Regulacin de la expresin gnica.

La expresin gnica provoca la produccin de un producto funcional del gen

(ARN o protena) a travs de los procesos de replicacin, transcripcin y
traduccin. Los genes pueden ser constitutivos (genes que se expresan
siempre, de mantenimiento) o regulados (se expresan solamente bajo ciertas
condiciones en todas las clulas o en un subtipo de clulas). La capacidad para
expresar (regulacin positiva) o para reprimir (regulacin negativa)
adecuadamente los genes es esencial en todos los organismos. La regulacin
de la expresin gnica tiene lugar principalmente a nivel de la transcripcin
tanto en procariotas como en eucariotas, y est mediada por la unin de
protenas de accin en trans a elementos reguladores en cis del ADN,
as como a travs de procesos postranscripcionales y postraduccionales.
En procariotas, como E. Coli, la regulacin coordinada de los genes cuyos
productos proteicos son necesarios para una ruta metablica particular se
alcanza a travs de los operones (grupos de genes organizados
secuencialmente en el cromosoma junto con los elementos reguladores que
determinan su transcripcin). El opern Iac contiene los genes estructurales
Z, Y, y A, cuyos productos proteicos son necesarios para el catabolismo de la
lactosa. Cuando se dispone de glucosa, el opern se reprime por la unin de
la protena represora (el producto del gen Iacl) al operador, y de esta manera
se evita la transcripcin. Cuando solo hay lactosa, el opern es inducido por
un ismero de la lactosa (alolactosa) que se une a la protena represora y evita
que se una al operador. Adems, el AMPc se une a la protena CAP, y el
complejo se une al ADN en el sitio CAP. Esto aumenta la eficacia del promotor
y da lugar a la expresin de los genes estructurales a travs de la produccin
de un ARNm policistrnico. Cuando hay glucosa y lactosa, la glucosa evita
la formacin del AMPc y la transcripcin de estos genes es insignificante. El
opern trp contiene los genes necesarios para la sntesis de triptfano y,
como el opern Iac, est regulado por un control positivo y negativo. A
diferencia del opern Iac, el trp tambin est regulado por atenuacin,
proceso por el cual la sntesis de ARNm que escap a la represin por trp
termina antes de completarse. En procariotas, la respuesta restrictiva a la
carencia de aminocidos inhibe de manera selectiva la transcripcin del
ARNr y los ARNt. La traduccin es tambin un proceso de regulacin de los
genes en procariotas: cuando hay exceso de protenas ribosmicas se unen a
la secuencia de Shine-Dalgarno en su propio ARNm policistrnico y evitan la
unin de los ribosomas. La regulacin gnica es ms compleja en
eucariotas. No hay operones, pero puede conseguirse la regulacin
coordinada de la transcripcin de los genes localizados en diferentes
cromosomas a travs de la unin de protenas de accin en trans a
elementos de accin en cis. En los organismos pluricelulares, las
hormonas pueden causar regulacin coordinada a travs de la unin del
propio complejo receptor hormonal-hormona al ADN (como sucede con
las hormonas esteroides) o a travs de la unin de una protena que se
activa en respuesta a un segundo mensajero (como sucede con el
glucagn). En cada caso, la unin al ADN est mediada a travs de motivos

