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Manual de limpieza y
desinfeccin del material que se
utilice en el procesamiento de
las muestras y/o de los
elementos que se reutilicen.

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INTRODUCCIN
Durante la rutina de trabajo diario que se realizan en todas las secciones
del laboratorio clnico del Hospital Local de Puerto Ass, se manipulan diferentes tipos de
muestras, los cuales pueden contener agentes infecciosos importantes, que requieren ser
eliminados antes de descartar los envases respectivos.
Por otro lado, existen materiales de laboratorio reusables que requieren posterior a su
utilizacin, de una limpieza apropiada, tal que puedan ser utilizados posteriormente.
Es importante recordar que al realizar cualquier procedimiento de limpieza y desinfeccin,
se deben tener presente las precauciones universales, los equipos de bioseguridad
requeridos y considerar TODAS las muestras como de alto riesgo.
DEFINICIONES
Esterilizacin: Proceso que destruye toda forma de vida microbiana. Un objeto estril (en
sentido microbiolgico) est libre de microorganismos vivos.

Desinfeccin: Es la destruccin, inactivacin o remocin de aquellos microorganismos

que pueden causar infeccin u ocasionar otros efectos indeseables; la desinfeccin no
implica necesariamente esterilizacin.

Desinfectante: Agente usualmente qumico, que mata las formas en crecimiento de los
microorganismos, pero no necesariamente las esporas. El trmino se refiere a sustancias
utilizadas sobre objetos inanimados.

Antisptico: Sustancia que impide el crecimiento o la accin de los microorganismos, ya

sea destruyndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se aplica sobre superficies
corporales.

Elaborado por:

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Bacteriloga

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Germicida: Agente que mata a los microorganismos, pero no necesariamente a sus

esporas.

Bactericida: Agente que mata a las bacterias.

Bacteriosttico: Agente que inhibe el crecimiento de las bacterias, mientras permanece

en contacto con ellas.

Fungicida: Agente que mata los hongos.

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE DESTRUCCIN DE LOS

MICROORGANISMOS

Temperatura
Las temperaturas elevadas tienen efectos dainos sobre los microorganismos y se debe
tener en cuenta que cuando, adems de la temperatura, tambin se utiliza un agente
antimicrobiano, los incrementos en la temperatura aceleran la destruccin de los
microorganismos. Por ejemplo, la muerte de una suspensin bacteriana por fenol es
mucho ms rpida a 42C que a 30C.

Tipo de microorganismos
Las especies de microorganismos difieren en su susceptibilidad a los agentes fsicos y
qumicos. En las especies formadoras de esporas, las clulas vegetativas son mucho ms
susceptibles que las formas esporuladas.
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Estado fisiolgico de las clulas

El estado fisiolgico de los microorganismos puede influenciar la susceptibilidad a un
agente antimicrobiano. Las clulas jvenes, metablicamente activas, son ms fcilmente
destruidas que las clulas viejas cuando el agente acta interfiriendo con el metabolismo.

Ambiente
Las propiedades fsicas y qumicas del medio o sustancia donde se encuentran los
microorganismos, tambin tienen una profunda influencia sobre la eficacia de la
destruccin microbiana, por ejemplo, el calor es mucho ms eficaz en
materiales cidos que en materiales alcalinos. La consistencia del material influye
notablemente en la penetracin del agente. La presencia de material orgnico puede
reducir significativamente la eficacia de un agente qumico, ya sea inactivndolo o
protegiendo de l a los microorganismos si estn presentes.

LIMPIEZA DE MATERIAL REUSABLE NO CONTAMINADO

La limpieza se define como el proceso de remover, a travs de medios mecnicos y/o

fsicos, el polvo, la grasa y otros contaminantes de las superficies, equipos, materiales,
personal, etc. Este proceso, junto con un adecuado proceso de desinfeccin, es
indispensable para controlar la presencia de los microorganismos en el ambiente.

El primer paso del proceso de desinfeccin es la limpieza. La limpieza remueve restos de

tejido, moco, sangre, etc., que podran interferir con la accin del desinfectante.
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Para realizar una limpieza adecuada se deben considerar el tipo de accin del agente
utilizado (remocin mecnica, disolucin o detergente), las condiciones requeridas para
aplicar la solucin limpiadora y el tiempo de contacto necesario para que sta ejerza su
efecto.
Los instrumentos con partes removibles debern desensamblarse de acuerdo con las
instrucciones del fabricante, para asegurarse que todas las superficies se expondrn al
procedimiento de limpieza.

