Introduccin

El tema de esta exposicin es la formacin de nuevas ordenaciones de genes por

desplazamiento de grandes bloques de ADN. Primero se hablar del proceso de la
recombinacin gentica, en la que se forma una molcula nueva de ADN por separacin y
reagrupamiento de las cadenas de ADN continuaremos con la enzimologa del proceso y
por ltimo se hablar acerca de los tres procesos de transferencia del material gentico en
los microorganismos a saber la conjugacin, transformacin y transfeccin. Mediante la
recombinacin gentica, se forman nuevas molculas de ADN por rotura y reunin de las
hebras de ADN. La recombinacin gentica se favorece notablemente con la homologa de
largas secuencias de las molculas de ADN que interaccionan entre s.

Las bacterias, que normalmente son haploides han elaborado un mecanismo para el
intercambio de informacin gentica. As, pueden adquirir ADN exgeno a travs de la
conjugacin, transduccin y la transformacin. En todos estos procesos, el ADN exgeno se
incorpora al cromosoma o a un plsmido de la clula receptora mediante recombinacin
general.
La recombinacin general se define como el intercambio de segmentos homlogos entre
dos molculas de ADN.
ADN Recombinante
Enzimologia
Pruebas de complementacin
Las pruebas de complementacin sirven para determinar si las diferentes mutaciones se
encuentran en el mismo gen funcional.
Clulas competentes
La competencia es un estado fisiolgico especial que presentan algunas bacterias de forma natural,
y que podemos inducir en otras, y que las hace especialmente permeables a la entrada de plsmidos.
Esta permeabilidad se debe a alteraciones que sufre la membrana celular.
Al ser un estado fisiolgico especial, no todas las bacterias lo presentan, pero si podemos conseguir
mediante el proceso de transformacin que ciertas bacterias que no son competentes, adquieran
este rasgo de forma temporal.
La entrada al estado de competencia viene codificada a nivel gentico (por los genes del genforo)
y est marcada por ciertas condiciones ambientales. Otras muchas bacterias no se hacen
competentes bajo las condiciones ordinarias de cultivo, pero que pueden hacerse competentes
mediante una serie de tratamientos sumamente artificiales, tales como la exposicin de las clulas
a elevadas concentraciones de cationes divalentes.

Sistema de transformacin natural

Se ha visto que en las cepas en crecimiento de la bacteria Streptococcus pneumoniae (bacterias
gram positivas) se hacen competentes rpidamente durante la fase exponencial de crecimiento. LA
Conversin de clulas no competentes en competentes se encuentra determinado por una protena
llamada factor de competencia, producido de forma constante y excretada al medio por las clulas.
No obstante, solo se desarrolla la competencia cuando la densidad de la poblacin se eleva hasta
llegar a un cierto valor crtico.
Se sintetiza un conjunto de unas doce protenas, que realizan el proceso de transformacin. Con
estas protenas, las clulas competentes pueden absorber ADN bicatenario en diferentes sitios de
su superficie externa y luego crtalo en fragmentos ms pequeos gracias a la accin de enzimas
unidos a la superficie. Luego una cadena del fragmento es digerida por la nucleasa y la otra penetra
en la clula mientras esta unida a una protena de unin al ADN especfica para la competencia.
Estado de competencia temporal
Un mtodo sencillo y muy socorrido es el aquel en el que se emplea cloruro de calcio. Es esta se
convierten bacterias, Escherichia Coli, en competentes medieante un choque trmico en un medio
con cationes divalentes, entre ellos el Ca2+.
La combinacin de la temperatura y los cationes, aumenta la porosidad de la membrana celular,
facilitando la asimilacin de los plsmidos. De esta forma atravesarn la membrana celular cualquier
plsmido que se encuentre en su forma circular o superenrollada. Los plsmidos lineales tienen
ms dificultad para penetrar la membrana.
El porqu de esta metodologa funciona an no se entiende bien. Posiblemente el cloruro de calcio
ocasiona que el ADN precipite alrededor de la clula, o posiblemente la sal es la responsable de
algn tipo de cambio en la pared celular que provoca la unin del ADN. En cualquier caso la adicin
del cloruro de calcio afecta solo la unin del ADN, y no la absorcin real en la clula. Cuando se
aade ADN a las clulas tratadas, el ADN permanece unido al exterior de la clula, y no es (en esta
etapa) transportada en el citoplasma. El movimiento real del ADN dentro de las clulas competentes
es estimulado por el ligero aumento de la temperatura a 42 C. una vez ms, la razn exacta del
porque el choque trmico es efectivo a un no se entiende. (libro gene cloning)

http://joseangelalonso.blogspot.mx/2012/12/blog-post_3441.html
https://bioquimexperimental.files.wordpress.com/2009/08/transformacic3b3n-bacteriana.pdf
https://books.google.com.mx/books?id=2u6Q2XCMDgC&pg=PA276&lpg=PA276&dq=tabla+11.1+bacterias+de+las+que+se+sabe+que+codific
an+capacidad+de+transformacion+natural&source=bl&ots=4UgfncuDOs&sig=KksMQMmZLfADoCF
oBBCstclqL9Y&hl=es419&sa=X&ei=fIZPVfDKJMrJtQXHuICgAQ&ved=0CB0Q6AEwAA#v=onepage&q&f=true

Transduccin
Un tercer mecanismo de transferencia gentica entre bacterias es la transduccin. En este proceso
el ADN bacteriano es trasferido de una clula donante a una clula receptora dentro de un virus que
infecta a las bacterias, denominados bacterifagos o fago.
A si en la transduccin un virus bacteriano transfiere el ADN de una clula a otra. Los virus pueden
transferir los genes del hospedador de dos maneras. En la primera, llamada transduccin
generalizada el ADN derivado de prcticamente cualquier fragmento de ADN del hospedador es
empaquetado en el interior del virn maduro en el lugar del genoma vrico. En la segunda llamada
transduccin especializada el ADN de una regin especfica es del cromosoma del hospedador es
integrado directamente en el genoma del virus normalmente reemplazando algunos genes vricos. El bacterifago transductor, producto de la transduccin generalizada como la especializada,
normalmente no es infeccioso, porque los genes bacterianos han sustituido todos o algunos de los
genes vricos.

Transduccin generalizada
En la transduccin generalizada prcticamente cualquier gen del cromosoma donador se puede
transferir al receptor. Sin embargo los genes donadores no pueden replicarse independientemente
y no forman parte de un genoma vrico, de modo que a menos que los genes donadores se
recombinen con el cromosoma bacteriano receptor se perdern.
Cuando una clula bacteriana es infectada por un fago, se puede iniciar el ciclo ltico, sin embargo,
durante la infeccin ltica, las enzimas responsables del empaquetamiento del ADN a veces
empaquetan ADN del hospedador de forma accidental. El virin resultante recibe el nombre de
partcula transductora, como las partculas transductoras no pueden provocar una infeccin vrica
se dice que son defectivas. Durante la lisis de la clula, estas partculas son liberadas junto con los
viriones normales.

Cuando este lisado es empleado para infectar a una poblacin de clulas receptoras, la mayora de
dichas clulas son infectadas por el virus normal. Sin embargo, solo una fraccin pequea de la
poblacin recibe las partculas transductoras, aunque este material no puede replicarse, puede
sufrir recombinacin gentica con el ADN del nuevo hospedador.