estructurales como los dedos del cinc. Tambin se observa regulacin

cotranscripcional y postranscripcional en eucariotas, e incluye la eleccin
del sitio de corte y empalme, la eleccin del sitio de poli-A, la
correccin del ARNm y variaciones en la estabilidad del ARNm como
puede verse en la sntesis del receptor de la transferina y con el ARN de
interferencia. La regulacin al novel de la traduccin puede estar
producida por fosforilacin (inhibicin) del eIF-2. La expresin gnica en
los eucariotas tambin est influida por la disponibilidad de ADN para el
apartado transcripcional, la cantidad de ADN y la organizacin del ADN.
Biotecnologa y enfermedad humana.
Las endonucleasas de restriccin son enzimas bacterianas que rompen el
ADN de doble hebra en fragmentos ms pequeos. Cada enzima digiere el
ADNdh en una secuencia de nucletidos especfica de cuatro a ocho bases de
longitud, produciendo segmentos de ADN denominados fragmentos de
restriccin. Las secuencias que son reconocidas son los palndromos. Estas
enzimas forman o bien cortes escalonados (extremos cohesivos) o cortes
de extremo romo en el ADN. Una secuencia de ADN que es reconocida por
una enzima de restriccin se denomina sitio de restriccin. Las ADN ligasas
bacterianas pueden hibridar dos fragmentos de ADN de diferentes fuentes si
han sido cortados por la misma endonucleasa de restriccin. Esta combinacin
hbrida de dos fragmentos se denomina molcula de ADN recombinante. La
introduccin de una molcula de ADN extraa en una clula que se est
repicando permite la amplificacin (produccin de muchas copias) del ADN,
un proceso denominado clonacin .Un vector es una molcula de ADN a la
cual se une el fragmento de ADN que se va a clonar. Los vectores deben ser
capaces de replicarse de manera autnoma dentro de la clula
hospedadora y deben contener al menos una secuencia especfica de
nucletidos reconocida por una endonucleasa de restriccin. Tambin deben
ser portadores de al menos un gen que confiera la capacidad para seleccionar
el vector, como un gen de resistencia a los antibiticos. Los organismos
procariotas normalmente contienen pequeas molculas de ADN circulares
extracromosmicas denominadas plsmidos, que pueden actuar como
vectores; pueden aislarse con facilidad de la bacteria, que se replicar y
producir as mltiples copias del plsmido hbrido. Una genoteca (banco
de ADN, biblioteca gnica) es un conjunto de fragmentos de ADN de doble
hebra obtenido por digestin del ADN total del organismo con una
endonucleasa de restriccin y su posterior ligadura a un vector apropiado.
Contiene idealmente una copia de todas las secuencias de nucletidos del ADN
del genoma. Por el contrario, las genotecas de ADN complementario
(ADNc) contienen solo las secuencias de ADN que son complementarias de las
molculas de ARNm presentes en una clula y son diferentes de un tipo de
clula a otro. Dado que el ADNc no tiene secuencias intercaladas, puede
clonarse en un vector de expresin para la sntesis de protenas eucariotas
en bacterias. Los fragmentos de ADN clonados y luego purificados pueden ser
secuenciados, por ejemplo, utilizando el mtodo de didesoxi de Sanger.

Una sonda es un segmento pequeo de hebra sencilla de ADN (normalmente

marcado con un istopo radiactivo, como 32P, u otro compuesto reconocible
como biotina) que tiene una secuencia de nucletidos complementaria a la
molcula de ADN de inters (ADN antiparalelo). Las sondas pueden utilizarse
para identificar el clon de una genoteca o la banda de un gel que contiene el
ADN antiparalelo de inters. La transferencia de Southern es una tcnica
que puede utilizarse para detectar secuencias especficas presentes en el ADN.
El ADN es escindido utilizando un endonucleasa de restriccin y los
segmentos son separados mediante electroforesis en gel y desnaturalizados
y transferidos a una membrana de nitrocelulosa para su anlisis. El
fragmento de inters se detecta utilizando una sonda. El genoma humano
contiene muchos millares de polimorfismos (variaciones en la secuencia de
ADN en un locus dado) que no afectan el fenotipo del individuo. Los
polimorfismos pueden ocurrir por cambios de una sola base y por repeticiones
en tndem. Un polimorfismo puede servir como marcados gentico y rastrearse
en familias. Un polimorfismo de la longitud de los fragmentos de
restriccin es una variante gentica que puede observarse mediante escisin
del ADN en fragmentos de restriccin utilizando una enzima de
restriccin. La sustitucin de una base en uno o ms nucletidos en un
sitio de restriccin puede hacer que el sitio sea irreconocible para una
endonucleasa de restriccin concreta. Tambin puede crearse un sitio de
restriccin nuevo por el mismo mecanismo. En cualquier caso, la escisin con
endonucleasas produce fragmentos de longitudes diferentes a las normales
que pueden detectarse mediante hibridacin del ADN. Esta tcnica puede
utilizarse para diagnosticar enfermedades genticas en las primeras etapas de
la gestacin de un feto. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), un
mtodo de amplificacin en tubo de ensayo de una secuencia de ADN
seleccionada no depende del mtodo de clonacin biolgica. La PCR permite la
sntesis de millones de copias de una secuencia especfica de nucletidos en
unas pocas horas. Puede amplificar l secuencia, aun cuando la secuencia de
inters constituya menos de una parte en un milln de la muestra inicial total.
El mtodo se utiliza para amplificar secuencias de ADN de cualquier fuente. Las
aplicaciones de la tcnica de PCR son: 1) comparacin eficiente de un gen
clonado normal con una forma mutante no clonada del gen, 2) deteccin de
secuencias de cido nucleico poco abundantes, 3) anlisis forenses de
muestras de ADN y 4) diagnsticos prenatal y deteccin de portadores, por
ejemplo, de fibrosis qustica. Los productos de la expresin gnica (ARNm
y protenas) pueden medirse por tcnicas como las siguientes: transferencias
Northern, que son similares a las de Southern, salvo en que la muestra
original contiene una mezcla de molculas de ARNm que se separan por
electroforesis y luego se hibridan a una sonda radiactiva. Las micromatrices
multignicas (genochips, microchips de ADN) se usan para determinar los
diferentes patrones de expresin gnica en dos tipos diferentes de clulas, por
ejemplo, las clulas normales y las cancerosas. En enzimoinmunoanlisis de
adsorcin (ELISA) y las transferencias Western (inmunotransferencias)
se usan para detectar protenas especficas. El objetivo de la terapia gnica

