Recombinao gnica

O que ?
!

Troca de segmentos de DNA

Pedaos de DNA so quebrados e recombinados

Processo fisiolgico

Importncia
Gerao de diversidade gentica e evoluo
Troca de genes entre pares de cromossomos homlogos durante a meiose
Reparo do DNA
Alterao da expresso e funo de alguns genes durante o desenvolvimento e
diferenciao celulares

Modelos de recombinao
!

Recombinao durante a replicao do DNA

Sntese de DNA

Troca para copiar outra fita

DNA recombinante

Quebra e reunio das molculas de DNA

DNA

Quebra, cruzamento e unio

DNA recombinante

Que modelo correto?

Vrus que infectam E. coli resultam
em prole recombinante

Vrus
Meio com C12 e N14

A recombinao ocorre durante

a replicao ou envolve quebra
e reunio?

Meio com C13 e N15

Que modelo correto?

Vrus que infectam E. coli resultam
em prole recombinante

Vrus
Meio com C12 e N14

A recombinao ocorre durante

a replicao ou envolve quebra
e reunio?

Meio com C13 e N15

Infeco de E. coli
Recombinao
entre molculas de
DNA do vrus

Que modelo correto?

Vrus que infectam E. coli resultam
em prole recombinante

Vrus
Meio com C12 e N14

A recombinao ocorre durante

a replicao ou envolve quebra
e reunio?

Meio com C13 e N15

Infeco de E. coli
Recombinao
entre molculas de
DNA do vrus?

Bloqueio da
replicao
bacteriana
Separao DNA leve x pesado
por centrifugao

Vrus leves
Vrus recombinantes
intermedirios
Vrus pesados

Que modelo correto?

Vrus que infectam E. coli resultam
em prole recombinante

Vrus
Meio com C12 e N14

A recombinao ocorre durante

a replicao ou envolve quebra
e reunio?

Meio com C13 e N15

Infeco de E. coli
Recombinao
entre molculas de
DNA do vrus
Separao DNA leve x pesado
por centrifugao

Vrus leves

Concluso

Vrus recombinantes
intermedirios
Vrus pesados

Tipos de recombinao gnica

!

Recombinao homloga

Recombinao stio especfica

Recombinao homloga
!

Cruzamento e troca de segmentos de DNA durante a meiose em eucariotos

E o que a meiose?

Meiose
!

Diviso celular necessria formao de gametas

Meiose II

Meiose I

Prfase II

Clivagem

Metfase II

Anfase II

Separao das
cromtides irms

Telfase II

Clulas filhas
haplides

Como exatamente ocorre a

recombinao homloga?
!

Modelo de Holliday
Quebra das
molculas molde

1. Cortes na mesma posio das duas

molculas homlogas de DNA
2. Desnaturao parcial das fitas cortadas

Troca de fitas

3. Invaso de cada molcula por uma das fitas

da outra molcula e pareamento com a fita
no quebrada
4. Ligao

Ligao

5. Corte das fitas cruzadas (separao) e

reunio para formao da molcula
recombinante
Regio da
heteroduplex

Como exatamente ocorre a

recombinao homloga?
!

O que garante que as duas fitas so

cortadas inicialmente no mesmo ponto?
Modificao do modelo inicial
1. Corte de uma das fitas
2. Fita nica invade a outra fita dupla, e se
pareia com ela
3. Ala de DNA deslocada da outra fita
clivada e unida primeira

Enzimas envolvidas na recombinao

homloga
!

Recombinases
RecBCD e enzimas relacionadas
!
Complexo de 3 protenas
!

Desnaturao e quebra da
fita dupla em um ponto (em
uma das fitas simples)

1. Ao de helicase
2. Ao de nuclease (GCTGGTGG) stio chi

Enzimas envolvidas na recombinao

homloga
!

RecA e enzimas relacionadas

!
Ligao ao DNA fita simples
!

