criopreservado. Los termos de
nitrgeno con boca ancha, presentan el inconveniente de que presentan una tasa
mayor de evaporacin y prdida de nitrgeno. Este tipo de termos son ms
recomendados para las casas productoras de pajillas, ya que facilitan la
manipulacin de las pajillas. Para las explotaciones ganaderas se recomienda el
uso de termos de boca angosta, con el fin de disminuir la prdida del nitrgeno, y
por ende disminuir los costos de manejo de los mismos.
Fuente: http://www.reproduccionanimal.com.mx/Galeria_RASA/Galeria45.jpg
Fig. 28. Termos de inseminacin. Los termos de boca ancha presentan una mayor tasa de
prdida de nitrgeno por evaporacin.
La transferencia de embriones es una biotecnologa que ha crecido a un ritmo

constante durante los ltimos aos, en Colombia se ha intensificado su uso,
especialmente en el ganado bovino durante los ltimos 18 aos (Bolvar y
Maldonado, 2008). Este es un mtodo de reproduccin artificial que consiste en la
produccin de varios embriones generados por una hembra donante y que sern
posteriormente transferidos a hembras receptoras.
Leccin 26. Seleccin y manejo de donantes y receptoras

Quiz uno de los aspectos mas importantes dentro de la transferencia de
embriones es la adecuada seleccin de las donantes y receptoras. En la seleccin
de donantes, es necesario tener en cuenta dos criterios fundamentales:
Animales de alta gentica, superiores a los otros.
Excelente estado reproductivo
Donantes:
La seleccin de donantes debe hacerse de manera estricta, las donantes deben
estar reproductivamente sanas y en un balance nutricional adecuado, de lo
contario el programa podra fracasar, las vacas demasiado flacas o muy gordas
(condicin corporal menor de 2.5 o mayor de 4.5 en escala 0 a 5).
Las vacas no deben estar con ternero, si en el momento del inicio del programa
tiene ternero, el mismo debe ser separado. De igual manera no es aconsejable
utilizar vacas con menos de 60 das posparto, ya que estas pueden presentar ciclo
irregulares (Albeiro, 2001).
Receptoras:
La seleccin de unas buenas receptoras es otro de los puntos crticos dentro del
programa e T.E. Las receptoras deben estar clnicamente sanas, libres de
cualquier enfermedad, y con un tracto reproductivo en ptimas condiciones, se
requieres que tengan buena habilidad materna y capacidad productora lctea.
Estas receptoras sern las encargadas de mantener el embrin desde el da 7
hasta su nacimiento y posterior amamantamiento. Por lo anterior deber ser una
hembra que no sea propensa a partos distcicos y que tenga una buena
produccin lctea.
El tamao de la receptora depende del tipo de embrin que se transferir. En
cuanto a la edad, se difiere an en lo recomendable, algunos autores piensan que
es mejor novillas y otros en vacas que ya hayan parido al menos una vez. Las
novillas permiten obtener tasas de preez mayores a las vacas, sin embargo
pueden presentar problemas durante la gestacin, el parto y la lactancia. Mientras
que el uso de vacas con historia de parto permitir conocer el comportamiento que
tendr la receptora durante y despus de la gestacin y el parto (Albeiro, 2001).
Programa de Sincronizacin del celo entre la donante y la receptora y

superovulacin de la donante
En condiciones normales, las vacas tienen una
ovulacin por ciclo, aunque
algunas pueden alcanzar hasta dos ovulaciones (hasta un 8% segn la raza). Lo

que se busca con esta biotecnologa es incrementar el nmero de ovulaciones
consideradas fisiolgicas para la especie, a travs de la aplicacin de hormonas
exgenas que estimulen el desarrollo y la ovulacin de un numero amplio de
folculos (Cyagra, 2008).
Para los programas de superovulacin en bovinos se puede hacer uso de dos

hormonas que ejercen este efecto: la Hormona foliculoestimulante (FSH, la cual
viene en combinacin con LH) y la Gonadotropina Corinica equina (eCG, o
PMSG).
Protocolo mediante el uso de Hormona foliculoestimulante (FSH).

La hormona foliculoestimulante ha sido la hormona de predileccin en los
programas de superovulacin en bovinos. La dosis de aplicacin vara de acuerdo
con la raza, algunas son ms susceptibles a la accin de la hormona y responden
a su accin con menos dosis. Los productos disponibles comercialmente son
hormonales de origen porcino u ovino, los cuales contienen FSH en combinacin
con LH. La presencia de LH se explica de acuerdo a lo expresado por Calier
(2008) en lo siguiente: a grandes dosis la LH provoca la ovulacin; a pequeas
dosis, acta en sinergia con la FSH en el desarrollo folicular. Los folculos
menores de 9 mm de dimetro son FSH-dependientes, lo que se evidencia por la
presencia de receptores FSH en las clulas de la granulosa, pero cuando superan
los 9 mm, adquieren receptores de LH, y el crecimiento folicular pasa a depender
de la LH. Por lo tanto, la LH es necesaria para los estadios finales del desarrollo
folicular.
Las dosis comnmente empleadas en la superovulacin de vas varia de acuerdo a
la siguiente relacin:
Ganadera bos taurus (Razas lecheras):
800-1000 UI
Ganadera bos taurus (Razas crnicas):
600-800 UI
Ganadera bos taurus (Novillas):
500 UI
Ganadera bos indicus:
250 UI
En dosis decrecientes, cada 12 horas, durante 4 das, aplicando una PG al 3 o 4

da por la maana.
Protocolo de superovulacin y sincronizacin del celo (vacas)

Tabla 11. Protocolo de superovulacin y sincronizacin del celo (vacas).
DIA
HORA
DIA 0
08:00 horas
DOSIS
DONANTE
RECEPTORA
Dispositivo intravaginal
1 Dosis PGF2
o auricular +
progesterona +
benzoato de estradiol
DIA 4
DIA 5
DIA 6
08:00 horas
3.0 ml
150 UI
20:00 horas
3.0 ml
150 UI
08:00 horas
2.5 ml
125 UI
20:00 horas
2.5 ml
125 UI
08:00 horas
1.5 ml
75 UI + PGF2 +
2 Dosis PGF2
Retiro del dispositivo
DIA 7
DIA 8
20:00 horas
1.5 ml
75 UI
08:00 horas
1 ml
50 UI
20:00 horas
1 ml
50 UI
Deteccin de celo
Inseminacin artificial
Deteccin de celo
08:00 horas
(I.A) + GnRH
DIA 15
20:00 horas
I.A
08:00 horas
Colecta de embriones
Transferencia de
embriones
Protocolo de superovulacin y sincronizacin del celo (novillas)

Tabla 12. Protocolo de superovulacin y sincronizacin del celo (Novillas).
DIA
HORA
DIA 0
08:00 horas
DOSIS
DONANTE
RECEPTORA
Dispositivo intravaginal
1 Dosis PGF2
o auricular +
progesterona +
benzoato de estradiol
DIA 4
DIA 5
DIA 6
08:00 horas
2.0 ml
100 UI
20:00 horas
2.0 ml
100 UI
08:00 horas
1.5 ml
75 UI
20:00 horas
1.5 ml
75 UI
08:00 horas
1 ml
50 UI + PGF2 +
2 Dosis PGF2
Retiro del dispositivo
DIA 7
DIA 8
20:00 horas
1 ml
50 UI
08:00 horas
0.5 ml
25 UI
20:00 horas
0.5 ml
25 UI
Deteccin de celo
Inseminacin artificial
Deteccin de celo
08:00 horas
(I.A) + GnRH
DIA 15
20:00 horas
I.A
08:00 horas
Colecta de embriones
Transferencia de
embriones
Protocolo mediante el uso de Gonadotropina Corinica equina (eCG, o

PMSG). La eCG (Folligon, Novormon) es una hormona producida en las copas
endometriales de la yegua durante los das 42 a 150 de la gestacin. Esta
hormona tiene una accin FSH y LH,
con una vida media larga de
aproximadamente 5 das. Debido a su vida media larga, puede desencadenar una

sobreestimulacin ovrica la formacin de quistes foliculares. La dosis empleada
para inducir la superovulacin es de 2000 UI en novillas y de 3000 UI en vacas.
Tabla 13. Protocolo de superovulacin con eCG.
DIA
HORA
DIA 1
08:00 horas
DOSIS
OBSERVACION
Dispositivo intravaginal o auricular +
progesterona + benzoato de estradiol
DIA 7
2000 UI
Aplicacin IM de eCG
Retiro dispositivo + aplicacin de PGF2
DIA 9
1000 G
DIA 10
I.A + Aplicacin de anti-PMSG (anti-eCG)
Progesterona: 50mg, benzoato de estradiol: 2.5
Fig. 29. Ovarios superovulados.
Leccin 27. Colecta y evaluacin de embriones

Los embriones bovinos, pueden ser recuperados a travs de mtodos no
quirrgicos. Inicialmente, la recuperacin de embriones se haca por medios
quirrgicos, y se requera de anestesia general y/o local, para luego realizar una
incisin a nivel de la lnea media y extraer los cuernos uterinos con los ovarios y
se realizaba el lavado de los cuernos para extraer los embriones (Palma, 2001).
Sin embargo estas tcnicas producan
lesiones con formacin de fibrina y
adherencias de los varios y cuernos a las paredes de la cavidad abdominal,

produciendo la prdida reproductiva del animal.
Hoy en da es posible realizar la extraccin de los embriones, por medio de

tcnicas no quirrgicas (mtodo transvaginal). Para la coleccin no quirrgica de
embriones se han inventado variedades de instrumentos pero los ms comunes
son los catteres Foley de 2 vas y el modelo Neustadt/. Las diferencias
fundamentales entre ellos redica en el largo y en la consistencia. El modelo
Neustadt/Aish es 27 cm. ms largo y es ms duro que el Foley (Del campo, 2000).
La sonda Foley es el elemento utilizado en nuestro pas para la recuperacin de
los embriones.
Tcnica
En el proceso de lavado y colecta de embriones se debe contar con los siguientes
elementos:
Circuito de lavado
Sonda Foley (Con estilete)
Medio de lavado (PBS)
Dilatador de crvix
Mangas de palpacin
Filtro de recoleccin
Jeringas
Lidocana al 2%, agujas 16G o 18G
Cajas de petri
Microestereoscopio
Medio holding
Pajillas
Congeladora de embriones
Pistola de transferencia
Se debe inmovilizar a la donante en un brete o carral, se realiza la palpacin rectal