Aproximadamente 99.8% del material orgnico puede ser removido con una limpieza
meticulosa. La limpieza puede ser acompaada de lavado manual o mecnico. Debe
haber en el laboratorio recipientes para productos potencialmente infectados:

Vasijas de un solo uso para recibir portaobjetos, pipetas Pasteur y pequeos

artculos a desechar.

Vasijas altas para pipetas graduadas (reusables).

Bolsas de plstico para materiales combustibles tales como cajas para muestras y
envoltorios que puedan estar contaminados.

Todos estos recipientes deben ir a la seccin de limpieza y esterilizacin para el

tratamiento final y esterilizacin de aquellos potencialmente contaminados.

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TRATAMIENTO
Y
CONTAMINADOS

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ELIMINACIN

DE

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MATERIALES

POTENCIALMENTE

En primer lugar, todo material " sucio " de laboratorio, deber considerarse como de alto
riesgo con el potencial de transmitir infecciones. Por lo que se deben tomar las medidas
adecuadas en su manejo y descontaminacin.

Existen tres mtodos prcticos para el tratamiento de los materiales de laboratorio

desechados y de los desechos contaminados:

La esterilizacin por autoclave.

La incineracin ( no utilizada en los laboratorios )

La desinfeccin qumica.

La eleccin se realiza atendiendo a la naturaleza de los materiales; si es desechable o

recuperable y, en este ltimo caso, si se ve afectado por el calor. Con ciertas excepciones,
ninguno de estos mtodos excluye a los dems. La desinfeccin sola es aconsejable
nicamente para las pipetas graduadas recuperables.

Materiales de vidrio contaminados

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El tipo de lquido o polvos de lavado que se utilice depender de la dureza

del agua suministrada y del mtodo de lavado. Deben tenerse en cuenta las
recomendaciones de varios fabricantes de detergentes de laboratorio. Un requisito previo
es un buen aporte de agua destilada o desionizada.

Si se realiza el lavado a mano, son necesarias piletas dobles, para el lavado y para el
aclarado posterior y adems, cuencos de plstico o de acero inoxidable para el aclarado
final en agua destilada. El agua destilada de alambiques no revestidos, independiente de
la conduccin de vapor, es raro sea satisfactoria para el trabajo bacteriolgico.
La tecnologa moderna tiene a disposicin maquinas lavadoras automatizadas para ste
fin. Los revestimientos de goma de los tapones a rosca deben separarse y lavarse por
separado los revestimientos y los tapones y unirlos despus. Son tiles para esto los
coladores o tamices fabricados de polipropileno.

El material de vidrio nuevo, excepto el fabricado de borosilicato o material similar, puede

requerir neutralizacin. Cuando se esterilizan al autoclave lquidos en tubos o frascos de
vidrio sdico puede liberarse lcali y alterar el pH. La inmersin durante varias horas en
cido clorhdrico al 2-3% es por lo general suficiente, aunque es conveniente comprobar
una muestra llenndolos de agua destilada neutra ms unas gotas de un indicador
apropiado y esterilizndolos en el autoclave.

METODOS DE DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN

Mtodos Fsicos:

Calor Hmedo (Ej. Autoclave).

Calor Seco (Ej. Horno).

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Radiaciones (Ej. Ultravioletas).

Filtracin (Ej. Filtros Millipore ).

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Mtodos Qumicos:

Antispticos (Ej. Alcohol).

Desinfectantes / Esterilizantes (Ej. Cloro).

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MTODOS

Mtodos Fsicos:

Calor Hmedo: Autoclave

El Autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar

cultivos y soluciones que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100C. Una
temperatura de 121 C (15 Lbs. de presin) con un tiempo de exposicin de 15 minutos
sirve para destruir microorganismos, incluso los formadores de esporas.

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Ventajas del calor hmedo

Rpido calentamiento y penetracin.

Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo.

No deja residuos txicos.

Hay un bajo deterioro del material expuesto.

Econmico.

Desventajas del Calor Hmedo

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua.

Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.

Materiales que se pueden esterilizar con vapor

Material textil

Material de vidrio

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Material de goma

Instrumental quirrgico de acero inoxidable

Soluciones acuosas

Todo aquel material cuyo fabricante certifique pueda ser esterilizado por vapor.

Materiales que no se pueden esterilizar con vapor

Sustancias oleosas

Sustancias grasas

Polvos

Instrumental quirrgico cromado o niquelado

Artculos elctricos sin cobertura especial

Todo material que no tolera la exposicin al calor y a la humedad.

