Los principales tipos de factores a considerar se pueden desglosar de la siguiente manera:

Agentes fsicos (tema 13)

Agentes qumicos (tema 14)

Temperatura

Desinfectantes y antispticos

Desecacin

Quimioterpicos de sntesis

Radiaciones

Antibiticos

Ondas sonoras
Presin hidrosttica
Presin osmtica
pH

2 EFECTO DE LA TEMPERATURA
2.1 EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL
CRECIMIENTO
La temperatura es uno de los parmetros ambientales ms importantes
que condicionan el crecimiento y la supervivencia de los
microorganismos.
La temperatura afecta a la velocidad de crecimiento (y, por lo
tanto al tiempo de generacin, g). Cada bacteria (y suponiendo que el
resto de condiciones ambientales se mantienten constantes) muestra
una curva caracterstica de tasa de crecimiento en funcin de la
temperatura, donde podemos distinguir tres puntos caractersticos
llamadostemperaturas cardinales:

La temperatura mnima se puede explicar en funcin de un descenso

de la fluidez de la membrana, de modo que se detienen los procesos
de transporte de nutrientes y el gradiente de protones.
Por encima de la temperatura mnima la tasa de crecimiento va
aumentando proporcionalmente hasta alcanzar la temperatura ptima,
debido a que las reacciones metablicas catalizadas por enzimas se van
aproximando a su ptimo. En dicha temperatura ptima las enzimas y
reacciones se dan a su mxima tasa posible.
A partir de la temperatura ptima, si seguimos subiendo la
temperatura se produce un descenso acusado de la tasa de crecimiento
hasta alcanzar la temperatura mxima. Dicha temperatura
refleja desnaturalizacin e inactivacin de protenas enzimticas
esenciales, colapsamiento de la membrana citoplsmica y a veces lisis
trmica de la bacteria.
Las principales adaptaciones bioqumicas a altas temperaturas en clulas vegetativas
bacterianas son:
enzimas termorresistentes. Algunas de ellas tienen un interior molecular muy
hidrfobo;
ribosomas termorresistentes;
membranas ricas en cidos grasos saturados, que permiten enlaces
hidrofbicos ms fuertes.
En Arqueas hipertermfilas los lpidos son muy especiales: en vez de basarse
en steres de cidos grasos con el glicerol, se trata de teres de hidrocarburos
unidos al glicerol (el enlace ter es ms resistente). Algunas, adems, en vez de
la tpica bicapa lpdica, exhiben una monocapa bioqumica de C40-bifitaniltetrateres (resultado de unirse cola con cola dos C20-fitanil-diteres), que
condicionan una extrema resistencia a agentes ambientales. (repasar tema 6).

2.3 EFECTO LETAL DEL CALOR

Al subir la temperatura por encima de la temperatura mxima de crecimiento, se
dejan sentir los efectos sobre la viabilidad: la prdida de viabilidad significa que las

bacterias dejan de ser capaces de crecer y dividirse, aun cuando las transfiramos a un medio
idneo. La muerte por calor es una funcin exponencial de primer or

ntes de seguir adelante, es importante tener claro que, dependiendo de

la temperatura y el tiempo a que sometamos un material a tratamiento
trmico, lograremosinactivacin parcial de la poblacin microbiana (es
decir, queda una fraccin de clulas viables) o bien esterilizacin
(=inactivacin total).
En general, entendemos por esterilizacin todo tratamiento de
un material con un agente fsico (como el calor, que nos ocupa en este
momento) o qumico (como veremos en el captulo 14) que acarrea la
eliminacin de toda forma de vida en l. Una vez estril, el material sigue
estril indefinidamente con tal de que est encerrado en un
compartimento estanco, sellado y libre del contacto con microorganismos
del ambiente exterior.
Centrndonos de nuevo en el calor, la inactivacin parcial o la
esterilizacin se pueden lograr por calor hmedo o por calor seco.
La inactivacin (total o parcial) por calor se debe a la
desnaturalizacin de protenas y a la fusin de lpidos de membrana,
debido a que se rompen muchos enlaces dbiles, sobre todo los puentes
de hidrgeno entre grupos -C=O y H2-N-. Estos enlaces se rompen ms
fcilmente por calor hmedo (en atmsfera saturada de vapor de agua),
debido a que las molculas de agua pueden desplazar a los puentes de
hidrgeno.
2.3.1