o la evaluacin ecogrfica para determinar el nmero de cuerpos lteos presentes
en cada ovario.
Se limpia y desinfecta la regin perineal y vulvar. Se aplica la anestesia epidural
baja (5 ml, de lidocana al 2%).
Se introduce un brazo por va rectal y con el otro se introduce la sonda Foley (con
el estilete) va vaginal, se pasa el crvix y se infla el baln o globo con 10-15 ml de
aire o de solucin salina o PBS, esto con el fin de evitar la salida de la sonda y/o
lquido de lavado durante el proceso (En algunas vacas ser necesario producir
una dilatacin del crvix para facilitar el paso de la sonda, esto se realiza con el
dilatador de crvix).
La sonda debe ser ubicada de forma tal que no exista perdida de lquido durante el
proceso, y se procede a introducir el medio de lavado (Este medio debe
introducirse a temperatura corporal, 37C, en volmenes de 20 a 100 ml, luego se
procede a realizar el masaje por todo el cuerno con el fin de arrastrar los
embriones, luego este liquido debe ser colectado y pasa a travs de un filtro en
donde van a ser colectados los embriones. Este procedimiento se repite entre 3 y
6 veces en cada uno de los cuernos.
Una vez se ha terminado de colectar los embriones se deba aplicar una dosis de
prostaglandina, con el fin de inducir la luteolisis y as evitar que ocurra una preez
de embriones que hayan podido quedar dentro del tracto reproductivo posterior al
lavado.
Fuente: Guzmn et al, 2008
Fig. 30. Proceso de colecta de embriones
Los embriones colectados en el filtro son llevados al laboratorio, para all realizar
la bsqueda, evaluacin y clasificacin de los mismos.
A nivel de laboratorio se realiza la bsqueda de embriones (Viables y no viables) y
estructuras no fertilizadas en el estereoscopio, para esto se extrae el contenido del
filtro en cajas de petri. Los embriones viables son separados en otra caja de petri
mas pequea que contiene medio PBS, posteriormente se realiza el lavado de los
embriones por medio del pase de los mismos en medio durante 8 a 10 veces.
Evaluacin de embriones
La evaluacin morfofolgica es un aspecto importante para definir cules son
aptos para la transferencia y/o crio preservacin. Por lo anterior es importante
realizar un repaso por los estadios de desarrollo del embrin durante los 9
primeros das.
Desarrollo del embrin en los bovinos
Tabla 14. Desarrollo del embrin.
TIEMPO
DESARROLLO
36-48 horas
2 clulas
3 da
4 8 clulas
4 da
8 16 clulas
4-5 da
Mrula temprana
5-6 da
Mrula compacta
6-7 da
Blastocisto temprano
7-8 da
Blastocisto expandido
8-9 da
Blastocisto eclosionado
A nivel del laboratorio se procede a realizar la clasificacin de los embriones de

acuerdo a su calidad, para esto se establece una escala de clasificacin de 1 a 5.
Escala de clasificacin de la sociedad internacin de Transferencia de embriones
Tabla 15. Escala de clasificacin embrionaria.
Fuente: Evangelista et al, 2007.
Los embriones aptos para criopreservacin son los tipo 1, los aptos para la
transferencia en fresco son los tipo 1, 2 y 3. Y los dems no son viables. Si se va a
realizar la criopreservacin son empajillados en medio de Etilenglicol, si van a ser
transferidos en fresco se empajillan en medio PBS.
Fuente: http://artbreeding.com/Graphics/BovineFlush.jpg
Fig. 31. Embriones en diferentes etapas de desarrollo.
Fuente: http://www.hamiltonthorne.com/products/lasers/xyclone/images/hatched -bovine-embryos.JPG
Fig. 32. Embriones colectados.
Leccin 28. Transferencia de embriones

La transferencia es no quirrgica. Las pajuelas conteniendo al embrin son
cargadas en un pistolete de transferencia, el cual es cubierta con una camisa
sanitaria de plstico. La receptora es ubicada en un brete, encepada y
anestesiada con una inyeccin epidural. Luego de ser palpada en bsqueda del
cuerpo lteo, el pistolete es insertado hasta la mitad del cuerno uterino (lo ms
profundo posible) y el embrin es depositado all. Los porcentajes de preez
esperados son de un 60 al 65 %, cuando se transfieren embriones en fresco, y del
50 al 55%, cuando los embriones transferidos son congelados (Cyagra, 2008).
Tomar una pajilla de 0,25 ml y cargar en ella el embrin en el siguiente orden:
1. 1ra. columna de PBS con suero fetal al 10%.
2. 2da. columna, pequea burbuja de aire.
3. 3ra. columna de PBS con medio de congelacin.
4. 4ta. columna, pequea burbuja de aire.
5. 5ta. columna, cargar el embrin en su medio.
7. completar el resto de la pajuela con medio de congelacin.
La pajilla se carga en la pistola de transferencia de embriones y sta dentro de la
pipeta plstica estril. Introducir una mano va y sujetar el crvix a travs de la
pared del recto. La pistola se introduce va vaginal en el canal cervical y su
extremo se ubica, con ayuda de la mano izquierda, en el cuerno ipsilateral al
Cuerpo lteo. Una vez en la posicin deseada (un poco ms all del cuerpo del
tero) el embrin es depositado suavemente y la pistola se retira lentamente. Todo
este procedimiento debe realizarse lo ms rpido y delicadamente posible. El
exceso de manipulacin producir dao a la mucosa del tero, que se traducir en
una baja en los resultados (Del campo, 2000)
Leccin 29. Criopreservacin de embriones
De acuerdo a lo expresado por Celestinos y Gatica (2002), el empleo de

embriones congelados posibilita la utilizacin eficiente de las donantes y
receptoras; permite la incorporacin de alta gentico a bajo costo (comparando los
valores del embrin y el de su transporte frente a los animales en pie), permite la
transferencia de algunos embriones y la conservacin del resto hasta poder
analizar los registros de produccin de la descendencia; facilita el control de
enfermedades exticas (reemplazando la importacin de animales en pie por la de
embriones congelados libres de ellas), y permite la creacin
de bancos de
embriones de valor pecuario, entre otras ventajas. Los registros de la Sociedad

Internacional de Transferencia de Embriones revelan que ms del 50% de 500.000
embriones de bovino transferidos en los ltimos aos han sido usados despus de
ser congelados y descongelados (Thiber, 1997). La conservacin de los
embriones a temperaturas extremadamente bajas (-196 C en nitrgeno lquido)
permite detener casi por completo la actividad enzimtica intercelular, respiracin
celular,
metabolismo,
crecimiento,
multiplicacin,
etc.;
es
decir,
reducen
drsticamente la actividad fisiolgica de la clula, as es posible almacenar

embriones durante un largo perodo sin afectar su viabilidad y sin causarles
cambios genticos.
En la actualidad, la crioconservacin de embriones de mamferos ha llegado a ser

un procedimiento rutinario en biologa, ganadera y medicina, pudiendo lograrse
por procedimientos de congelacin estndar y por vitrificacin. La principal
diferencia que tiene la vitrificacin con el mtodo estndar es que en este ltimo la
concentracin de crioprotectores es menor y el descenso de temperatura se
realiza de manera controlada mediante equipos programables (Fahning y Garca,
1992, citado por Celestinos y Gatica, 2002).
Crioprotectores
Durante el proceso de criopreservacin, los embriones deben ser deshidratados

parcialmente a fin de evitar la formacin de cristales que lesionan las estructuras
citoplasmticas. Esta deshidratacin se logra incorporando un agente crioprotector
al medio de congelacin. Existen dos clases de Crioprotectores: intracelulares o
permebales y extracelulares o impermeables.
Permeables o intracelulares: presentan bajo peso molecular, estos compuestos
deshidratan la clula penetrando a sta para ayudar a proteger el citoplasma.
Entre estos se encuentran:
Glicerol (G), Dimetilsulfxido (DMSO), 1-2
propanodiol, etilenglicol (EG), propilenglicol (PG), polietilenglicol (PEG), etanol y

otros alcoholes.
Impermeables
extracelulares:
Presentan
alto
peso
molecular,
estos
compuestos extraen el agua libre intracelular utilizando la diferencia de presin

osmtica sin penetrar a la clula; son efectivos para preservar la funcionalidad y
estructura de las membranas a baja actividad de agua; deshidratan junto con el
crioprotector
las clulas de
los embriones.
Entre estos se encuentran:
polivinilpirrolidona (PVP), glucosa, fructosa, ficol, dextrano sorbitol, sucrosa,

lactosa, trealosa, rafinosa y otros azucares
Los crioprotectores previenen la deshidratacin total y la degeneracin proteica,

causada por la congelacin del agua intra y extracelular durante el proceso. La
etapa del desarrollo ms apropiada para la vitrificacin en etilenglicol es la mrula
compacta y blastocisto temprano de embriones producidos in vivo o in vitro
(Celestinos y Gatica, 2002).
Tcnica de criopreservacin
El mtodo de congelacin estndar fue desarrollado por Wilmut y Rowson en

1973, en este mtodo
la exposicin de los embriones al medio de congelacin
(PBS + G) debe realizarse a temperatura ambiente (20 - 22 C), en un solo paso,

de 10 a 30 minutos de duracin. Este perodo incluye el envasado de los
embriones en pajillas plsticas. Esto permite realizar ms rpidamente y con
mayor precisin la induccin de la cristalizacin o seeding. Las pajillas deben ser
colocadas en un equipo de congelacin a -7 C durante 5 minutos para equilibrar
la temperatura de las pajillas con la del equipo; el seeding se realiza poniendo en
contacto la superficie de la pajilla con una placa metlica enfriada con nitrgeno
lquido (NL2); el agente refrigerante del equipo puede ser nitrgeno lquido alcohol
o etanol enfriado por medio de un compresor (El no inducir la cristalizacin
conduce a la formacin de cristales de hielo bajo un estado de superenfriamiento y
a una elevacin repentina de temperatura (se genera calor latente de 10 a 15
C), resultando un severo trauma fsico que puede daar las clulas (Niemann,
1995, citado por Celestinos y Gatica, 2002). Una vez efectuado el seeding, se
mantiene la temperatura estable durante 10 minutos (perodo de estabilizacin) y
luego se desciende a una velocidad de entre 0.1 y 0.5 C hasta -30 -35 C para
establecer un adecuado balance entre deshidratacin y formacin de hielo
intracelular, en este momento las pajuelas pueden ser retiradas del equipo de
congelacin y sumergidas en nitrgeno lquido. La descongelacin se realiza de
manera rpida, sumergiendo las pajillas en bao Mara a 30 35 C durante 20
30 segundos (Celestinos y Gatica, 2002).
Existe otro mtodo de congelacin rpida que fue desarrollado por Chupin (1986).
Los embriones son deshidratados parcialmente como ocurre en el mtodo
estndar, luego se les deshidrata nuevamente colocndolos en una solucin mixta
de glicerol y sucrosa. Esta segunda deshidratacin deja a los embriones en
condiciones de ser enfriados rpidamente. Las pajuelas son colocadas en el cuello
del termo de nitrgeno, durante 5 minutos, posteriormente son sumergidas al NL.
Por ltimo, existe un proceso denominado vitrificacin, el cual consiste en
un
proceso fsico de solidificacin utilizado para conservar rganos, tejidos y

embriones. La solucin vitrificante (SV) lleva incorporado crioprotectores en alta
concentracin. Al ser enfriada no cristaliza, sino que se torna viscosa y pasa del
estado lquido a un estado slido no estructurado similar al vidrio, tomando de ah
su nombre. Todo el procedimiento desde el equilibrio hasta la inmersin en NL no
requiere ms de 10 minutos
Por otro lado De Luca (2007) describe la tcnica de criopreservacin de embriones
bovinos de una manera ms detallada:
Seleccin del embrin. Separar mrulas de blastocistos.
Lavar 10 veces con una solucin de Dulbecco modificado, con 10% de
suero fetal bovino (Mrulas: sumergir durante 10 minutos el embrin en una
solucin de Dulbecco, con 1,5 molar de glicerol, ms 0,1 molar de
sucrosa. Blastocistos: sumergir durante 10 minutos el embrin en una
solucin de Dulbecco, con 1,5 molar de glicerol, ms 0,2 molar de
sucrosa).
Tomar una pajilla de 0,25cc y cargar en ella el embrin en el siguiente
orden:
8. 1ra. columna de Dulbecco con suero fetal al 10%.
9. 2da. columna, pequea burbuja de aire.
10. 3ra. columna de Dulbecco con medio de congelacin.
12. 5ta. columna, cargar el embrin en su medio.
14. completar el resto de la pajuela con medio de congelacin.
Llevar los embriones a la congeladora con una temperatura de entre -6C a
-7C, donde permanecern 10 minutos en stand by, hasta alcanzar los 35C.
A su trmino tocar la pajuela a la altura de la 3ra. columna con una pinza

hemosttica, previamente sumergida en nitrgeno lquido para que alcance
en su extremo los -196C. Este mtodo (Seeding) evitar la muerte del
embrin por sobrefusin.
La corrida de temperatura ser de 0,5C por minuto hasta alcanzar los 35C, momento en que se introducir la pajuela en nitrgeno lquido
(Plunging)
Proceso de descongelacin de las pajillas