Calor Seco: Horno

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Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado, a la accin del calor. El
calor provoca en ellos coagulacin y desnaturalizacin de sus protenas. La efectividad
del calor como mtodo de esterilizacin depende de:

Temperatura

Tiempo de exposicin

La estufa de esterilizacin (Horno), es el artefacto utilizado en los laboratorios para

esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que el
autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de
exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a
160C se requieren al menos 2 horas de exposicin.

Ventajas del Calor Seco

No es corrosivo para metales e instrumentos.

Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias

viscosas no voltiles.

Desventajas del Calor Seco

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Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la

baja penetracin del calor.

Materiales que pueden esterilizarse por calor seco

Instrumental quirrgico cromado- Materiales de vidrio, aluminio o porcelanaAceites, parafina, sustancias grasas, vaselina- Polvos (talco).

Materiales que NO se pueden esterilizar por calor seco

Material textil (algodn, sedas, lino, etc.)

Gomas - Materiales sintticos - Todo material que se altere a la temperatura

trabajo.

Temperatura

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La temperatura de esterilizacin por Calor Seco deber estar entre 160 C 170
C.

Tiempos

El tiempo de exposicin del material se determina mediante la correspondiente validacin

del ciclo. El material a esterilizar se deber cargar con el esterilizador fro, teniendo en
cuenta las siguientes recomendaciones: Cada unidad deber quedar separada de las
vecinas. Los materiales no debern estar en contacto con las paredes, piso y techo del
esterilizador. La carga del esterilizador ser homognea y no deber superar el 80% de la
capacidad total de la cmara

Etapas del ciclo de esterilizacin por calor seco

Colocar el material dentro del Esterilizador

Encender el Esterilizador

Verificar que los instrumentos de control de ciclo, tiempo y temperatura se

encuentren en la posicin correcta

Esperar hasta que los instrumentos de medicin registren la temperatura

seleccionada para el ciclo

Cuando se alcance la temperatura seleccionada, se comenzar a descontar el

tiempo de esterilizacin

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Cumplido el tiempo de exposicin se apagar el Esterilizador

La descarga del Esterilizador se efectuar una vez que el material se haya

enfriado

Precauciones

Durante el ciclo de Esterilizacin no deber abrirse la puerta del Esterilizador porque ello
implicara abortar el ciclo, debiendo en este caso recomenzarlo.

Otros agentes fsicos:

Radiaciones ionizantes (rayos Gamma)

Luz ultravioleta

Filtracin (Filtros Millipore )

Ultrasonido.

Mtodos Qumicos:

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La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan:

Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma

concentracin del agente puede producir un efecto diferente en distintos
microorganismos.

Tiempo: Los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo

que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo.

pH: Determina el grado de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor
disociacin, mayor permeabilidad y mayor efectividad.

Listado de Desinfectantes (agrupados por su radical qumico)

Compuestos Fenlicos:

Fenoles

Cresoles

Alcoholes:

Etlico

Isoproplico

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Halgenos:

Yodo

Cloro

Oxidantes:

Perxido de hidrgeno

Permanganato de potasio

Colorantes:

Azul de metileno

Giemsa

Acridina

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Metales Pesados:

Bicloruro de mercurio

Nitrato de plata

Vapores y Gases:
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Formaldehido (2 5 %)

Ozono (O3)

Oxido de etileno

Glicol.

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cidos:

cido actico (1%)

cido brico

RECOMENDACIONES GENERALES PARA EL USO DE LOS DESINFECTANTES

No deben mezclarse en un mismo recipiente productos antispticos o

desinfectantes de distinta composicin.

No se debe modificar la concentracin establecida para cada procedimiento.

Nunca se deben tapar utilizando cubiertas de metal, algodn, gasa, corcho o

papel. Usar la tapa original.

Una vez que se vierte el contenido del desinfectante o antisptico, no deben

retornarse a su envase original.

Nunca debe llenarse un envase semivaco a partir de otro.

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Las diluciones deben hacerse a la temperatura, y segn el procedimiento indicado

por el fabricante.

Deben almacenarse en reas secas, ventiladas y protegidas de la luz.

Vigilar y controlar la fecha de vencimiento de los antispticos y desinfectantes

Seleccin de un desinfectante

Tipo y cantidad aproximada de microbios.

Tipo y cantidad de materia orgnica presente.

Tiempo de contacto.

Tipo de superficie a ser desinfectada.