es la insercin de un gen normal para sustituir uno defectuoso. La insercin de

un gen extrao en un animal convierte a este en un animal transgnico, el
cual podra producir protenas teraputicas o servir como modelo de una
enfermedad humana.

Gentica.
A. Bioqumica de la gentica.
I. Visin de conjunto. Los cromosomas se descubrieron en 1950.Las
endonucleasas de restriccin permiten diseccionar enormes molculas de ADN
en fragmentos definidos. Las tcnicas de clonacin proporcionan un
mecanismo de amplificacin de secuencias de nucletidos especficas. La
capacidad de sintetizar sondas especficas permite la identificacin y
manipulacin de secuencias de nucletidos de inters.
II. Conocimientos previos. Caractersticas biolgicas= genotipo.
Caractersticas fsicas=fenotipo.
Los genes, formados por segmentos de ADN (doble hebra) y ARN (hebra
simple), tras la transcripcin de ARN mensajero, ribosmico y de transferencia,
controlan la estructura y funcionamiento de cada clula, con la capacidad de
crear copias exactas de s mismo, tras un proceso llamado replicacin, en el
cual el ADN se replica. Es la combinacin de la gentica replicacin,
transcripcin, procesamiento (maduracin del ARN) con las experiencias del
organismo la que determina el resultado final en la apariencia y
comportamiento del organismo. La secuencia de nucletidos en la cadena de
ADN o ARN es la informacin gentica que heredan los organismos. La
secuencia de nucletidos de un gen es traducida por las clulas para producir
una cadena de aminocidos, creando protenas. El orden de los aminocidos en