Tomar la pajilla con una pinza y exponerla a temperatura ambiente durante
1 segundo.
Sumergir la pajuela en agua a 35C durante 1 minuto.
Sacar la pajilla del agua y secarla sin agitarla.
Cortar el extremo con un cortador especial evitando agitarla.
Cargar la pajilla en la pipeta de transferencia e implantar el embrin sobre el
cuerno en que se presenta el cuerpo lteo.
Leccin 30. Transferencia de embriones en equinos
La tcnica de transferencia de embriones en equinos es el procedimiento por el

cual se recolecta uno o ms embriones a travs de un lavaje uterino transcervical
de una yegua donante inseminada o servida por monta natural, 6 a 10 das postovulacin, y se transfiere de manera no quirrgica al tero de otra yegua receptora
sincronizada previamente (Losinno 2007).
La primera transferencia de embriones en
equinos realizada con xito fue
comunicada por Oguri y Tsutsumi en 1972, pero no fue aceptado como

procedimiento en la industria equina hasta comienzos de los aos 80. En 1984 se
realiza el 1 Simposio Internacional Equino en la Universidad de Cornell (U.S.A.),
el 2 en Canad en el ao 1989, y el 3 en Argentina en 1992. Actualmente, a 11
aos de este evento, en nuestro pas se realiza con xito el trasplante de
embriones y cada da se acrecenta ms la utilizacin de este mtodo en la
reproduccin equina. Hoy da esta tcnica es considerada a nivel mundial, como
una de las tcnicas de Reproduccin Asistida ms utilizada.
Indicaciones de la T.E en equinos
La T.E es una tcnica que presenta mucho potencial en la explotacin equina, en
aras del mejoramiento de la eficiencia reproductiva, algunas de las indicaciones
para la implementacin de esta biotecnologa son:
Disminuir el intervalo generacional.
Obtencin de cras de hembras en exposicin o competencia deportiva
Obtencin de cras de hembras con problemas o lesiones de tipo no
reproductivo.
Obtencin de cras de hembras de avanzada edad o hembras muy jvenes
(entre dos y tres aos de edad).
Incrementar la produccin de cras por hembra, lo cual permite la rpida
multiplicacin de cras por hembra.
Disminuir los riesgos de la gestin y el parto en yeguas de alto valor.
Fuente: http://www.transbio.com/images/trans0.jpg
Fig. 33. T.E en equinos.
Sin embargo la transferencia embrionaria en el equino no ha tenido el mismo xito

que en el bovino, ya que no existe un mtodo seguro de superovulacin en la
yegua, esto implica que solo se puede obtener un embrin por ciclo si la yegua es
preada. (Losinno 2007). Sin embargo, esta tcnica permite la obtencin de 6 a 8
cras por ao, pero aqu existe una limitante, y es que algunas asociaciones
criadores restringen el nmero mximo de cras por ao.
Tcnica
Seleccin de Yeguas Receptoras. La seleccin de receptoras es uno de los
factores que inciden en mayor proporcin en el xito de la tcnica. Se debe
seleccionar yeguas con una edad entre los 3 y 10 aos, con buna condicin
corporal y conformacin, deben tener un peso y tamao igual o superior al de las
yeguas donantes para poder llevar a buen trmino la gestacin. Usualmente se
eligen yeguas de razas pesadas o sus cruzas para aprovechar rusticidad, tamao,
temperamento y aptitudes maternas que facilitaran la cra del potro.
Las
receptoras seleccionadas son sometidas a un examen reproductivo en el cual se

examina la integridad de los rganos sexuales, asimismo se realiza un
seguimiento ecogrfico de al menos dos ciclos para determinar la ciclicidad
(actividad folicular, ovulacin) y se someten a un rgimen alimentario que les
permita ganar peso despus de la gestacin.
Seleccin de Yeguas donantes. Las yeguas donantes son yeguas seleccionadas

por su alta gentica, las mismas son sometidas a un completo examen
reproductivo que incluye tamao, tono y forma del tero. El cervix, se examina por
va vaginal y se realiza un cultivo cervical para obtener informacin del estado del
mismo, si se identifican anormalidades deben ser tratadas antes de su
introduccin al programa de transferencia (Losinno 2007, Campos, 2007).
Sincronizacin de celo (Donante receptora)

Es importante realizar un adecuado proceso de sincronizacin del celo entre la
yegua donante y las receptoras. Una buena alternativa es la utilizacin de un
progestgeno de suministro oral o alguno de los mtodos alternativos, tal como se
explic en el captulo de sincronizacin. Durante el celo de la yegua donante se la
observa por ecografa para conocer el momento ptimo del servicio o
inseminacin artificial. Luego de ste se procede a la seleccin, tambin mediante
ecografa, de 2 o ms yeguas receptoras (de acuerdo a la disponibilidad de las
mismas), y de stas se elige una, que de acuerdo al crecimiento folicular y
ovulacin se encuentre mas sincronizada con la donante (Losinno 2007, Campos,
2007).
Colecta y transferencia de embriones

Al sptimo u octavo da post inseminacin de la donante se realiza la colecta del
embrin o embriones mediante lavado uterino transcervical. Para esto se debe
seguir los siguientes pasos (Losinno 2007, Campos, 2007):
Se coloca la yegua donante en un brete se venda la cola y se lava la regin
perineal con abundante agua y un detergente suave, se enjuaga y seca.
El operador se coloca un guante de tacto estril, con gel lubricante estril, y
procede a la introduccin de un catter (sonda Foley) de 80 cm de longitud,
con un baln inflable de 30-60 cc.a travs del cervix, ubicando en el cuerpo
del tero el baln del catter, que una vez all es inflado con aire o suero.
Se comprueba que est en el sitio adecuado traccionando hacia atrs para
que no haya reflujo de lquido.
Se lava el tero introduciendo por el catter 3 litros de PBS (phosphate
buffer saline) o PBS modificado tibio a 30 a 35 C. Luego se permite al
liquido salir y pasar a travs de un filtro para embriones.
Mediante masajeo del tero va rectal se logra obtener el 80% del total del
lquido prefundido el cual si la yegua no tiene problemas uterinos debera
ser claro, libre de restos celulares y sangre. La recuperacin de lquido
turbio indica endometritis.
Al finalizar el lavado el contenido del filtro se vaca en una placa de petri
para buscar el embrin bajo lupa estereoscpica con un aumento de 15X.
Luego de localizado el embrin se lava 3 o 4 veces con lquido de
enriquecimiento y se observa a mayor aumento para clasificarlo de acuerdo
a una escala que va de 1 (excelente) a 4 (pobre) de acuerdo a las
caractersticas de viabilidad embrionaria.
Se introduce en una pajuela 0.5 o 0.25, (mediante aspiracin a travs de
una pipeta dosificadora para embriones o una pajuela adosada a una
jeringa) con medio de enriquecimiento y se mantiene a temperatura de 37
C hasta el momento de la transferencia, preferentemente antes de 2 horas
de su recoleccin.
Se coloca la pajuela dentro de un inyector de Inseminacin Artificial

descartable, se protege ste con una camisa sanitaria estril para evitar la
contaminacin durante el pasaje de la misma por la vagina.
El operador, con un guante de tacto estril, con lubricante tambin estril,
previo lavado y secado de los genitales de la yegua receptora, introduce la
mano en la vagina con la punta del inyector protegida en la palma de la
mano, rompe la camisa sanitaria y lo introduce a travs del cervix en el
cuerpo uterino. Se deposita el embrin lentamente.
Es imprescindible siempre administrarle a la yegua donante Prostaglandina
F2a para que esta retorne al estro, y asegurarnos que no se establezca la
preez en aquellas yeguas en la que no se pudo recolectar embrin.
A los 7 das de realizada la transferencia, se realizan ecografas en las
receptoras para diagnosticar preez, que se repiten a los 20, 35, 50 y 60
das.
La tasa de recuperacin de embriones por cada intento de colecta vara entre un

20% a un 160%. La variabilidad de estas obtenciones se debe, entre otros
factores, a la cantidad y calidad del semen utilizado, la edad y estado reproductivo
de la donante, el da post-ovulacin en el que se intente obtenerlo, el nmero de
ovulaciones, la tcnica de lavaje utilizada y el entrenamiento del operador
(Lossino, 2007).
UNIDAD 3. ULTIMAS BIOTECNOLOGIAS

REPRODUCTIVAS APLICADAS A LA PRODUCCION
ANIMAL
OBJETIVOS
Conocer la tcnica y los procesos desarrollados en la Fertilizacin in vitro.
Identificar las ultimas biotecnologas aplicadas a la reproduccin y su
estado actual a nivel mundial y a nivel local.
ESTRUCTURA
CAPITULO 1. FERTILIZACION IN VITRO.

Leccin 33. Maduracin de ovocitos.
Leccin 34. Fertilizacin in vitro.
Leccin 35. Maduracin y transferencia de embriones.
Leccin 37. Clonacin.
Leccin 38. ltimos avances en clonacin.
Leccin 39. Transgnesis.
Leccin 40. ltimos avances en transgnesis.
CAPITULO 3. SEXAJE DE SEMEN, QUIMERAS, ICSI, CELULAS MADRE
Leccin 45. Produccin de clulas madre
UNIDAD 3. ULTIMAS BIOTECNOLOGIAS

REPRODUCTIVAS APLICADAS A LA PRODUCCION
ANIMAL
CAPITULO 1. FERTILIZACION IN VITRO

La biotecnologa de la Fertilizacin in vitro (FIV) ofrece una nueva dimensin en la
reproduccin animal,
esta
tcnica supera la inseminacin artificial y
la
transferencia de embriones, lo cual permite ampliar las posibilidades de

mejoramiento de la productividad y eficiencia de las explotaciones bovinas
(Fernndez, Bastidas y Trocniz, 1997).
La FIV es una biotecnologa que durante los ltimos 10 aos se ha venido
implementando de manera paulatina en ganaderas de alto valor gentico. Su
valro est representado en un mayor nmero de embriones obtenidos durante
cada uno de los tratamientos, sin embargo su principal inconveniente radica en
los costos, pues requiere de un equipamiento especial, para los procesos de
maduracin de ocovitos, fertilizacin in vitro y maduracin embrionaria.
Sin embargo, si se cuenta con animales de alta gentica es una buena alternativa
y puede implementarse en animales que no podran ser utilizados en otras
biotecnologas, tales como (Cyagra, 2008):
Vacas refractaria a tratamientos superestimulatorios.
Vacas que no dan embriones transferibles en programas de Superovulacin
y Transferencia de Embriones.
Vacas con alteraciones anatmicas que impiden una correcta fecundacin o
anidacin del embrin. (Ej: adherencias post-cesrea)
Vacas de desecho (por enfermedad o accidente)
Vacas o Novillas hasta el primer tercio de gestacin
Vacas en puerperio
Terneras Prepberes
La fertilizacin in vitro comprende varias etapas, relacionadas de la siguiente
forma:
Obtencin de ovocitos.
Maduracin de ovocitos.
Fertilizacin in vitro.
Maduracin in vitro.
Transferencia de embriones.