Descripcin de la fecha de eficacia e instrucciones de su uso.

Seguridad y aceptabilidad ambiental del producto.

Buena actividad residual.

Costos. No necesariamente lo mejor es lo ms costoso.

LOS TIPOS DE GERMICIDAS Y SUS MECANISMOS DE ACCIN

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Inorgnicos

Metales: Los ms efectivos son el mercurio, plata, cobre y zinc. Actan inactivando las
protenas celulares al combinarse con ellas. Entre los compuestos de mercurio que se
emplean como antispticos en heridas superficiales de la piel y mucosas estn el
mercurocromo (mercromina) y el mertiolato. Entre los compuestos de plata utilizados
como antispticos est el nitrato de plata (AgNO3). Entre los compuestos de cobre se
encuentra el sulfato de cobre (CuSO4) que se utiliza como algicida en los recipientes
abiertos que contienen agua. Los compuestos de zinc tambin son fungicidas por lo que
se utilizan para tratar el pie de atleta

cidos y lcalis: Actan alterando la permeabilidad y coagulando las protenas. En

general los cidos son ms eficaces que los lcalis. Dentro de estos compuestos se
encuentran el sulfrico (H2SO4), ntrico (HNO3), hidrxido sdico (NaOH) e hidrxido
potsico (KOH).

Compuestos inorgnicos oxidantes: actan oxidando los componentes de la

membrana y enzimas. El agua oxigenada (H2O2) al 6% (20 volmenes) se utiliza como
antisptico en pequeas heridas de la piel.

Halgenos: Los halgenos especialmente el cloro y el iodo son componentes de muchos

antimicrobianos. Los halgenos son agentes fuertemente oxidantes por lo que son
altamente reactivos y destructivos para los componentes vitales de las clulas
microbianas. El iodo es un antisptico y el cloro un desinfectante.

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Cloro: La muerte de los microorganismos por accin del cloro se debe en parte a
la combinacin directa del cloro con las protenas de las membranas celulares y
los enzimas. El cloro es un desinfectante que actan sobre protenas y cidos
nucleicos de los microorganismos. El producto clorado ms utilizado en
desinfeccin es el Hipoclorito de sodio (NaOCl), que es activo sobre todas las
bacterias, incluyendo esporas. El hipoclorito de sodio al 1% se puede utilizar como
desinfectante domstico y hospitalario, y de hecho es el ms barato, pero tambin
el ms efectivo. La nica desventaja reconocida es su relativa toxicidad
provocando reacciones alrgicas en algunas personas. Aparte se describen los
sntomas.

Concentracin del cloro puro casero: 5.25 %

Concentracin til : 1 al 2 %

El Cloro es un biocida de amplio espectro barato y eficaz, que se utiliza en disoluciones

de 500- 5000 ppm para desinfeccin medioambiental Sin embargo, una vez disuelto, los
tomos de cloro tienen una vida media muy corta y para que el formulado tenga efecto,
debe ser preparado in situ antes de su utilizacin.

NOTA: Si la solucin comercial de Hipoclorito de Sodio es al 5.25%, la solucin al 1% se

prepara mezclando 1 litro de solucin comercial y 4.25 litros de agua.

Tambin se puede utilizar el siguiente mtodo:

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Ejemplo: Tenemos Cloro comercial al 5% y deseamos preparar un litro al 0.5% (5000

ppm).

FORMULA:

CD x VD
V = -------------CC

VD: Volumen deseado.

CD: Concentracin deseada.
CC: Concentracin conocida.

0.5% x 1000 c.c.

V = -------------------- = 100 c.c.
5%

Por tanto, se debe agregar 100 c.c. de hipoclorito de sodio al 5% a 900 c.c. de agua para
tener 1000 c.c. de una dilucin al 0.5%.
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Compuestos de amonio cuaternarios:

Son agentes desinfectantes por su accin detergente, rompen la membrana

citoplasmtica debido a que disuelven las capas lipdicas, adems desnaturalizan las
protenas. Son detergentes catinicos eficaces contra bacterias vegetativas y algunos
hongos, aunque no contra las mycobacterias ni esporas. Son inactivados por las protenas
y por una diversidad de materiales naturales y plsticos, por los detergentes no inicos y
por el jabn. Su utilizacin en el laboratorio es por tanto limitada, aunque tienen la clara
ventaja de ser estables y de no corroer los metales. Se emplean generalmente a
diluciones de 1-2% para la limpieza de superficie e instrumentos.