una protena corresponde con el orden de los nucletidos del gen. Esto recibe
el nombre de cdigo gentico. Los aminocidos de una protena determinan
como se pliega en una forma tridimensional, y son responsables del
funcionamiento de la protena. Las protenas ejecutan casi todas las funciones
que necesitan las clulas para vivir. El genoma es la totalidad de la informacin
gentica que posee un organismo en particular. Por lo general, al hablar de
genoma en eucariotas, nos referimos solo al ADN contenido en el ncleo,
organizado en cromosomas. La mitocondria tambin tiene genes, llamado
genoma mitocondrial. El genoma humano est organizado en 46 cromosomas,
22 pares presentes en ambos sexos, y los cromosomas X y Y, que determinan
el sexo. Un juego de cromosomas autosmicos procede de cada progenitor. Un
cromosoma X procede de la madre, mientras que el otro cromosoma X o el Y
proceden del padre. Los cromosomas autosmicos se numeran en funcin de
su tamao, de modo que el 1 es el ms grande. Cada cromosoma contiene
genes entremezclados y a menudo con regiones grandes de ADN que no
codifican protenas. La mayora de genes de los mamferos constan de varios
exones, que son las porciones que, a la larga, constituyen el ARNm maduro, y
de intrones, que separan los exones y que son eliminados del transcripto
primario mediante corte y empalme. Los 3,000 millones de pares de bases que
conforman el genoma humano, solo albergan entre 20,000 y 25,000 genes
codificadores de protenas. No obstante, las clulas de los mamferos utilizan
mtodos de corte y empalme alternativos, as como promotores gnicos
alternativos para generar de 4 a 6 ARNm diferentes a partir de un solo gen, por
lo que el nmero de ARNm codificadores de protenas, o transcriptoma, puede
llegar a 100,000. Esta complejidad se amplifica an ms a nivel proteico
gracias a las modificaciones postraduccionales y la protelisis dirigida, que
podran generar entre 500,000-1,000,000 de entidades proteicas
funcionalmente diferentes, que constituyen el proteoma. Se calcula que entre
10-15% de estas protenas actan en el metabolismo, en lo que,
colectivamente, se conoce como procesos generadores de energa y los
bloques de bajo peso molecular para la construccin celular, como
aminocidos, cidos grasos y azcares. Tambin se incluyen los procesos que
convierten las sustancias exgenas, como frmacos o sustancias qumicas
ambientales. Se describen aproximadamente 2,500 metabolitos, que son el
objeto de estudio del metaboloma, aunque se desconoce el tamao real. Este
aumenta con el nmero de sustancias ambientales al que se ve expuesto un
organismo.
Tcnicas de exploracin del ADN. En el proceso de anlisis del ADN, se
estudian las regiones polimrficas del ADN, de esta manera se comparan los
genes biolgicos entre los individuos. En cada gen humano, se encuentran
fragmentos llamados locus y marcadores genticos que son examinados por
los cientficos para detectar el patrn hereditario del gen. Anteriormente, la
manera de estudiar los marcadores genticos en el anlisis de ADN era
mediante la tcnica de hibridacin con sondas, pero este mtodo requera
grandes cantidades de ADN y que no estuviera degradado. El avance en
gentica ha permitido, mediante el mtodo por reaccin en cadena de

polimerasa (PCR), la extraccin de ADN incluso desde cantidades mnimas. Las

estructuras de ADN se pueden extraer a partir de muestras de piel, uas, pelo,
sangre, etc. Actualmente, utilizando laboratorios de alta tecnologa, el anlisis
de ADN se puede realizar desde muestras muy pequeas. Una vez recibidas las
muestras en el laboratorio, el proceso de anlisis se realiza inmediatamente. El
procedimiento consiste en: 1) extraccin y purificacin del ADN, 2)
cuantificacin, 3) amplificacin del ADN por PCR, 4) separacin de las
molculas, y 5) anlisis.
Procedimiento. En PCR, el ADN es el analito. Por tanto, una buena muestra
implica siempre un correcto proceso de obtencin de esta molcula a partir de
material biolgico. La extraccin del ADN consta de una etapa de lisis, que
consiste en romper las estructuras que confinan el citoplasma y liberar al
medio su contenido, y otra de purificacin, que implica la retirada de la
solucin final de la mayora de elementos que pueden interferir en la PCR. La
extraccin del ADN de las clulas o virus donde se halla confinado es un aspo
previo en muchos procedimientos analticos y diagnsticos.
1. Extraccin y purificacin del ADN. Se separa la molcula de ADN del
resto de los componentes celulares. Hay varias sustancias que pueden afectar
este proceso, como los soportes donde se encuentra la muestra biolgica
(ropa) o los propios reactivos para la extraccin. La tcnica requerir de ms
tiempo o resultar ms costosa. La sangre o saliva tiene un proceso de
extraccin ms rpido y econmico que un hueso o diente
Cuantificacin. Se realiza posterior a la extraccin del ADN y consiste en
mesurar la cantidad de ADN aislado y valorar en qu estado se encuentra
(completo o roto). Uno de los mtodos ms utilizados para la cuantificacin del
ADN es el anlisis de la absorcin de UV, ya que los nucletidos poseen
mximos de absorcin de 260nm. Este mtodo proporciona una estimacin
simple y precisa de la concentracin de una muestra. Se considera una
muestra adecuada entre 50-200ng/l.
2. Amplificacin del ADN, tambin conocido como anlisis por reaccin
en cadena de polimerasa (PCR). Esta tcnica se usa para amplificar un
fragmento de ADN, es muy til en caso de no tener suficiente muestra de ADN,
en ese caso, se hacen copias de los marcadores del mismo ADN para proceder
a estudiarlo (es posible amplificarlo hasta un milln de veces). De manera
general, la cantidad ptima de ADN est en torno a los 5ng, siempre y cuando
se conozca una parte de la secuencia de los nucletidos. El proceso consiste en
varias fases de altas y bajas temperaturas alternadas mediante un aparato
llamado termiciclador, que permite calentar y enfriar los tubos de ensayo de la
reaccin. En estos tubos, se pone el ADN original junto con una mezcla que
contiene nucletidos, polimerasa e iniciadores (primers). Los iniciadores o
primers son molculas de ADN sintetizadas de forma qumica que se adhieren
a la plantilla del ADN, permitiendo reconocer la zona variable y propiciando el
inicio de la reaccin de repeticin. Los nucletidos y polimerasa permiten la
extensin y multiplicacin de la cadena de ADN.
Separacin de las molculas. La electroforesis es una tcnica para la
separacin de molculas segn la movilidad de estas en un campo elctrico. La