Durante el ciclo estral es posible encontrar un elevado nmero de folculos que
inicia su desarrollo (Fase de reclutamiento) , sin embargo solo uno va a alcanzar la
ovulacin, los dems involucionan o se atresian e inicia un nuevo ciclo estral. Esto
ocurre durante toda la vida reproductiva del animal, ocurriendo que solo unos
pocos folculos llegaran a la ovulacin y miles involucionaran.
En este sentido, la recoleccin de ovocitos permite recuperar y aprovechar
folculos no ovulatorios, que bajo condiciones fisiolgicas se tornaran en folculos
atrsicos, con el fin de aprovechar el mximo potencial gentico de una donadora
por procedimientos in vitro. La recoleccin de ovocitos para el procedimeitno de
FIV se puede realizar en dos formas (Ramrez y Jimnez, 1999):
Recoleccin en animales post-mortem.
Recoleccin en animales vivos
Recoleccin en animales post-mortem: los ovarios pueden provenir de vacas de

alta gentica que sufrieron algn accidente o trauma y requieren ser sacrificadas.
En otros pases estos ovarios pueden ser obtenidos de vacas de matadero, para
obtener animales comerciales, sin embargo en nuestro pas esto no es viable por
el elevado valor de la tcnica. Los ovocitos se pueden recoger por aspiracin de
folculos visibles o mediante el mtodo de corte de la superficie e interior del
ovario. La temperatura a la cual se deben transportar los ovarios desde el
matadero o el sitio de colecta hasta el laboratorio, oscila entre 35 y 37 oC, y en esta
temperatura pueden permanecer hasta 8 horas, sin llegar a afectar su maduracin
y fertilizacin.
En la tcnica de corte (Ramrez y Jimnez, 1999) se corta la superficie y el interior
de los ovarios a lo largo y se hace remocin del tejido adyacente, del cuerpo lteo
y de sangre con lavados de solucin salina y alcohol. En la tcnica de aspiracin
los folculos superficiales visibles de 2 a 5 mm son aspirados mediante el uso de
jeringas y agujas de 16G.
Recoleccin en animales vivos: En animales vivos la recoleccin de ovocitos se

puede realizar por aspiracin trasvaginal guiada por ultrasonido (OPU, por sus
siglas en ingls, Ovum Pick Up) y por laparoscopia / laparotoma. La tcnica ms
comn y menos traumtica es la de OPU, y se puede realizar hasta 2 veces por
semana y repetida durante 5 a 6 meses, y con una periodicidad de dos
aspiraciones por semana o una semanal, sin ningn efecto adverso sobre la
reproduccin o sobre el bienestar del animal. Se ha demostrado que al final del
periodo de aspiraciones los animales pueden retornar a sus ciclos estrales
normales y ser incorporados a programas de cra (Rodrguez, 2006). Para el
procedimiento, se debe aplicar anestesia epidural, con el fin de evitar
contracciones abdominales y
las
facilitar la manipulacin de los ovarios, se debe
vaciar el recto y limpiar la regin perineal. Se utiliza un ecgrafo con transductor
de 5 7.5 MHz que posee una aguja en la parte superior con punta ecognica
conectado a una bomba peristltica de vaco que es introducido por va vaginal.
Se hace manipulacin rectal de los ovarios y se colocan contra el transductor, se
visualizan los folculos (mayores de 2 mm) y una vez localizados, la aguja
atraviesa la pared vaginal y se recoge el aspirado folicular en tubos que contengan
el medio de cultivo. En cada pasaje de la aguja se punciona solamente un folculo
(Ramrez y Jimnez, 1999)
Mediante aspiracin folicular se pueden obtener de 4 a 20 oocitos por donante, los
cuales se maduran, fertilizan y cultivan in vitro hasta el momento de la
transferencia. Se ha visto, adems, que despus de la aspiracin de los folculos
terciarios, una nueva cohorte de folculos se desarrolla. La viabilidad de los
embriones producidos a partir de oocitos obtenidos por aspiracin es similar a la
alcanzada por embriones producidos por otros procedimientos in Vitro, pero un
poco ms baja que la obtenida para embriones producidos por lavado,
obtenindose porcentajes de preez que varan desde un 25 hasta un 45%
(Rodrguez, 2006).
Leccin 33. Maduracin de ovocitos in vitro

Para el proceso de maduracin es necesario realizar una buena seleccin de los
ovocitos a madurar, en tal sentido se deben seleccionar aquellos con el citoplasma
homogneo, no granular, ni polarizado y con clulas del cmulo intactas rodeando
al gameto, ya que ellos representan los mayores porcentajes de maduracin. Los
ovocitos rodeados por un cmulo compacto formado por varias capas de clulas,
presentan mayores porcentajes de maduracin, fecundacin y de desarrollo hasta
blastocistos, que los que carecen de cmulo o los que estn rodeados solamente
por la corona radiata.
La seleccin de los ovocitos se realiza generalmente en base a tres criterios: el
dimetro del ovocito, el aspecto de su citoplasma y las caractersticas del cmulo
que los rodea. El dimetro de los ovocitos condiciona su capacidad para madurar,
de tal forma que los ovocitos bovinos con un dimetro inferior a 110 m se
encuentran todava en fase de crecimiento y no han adquirido aun la capacidad
para madurar (Herradon et al, 2007).
La maduracin in vitro constituye una etapa decisiva en el rendimiento del proceso
de produccin de embriones in vitro. El medio de maduracin en el que
tradicionalmente se han madurado los ovocitos incluye TCM-199, suplementado
-estradiol
(Herradon et al, 2007). No obstante, los ovocitos bovinos reinician la meiosis en
una gran variedad de medios que van desde una solucin salina simple hasta
medios ms complejos, sin embargo, se prefiere estos ltimos ya que se ha
comprobado que el medio utilizado afecta no solamente la capacidad posterior de
fecundacin, sino que tambin el desarrollo embrionario (De los Reyes, 1994).
El medio de maduracin ms comnmente utilizado es el medio 199 (TCM199),
adicionalmente se hace suplementacin del medio con gonadotrofinas y estradiol,
las cuales tienen un efecto favorable, especialmente en lo que se refiere al
desarrollo post maduracin. Las gonadotrofinas provocan un aumento significativo
en la cantidad de AMPc en las clulas de la granulosa e inducen la maduracin
ovocitaria. La LH mejora las condiciones de maduracin in vitro, modificando el
ambiente nutricional ya que aumenta la energa disponible para el ovocito;
adicionalmente impide los efectos inhibitorios que actan sobre el gameto,
logrando de ese modo la ruptura de la vescula germinal. Por otro lado, la FSH
induce la expansin de las clulas de cmulo en bovinos, a travs de la sntesis de
piruvato y cido hialurnico. Se ha sugerido adems que la FSH y el estradiol
participaran en el bloqueo a la poliesperma durante la fecundacin, a travs de la
sntesis previa de los grnulos corticales (De los Reyes, 1994).
La adicin de esteroides no afectara la maduracin nuclear in vitro, ni la
penetracin espermtica posterior de los ovocitos bovinos, lo que puede indicar
que la maduracin no sera mediada a travs de los esteroides; sin embargo, los
ovocitos
que son madurados sin estradiol disminuyen su capacidad de
segmentarse normalmente y lograr un desarrollo posterior (Sirotkin, 1992, citado

por De los Reyes, 1994).
El tiempo de incubacin como tambin la temperatura, son parmetros
importantes a considerar en los protocolos de maduracin ovocitaria, la
temperatura de incubacin debe estar entre 37 y 39C. La duracin del proceso de
maduracin est entre 22 y 26 horas.
Leccin 34. Fertilizacin in vitro

Este proceso dura aproximadamente 18 horas, se requiere inducir la capacitacin
espermtica
en los espermatozoides que van a ser utilizados para la
fecundacin, lo anterior debido a que la capacitacin espermtica ocurre

normalmente a nivel del tracto reproductivo de la hembra, entonces se requiere
imitar los efectos ocurridos normalmente durante el proceso de fecundacin
natural. Durante este proceso de capacitacin el gameto sufre una serie de
fenmenos que lo conducen a la hiperactivacin y reaccin acrosmica, procesos
considerados vitales para la penetracin espermtica a la zona pelcida y para la
posterior fusin del espermatozoide con la membrana plasmtica del ovocito.
Para lograr el proceso de capacitacin y reaccin acrosmica, se han utilizado
diverso mtodos, uno de ellos es la separacin celular previa mediante "swim up",
hace que se recuperen los espermatozoides con mejor motilidad y la posterior
incubacin de stos con heparina, mediante esta tcnica se han obtenido altos
porcentajes de fecundacin in vitro. Otra alternativa de separacin espermtica es
el gradiente de percol, que es equivalente a un "swim down", ya que se recuperan
del fondo del tubo los espermatozoides ms motiles (De los Reyes, 1994).
La fecundacin va a depender de que haya ocurrido una adecuada maduracin
nuclear y citoplasmtica de los ovocitos bovinos, y una eficiente capacitacin de
los espermatozoides. Esta tcnica se realiza en gotas de 50-100 l de medio
Tyrode tamponado (pH 7,8), utilizando una proporcin de 10-15 ovocitos intactos o
previamente denudados de las clulas del cmulo, ya que ello podra favorecer la
penetracin espermtica (Hawk y col., 1992, Herradon et al, 2007), con una dosis
aproximada de 1 milln de espermatozoides por ml de medio. El medio para el
desarrollo de esta tcnica debe contener una atmsfera de CO 2 del 5% y una
temperatura adecuada (39C), durante un periodo comprendido entre 18 y 20
horas.
Leccin 35. Maduracin de embriones (Cultivo in vitro)

Los medios utilizados para el cultivo de los embriones bovinos han sido
clasificados en tres categoras:
Indefinidos, cuando se utiliza suero y cocultivo con clulas somticas;
Semidefinidos, cuando se omite el cocultivo y el suero se reemplaza por
albmina srica;
Definidos, cuando el suero se reemplaza por macromolculas como el
polivinil alcohol o la polivinil pirrolidona.
Para la maduracin de los embriones se procede a denudar los ovocitos que

consiste en desprender del mismo a las clulas de la granulosa, las cuales lo
rodean como si fuera una corona. De esta forma el ovocito fecundado, en el medio
especifico, se lleva a una estufa cuya caracterstica principal es el bajo porcentaje
de oxigeno en su ambiente. Se inicia as la etapa que se denomina Cultivo en la
cual, durante 6-7 das se llevar a cabo la divisin celular hasta llegar al estadio de
mrula o blastocisto, evolucin que denominamos desarrollo embrionario (Cyagra,
2008).
Transferencia de embriones
Finalmente los embriones obtenidos pueden ser criopreservados o transferidos en
fresco a receptoras sincronizadas.
Fuente: Hernndez, Hugo (2004).
Fig. 34. Proceso de FIV.