Ligao do complexo DNA fita simples/

protena ao DNA fita dupla (pareamento
de bases)
Troca das fitas e formao da heteroduplex

Enzimas envolvidas na recombinao

homloga
!

RuvA, B e C e enzimas relacionadas

!
Migrao do stio em que as fitas se cruzam
na juno de Holliday
!

Clivagem das fitas cruzadas

Ligao das fitas clivadas

Recombinao stio-especfica
!

O que ?
Recombinao mediada por protenas, que reconhecem sequncias especficas
do DNA
Recombinao homloga: dirigida por homologia da sequncia de DNA
Recombinao stio-especfica: dirigida pela ao de protenas que reconhecem
sequncias especficas do DNA

Recombinao stio-especfica
!

Prottipo: bacterifago
!
Infeco de bactrias E. coli
!
Replicao e lise celular
!
Integrao ao genoma bacteriano
(lisogenia) e desintegrao futura
recombinao stio-especfica

Recombinao stio-especfica
!

Recombinao em stios especficos

!
Stios att (attachment sites)
Recombinao entre stios att do fago e da bactria
Enzima envolvida: integrase
!
Ligao aos stios attP e attB

Recombinao stio-especfica
!

Recombinao em stios especficos

!
Stios att (attachment sites)
Recombinao entre stios att do fago e da bactria
Enzima envolvida: integrase
!
Ligao aos stios attP e attB
!
Clivagem dos stios att
!
Troca das fitas e ligao das fitas clivadas

Recombinao stio-especfica
!

Recombinao em stios especficos

!
Stios att (attachment sites)
Recombinao entre stios att do fago e da bactria
Enzima envolvida: integrase
!
Ligao aos stios attP e attB
!
Clivagem dos stios att
!
Troca das fitas e ligao das fitas clivadas

E nos humanos, qual a sua importncia?

!

Rearranjos programados do genoma

Sistema imunolgico
!
Resposta humoral: imunoglobulinas
!
Resposta celular: linfcitos T

Diversidade para
resposta a enorme
variedade de antgenos
1011 imunoglobulinas
X
105 genes
Genes formados ao longo do
desenvolvimento do sistema
imunolgico, por recombinao
stio-especfica dos genes das
imunoglobulinas

Recombinao stio-especfica e sistema

imunolgico
!

Estrutura das imunoglobulinas

!
Cadeias leve e pesada
!
Regio constante e regio varivel
Regio varivel: ligao aos diferentes
antgenos
O que determina a variabilidade da regio varivel?
!
Recombinao stio-especfica

Recombinao stio-especfica e sistema

imunolgico
!

Gene que codifica a cadeia leve das imunoglobulinas

!
Regio V: regio aminoterminal varivel
!
Regio J: regio de juno
!
Regio C: regio constante

Camundongo
250 regies V
4 regies J
1 regio C
Sempre uma
combinao V, J e C
por recombinao stioespecfica

Recombinao stio-especfica e sistema

imunolgico
!

Gene que codifica a cadeia pesada das imunoglobulinas

!
Regio V: regio aminoterminal varivel
!
Regio D: regio de diversidade
!
Regio J: regio de juno
!
Regio C: regio constante

Duas recombinaes
1. D com J
2. DJ com V
Camundongo
500 regies V
12 regies D
4 regies J
1 regio C
Quantas cadeias
pesadas diferentes

Recombinao stio-especfica e sistema

imunolgico
!

Receptor de linfcitos T
!
Cadeia alfa e cadeia beta
!
Regies varivel e constante
!

Gene
!
Regio V
!
Regio J
!
Regio C
Recombinao stio-especfica

Cadeia alfa

Cadeia beta

Recombinao stio-especfica e sistema

imunolgico
!

Mediadores da recombinao
!

Sequncias sinal adjacentes regio

codante de cada segmento do gene

Complexo enzimtico RAG1 e RAG2

!
Expresso especfica nos linfcitos
!
Clivagem e ligao do DNA

RAG1

RAG2

Ligao de
RAG1/RAG2

Clivagem

Unio das fitas

quebradas