separacin puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte slido

(en papel o acetato de celulosa), a travs de una matriz porosa (en gel), o en
disolucin (libre). Dependiendo de la tcnica usada, la separacin obedece en
distinta medida a la carga elctrica de las molculas y a su masa. La
electroforesis se usa en la mayora de fragmentos de ADN amplificado por PCR.
Se usa comnmente para el anlisis de mezclas de protenas o de cidos
nucleicos, como soporte un gel, habitualmente de agarosa o poliacrilamida. Los
cidos nucleicos ya disponen de una carga elctrica negativa, que los dirigir al
polo positivo, mientras que las protenas se cargan al unirse como sustancias
como el SDS (detergente) que incorpora cargas negativas de una manera
dependiente de la masa molecular de la protena. Al poner la mezcla de
molculas y aplicar un campo elctrico, estas se movern y debern ir pasando
por la malla del gel (una red tridimensional de fibras cruzadas), por lo que las
pequeas se movern mejor, ms rpidamente. As, las ms pequeas
avanzarn ms y las ms grandes quedarn cerca del lugar de partida.
Anlisis. Los fragmentos amplificados por PCR se corrieron en la
electroforesis. Las molculas de ADN grandes viajan despacio a travs del gel,
mientras que las molculas pequeas viajan ms aprisa. El gel est orientado
de modo que las bandas ms lentas (molculas mayores estn arriba). Se
coloca en el primer carril de la derecha un conjunto de patrones de ADN
obtenidos por la digestin de una molcula grande de ADN (49kb) con una
enzima de restriccin. Se conoce el tamao de todos estos fragmentos. Se
comparan los fragmentos desconocidos con estos patrones pudiendo
determinar el tamao de los fragmentos desconocidos y compararlos con
varias muestras.
Aplicaciones.
1. Secuenciacin. Una de las razones ms comunes para el uso de la PCR es la
formacin de suficiente cantidad de ADN molde para su secuenciacin. Es
mucho ms sencillo y rpido que la clonacin en clulas.
2. Estudios evolutivos. Mediante la PCR se pueden amplificar genes de
organismos ya extinguidos Se pueden comparar estos genes con los genes
semejantes de organismos actuales y construir rboles filogenticos. El PCR
tambin se ha usado para conseguir el mapa del genoma humano.
3. Huellas dactilares del ADN. Mediante esta tcnica es posible comparar
muestras diferentes de ADN para comprobar si pertenecen al mismo individuo
o no, o si existe parentesco entre ellas. Esta tcnica se aplica actualmente en
medicina forense e investigaciones policiales, con el fin de identificar
individuos a partir de muestras biolgicas, como sangre, semen, piel o
cabellos. Tambin se utiliza en las pruebas de paternidad.
3. Hibridacin in situ fluorescente (FISH). La hibridacin es el proceso de
unin de dos hebras complementarias de cidos nucleicos de origen distinto.
Una de ellas ser el ADN diana, y la otra una sonda. La tcnica se basa en la
hibridacin de una sonda de ADN monocatenario marcada con un compuesto
fluorescente sobre su secuencia complementaria en el genoma, bien en a
metafase o en el ncleo en interfase. Las sondas de ADN usadas pueden ser
centromricas (marcan nicamente los centrmeros), de secuencias nicas