CALOR HMEDO

Por lo tanto, la inactivacin por calor hmedo requiere menores temperaturas que la que se
realiza en ausencia de agua. Veamos algunos ejemplos de condiciones de inactivacin total
por calor hmedo:

Microorganismo

condiciones

La mayora de clulas vegetativas, de bacterias, levaduras y

hongos

80oC , 5-10 min

Bacilo tuberculoso

58oC , 30 min

Bacilo tuberculoso

59oC , 20 min

Bacilo tuberculoso

65oC , 2 min

Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis

60oC , 60 min

La mayora de esporas de bacterias patgenas

100oC , pocos min

esporas del patgeno Clostridium botulinum

100oC , 5,5 horas

esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos

100oC , muchas horas

esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos

120oC , 15 minutos

Veamos los mtodos principales de lograr esterilizacin de materiales

por calor hmedo:
Autoclave Es un aparato que permite calentar muestras por calor
hmedo a temperaturas superiores a las de ebullicin del agua (sin que
sta hierva), debido a que el tratamiento se efecta en un compartimento
estanco saturado con vapor de agua y a presiones superiores a la
atmosfrica. (El funcionamiento del autoclave ser oportunamente
explicado en clases prcticas). Los parmetros de esterilizacin suelen
ser: temperatura 121C y 10-15 min. Como se puede deducir, estos
parmetros vienen fijados por la resistencia de las esporas de especies
saprofitas (ver ltima lnea de la tabla anterior), que son las formas de
vida que ms aguantan el calor sin perder viabilidad. Los medios de
cultivo que incluyen glucosa deben esterilizarse a 115oC, ya que a
temperaturas superiores la glucosa "carameliza"; por lo tanto, en estas
ocasiones, el tiempo tambin es mayor: 30 min).

La accin rpida del calor hmedo depende en buena parte del

alto valor de calor latente del agua (540 calg-1); ello hace que los objetos
ms fros (como las muestras a esterilizar) se calienten rpidamente por
condensacin de agua en su superficie.
Aplicaciones principales del calor hmedo:
1. En la prctica cotidiana del laboratorio de microbiologa, en la
esterilizacin de medios de cultivo y soluciones.
2. En la esterilizacin de material quirrgico.
3. En la esterilizacin o inactivacin parcial, en las industrias
alimentarias (conservas, leche y derivados).
CALOR SECO
Como ya dijimos, la esterilizacin por calor seco necesita recurrir a
mayores temperaturas que la efectuada por el calor hmedo, ya que al no
existir agua, la rotura de puentes de hidrgeno y la desnaturalizacin de
protenas, as como la fusin de membranas, se efectan a mayores energas.
Otros efectos del calor seco son los daos por oxidacin y el provocar un
aumento de la concentracin de electrolitos.
Aplicaciones del calor seco:
1.

El llamado horno de Pasteur, mediante calentamiento a 160-170C

durante 2-3 horas permite esterilizar materiales inertes de laboratorio
resistentes al calor: material de vidrio y metlico, aceites y jaleas, etc.

2.

Flameado a la llama (hasta el rojo) de asas metlicas de siembra, con

las que se inoculan las bacterias.

3.
2.4

Incineracin de materiales de desecho.

EFECTO DE LAS BAJAS TEMPERATURAS SOBRE LAS BACTERIAS

Las bajas temperaturas (por debajo de la temperatura mnima) no son

tiles para la esterilizacin, ya que, aunque existen algunas bacterias que
mueren por congelacin (p. ej., especies patgenas de Neisseria), el efecto de
este tratamiento sobre otras muchas es, sobre todo, bacteriosttico, sin contar
aquellos organismos psicrfilos o psicrotrofos.
Los efectos de someter una suspensin bacteriana a temperaturas
menores de 0C dependen de:

el medio donde estn suspendidas las bacterias;

el modo en que se realice la congelacin y una ulterior descongelacin.