Desde que se produjo la primera clonacin de un mamfero el ao de 1996, con la
oveja Dolly, se han realizado muchos experimentos en diversas especies, sin
embargo an se discute mucho en los aspectos legales, ticos, sociales y
econmicos que trae como consecuencia la implementacin de esta biotecnologa
en la produccin animal.
La clonacin puede definirse como el proceso por el que se consiguen copias
idnticas de un organismo ya desarrollado, de forma asexual. Estas dos
caractersticas son importantes:
Se parte de un animal ya desarrollado, porque la clonacin responde a un
inters por obtener copias de un determinado animal que nos interesa, y
slo cuando es adulto conocemos sus caractersticas.
Por otro lado, se trata de hacerlo de forma asexual. La reproduccin sexual
no nos permite obtener copias idnticas, ya que este tipo de reproduccin
por su misma naturaleza genera diversidad.
Este proceso de clonacin a partir de clulas adultas ya diferenciadas ha sido el
resultado de mnimo 40 aos de investigacin en diferentes reas del
conocimiento, como la gentica y la biologa reproductiva. El sincronizar tanto la
clula donante como la receptora permiti el xito final de un procedimiento que se
crea imposible. Este avance cientfico abrir nuevos horizontes especialmente en
el campo de la biotecnologa (Serrano, 2004).
Leccin 37. Mtodos de clonacin

De acuerdo a lo expresado por Chuaire, Snchez y Franco (2004), existen
bsicamente dos mtodos de clonacin: la particin y la transferencia de clulas
somticas.
Particin. En esta tcnica se utilizan embriones octocelulares, en estado de
preimplantacin. Estos embriones son sometidos a una microciruga que los
divide, luego se toman las mitades o secciones y se introducen dentro de zonas
pelcidas naturales o artificiales. A continuacin, se efecta la implantacin del
producto en el endometrio. El nmero mximo de clulas del embrin, no puede
ser superior a 8, porque a partir de este momento, se inicia la expresin del
genoma embrionario. Los individuos obtenidos son prcticamente idnticos entre
s, aunque diferentes a los progenitores, por lo cual se considera que son el
equivalente de los gemelos monocigticos.
Clonacin por transferencia nuclear de clulas somticas (SCNT: Somatic
Cell Nuclear Transfer). En este tipo de clonacin se utilizan dos tipos de clulas:
somticas o no sexuales, y sexuales femeninas, u ovocitos. Los ncleos de
clulas somticas de individuos postnatales son transferidos dentro de ovocitos o
de cigotos enucleados. Esta tcnica tiene la ventaja que permite conservar el
genoma durante la diferenciacin celular y la capacidad del citoplasma celular
para reprogramar la actividad gnica y aumentar la redireccionalidad de la
diferenciacin celular. Para clonar a un ser vivo mediante SCNT, se extrae el
material gentico de ambos tipos de clulas y, a continuacin, se inyecta el ncleo
de la clula somtica que se desea clonar (donante), dentro del oocito
previamente enucleado (receptor). El transplante de ncleos somticos dentro de
ovocitos enucleados tiene como fin reproducir los procesos bioqumicos y
fisiolgicos que, de manera natural, se desencadenan durante la fertilizacin.
Fuente: www.produccionbovina.com/genetica...en.../11-clonacion.pdf
Fuente: http://www.unav.es/cryf/clonacion3.png
Fig. 35. Proceso de clonacin.
Leccin 38. Tcnica de clonacin.

Para poder lograr la clonacin es necesario tener los siguientes elementos:
Un ncleo que contenga la informacin hereditaria completa,
El citoplasma de un vulo que debe corresponder, en principio, a la misma
especie que el ncleo trasplantado y
Una madre receptora que anidar en su tero al embrin. Respecto al valor
de la especie que anida el embrin, se debe notar que hay casos en que el
tero de una especie puede anidar a un ejemplar de otra especie diferente,
como el caso de una yegua que sirvi de madre husped para una cebra, o
el caso de osos pandas que pueden desarrollarse en teros de hembras de
otras especies de osos (Rojas, et al, 2004).
Fuente: http://www.drogomedia.com/hemeroteka/archivos/200807254.pdf
Fig. 36. Clonacin por transferencia nuclear.
La tcnica de clonacin por transferencia nuclear se llama as porque involucra

transferir el ncleo (y, por lo tanto, la mayor parte del material gentico) de una
clula de un ser existente a un vulo, con el fin de reemplazar el ncleo del vulo.
Este huevo, ahora un embrin, se divide por la aplicacin de energa elctrica, y
es guiado por su nuevo material gentico a desarrollarse como un ser que es
genticamente casi idntico al cual se extrajo el ncleo. A continuacin se explica
este proceso paso a paso.
Enucleacin.
Se toma una clula somtica, mediante un proceso de microciruga se extrae el
ncleo que contiene todos los cromosomas (la informacin gentica)
Fuente: www.forodegeneticabovina.com/pdfs/03_rigali_florencia.pdf
Fig. 37. Enucleacin.
Transferencia nuclear.
Se toma un vulo no fertilizado y se le extrae el ncleo.
Fig. 38. Transferencia nuclear.
Ovocito con ncleo transferido.

Mediante una microciruga se transfiere el ncleo (la informacin gentica). El
citoplasma provee los nutrientes para el desarrollo del futuro embrin.
Fig. 39. Ovocito con ncleo.
Fusin.
Posteriormente se aplica una mnima corriente elctrica para que la clula se
empiece a dividir como si hubiese sido fertilizada (Electroestimulacin). El ovocito
se pega a las clulas somticas mediante fusin elctrica. Se espera un lapso de
tres horas y despus se provoca, mediante un procedimiento qumico que genera
la entrada de grandes cantidades de calcio, un engao de fertilizacin en el vulo.
El ncleo que estaba contrado durante la fusin se dilata nuevamente y empieza
a dividirse la clula, primero en dos, despus en cuatro, hasta llegar a ocho
(Fauba, 2007).
Fig. 40. Electrofusin.
Cultivo embrionario.
Las clulas se multiplican en un tubo de ensayo y son cultivadas durante un
periodo de 7 das.
Fig. 41. Cultivo.
Transferencia embrionaria.
Al sptimo da es transferido el embrin en vacas receptoras sincronizadas para
tal fin.
Fig. 42. Transferencia embrionaria.
Avances de la clonacin animal

La clonacin ha tenido un gran desarrollo durante los ltimos aos, desde que se
realiz por primera vez con xito en una oveja en el ao 2007, son muchos los
experimentos que se han realizado con diversos resultados en varias especies. A
continuacin se sealan los avances cronolgicos que se han obtenido en las
especies animales (Vivanco, 2009).
Avance de la clonacin en las diferentes especies

1997
Ovinos: La oveja Dolly, Escocia
1998 Vacunos: Elsie clon de Lady, NZ

1998
Ratones
1999
Caprinos
2000 Cerdos
2002 Conejo y gato
2003 Mula, Rata y Yegua (Prometea)
2004 Venado Rojo y Gato monts
2005 Perro
2006 Mink
2007 Lobo y Bfalo
2009
Camello
Fuente: http://www.drogomedia.com/hemeroteka/archivos/200807254.pdf
Fig. 43. Clonacin en las diferentes especies.
La clonacin de Dolly
En el ao de 1997 en Escocia, se dio al mundo la noticia de la primera clonacin
con xito, el cientfico responsable de este logro fue Ian Wilmut, quien logro la
clonacin de una oveja, a quien llamaron Dolly. Sin embargo el proceso de
clonacin de Dolly no fue fcil, este fue un proceso largo y complejo, resultado de
decenas de experimentos en diversos laboratorios con un sinnmero de fracasos.
El primer paso fue obtener por medio de biopsia clulas mamarias de una oveja
blanca en el tercer trimestre de preez. Estas clulas fueron cultivadas in vitro y
luego mantenidas durante cinco das en un medio pobre en suero para llevar el
ciclo celular al borde de la apoptosis. Cada una de estas clulas en estado de casi
hibernacin fueron introducidas en un ovocito enucleado de una oveja de cabeza
negra. Estos ovocitos haban sido obtenidos quirrgicamente por perfusin de los
oviductos despus de una estimulacin ovrica, durante la metafase II, en el
momento de la ovulacin. Despus de aspirar el ncleo (incluso el cuerpo polar y
algo de citoplasma) los ovocitos fueron puestos en cultivo a 37 C y activados con
un primer pulso elctrico y luego fusionados con las clulas mamarias continuando
con una serie de pulsos elctricos, lo que permita la formacin de una nueva
clula, un nuevo embrin. Mediante este proceso de obtuvieron 277 embriones,
los cuales
fueron introducidos en el oviducto previamente ligado de diversas
hembras. Despus de 6 das, 247 fueron recuperados, y de ellos nicamente 29

haban llegado a la etapa de blastocito. Estos 29 embriones fueron introducidos en
el tero de 13 ovejas. En julio, un solo embrin haba llegado a trmino, naciendo
una oveja de cabeza blanca que reciba el nombre de Dolly (Dosne, 2001). Si bien
el desarrollo de Dolly fue normal durante los primeros aos, luego se manifest
una artritis severa a una edad precoz para su especie, y se observ, al igual que
en los dems animales clonados por esta tcnica, una disminucin en la longitud
de los telmeros. Este punto es de gran inters, ya que la longitud de los extremos
de los cromosomas (los telmeros) podra funcionar como un reloj gentico, lo que
ha llevado a especular
acerca de cual sera la edad real de Dolly.
Finalmente, Dolly muri a los 6 aos de edad (la vida media de una oveja es de
alrededor de 12 aos) debido a una afeccin pulmonar, sin que se haya podido
establecer hasta el momento si esta enfermedad est relacionada a su origen

clonal.
Fuente: http://www.queciencia.com/wp-content/uploads/2007/12/01-ciencia-oveja-dolly.jpg
Fig. 44. Oveja Dolly y su creador.
Clonacin en bovinos
En el ao de 1998 se dio el nacimiento del primer vacuno clonado en el mundo, el
clon de la vaca Lady, en Nueva Zelanda en Agresearch/arTech Ruakura Research
Station, la ternera fue llamada Lady.
Fuente: http://www.rarebreeds.co.nz/enderby1.jpg
Fig. 45. Lady, la primera ternera clonada.
Posteriormente en el ao 2002, se produjo el primer clon en el mundo de un toro

probado, producido en Italia por el Dr. Cesare Galli en el Instituto Lzaro
Spallanzani, el toro fue bautizado con el nombre de Galileo
En el ao 2002, se produjo el primer clon de un ternero en Argentina, se trat de
un vacuno raza jersey, Pampa fue creada a partir de una clula somtica (clula
adulta) de un animal, que permiti obtener otro con idntica informacin gentica.,
A partir de este mtodo de clonacin naci luego Pampa Mansa, una vaca
tambin de raza Jersey que porta el gen de la hormona de crecimiento humana
(hGH: somatotropina) en sus clulas de la glndula mamaria.
Fuente: http://www.pregonagropecuario.com.ar/assets/images/upload/ternera_PAMPA.jpg
Fig. 46. Pampa mansa.
En el ao de 2008, Cientficos de la Universidad de San Martn, Buenos Aires,

clonaron por primera vez a un toro de raza Brangus, al que llamaron Manuel,
producto de unas clulas de un toro llamado ciruelo. Sin embargo, este toro fu
resultado de una gran cantidad de experimentos, ya que para lograr este resultado
se tuvieron que implantar 20 embriones, de los cuales se lograron cinco preeces,
sin embargo, se presentaron 2 prdidas embrionarias tempranas antes del da 60,
posteriormente al da 120, solo haban dos preeces y al octavo mes, slo una,
luego al da 280 de gestacin se realiz la cesrea y se obtuvo el nacimiento del
primer clon argentino. En la actualidad en Argentina, la empresa de biotecnologa
animal y vegetal Goyaike ya tiene 16 toros clonados de pedigr con fines
productivo en su propio rodeo y da a da se especializa ms en brindar servicios
de clonacin a terceros, abriendo as el mercado de a compra y venta de ADN.
Fuente: http://d.yimg.com/i/ng/ne/afp/20090708/09/3810366514-argentina-clona-mundo-toro-raza-brangus.jpg
Fig. 47. Manuel
En Chile en al ao 2008, fue producido el primer bovino chileno a travs de