(marcan regiones concretas del cromosoma) o de pintado cromosmico

(marcan todos los cromosomas). La tcnica ms importante, y de la que
derivan todas las dems, es la hibridacin in situ fluorescente (FISH).
Comparada con la determinacin convencional del cariotipo, la tcnica de FISH
es ms sensible, y no necesita clulas en metafases, aunque como
inconveniente cabra sealar que detecta nicamente la alteracin especfica
que buscamos. Por lo tanto, es un complemento adecuado cuando no se ha
podido disponer del cariotipo (por ausencia de metafases) o bien este es muy
complejo (en el caso de tumores). El inters de esta tcnica consiste en que
permite diagnosticar alteraciones cromosmicas o gnicas indetectables
mediante la citogentica convencional, o hacerlo de una manera ms rpida.
4. Cariotipo. El anlisis espectral de los cariotipos (SKY) se trata de una
tecnologa de citogentica molecular que permite el estudio y visualizacin de
los 23 pares de cromosomas en forma simultnea. Sondas marcadas
fluorescentemente son hechas para cada cromosoma al marcar ADN especfico
de cada cromosoma con diferentes fluorforos. Debido a que hay un limitado
nmero de fluorforos espectralmente distintos, un mtodo de etiquetado
combinatorio es usado para generar muchos colores diferentes. Las diferencias
espectrales generadas por el etiquetado combinatorio son capturadas y
analizadas usando interfermetro agregado a un microscopio de fluorescencia
El programa de procesamiento de imgenes entonces asigna un pseudocolor a
cada combinacin espectralmente diferente, permitiendo la visualizacin de
cromosomas coloreados. Esta tcnica es usada para identificar aberraciones
estructurales cromosmicas en las clulas cancergenas y otras patologas
cuando el bandeo con Giemsa u otras tcnicas no son lo suficientemente
precisas. Este tipo de tcnicas mejorar la identificacin y diagnstico de las
aberraciones cromosmicas en citogentica prenatal as como en clulas
cancerosas.
5. Inmunohistoqumica. Es un procedimiento histopatolgico que se basa en
la utilizacin de un anticuerpo especfico, previamente marcado mediante un
enlace qumico con una enzima que puede transformar un sustrato en visible,
sin afectar la capacidad del anticuerpo para formar un complejo con el
antgeno, aplicado a una muestra de tejido orgnico, correctamente fijada e
incluida en parafina. Con la utilizacin de alguna de las tcnicas especficas
(peroxidasa, antiperoxidasa, fluorescena, etc.), el complejo antgenoanticuerpo as formado puede localizarse e identificarse en las muestras
tisulares o citolgicas a estudiar, con lo que se identifican los marcadores
antignicos caractersticos de distintas lneas de diferenciacin y funcionalismo
celular y se determina el tipo de clula involucrada en la muestra. Esto puede
usarse para localizar una protena de inters.
B. Errores innatos del metabolismo. Los procesos metablicos se
desarrollan por pasos, y cada paso est controlado por una enzima en
particular, y esta es el producto de un gen particular. Esto se concreta con el
concepto un gen-una enzima (o protena). Se conocen ms de 200 errores
innatos del metabolismo que pueden agruparse segn el metabolito, ruta
metablica, funcin de la enzima, o el orgnulo celular afectado. La mayora de