Aplicaciones de la congelacin:
La congelacin se aplica, en laboratorio, para preservar
muestras bacterianas durante largos periodos de tiempo. Como
acabamos de ver, y con objeto de maximizar la viabilidad bacteriana el
mayor tiempo posible, es importante cmo se efecta tanto la
congelacin como la descongelacin. Una vez congeladas, las bacterias
supervivientes conservan su viabilidad durante mucho tiempo,

CONCEPTOS GENERALES SOBRE RADIACIONES

Y BIOMOLCULAS
Se puede definir la radiacin como la propagacin de energa por el espacio. Los
principales tipos de radiaciones que pueden tener efectos sobre los seres vivos son:

radiacin electromagntica

(longitudes de onda, en nm)

radiacin infrarroja (IR)

800-106

radiacin visible

380-800

ultravioleta (UV)

13,6-380

rayos X

0.14-13.6

rayos

0.001-0.14

rayos csmicos

< 0.001

Los efectos derivados de la absorcin de radiacin dependen de:

la energa de la radiacin absorbida;
la naturaleza del material.
Los efectos de las radiaciones ionizantes son letales, tanto directos como indirectos, as
como mutagnicos. Los efectos letales directos se logran a altas dosis de radiacin,
mientras que los letales indirectos y mutagnicos se consiguen a menores dosis.
1. Efecto letal directo: por impacto de cuantos de radiacin ionizante sobre alguna
molcula esencial para la vida, que es el ADN (ya que obviamente es absolutamente
esencial y suministra una sola copia de la mayora de los genes bacterianos). Los daos al
ADN son, principalmente: roturas en ambas cadenas, y entrecruzamiento entre dichas
cadenas, que no puedan repararse.
2. Efecto mutagnico: deriva de la produccin de daos menores al ADN que pueden
repararse por mecanismos propensos a error.
3. Efecto letal indirecto: este tipo de efecto es el ms importante, y deriva de la radiolisis
del agua, que genera hidrgeno naciente (H) y radical hidroxilo (OH). El radical
hidroxilo reacciona fcilmente con macromolculas, sobre todo con ADN, provocando
roturas en ambas cadenas, lo cual se traduce en efectos de letalidad. Si, adems, la
bacteria est expuesta al oxgeno mientras se la est irradiando, el efecto es an ms
intenso, debido a que el O2 reacciona con los radicales libres, originando cadenas de
reacciones de autooxidacin, muy destructivas, y promoviendo la formacin de
perxidos y epxidos, asimismo letales.
H + O2 HO2
2 HO2 H2O2 + O2
Las principales aplicaciones de las radiaciones ionizantes son la esterilizacin de:
material farmacutico (antibiticos, hormonas, etc);
material mdico-quirrgico (guantes de cirujano, suturas de nylon, jeringas
desechables, agujas, bistures, catteres, prtesis, etc);
alimentos envasados (aunque en algunos pases an sigue abierta la polmica

por parte de ciertos grupos sobre la seguridad de este tratamiento).

5.3 EFECTOS DE LAS RADIACIONES

ULTRAVIOLETA
La radiacin UV tiene un efecto letal y mutagnico, que depende de su longitud de
onda. Ello se debe a la absorcin selectiva de longitudes de onda por parte de ciertas
molculas biolgicas:
Las protenas tienen dos picos (es decir, mximos) de absorcin: uno a 280 nm,
debido a los aminocidos aromticos (Trp, Tyr, Phe), y otro a 230 nm, debido a
los enlaces peptdicos.
El ADN y el ARN absorben a 260 nm, debido al enlace doble entre las
posiciones 4 y 5 de las bases pricas y pirimidnicas.
Los rayos UV no tienen actividad ionizante, pero provocan cambios qumicos en las
molculas absorbentes, de modo que aparecen molculas alteradas denominadas
genricamente fotoproductos. Los fotoproductos originan la inactivacin de
macromolculas, aunque, como veremos enseguida, el ADN dispone de mecanismos para
paliar o eliminar estas modificaciones potencialmente lesivas.
MECANISMOS DE REPARACION DE LOS FOTOPRODUCTOS
Debido al carcter esencial del ADN como molcula central informativa
de los seres vivos, la evolucin ha desarrollado una serie de mecanismos
capacitados para enfrentarse con los posibles daos ocasionados por la luz
ultravioleta. Los principales mecanismos hallados en bacterias se pueden
agrupar as:
1)