Los compuestos de amonio cuaternario no son txicos y son inofensivos para la piel y los
ojos. Ejemplo: Cetrimida, Cloruro de benzalconio, etc.

Iodo: El mecanismo mediante el cual el iodo ejerce su accin antimicrobiana es debido a

su accin oxidante. El iodo se puede utilizar como antisptico bajo dos formas:

Tintura de iodo, es una solucin alcohlica (tintura) de iodo (I 2) ms ioduro

potsico (KI) o ioduro sdico (NaI).

Iodforos, son mezclas de iodo (I2) con compuestos que actan como agentes
transportadores y solubilizadores del iodo. Por ejemplo, la povidona iodada
(Betadine) es un complejo de iodo y polivinil pirrolidona (PVP).

Los agentes alquilantes actan aadiendo pequeas cadenas de tomos

de carbono a las enzimas, que como consecuencia quedan inactivadas, lo que

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ocasiona la muerte de las clulas. El formaldehido, la formalina y el glutaraldehdo

son algunos de estos compuestos.

El xido de etileno es un compuesto gaseoso que se utiliza como agente

esterilizante para el tratamiento de material termosensible y objetos voluminosos
que no pueden ser esterilizados mediante otros sistemas. Sin embargo, es un
compuesto muy txico para la especie humana y su uso ya ha sido reemplazado
por otros ms seguros.

Orgnicos

Alcoholes: Los alcoholes actan desnaturalizando las protenas, disolviendo las

capas lipdicas y como agentes deshidratantes. Se recomienda la utilizacin del
Alcohol Etlico, no desnaturalizado, o Alcohol Isoproplico al 70%. La accin
deshidratadora de ambos alcoholes al 95% limita su utilidad, ya que las protenas
deshidratadas resisten la desnaturalizacin. El etanol al 70% se usa como
antisptico de la piel y como desinfectante en los termmetros clnicos orales y
algunos instrumentos quirrgicos. El etanol y el isopropanol son utilizados como
desinfectantes y antispticos clnicos. Tomar en cuenta que el alcohol etlico al
70% tiene un efecto bacteriosttico y que al 95% su efecto es bactericida. Su
actividad cae bruscamente en concentraciones menores al 50%. Las bacterias
sometidas a la accin de alcohol concentrado sufren destruccin de la pared
celular, permitiendo el paso de contenido intracelular y componentes de la pared
celular al medio externo (endotoxinas). Las bacterias sometidas a la accin de
alcohol al 70% sufren una deshidratacin menos violenta, conservando la
integridad celular. El alcohol se considera un desinfectante de nivel intermedio y se
usa en la desinfeccin de superficies y artculos no crticos. El alcohol tiene la
ventaja de no ser corrosivo. El alcohol Isoproplico es hasta cierto grado ms
germicida que el Etlico, pero es altamente deshidratante.

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ngela Rosales
Bacteriloga

William Martnez
Calidad

Marino Rincn
Gerente.

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PLC-006
VERSION 015

FECHA DE ACTUALIZACION
FEBRERO 2014

Manual de limpieza y
desinfeccin del material que se
utilice en el procesamiento de
las muestras y/o de los
elementos que se reutilicen.

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Las desventajas de los alcoholes en los equipos son que daan la cubierta de los
lentes, tienden a alterar y endurecer el material de goma y plstico, se inactivan en
presencia de materia orgnica y se evaporan rpidamente. Esto condiciona que no
se deben usar alcoholes como mtodo de desinfeccin de alto nivel ni para
materiales en inmersin.

Fenol y compuestos Fenlicos: Una solucin acuosa al 5% de fenol mata

rpidamente a las clulas vegetativas de los microorganismos. Sin embargo, las
esporas son mucho ms resistentes al fenol. Debido a que el fenol es txico y
tiene un olor desagradable ya casi no se usa como desinfectante o antisptico,
siendo reemplazado por compuestos fenlicos que son sustancias derivadas del
fenol menos txicas y ms activas frente a los microorganismos. Lysol es una
mezcla de compuestos fenlicos que se utiliza para desinfectar objetos
inanimados como los suelos, paredes y superficies. El fenol y compuestos
Fenlicos actan alterando la permeabilidad de la membrana citoplsmica as
como desnaturalizando protenas. El hexaclorofeno es un compuesto Fenlicos
que ha sido reemplazado por la clorhexidina, menos txica para la especie
humana.

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de

bioseguridad

en

microbiologa.

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Gua para preparar y esterilizar paquetes envueltos. Especialistas en

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