errores innatos del metabolismo se heredan de forma autosmica recesiva o

ligados al cromosoma X, y solo unos pocos lo hacen de forma autosmica
dominante.
Mecanismos patognicos. En estos trastornos una mutacin determina la
falla de una enzima. La alteracin gnica puede causar el dficit enzimtico de
varias maneras: a) la protena no se produce, se produce truncada (cortada) o
se produce en cantidades mnimas, lo que puede ocurrir como resultado de la
emergencia de un codn de terminacin muy cerca del principio de la regin
codificante; o como consecuencia de un defecto de corte y empalme debido a
la prdida de las seales normales del empalme; o a causa de la inestabilidad
del ARN transcrito o de la propia protena, y b) la enzima se produce pero est
alterada; su actividad funcional es menor o nula como consecuencia de
defectos estructurales de la protena que disminuye su afinidad por el sustrato,
o directamente reducen su actividad cataltica modificando el centro activo de
la enzima. En cada paso de un camino metablico en el que participa una
enzima, las mutaciones de esta pueden determinar una enfermedad (adems
de un polimorfismo). El desarrollo de la enfermedad puede acontecer por
diferentes mecanismos.
Ausencia de un producto final (o posterior a la reaccin pertinente), como el
albinismo (dficit de melanina) secundario al dficit de la enzima tirosinasa.
Acumulacin del producto previo en el camino metablico; el producto
acumulado puede ejercer un efecto txico, como en la galactosemia, o
determinar la atrofia y muerte celular por simple acumulacin, como en las
tesaurosis.
Derivacin anormal de los productos hacia un camino metablico alternativo,
con la formacin de productos intermediarios en cantidad nociva, como la
fenilcetonuria.
Ruptura de un mecanismo regulador del metabolismo a causa de la alteracin
de las cantidades productos, como en el caso de la hipercolesterolemia
familiar.
Diagnstico. Para confirmar el diagnstico de errores innatos del
metabolismo, debemos encontrar la enzima ausente o defectuosa, sin
embargo, ciertos hallazgos clnicos, como convulsiones, retardo del
crecimiento, llanto grave o agudo, caractersticas fsicas, etc., nos har
sospechar de ello y una serie de pruebas de laboratorio nos podr orientar en
el diagnstico para despus confirmarlo por pruebas como cariotipo, prueba de
FISH o PCR, segn sea el caso.

ORINA

Protocolo bioqumico inicial

Olor
Color
Cuerpos cetnicos
pH
Sustancias reductoras (clinitest)
Cetocidos
Sulfitos
Reaccin de Brandt

Hemograma
Electrolitos
Gasometra (anin Gap)
Glucosa
Calcio
SANGRE
cido rico
Pruebas hepticas (transaminasas,
fosfatasa alcalina, bilirrubinas,
albmina)
Pruebas de coagulacin
Amonio
cidos lctico y pirvico
b-hidroxibutirato , acetoacetato
Los trastornos del metabolismo ms frecuentemente reportados son:
1. Fenilcetonuria. Enfermedad hereditaria, autosmica recesiva, que causa
retraso mental y se instala desde la lactancia temprana; es un bloqueo del
metabolismo de la fenilalanina, causada generalmente por la deficiencia de la
fenilalanina hidroxilasa, uno de los aminocidos esenciales en la dieta; este
bloqueo provoca una acumulacin del aminocido en la sangre, que eleva su
concentracin a ms de diez veces lo normal. Los nios afectados no muestran
anormalidades al nacer, pero despus de unas semanas presentan vmitos,
convulsiones, erupciones tipo eccematoide y a veces un olor particular debido
a la presencia del cido fenilactico en sudor y orina. El retraso mental se
instala rpidamente en todos los nios que muestran un nivel superior a
6mg/100ml de sangre de fenilalanina. Estos nios suelen tener ojos claros, tez
ms clara, y cabello ms rubio que sus familiares consanguneos, debido a que
el bloqueo disminuye la sntesis de tirosina inicial para la sntesis de melanina.
El diagnstico se hace al detectar la presencia del metabolito de la fenilalanina,
el cido fenilpirvico, en la orina por su reaccin con el cloruro frrico, o por los
aumentos de los valores de fenilalanina en sangre. Adems de la fenilcetonuria
clsica, se observa bloqueos por ausencia de cofactor tetrahidrobiopterina
(BH4) que tambin causa hiperfenilalaninemia pero con repercusin neurolgica
grave, porque la BH4 e necesaria para hidroxilacin de tirosina y triptfano. El
gen responsable de la fenilcetonuria clsica est localizado en el extremo del
brazo largo del cromosoma 12. El tratamiento consiste en una restriccin
cuidadosa, temprana y permanente de la fenilalanina de la dieta, que debe
empezarse en el primer mes de vida para evitar las complicaciones
neurolgicas, esto para mantener los niveles de fenilalanina por abajo del nivel
txico y por encima de su nivel carencial.
2. Enfermedad por orina en jarabe de arce. Los recin nacidos con este
trastorno autosmico recesivo presentan en la primera semana de vida,
vmitos, seguidos de una hipertona e hipotona alternantes, seguida de la
muerte en unas pocas semanas si no se trata. El trastorno est causado por la
deficiencia del complejo cetocido deshidrogenasa de aminocidos de cadena
ramificada; que produce aumento de la excrecin de aminocidos ramificados
valina, leucina e isoleucina en la orina, cuya presencia sugiere el diagnstico,
que se confirma por la demostracin de los tres aminocidos ramificados