Mecanismos prerreplicativos:
a)

b)
2)

reparacin fotoenzimtica o fotorreactivacin, que permite la

reparacin directa del dao en s
reparacin por escisin y resntesis

Mecanismos posreplicativos:
a)

reparacin por recombinacin

b)

reparacin inducible de emergencia (SOS)

A) Reparacin fotoenzimtica
Se debe a la actuacin de una enzima denominada fotoliasa o enzima
fotorreactivante, que muchas bacterias sintetizan de manera constitutiva.
Las fotoliasas reparan directamente los dmeros de pirimidina, en una
reaccin que requiere luz visible de 300-500 nm de longitud de onda (luz
azul). Estas enzimas poseen dos grupos prostticos coloreados (cromforos):

flavina reducida (FADH2)

una pterina.

Mecanismo
1)

La primera fase del mecanismo es independiente de la luz. La

fotoliasa reconoce el dmero de pirimidina, y se une a l, formando un
complejo enzima-sustrato [E-S].

2)

La flavina reducida (FADH2) de la fotoliasa, en presencia de luz (=300500), se excita, y dona electrones al anillo de ciclobutano del dmero de
pirimidina, rompindolo, y regenerando las dos pirimidinas sin alterar.

Aunque se sabe que el segundo cromforo (la pterina) favorece la

reparacin, no est claro cul es su papel exacto.
No todas las bacterias tienen enzimas fotorreactivantes, pero en cambio la
fotorreparacin est muy extendida entre eucariotas.
B) Reparacin por escisin-resntesis
La distorsin en la doble hlice provocada por el dmero es reconocida
por un complejo proteico con actividad de endonucleasa correctora,
conocido comocorrendonucleasa o escinucleasa. El dao se repara
indirectamente (es decir, no se acta sobre el propio fotoproducto), sino que
las bases daadas se eliminan (se escinden) formando parte de un
oligonucletido, y el hueco resultante se rellena por resntesis reparadora de
ADN.
Mecanismo:

1)

Un complejo formado por dos subunidades de la protena UvrA y una de la

UvrB (Uvr[A2B]) se une cerca del dmero de pirimidina, usando la energa
de la hidrlisis del ATP, y merced a su actividad helicasa, desenrolla
localmente la doble hlice.

2)

Se une la protena UvrC, con lo que se completa el complejo Uvr[A2BC],

es decir, la correndonucleasa, unido a la cadena daada del ADN, cerca del
dmero.

3)

La correndonucleasa realiza dos cortes en la cadena afectada por el

dmero: corta el 8 enlace fosfodister a la izquierda del dmero (o sea,
hacia el lado 5') respecto de la localizacin del dmero y corta el 4 o 5
enlace fosfodister a la derecha (en direccin 3' del dmero). Por lo tanto,
se produce y libera un fragmento de unos 12 nucletidos de longitud, que
incluye al dmero de pirimidina, al mismo tiempo que se retira la
escinucleasa, que se separa en sus polipptidos constituyentes.

4)

Queda, pues, un hueco de cadena sencilla en el ADN. Este hueco es

ocupado ahora por la ADN-polimerasa-I y por la ADN-helicasaII (codificada por el gen uvrD), que llevan a la sntesis de nuevo ADN para
rellenar el hueco (por supuesto, en sentido 5' 3'), tomando como molde
la cadena intacta, y usando como cebador (primer) el extremo 3'-OH que
se haba generado en la fase anterior.

5)

Finalmente, la actuacin de la ADN-ligasa sella la cadena (regeneracin

del enlace fosfodister del lado 5').

