DETERMINACIN DE ANTICUERPOS ANTIESTREPTOLISINA O (ASO)

(Prueba de Ltex)
Practica N 3

INTRODUCCIN
Los estreptococos del grupo A
beta-hemolticos producen varios antgenos
intracelulares y extracelulares que estimulan la produccin de anticuerpos por parte del
paciente infectado.
Muchos de estos anticuerpos son detectables mediante pruebas serolgicas apropiadas.
El ms familiar de los cuales es la Estreptolisina O, una toxina con caractersticas de
enzima.
La prueba de ASO fue seleccionada por qu: a) Tiene buena reproducibilidad. b) El
antgeno es producido por la mayora de cepas de estreptococos del grupo A. c) El
antgeno es asequible comercialmente. d) Es la prueba ms estudiada.
En este tipo de prueba la Estreptolisina O se adsorbe a partculas tales como ltex. Las
partculas recubiertas se mezclan con el suero del paciente, sobre una placa portaobjetos. Las partculas se aglutinan en pocos minutos si el anticuerpo ASO est presente
en el suero.
La principal ventaja de ste tipo de prueba es que las serolipoproteinas, los productos de
desarrollo bacteriano, la Estreptolisina O oxidada, no causan falsos ttulos positivos.
Un ttulo elevado de ASO es, por lo comn, ndice de una infeccin reciente por
estreptococos del grupo A beta-hemoltico, y como tal puede ser de ayuda para el
mdico en el diagnstico de fiebre reumtica aguda o glomerulonefritis aguda.
La prueba de ASO no es la nica prueba til para el diagnstico de glomerulonefritis
aguda, su importancia radica en que ha sido la ms ampliamente utilizada de las pruebas
de anticuerpo estreptoccico y por esto la ms familiar, algunas son sus desventajas:

a) Los bajos ttulos asociados con las infecciones cutneas y sus secuelas b) Los falsos
ttulos positivos causados por el desarrollo de ciertas bacterias en la muestra de suero c)
Y los falsos ttulos positivos provocados por la oxidacin del reactivo Estreptolisina
Antgenos del Estreptococo grupo A.
Fig. 1 Componentes celulares y productos extracelulares del estreptococo grupo
A
Celulares
Pared celular
*carbohidratos especficos
*protenas M, T, R
*S. O. R.
*Peptidoglicano
Membrana Protoplsmica

Cpsula de cido Hialurnico

Productos Extracelulares
*Hemolisina
* Estreptolisina O y S
*Estreptoquinasa
* Hialuronidasa
*Desoxyribonucleasa ( A, B, C, D )
*Adenin Nicotinamida dinucleotidasa
* Exotoxina pirognica SPE A, B, C, F
* Amilasa
* Esterasa
* Acido lipoteicoico.

Tabla 1 Pruebas para determinar Anticuerpos a estreptococos

Antgeno
EXTRACELULAR
Estreptolisina O ....................................................
Estreptoquinasa ........................................................
Hialuronidasa .........................................................
Dnase B ...................................................................
NADase ..................................................................
Todos los mencionados...........................................
CELULARES
Protena M especfica
........................................
Polisacrido de grupo especfico............................
ASK, Antiestreptikinasa
ASH, Anti-Hialuromidasa.

Prueba
ASO
ASK
ASH
Anti-NADase
Anti-NADase
Estreptozimas
Anticuerpo especfico
Anti-A-CHO

Mtodos comunes para la determinacin de los anticuerpos Antiestreptolisinas son los

siguientes:
a) Mtodo de ltex
b) Mtodo Inmunoturbidimtrico.
c) Nefelometra.
( En la prctica desarrollaremos el mtodo de ltex )

AVITEX ASO PRUEBA DE LATEX

Introduccin y Utilidad
AVITEX ASO es una prueba rpida de aglutinacin para la deteccin de anticuerpos
Antiestreptolisinas O (ASO) en suero humano.
Los anticuerpos ASO aparecen en el suero de los pacientes como respuesta la infeccin
por estreptococos hemolticos de los grupos A, C o G. La Estreptolisina O es altamente
antignica, en consecuencia, los pacientes infectados producen anticuerpos especficos
que son detectables por el reactivo AVITEX-ASO.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
Las partculas de ltex del reactivo AVITEX-ASO, estn recubiertas con Estreptolisina
O purificada y estabilizada. Cuando mezclamos la suspensin de partculas de ltex y un
suero con una elevada concentracin de ASO, se produce una aglutinacin visible a los
dos minutos.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo ltex AVITEX- ASO
Suero control positivo
Suero control negativo
Agitadores
Porta reutilizable
Folleto de instrucciones
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS
Micropipetas
Solucin Salina (0,9 % NaCL)
PRECAUCIONES
Antes de su dispensacin, agitar la suspensin de partculas de ltex.
El porta debe estar perfectamente limpio, ya que los residuos de detergente o de suero
pueden alterar los resultados.