tcnicas de clonacin, una hembra de nombre "Victoria", enmarcado dentro de un
proyecto impulsado y cofinanciado por la estatal Fundacin para la Innovacin
Agraria (FIA) y por investigadores de la Facultad de Medicina Veterinaria de la
Universidad de Concepcin .
Fuente: http://www.perulactea.com/panel/noticias/gallery/040808145terneroclon%20chil e.jpg
Fig. 48. Victoria
Clonacin en equinos.
En el ao 2003, cientficos italianos, lograron la primera clonacin en equinos, una
yegua a la que llamaron "Prometea", la yegua fue creada en el Laboratorio
Especial de Tcnicas Reproductivas de Cremona, en el sur de Italia. La madre
nodriza de Prometea es a la vez la vez donante de las clulas para la produccin
de Prometea, es decir es su madre nodriza y su original de Prometea.
Fuente: http://www.diariodenavarra.es/actualidad/20030806/culturaysociedad/culturaysociedad50_300.jpg
Fig. 49. Prometea y su progenitora.
Clonacin en caninos.
En Agosto del ao 2005, el investigador Woo Suk Hwang, doctor en Medicina
Veterinaria y Filosofa, exdirector del Departamento de Teriogenologa y
Biotecnologa del Colegio de Medicina Veterinaria en la Universidad Nacional de
Seaul, Corea del Sur, fue el primer cientfico en lograr la clonacin de un perro de
raza Afgano, llamado
Snuppy. Aunque dos estudios de Hwang sobre clulas
embrionarias humanas posteriormente resultaron ser falsos, Snuppy s era un clon

autntico. El perrito clon se llama Snuppy, por su abreviatura de Sel National
University Puppy, es decir: cachorro de la Universidad Nacional de Sel, la
"maternidad" donde naci. Sin embargo, es importante sealar que ms de mil
embriones transferidos a 123 recipientes, slo Snuppy sobrevivi. Uno termin en
aborto, y otro muri de neumona a los 22 das de vida. Los investigadores no
relacionaron esa dolencia con el hecho de que haya nacido por clonacin.
Fuente: http://greatdane.lt/var/greatdane/storage/images/media/images/snuppy/36113-1-lit-LT/Snuppy.jpg
Fig. 50. Snuppy
Posteriormente, en el ao 2008 un cachorro labrador de 10 meses fue clonado por

una empresa californiana en Corea del Sur, para una pareja estadounidense,
constituyndose en la primera clonacin comercial del mundo. La empresa
responsable de este proceso fue
BioArts International en San Francisco, y el
responsable del servicio de clonacin, fue Lou Hawthorne. En este mismo ao,
Hawthorne clon a su propia perra: Missy, una mezcla de border collie y husky,
que haba muerto en 2002 a los 15 aos, con su material gentico congelado se
crearon tres hermanos, los tres cachorros se parecan a Missy y heredaron sus
caractersticas, de acuerdo con Hawthorne.
Hawthorne en 1997, luego del xito en la clonacin de la oveja Dolly, compr al
equipo de Dolly la licencia mundial para clonar perros y gatos., en este sentido, en
el ao 2004 la firma de biotecnologa de Hawthorne, llamada entonces Genetic
Savings and Clone, inicio la clonacin de gatos a pedido, por un valor cercano a
los 50.000 dlares. Sin embargo, dos aos despus la empresa tuvo que cerrar
porque el procedimiento no era rentable econmicamente.
Fuente: http://misionlandia.com.ar/blog/mascotas/files/perro-clonado.jpg
Fig. 51. El primer cachorro clonado comercial.
Fuente: http://www.elmundo.es/elmundo/2009/04/29/ciencia/1241005919.html
Fig. 52. Caninos clonados.
En Corea del sur, el ao 2009 en un grupo de cientficos consiguieron clonar

cuatro perros transgnicos (de la raza beagle) cuya piel brilla con un color rojo
fluorescente. El objetivo del experimento es demostrar la utilidad de esta tcnica
en la investigacin biomdica. Los cuatro cachorros de beagle tienen la misma
apariencia que cualquier otro beagle a la luz del da. Sin embargo, bajo rayos
ultravioleta, brillan en la oscuridad con un tono rojizo, y tanto sus uas como su
vientre tienen este color incluso bajo una luz normal. Segn el profesor Lee
Byeong-chun, de la Universidad Nacional de Sel, que ha dirigido al equipo
cientfico responsable del experimento, asegura que se trata de los primeros
perros transgnicos del mundo a los que se les ha implantado genes fluorescentes
(El mundo, 2009).
Clonacin en ratones.
En el ao de 1998, los cientficos japoneses Teruhiko Wakajama y Ryouzo
Yanagimachi, de la Universidad de Hawai, presentaron al mundo unos ratones
clnicos, y lo han logrado mediante un tcnica distinta a la que utilizaron los
investigadores
del
Instituto
Roslin
para
crear
"Dolly".
El primer ratn (que naci en octubre de 1997) fue bautizado como "Cumulina",
se trasnfirieron mas de 800 embriones, sin embargo solo fue posible la obtencin
de un pequeo grupo de hembras de ratn sanas (10 ratones).
Leccin 39. Transgnesis

Normalmente, en los organismos superiores animales o vegetales la informacin
gentica se transmite por mecanismos de reproduccin sexual; es lo que se
conoce como transmisin gentica vertical. Sin embargo, hace aproximadamente
treinta
aos se logr obtener los primeros ratones transgnicos mediante
transferencia gnica por inyeccin directa de ADN extrao en un cigoto obtenido

por fecundacin in vitro; es decir, se trataba de una transmisin gentica
horizontal, tambin llamada transgnesis. La transgnesis se puede definir como
la introduccin de ADN extrao en un genoma, de modo que se mantenga estable
de forma hereditaria y afecte a todas las clulas en los organismos multicelulares.
Generalmente, en animales, el ADN extrao, llamado transgen, se introduce en
zigotos, y los embriones que hayan integrado el ADN extrao en su genoma,
previamente a la primera divisin, producirn un organismo transgnico; de modo
que el transgen pasar a las siguientes generaciones a travs de la lnea germinal
(gametos) (Lacadena, 2002)
Los estudios experimentales fueron iniciados por
Gordon y Ruddle en 1980
(Lacadena, 2002) en los mismos inyectaron ADN de ratn en uno de los

proncleos de un cigoto de la misma especie. En 1981, Gordon y Ruddle
demostraron la integracin y transmisin estable a travs de la lnea germinal de
genes inyectados en proncleos de cigotos de ratn obtenidos por fecundacin in

vitro, desarrollando as los primeros ratones transgnicos. El paso siguiente
consisti en probar que tambin se podan obtener ratones transgnicos que
incorporaran en su genoma un gen (transgn) de otra especie. As, Palmiter en el
ao de 1982 obtuvieron ratones transgnicos gigantes al inyectar en el proncleo
de un cigoto el gen de la rata que codifica para la hormona del crecimiernto.
Incluso, se obtuvieron tambin ratones transgnicos gigantes cuando el transgn
introducido era el gen humano que codifica para la hormona de crecimiento
(Lacadena, 2002).
La transgnesis comprende la introduccin de ADN exgeno en el genotipo de un
animal, esta es una herramienta importante tanto para la agricultura, como para la
farmacologa, la biomedicina y la biotecnologa. Una gran variedad de mtodos
han sido desarrollados para introducir ADN, entre ellos la inyeccin de ADN en
embriones y la transfeccin de clulas somticas seguidas del transplante nuclear
o clonacin (Salamone, 2005).
Leccin 40. Tcnicas de obtencin de animales transgnicos

Las tcnicas de obtencin de animales transgnicos son:
Microinyeccin de ADN en ncleo de ovocito
Vectores virales o retrovirus
Manipulacin de clulas embrionarias
Tcnicas:
Transgnesis por microinyeccin de ADN en ncleo de ovocito: Es una
tcnica fcilmente aplicable a una variedad de especies, el inconveniente radica
en que el gen se inserta al azar en el genoma y que solo el 5% de los ovocitos dan
lugar a un animal transgnico vivo. Par realizar la tncia en primer lugar se induce
la superovulacin en la hembra, a nivel del laboratorio se hace la fertilizacin in
vitro. Se inyecta el nuevo gen en el
ncleo del ovocito,
posteriormente los
ovocitos son reintroducidos en hembras receptoras, sin embargo, el porcentaje de

embriones que sobreviven es muy bajo. Por ltimo, tras el destete de los recin
nacidos, stos se chequean, para ver si ha ocurrido la incorporacin del transgn.
Transgnesis por Retrovirus: Mediante esta tcnica se consigue que el trasgen

est presente en todas las clulas de individuo transgnico, sin embargo el gen
tambin se inserta al azar. Cabe la posibilidad de que el retrovirus usado como
transporte se reproduzca en el organismo transgnico dando lugar
a la
presentacin de enfermedades. El proceso consiste en elegir un virus benigno y

atenuarlo hasta eliminar su carga viral, se inserta en el virus el transgen que se
desea introducir. El virus acta como medio de
transporte, cuando el virus
comienza a replicarse al interior de las clulas se libera el transgen.
Transgnesis por manipulacin de clulas madre embrionarias: Este mtodo

es el menos aleatorio y se utiliza cuando es importante dirigir las secuencias
genticas a lugares especficos del genoma. Cuando las clulas estn en cultivo
es posible llevar a cabo modificaciones genticas especificas como la eliminacin
o sustitucin de un gen, por lo tanto se tiene la clula madre transgnica, y se
realiza la respectiva modificacin. Las clulas modificadas son inyectadas en
embriones en fase de blastocisto, los individuos resultantes portan el gen
transferido solo en un porcentaje de sus clulas.
Avances en transgnesis
Los fines que pretende la transgnesis, es la creacin de animales genticamente
superiores, con diversos fines: animales para produccin comercial, animales
resistentes a enfermedades, animales gigantes, animales con fines teraputicos
(animales productores de medicamentos o donantes de rganos, animales
pharming).
El uso principal de la transgnesis en los animales ha sido su utilizacin como

laboratorios vivientes para la produccin de medicamentos, en tal sentido, los
animales son utilizados como biorreactores para producir protenas y sustancias
biolgicas de inters para la salud humana, las cuales son segregadas en la leche
por el ganado. Por tal razn, en Estados Unidos, a las granjas de experimentacin
con animales transgnicos se les ha empezado a llamar "pharms", haciendo un
juego de palabras que intercambia el significado original de la palabra granja
(granja en ingls se dice "farm") por el de "pharmacy" (que quiere decir farmacia).
Y es que una de las aplicaciones de la transgnesis. En el ao 1990 en el Instituto
Roslin de Escocia se cre la primera oveja transgnica, a cual segregaba alfa-1antitripsina en su leche. Esta enzima es empleada en el tratamiento del enfisema
pulmonar, una enfermedad que suele tener carcter hereditario y que afecta a las
fibras elsticas de los pulmones. La leche de estas ovejas contiene hasta un 30%
de alfa-1-antitripsina, una sustancia que tambin se encuentra en experimentacin
en los Laboratorios PPL para el tratamiento de la fibrosis qustica, luego esta
enzima es aislada a nivel del laboratorio. La elaboracin de productos
farmacuticos es uno de los resultados ms visibles de las investigaciones con
animales transgnicos, pero la mayor parte de este tipo de animales se destina a
la investigacin bsica. Los ratones transgnicos, por ejemplo, han aportado una
nueva visin a los cientficos sobre cmo funciona el sistema inmune, el cerebro,
la memoria, la formacin de rganos y han sido especialmente valiosos en
oncologa (Lacadena, 2002).
En el ao 2002, en Argentina se logr la clonacin de Pampa Mansa, una vaca
Jersey a la cual se le agreg un gen para la produccin de hGH (Somatotropina
humana), por lo cual produce grandes cantidades de la hGH en su leche.
Por otro lado, durante los ltimos aos los estudios en transgnicos se han
enfocado hacia la produccin de animales para consumo,
el objetivo es
introducirles genes que induzcan el crecimiento mayor, con menos cantidad de