C) Reparacin por recombinacin

Cuando la ADN-polimerasa-III bacteriana (que es la enzima que
normalmente replica el cromosoma) se encuentra, en la cadena que est
usando como molde, con un dmero de pirimidina, deja de replicar esa zona, y
salta unos 1000 nucletidos ms adelante para seguir la replicacin. Por lo
tanto, deja un gran hueco o mella de unos 1000 nucletidos. Esta
discontinuidad (llamada mella post-replicativa) se puede rellenar por el
mecanismo de reparacin por recombinacin general, recurriendo a
la protena RecA, que verifica una recombinacin con la hebra parental
homloga intacta.
Mecanismo:
1)

Numerosas unidades de protena RecA recubren la zona de cadena sencilla

de la mella posreplicativa, formando estructuras helicoidales.

2)

La protena RecA promueve emparejamiento homlogo de la cadena

sencilla a la que recubre con la doble cadena hermana intacta.

3)

Se produce un intercambio recproco de cadenas.

4)

El extremo 3'-OH libre de la cadena daada (que merced al intercambio

recproco est ahora emparejada con la cadena complementaria procedente
de la doble hlice hermana) sirve de cebador a la ADN-polimerasa-I, que
sintetiza ADN nuevo usando como molde la cadena complementaria intacta
del dplex.

5)

Ligacin e isomerizacin espontneas, que produce la llamada estructura

de Holliday, una figura en X donde hay dos sobrecruzamientos
(crossing-over) que mantienen unidos entre s a los dos duplex.

6)

Resolucin de los dos sobrecruzamientos por sendas roturas y religaciones,

lo cual genera dos dobles hlices ininterrumpidas. Como se ve en la figura,
uno de estos dplex lleva el dmero de pirimidina, y el otro es una doble
cadena intacta, aunque parte de ella contien ADN de nueva sntesis.

Como se puede ver, el mecanismo de reparacin por recombinacin no

repara por s mismo la lesin en el ADN, pero logra reparar la mella
postreplicativa, evitando que se detenga la replicacin del cromosoma. Al final
del proceso el dmero como tal sigue sin reparar, pero ahora tendr una
oportunidad de ser reparado por algn otro mecanismo, como el de escisinresntesis.
D) Reparacin de emergencia (SOS) propensa a error
Cuando la bacteria se somete a dosis elevadas de luz UV o a
determinados agentes qumicos que daan severamente el ADN, o que
interfieren seriamente con la replicacin, puede ocurrir que los sistemas de
reparacin que hemos visto hasta ahora no sean suficientes para reparar todos
los daos; en estas circunstancias se pone en marcha un nuevo mecanismo,
que es inducible y que calificamos como de emergencia, ya que tiende a
salvaguardar la viabilidad de la clula, a costa de acumular mutaciones con
frecuencia elevada (y por eso lo llamamos tambin propenso a error).
Descripcin del sistema en una clula normal (no sometida a daos al ADN):
El gen lexA posee un nivel basal de expresin, de modo que codifica la
protena LexA, que acta como represor sobre su propio gen (represin
autgena), as como sobre los genes recA, uvrA, B, C, umuDC. La represin no
es total, sino que se da un nivel basal de produccin de los polipptidos
correspondientes a estos genes. As, por ejemplo, el nivel de protena RecA es
suficiente para efectuar los procesos normales de recombinacin, y los niveles
de UvrABC son suficientes para reparar pequeos daos en el ADN.
Descripcin del sistema en una clula severamente daada:

Una clula seriamente afectada por un agente que daa el ADN o

interfiere con su replicacin poseer zonas de cromosoma con ADN de cadena
sencilla (c.s.) sin reparar. Pues bien, este ADN de c.s. constituye una seal de
situacin de emergencia para la protena RecA: dicha protena se une a esas
regiones de c.s., de modo que adquiere una actividad proteasa muy especfica
(para distinguir esta actividad, usamos la nomenclatura RecA *). La protena
RecA* (activada como proteasa) induce la proteolisis del represor LexA
(rompindolo entre dos aminocidos concretos hacia la mitad de la molcula).
Por lo tanto, ya no hay suficiente protena LexA intacta como para seguir
reprimiendo a los genes citados (recA, uvrABC, umuDC). Dichos genes
(llamados genricamente genes SOS) se pueden expresar ahora a altos
niveles, de modo que:

Aumentan los niveles de RecA, lo que conlleva un aumento de la eficiencia de la

reparacin por recombinacin;

Aumentan los niveles de la escinucleasa (Uvr[A2BC]), lo que supone mejorar la

reparacin por escisin-resntesis;

Se expresan los genes umuDC, lo que se traduce en un aumento de la mutagnesis.

Pero por qu aumenta la mutagnesis? El mecanismo exacto no est claro. Se sabe
que en esta situacin de emergencia algunos dmeros de pirimidina son procesados
con la intervencin de los productos de recA y de umuD y umuC, de modo que hay
una sntesis de emergencia de ADN que acarrea la frecuente introduccin de
bases incorrectas (es decir, es un proceso de reparacin propenso a error).

De esta manera, la clula salvara su integridad en esta situacin

lmite, pero a costa de adquirir frecuentes mutaciones. (Es mejor sobrevivir
aunque sea con unas cuantas mutaciones a morirse!).

El uso prctico de la luz UV como agente esterilizante est limitado, ya

que tiene poco poder penetrante: no entra en objetos slidos, y adems
se ve apantallada por el cristal y penetra poco en los lquidos. Su
aplicacin concreta ms frecuente es en el control de infecciones por va
area: lmparas de desinfeccin en salas de hospitales y de laboratorios
de investigacin. En Microbiologa se emplea la luz UV como agente
mutagnico en bacterias (en muchos estudios que requieran obtener
mutantes correspondientes a cualquier tipo de fenotipos, para conocer
las correspondientes bases genticas). EFECTOS DE LA PRESIN OSMTICA
(Repasa en el captulo 11 el concepto de potencial de agua o actividad de agua, aw)

Exceptuando los micoplasmas, que carecen de pared celular, las bacterias pueden
vivir en medios tanto hipotnicos como hipertnicos, debido a la proteccin de una pared
celular rgida y a la membrana citoplsmica semipermeable.

Normalmente el citoplasma de las bacterias poseen una osmolaridad

ligeramente superior a la del entorno, lo que garantiza el paso de agua al
interior. La presin de turgor es relativamente constante porque la
membrana citoplsmica se topa con la rigidez de la pared celular. Esta
presin de turgor permite que la bacteria aguante cambios bruscos de
concentracin de solutos en su entorno (dentro de ciertos lmites). Pero
esto plantea una pregunta (que intentaremos responder a continuacin):
cmo logra la bacteria ajustar su osmolaridad interna a esos cambios
exteriores?
A) En medios hipotnicos (con una aw>aw del citoplasma) es la pared celular la que ejerce
todo el papel: su rigidez se opone a la entrada de agua, y por lo tanto, evita que la
membrana citoplsmica tienda a sufrir una presin de turgor excesiva.
B) En medios hipertnicos (cuando la aw del exterior es menor que la del citoplasma). Las
bacterias poseen mecanismos compensatorios por los que tienden a aumentar la
osmolaridad interior por encima de la del medio (para garantizar la entrada de agua del
ambiente y mantener su metabolismo). Ello se logra esencialmente aumentando la
concentracin de un soluto muy soluble en agua en el interior celular, soluto llamado
genricamente soluto compatible, lo cual se puede lograr por varios posibles mecanismos:
bombeando iones al interior;
sintetizando una molcula orgnica osmticamente activa;
bombeando sustancias osmoprotectoras.
1) En el caso de los iones, el in bombeado suele ser el potasio (K+), por un sistema de
antiporte K+/H+.
2) Como ejemplos de sntesis de solutos orgnicos compatibles y osmticamente activos
tenemos el glutamato, la glutamina y la trehalosa. En levaduras es frecuente que el
soluto compatible sea un poliol (sorbitol, manitol, etc.).
Ahora bien, si el medio es muy hipertnico, estos mecanismos ya son incapaces de
evitar la salida de agua desde el citosol, lo cual conlleva una retraccin de la membrana