ATEMPERAR LOS REACTIVOS Y LAS MUESTRAS ANTES DE REALIZAR LA

PRUEBA.
Los reactivos AVITEX contienen materiales de origen humano los cuales han sido
ensayados por mtodos aprobados por la FDA para confirmar su negatividad para los
anticuerpos HIV y antgeno de superficie de la Hepatitis B, sin embargo, en su uso y
eliminacin deben ser tratados como potencialmente infecciosos.
Los reactivos AVITEX contienen 0.1 % de azida sdica como conservante, su ingesta
puede resultar txica. La azida sdica puede reaccionar con las caeras de plomo y
cobre, formando sales explosivas. Cuando se vierta por las conducciones utilizar gran
cantidad de agua.
Los equipos AVITEX deben ser conservados a 2-8 C. No congelar. No usar reactivos
caducados.
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Obtener una muestra de sangre venosa, permitiendo la formacin y retraccin del
cogulo.
Centrifugar a ms o menos 4,500 r.p.m. (5 minutos) para conseguir un suero limpio.
NOTA: No utilizar sueros hemolizados, contaminados o lipmicos. El suero puede
conservarse a 20 C hasta un mximo de seis semanas.
NO DILUIR EL SUERO PARA REALIZAR EL ENSAYO CUALITATIVO.

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
Permitir que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente.
1. Depositar una gota de suero en el crculo de la porta.
2. Agitar la suspensin de ltex. Empleando el gotero, depositar sobre el crculo
una gota de reactivo.
3. Mezclar las dos gotas con el agitador, cubriendo con la mezcla toda el rea del
crculo.
4. De forma suave, rotar y balancear la porta durante dos minutos, mientras
observamos la aparicin de la aglutinacin.
RESULTADOS
Transcurridos los dos minutos examinar la porta bajo una luz intensa. La presencia de
aglutinacin evidente se interpreta como resultado positivo. Si no se observa cambio en
la suspensin de ltex, el resultado ser negativo.
AVITEX-aso tiene un lmite de deteccin de 200 UI/ml. Cuando la concentracin de
ASO en suero es igual o superior a 200 UI/ml. Se obtiene un resultado positivo y
cuando es inferior el resultado es negativo.

PRUEBA SEMICUANTITATIVA

Preparar una serie de diluciones sucesivas del suero problema con solucin salina ( ,
, 1/8 y 1/16) . Repetir en cada una de las diluciones el procedimiento indicado
anteriormente. La concentracin de ASO puede calcularse de forma aproximada
multiplicando el factor de dilucin ( 2, 4, 8 16 ) por el lmite de deteccin. Por
ejemplo si la ltima dilucin en la que se observa aglutinacin es la 1/8, la
concentracin aproximada ser 8x200 = 1600 UI/ml.
INTERPRETACIN
Los resultados obtenidos con AVITEX- ASO se pueden comparar favorablemente con
los derivados del mtodo hemoltico tradicional. Se aconseja repetir las titulaciones
positivas a intervalos semanales para seguir la evolucin y controlar la efectividad del
tratamiento
Se pueden presentar reacciones positivas en pacientes con artritis reumatoide, tonsilitis
y otras infecciones en las que el nivel de ASO de encuentra elevado.
ASL O Mtodo Inmunoturbidimtrico para la determinacin cuantitativa in vitro de
anti-Estreptolisina O en suero y plasma humanos con analizadores automticos de
qumica clnica.
Principio del Test o de la Prueba.
La Estreptolisina O fijada a ltex reacciona con el anticuerpo de la muestra formando un
complejo antgeno-anticuerpo que se mide turbidimtricamente despus de la
aglutinacin.

Ltex con SL O (antgeno)

ASL O (anticuerpos)

Concentracin.

Aglut. Antic. Antig.

Medicin Turbidimtrica.

Obtencin y preparacin de las muestras:

 Suero , recogido en tubo estndar de prueba

Plasma: con heparina y EDTA.
Estabilidad de la muestra: 2 das de 20-25 C
6 meses a 20C
Limitaciones e interferencias:
Ictericia: No interfiere.
Hemlisis: Sin interferencia significativa.
Lipemia: Sin interferencia significativa.
Factores reumatoides: < 180 UI/ml no interfieren en la prueba.
BIBLIOGRAFA
1.- El Laboratorio en Inmunologa Clnica. Rosse Friedman
2.- Inmunologa Clnica. Dr. Hugh Fundemberg
3.- Inserto AVITEX ASO . Omega Diagnostics Limited.
4.- Inserto ASLO Roche Diagnostics.

Profesora encargada del Curso de Inmunologa II: T.M. Mirtha Hernndez Acasiete.