grasa y resistencia a las enfermedades, entre otros aspectos.
Dentro de este marco, en el ao 2006 se logr el nacimiento de algunos lechones

con produccin de cidos omega 3, benficos para la salud humana. Para obtener
estos animales transgnicos, los investigadores transfirieron al ncleo de las
clulas madre un gen llamado fat-1, responsable de la produccin de una enzima
que transforma en omega-3 los cidos grasos omega-6, menos beneficiosos pero
ms comunes. Luego se us el mtodo de clonacin empleado en 1996 con la
oveja Dolly. De 1.633 embriones implantados en 14 cerdos, nacieron vivos 10
lechones, de los cuales seis tenan el gen fat-1 (Carletti, 2006).
El 28 de mayo de 2009, en la revista Nature, cientficos japoneses informaron la

creacin de micos tit transgnicos. Estos primates se incorpor un transgen de
protena verde fluorescente en la lnea germinal y se logro la trasmisin en la
descendencia, constituyndose un gran avance para estudiar las enfermedades
humanas y las posibles terapias (Margawati, 2009).
Tabla 16. Avances de la transgnesis.
MAMFEROS TRANSGNICOS: ANTECEDENTES Y CRONOLOGA
1938:
Spemann propone experimento de transferencia nuclear
1949:
Hammond mantiene embriones de ratn en cultivo in vitro
1961:
Tarkowski obtiene ratones quimricos agregando embriones
1966:
Lin describe la tcnica de microinyeccin de embriones de ratn
1980:
Gordon, Ruddle y col. obtienen los primeros ratones transgnicos por

microinyeccin de ADN en el proncleo de cigotos de ratn
1981
Gordon y Ruddle obtienen ratones transgnicos por microinyeccin de ADN en

el proncleo de cigotos de ratn
1981:
Evans y Kaufman obtienen clulas embrionarias totipotentes de ratn
1982:
Palmiter y col. obtienen ratones transgnicos gigantes mediante transgenes de

la hormona del crecimiento de la rata
1983
Palmiter y col. obtienen ratones transgnicos gigantes mediante transgenes de

la hormona de crecimiento humana
1983:
McGrath y Solter desarrollan una nueva tcnica para experimentos de

transferencia nuclear en ratn
1985:
Hammer y col. obtienen animales de granja transgnicos (conejos, ovejas,

cerdos) con el transgn de la hormona del crecimiento humano
1987:
Thomas y Capecchi obtienen los primeros ratones knockout por recombinacin

homloga
1989
Clark y col. obtienen ovejas transgnicas con el gen humano del factor IX de
coagulacin de la sangre mediante microinyeccin de ADN en el proncleo del
cigoto
1991
Wright y col. obtienen ovejas transgnicas con el gen humano de la a -1antitripsina mediante microinyeccin de ADN en el proncleo de cigotos
1991
Ebert y col. obtienen cabras transgnicas con el gen AtPH humano (activador
tisular de plasmingeno) mediante microinyeccin de ADN en proncleo de
cigoto
1991
Krimpenfort y col. obtienen vacas transgnicas con el gen humano de la

lactoferrina mediante microinyeccin de ADN en el proncleo de cigotos
1993:
Nagy y Rossant obtienen ratones quimricos por co-cultivo de embriones
1993:
Schedl y col. obtienen ratones transgnicos con cromosomas artificiales de

levaduras
1994:
Brinster y col. obtienen ratones transgnicos por transplante de

espermatogonias
1996:
Campbell y col. obtienen ovejas clnicas por transferencia nuclear de clulas

embrionarias en cultivo
1997:
Wilmut y col. obtienen ovejas clnicas por transferencia nuclear de clulas

diferenciadas fetales y adultas en cultivo
1997:
Schnieke y col. obtienen ovejas clnicas transgnicas por transferencia nuclear

a partir de clulas fetales diferenciadas
1998:
Cibelli y col. obtienen vacas clnicas transgnicas por transferencia nuclear a

partir de clulas fetales diferenciadas
1999
Baguisi y col. obtienen cabras transgnicas por transferencia nuclear
1999
Yanagimachi y col. obtienen ratones transgnicos mediante la co-inyeccin de

cabezas de espermatozoides y ADN exgeno
2000
Marcacin gentica en ovejas
2002
Adicin artificial de un cromosoma en una vaca (vaca trans-cromosmica)
2002
Se cre en Argentina, la vaca Pampa Mansa, la cual tiene un gen para la

produccin de Somatotropina.
2003
Obtencin de cerdos transgnicos va inyeccin lentiviral (Transferencia del

trasngen dentro del zigoto)
2009
Cientficos clonaron por primera vez perros transgnicos de color rojo

fluorescente
2009
Cientficos japoneses informaron la creacin de micos tit transgnicos

Fuente: Lacadena, 2002
CAPITULO 3. SEXAJE DE SEMEN, QUIMERAS, ICSI, CELULAS

MADRE
La biotecnologa ha desarrollado herramientas muy tiles que permiten mejorar la
eficiencia reproductiva de las explotaciones. Hoy, es fcil decidir que sexo va a
tener la prxima cra de nuestro hato, utilizar reproductores de alta gentica que
presentan problemas de infertilidad y prximamente producir clulas madre con
destino a la regeneracin de tejidos especficos o producir animales con destino a
la donacin de rganos todo esto gracias a la biotecnologa reproductiva.
El mundo cientfico no se detiene, y mientras leemos esto un nuevo
descubrimiento tiene la ciencia para nosotros. As que aprovechemos de manera
racional las herramientas que la biotecnologa trae para mejorar la eficacia de las
explotaciones pecuarias.

La produccin de semen sexado es una realidad que ya se encuentra disponible
comercialmente. Hoy en da es posible decidir el sexo que va a tener el nuevo ser
antes de producirse la fecundacin, algo que hasta hace menos de 20 aos
pareca un imposible. As se podr decidir el semen a utilizar de acuerdo con la
finalidad de la explotacin, en el caso de ganadera lechera, se querr obtener
hembras para reemplazo, al contrario en las explotaciones de ganadera de carne,
se preferir la obtencin de machos para engorde.
Pero, como se puede realizar esta tcnica? es un procedimiento algo complejo:

las
clulas
reproductivas
femeninas
aportan
un
cromosoma
el
espermatozoide puede aportar un cromosoma X o un cromosoma Y, por ende

el espermatozoide es el que determina el sexo de las cras en los mamferos. En
este sentido, para que se produzca una hembra (XX) deber un espermatozoide
X fertilizar el vulo. Por el contrario, si fuera el espermatozoide con cromosoma

Y el que lo fertilizara, se producira un macho (XY) (Velasco, 2004).
Se estima que aproximadamente la mitad de los espermatozoides portan

cromosoma X y la mitad Y, por lo tanto se obtiene aproximadamente un 50% de
nacimientos por cada sexo El objetivo de esta biotecnologa, es modificar esa
proporcin, y obtener animales de un determinado sexo, de acuerdo con los
objetivos de la explotacin.
La tcnica utilizada en la obtencin del semen sexado es denominada: citometra
de flujo, esta tcnica fue desarrollada por Dr Johnson, y se fundamenta en las
diferencias de ADN expuestas para hacer dicho sexaje (el espermatozoide de toro
que contiene el cromosoma X tiene 3.8% ms ADN que el que contiene el
cromosoma Y).
.
La tcnica consiste en primer lugar en una tincin que se hace a los
espermatozoides con una solucin fluorescente (con Hoechst 33342), por 45
minutos, lo cual hace que este tinte se una al ADN cuantitativamente.
El
espermatozoide X produce 3.8% ms fluorescencia azul cuando es expuesto a

un lser de cierta longitud de onda. El semen se separa razn de 90,000
gotas/segundo con un espermatozoide c/u, pasando a travs de una boquilla muy
fina a 100 Km./h. Los X se cargan positivamente y los Y negativamente. Los
espermatozoides muertos y aquellos que no han podido ser sexados no son
cargados. Los espermatozoides corren a travs de placas cargadas, los Y son
atrados a la placa positiva, los X a la negativa, y las gotas sin carga son
descartadas.
Fuente: http://www.chemometec.com/global/files/file_12.jpg
Fig. 53. Citmetro de flujo. Fue desarrollado en al ao de 1970.
Algunos de los avances que se han dado gracias esta tcnica son: En el ao de
1992, en Cambridge nace la primera ternera producida por fertilizacin in vitro y
semen sexado, posteriormente hacia el ao 1995, en la Colorado State University,
nace la primera ternera producida por Inseminacin artificial y semen sexado. En
el ao 2001, nace la primera ternera lechera con la utilizacin de semen sexado
en Suiza. En el ao 2001, en Sydney (Australia) nacen las primeras corderas,
mediante la utilizacin de semen sexado (Velasco, 2004).
Del computador al
cargador de gotas
Al computador
Fuente: http://edis.ifas.ufl.edu/LyraEDISServlet?command=getScreenImage&oid=1746729
Fig. 54. Citometra de flujo en la produccin de semen sexado.
Una de las desventajas que presenta esta tcnica es su elevado valor comercial,
lo cual dificulta su aplicacin en todas las explotaciones animales. Sin embargo,
durante los ltimos aos se ha difundido mucho esta tcnica, logrando la
disminucin de su valor y facilitando la consecucin de semen sexado a precios
accequibles.

Una quimera es un animal que tiene caractersticas de dos o ms especies. La
quimera se origina por la mezcla de clulas provenientes de especies diferentes y
posee las caractersticas de los dos individuos que genticamente lo originan. Las
quimeras son aquellas logradas por mtodos experimentales de manipulacin
embrionaria y pueden ser de diferentes especies o de una misma especie (Rojas,
et al, 2004).
De acuerdo con algunos autores se pueden diferenciar dos clases de quimeras:

Primarias: aquellas naturales o artificiales que desde los estadios
embrionarios presentan dos poblaciones celulares genticamente diferentes
Secundarias: aquellas en las que los tejidos u rganos de dos fetos o
adultos diferentes se combinan.
Un ejemplo de las quimeras secundarias es el caos de los trasplantes de rganos,

en los que un rgano de la misma o de otra especie es introducido y se incorpora
en el cuerpo de un animal.
Tal como lo plantea Rojas y col. (2004) las primeras quimeras fueron
desarrolladas en 1920, en el laboratorio de Hans Spemann por fusin de
embriones
tempranos
de
anfibios,
pero
los
primeros experimentos
que
desarrollaron quimeras en mamferos, se realizaron en la dcada de los aos 60 y

fueron logrados por Beatrice Mintz, empleando mtodos de micromanipulacin de
embriones. Beatrice Mintz utiliz mrulas provenientes de cruzamientos de parejas
de conejos albinos y tambin mrulas de parejas de conejos negros. Las mrulas
fueron separadas de la zona pelcida mediante tripsina, y luego fueron
fusionadas. El blastocisto gigante resultante se coloc en el tero de una madre
receptora, que haba sido hormonalmente tratada para simular una gestacin. El
resultado fueron cras con cuatro padres (tetraparentales), que presentan una
cubierta de pelos formada por manchones de pelo blanco y manchones de pelo

negro. Ms tarde, se produjeron de la misma forma quimeras en conejos y ovejas.
Este mtodo se emplea habitualmente cuando se fabrican los animales knock-out,
los cuales pueden ser considerados tambin como quimeras. Pero no cabe duda
de que dentro de las quimeras de mamferos, el caso mas interesante ha sido el
de la oveja-cabra creada en Cambridge (Inglaterra) por Fehilly y Willadsen. Estos
investigadores utilizaron blastocistos de cabra y oveja. El embrioblasto de cabra
fue introducido dentro del blastocisto de una oveja. El embrin as formado
formado fue transferido a una oveja receptora. El animal que naci mostr una
mezcla de ambas especies: lo ms destacado fue su pelaje que presentaba las
caractersticas de ambas especies: y sus cuernos que tenan la forma de los de la
cabra, pero que aparecan enroscados como los de oveja. Asimismo, su sangre
contena clulas de ambas especies. Existan en este animal otras caractersticas
interesantes, como que se pareca fsicamente ms a una cabra, aunque prefera
la compaa de las ovejas. Tambin el anlisis de sus protenas mostr que
posea caractersticas de ambas especies, pero que predominaban las de oveja.
Respecto a su comportamiento reproductivo, demostr ser frtil aunque era capaz
slo de copular con ovejas.
Los estudios realizados con quimeras son de gran inters para analizar el proceso
embriolgico, ya que se pueden fabricar quimeras utilizando embriones de
diferentes edades. Por ejemplo, cuando se mezcla un embrin de cuatro clulas
con uno de ocho, esta ltima forma el embrin, mientras el de cuatro clulas forma
el trofoblasto. Al respecto, se debe notar que el trofoblasto es el que interacta con
el tero materno, por lo tanto, esta tcnica podra ser usada potencialmente para
producir transferencias embrionarias entre especies diferentes (Rojas, et al, 2004).

La inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides (ICSI) es una tcnica que fue
desarrollada en el ao 1992, consiste en seleccionar un espermatozoide e
inyectarlo directamente dentro del vulo. Esta tcnica se ha empleado a nivel de
la medicina humana para problemas de infertilidad, en aquellos casos, en donde
los espermatozoides no tienen la capacidad de penetrar al interior del ovocitos, o
en caso de azoospermia. Sin embargo, en los ltimos aos se han realizado
estudios experimentales para su implementacin a nivel de la produccin animal.
Fuente: http://www.brusselsivf.be/user_docs/hi storiek/28)ICSI.jpg
Fig. 55. Inyeccin del espermatozoide.
Los pasos que involucra la ICSI son:

1. Estimulacin de la ovulacin
2. Aspiracin folicular
3. Obtencin de espermatozoides
4. Fecundacin o fertilizacin
5. Transferencia embrionaria
La ICSI es una herramienta con gran potencial aplicativo en diversos campos de la

produccin animal, entre los que destacan la produccin de animales transgnicos
de inters en ganadera o biomedicina, y la recuperacin de razas en peligro de
extincin. En la actualidad existen referencias de obtencin de descendencia viva
mediante esta tecnologa en diversas especies, sin embargo, el rendimiento an
es muy bajo, posiblemente debido al desconocimiento de las condiciones idneas
para el desarrollo de la misma, y la dificultad de los cigotos para alcanzar el
estadio de blastocisto in vitro (Garca, 2005).
Ovocito sujetado
Fuente: http://www.pacificfertilitycenter.com/images/lab_icsi_process_fig3.gif
Fig. 56. ICSI
De acuerdo a lo reportado por Lossino y Aguilar (2002), en el ao de 1997 se

reporto el nacimiento del primer potrillo obtenido por ICSI, con oocitos maduros
recuperados de ovarios de una yegua post-mortem. Posteriomente, en marzo de

1998, McKinnon y col. (Citado por
Lossino y Aguilar, 2002) en Australia,
comunicaron el nacimiento de un potrillo tambin obtenido por ICSI, pero con

oocitos maduros aspirados de una yegua, transportados refrigerados 200 km al
laboratorio de la Universidad,
fertilizados y mantenidos "in vitro", luego
transportados nuevamente a una clnica y transferidos al oviducto de una

receptora. En ese mismo ao, investigadores de la Universidad de Louisiana
reportaron el nacimiento de 2 potrancas producto de oocitos inmaduros colectados
por aspiracin transvaginal de yeguas preadas, madurados "in vitro", fertilizados
por ICSI y transferidos quirrgicamente a una receptora.
Leccin 45. Produccin de clulas

embrionarias primarias pluripotenciales)
madre
embrionarias
(Clulas
Las clulas embrionarias primordiales pluripotenciales son clulas indiferenciadas

derivadas del embrin en estadio temprano capaces de proliferar in vitro en forma
indiferenciada e ilimitada, estas mantienen la habilidad de diferenciarse en todos
los tipos celulares (Prelle y Wolf, 2001).
De acuerdo lo expresado por Flores y Paniagua (2006), existen cuatro niveles de

clulas madre:
1) las clulas madre embrionarias totipotenciales,

2) las clulas madre pluripotenciales,
3) las clulas madre multipotenciales y
4) las clulas madre progenitoras unipotenciales.
El primer nivel, corresponde a las clulas ms primitivas, producto inmediato de la

fecundacin con capacidad de diferenciarse hacia todos los tejidos que forman los
rganos de un organismo. Las clulas del segundo nivel se desarrollan
aproximadamente en el cuarto da de la fertilizacin y pueden diferenciarse a

cualquier tipo celular, excepto a clulas totipotenciales y de la placenta. El tercer
nivel celular se encuentra en la circulacin perifrica de un recin nacido y pueden
ser recuperadas de sangre de placenta colectada del cordn umbilical. El cuarto
nivel celular puede originar solamente un tipo celular, por ejemplo, una clula
progenitora eritroide de diferencia solamente a eritrocito, generando clulas
terminales. Las clulas madre embrionarias totipotenciales, solamente se pueden
obtener durante los primeros cuatro das despus de la fertilizacin, justo en el
momento en el que el cigoto se ha constituido como mrula para comenzar el
proceso de segmentacin de 2 hasta 32 blastmeros (68 h), organizndose en
una capa perifrica denominada trofoblasto (Flores y Paniagua, 2006).
Fuente: http://juanv.files.wordpress.com/2008/01/ stemcells2-gif.gif
Fig. 57. Produccin de clulas madre
Actualmente, son muchos los laboratorios en todo el mundo que trabajan para
obtener clulas totipotenciales embrionarias. Estas clulas son llamadas as
porque tienen la potencialidad de originar todos los tipos celulares que existen en
el cuerpo y se han convertido en una esperanza teraputica para muchas
enfermedades tanto del hombre como de los animales.
Las clulas madres
embrionarias son las nicas capaces de autorrenovarse y diferenciarse en muchas

lneas celulares. Algunos tejidos adultos de mamferos conservan tambin clulas
madres, pero stas son capaces de generar slo un nmero limitado de tipos
celulares. Las clulas madres obtenidas de embriones en la etapa de blastocisto
tienen la capacidad de formar todas las clulas del cuerpo, porque mantienen el
cariotipo normal, y una alta actividad telomerasa, adems, logran en cultivo, un
notable potencial de proliferacin durante un largo perodo de tiempo, dando la
posibilidad de una expansin ilimitada.
Las clulas madres se obtienen del
embrioblasto de un blastocisto y deben cultivarse in vitro para obtener lneas de

clulas pluripotenciales. Estas clulas madre pueden seguir los siguientes dos
caminos, dependiendo del medio de cultivo que se utilice:
a) Mantenerse en un estado indiferenciado y

b) Diferenciarse en lneas celulares ms especficas, por ejemplo cardacas,
neurales, sanguneas, etc.
Es importante sealar que la investigacin relacionada con clulas madres

embrionarias se ha desarrollado ratones de laboratorio y algunos otros animales
como conejos, ovejas y vacas.
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MODULO REPRODUCCION ANIMAL AVANZADA

EDWIN MANUEL PAEZ BARON

Universidad Nacional Abierta y a Distancia

UNIDAD 1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD REPRODUCTIVA.

CAPITULO 3. PROGRAMAS DE INSEMINACON ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO

UNIDAD 2. INSEMINACION ARTIFICIAL Y TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

CAPITULO 1. COLECTA Y EVALUACION DE SEMEN.

CAPITULO 2. INSEMINACION ARTIFICIAL.

CAPITULO 3. TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

UNIDAD 3. ULTIMAS BIOTECNOLOGIAS REPRODUCTIVAS APLICADAS A LA

CAPITULO 1. FERTILIZACION IN VITRO.

CAPITULO 2. CLONACION Y TRANSGENESIS.

CAPITULO 3. SEXAJE DE SEMEN, QUIMERAS, ICSI, CELULAS MADRE

Fig 1. Folculo primordial.

Fig. 25. Insercin del catter.

Fig. 49. Prometea y su progenitora.

Tabla 1. Protocolo Ovsynch.

El curso de reproduccin avanzada comprende el conocimiento de las

Se pretende brindar un conocimiento acerca de la

evolucin de las biotecnologas y su aplicacin en los diversos campos de la

El estudiante es el responsable de su proceso de aprendizaje, y en tal sentido el

Es importante sealar que la educacin a distancia involucra la participacin de

las presentaciones, las animaciones, los encuentros sincrnico y

El curso pretende brindar al estudiante la gua para desarrollar su proceso de

UNIDAD 1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD REPRODUCTIVA

Comprender los cambios fisiolgicos ocurridos en el ovario y sus

UNIDAD 1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD REPRODUCTIVA

en el cual se puede producir celular sexuales en la vida posnatal. En el feto

la degeneracin por atresia (sufrida por el 99%

folculos primordiales, se caracterizan por el ovocito I detenido en la profase de

Posteriormente el folculo primordial contina su desarrollo a los denominados

aquel en el cual se completa la proliferacin de las clulas de la granulosa y las

Fig. 3. Folculo secundario. En este las clulas de la granulosa aumentan de tamao.

Posteriormente, se produce la formacin de la cavidad del folculo, y el folculo se

(Fernndez, 2003). Los folculos terciarios se caracterizan por estar rodeados de

Por ltimo se encuentran los folculos preovulatorios o folculos de De Graaf,

Dentro de este marco, es vlido sealar que gracias

ultrasonografa, se logr determinar que el desarrollo folicular se produce de

Leccin 3. Ondas de desarrollo folicular

Una onda de desarrollo folicular

se define como el desarrollo armnico y

simultneo de un pool de folculos antrales (terciarios) pequeos, en promedio 24

A continuacin se detallan las fases que

componen las ondas de desarrollo folicular:

es un proceso regulado por

foliculoestimulante (FSH), consiste en que un conjunto de folculos antrales

Fig. 5. Dinmica folicular durante un ciclo estral bovino

El desarrollo folicular es controlado por diversas hormonas y protenas

CAPITULO 2. INDUCCIN Y SINCRONIZACIN DE CELO EN LAS

El conocimiento de la dinmica folicular es importante para la aplicacin y el xito

Tcnicas de sincronizacin mediante el uso de progestgenos. Este mtodo

el dispositivo. Adems provoca una replecin de gonadotrofinas hipofisarias que

Tcnicas de sincronizacin mediante el uso de GnRH. La propuesta bsica de

A continuacin se describen los programas de sincronizacin de celo en las

Leccin 7. Sincronizacin de celo en bovinos.

al inicio del tratamiento con progesterona, la aplicacin de un

estrgeno: el Valerato de estradiol, el cul cumplia una funcin de efecto

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