esenciales en la sangre. El tratamiento consiste en una dieta que limite la

ingesta de los tres aminocidos ramificados a las cantidades necesarias para el
crecimiento. Los individuos afectados son particularmente sensibles al
deterioro, junto con enfermedades intercurrentes resultantes de la degradacin
de protenas.
3. Albinismo clsico. El albinismo es un trastorno autosmico recesivo
debido a la deficiencia de la enzima tirosinasa, necesaria para la formacin de
melanina a partir de tirosina. En estas personas hay una falta de pigmento en
la piel, pelo, iris y fondo de ojo. Estas personas tienen poca tolerancia al sol,
pueden presentar ojos bizcos (estrabismo), sensibilidad a la luz (fotofobia),
movimientos oculares rpidos (nistagmo) y problemas de visin o ceguera
funcional. Las clulas de las personas con albinismo no tienen actividad
medible de la tirosinasa, se le denomina tirosina-negativo; algunas clulas
pueden tener actividad reducida y se le denomina tirosinasa-positivo, esto
suele observarse clnicamente por el desarrollo variable de pigmento en la piel
y pelo con la edad. Estudios de ADN han demostrado mutaciones en el gen de
la tirosinasa en el brazo largo del cromosoma l1.
4. Trastornos del ciclo de la urea. El ciclo de la urea es una ruta metablica
de cinco pasos que tiene lugar principalmente en los hepatocitos para la
eliminacin de los desechos de nitrgeno de los grupos de amino de los
aminocidos, que se producen por el recambio normal de las protenas.
Convierte dos molculas de amonaco y una de bicarbonato en urea. Las
deficiencias de las enzimas del ciclo de la urea producen intolerancia a las
protenas debida a la acumulacin de amonaco en el organismo, conocida
como hiperamonemia. Los valores aumentados de amonaco son txicos para
el SNC y pueden producir coma, y al igual que algunos trastornos de urea, si se
dejan sin tratar, la muerte. Los diversos trastornos del ciclo de la urea son muy
raros, sin embargo en Guatemala se han encontrado algunos casos (genetista
Dr. Gabriel Silva). Todos ellos se heredan como trastornos autosmicos
recesivos, excepto la deficiencia de la ornitina transcarbamilasa, que est
ligada al cromosoma X.
5. Alcaptonuria. Es el error congnito del metabolismo autosmico recesivo
descrito por el D. Richard Garrod. En la alcaptonuria hay un bloqueo en la
descomposicin del cido homogentsico, un metabolito de la tirosina, debido a
la deficiencia de la enzima cido homogentsico oxidasa (HGO). En
consecuencia el cido homogentsico se acumula y se excreta por la orina, a la
que le confiere un color oscuro cuando se expone al aire. El pigmento se
deposita tambin en ciertos tejidos que adquieren una coloracin oscura
llamada ocronosis en cartlagos articulares y nasales, tambin esclertica y
otros tejidos conectivos, tambin se producen artropatas causadas por el
depsito pigmentario en los cartlagos articulares. En estudios radiogrficos se
observa osteoartritis y avanza a anquilosis de la espina lumbosacra. Tambin
pueden desarrollar enfermedad cardaca por arteriosclerosis y calcificacin de
las vlvulas cardiacas. La alcaptonuria es causada por una mutacin del gen
que codifica la enzima HGO localizada en el cromosoma 3. Esta mutacin es un

cambio del aminocido prolina por serina con lo cual esta protena se vuelve no
funcional.