citoplsmica. La prdida de agua puede suponer la deshidratacin del citoplasma, lo que

conlleva la detencin del crecimiento.
En Gram-positivas se produce una plasmolisis autntica (retraccin de la
membrana citoplsmica respecto de la pared rgida suprayacente)
En Gram-negativas no existe autntica plasmolisis, ya que la pared celular y
la membrana citoplsmica se retraen al mismo tiempo. Las bacteria entricas
crecen lentamente por encima de 0.65M de NaCl.
3) Sin embargo, las bacterias pueden crecer a osmolaridades superiores a la mxima
terica, si en el medio existen determinados compuestos llamados osmoprotectores. La
bacteria bombea esos compuestos a su interior, usndolos como solutos compatibles.
Ejemplos de osmoprotectores exgenos que pueden ser bombeados al interior celular:
Prolina (p. ej., en Salmonella typhimurium y Staphylococcus aureus)
Betana (glicnbetana), un derivado trimetilado de la glicocola (en cianobacterias
y en algunas Gram-positivas).
Colina (en Escherichia coli).
Ectona en enterobacterias.

Por ejemplo, S. typhimurium crece muy lentamente en 1M de ClNa, pero

mejora si al medio se aade 1mM de prolina. Un mtodo normal de
aislar S.aureus es comprobar el crecimiento en medio con 7.5% de ClNa
en presencia de prolina.
Existen ciertos microorganismos especializados que viven en medios hipertnicos, y en
general se llaman osmfilos. Entre los osmfilos podemos distinguir los sacarfilos y los
halfilos.
Uno de los mejores ejemplos de microorganismos sacarfilos no es una
bacteria, sino las levaduras, que viven en jugos vegetales, nctares, zumos, etc.
Utilizan como solutos compatibles polioles como el sorbitol, el ribitol, etc.

Entre los organismos halfilos, podemos distinguir los halfilos moderados y los
halfilos extremos o hiperhalfilos.
Halfilos moderados: suelen ser bacterias marinas (ej.: Vibrio fischeri) que
viven en 3.5% de NaCl, y que ven inhibido su crecimiento a concentraciones
mayores o menores de sales. Los halfilos moderados tienen requerimientos
concretos de una aw equivalente a la de agua de mar, as como
concentraciones determinadas de iones Na+. El papel jugado por este Na+ es:
mantenimiento de los sistemas de membrana citoplsmica y transporte;
estabilizacin de la pared celular;
requerimiento por parte de muchas enzimas.
Halfilos extremos (hiperhalfilos), representados paradigmticamente por
las arqueas del gnero Halobacterium, que viven en (y de hecho requieren)
concentraciones saturantes de sales (salitrales, lagunas salinas). Usan como
soluto compatible el K+, concentrndolo a partir del medio donde viven, hasta
que el citoplasma queda prcticamente saturado con l (4 a 7 M). Esta gran
concentracin de potasio es esencial para mantener la estabilidad y actividad
de sus ribosomas, enzimas y sistemas de transporte. Pero las estructuras
superficiales de estas arqueas requieren altas concentraciones de cloruro
sdico.
Dejando aparte las bacterias halfilas, hay algunas bacterias halotolerantes (como
por ejemplo, Staphylococcus aureus), pero la inmensa mayora de los procariotas viven a
valores de actividad de agua de 0.98. Por ello, un mtodo que ya se conoca empricamente
en la antigedad para conservar ciertos alimentos era el desecarlos o salarlos, o aadirles
grandes cantidades de azcar (como en las mermeladas).

EFECTO DEL pH

La mayora de las bacterias pueden crecer dentro de un margen de pH de su medio,

manteniendo al mismo tiempo su pH interno ptimo prcticamente constante.

Por ejemplo, Escherichia coli puede crecer bien entre pH 6 y pH 8, pero

su pH interno es siempre 7.6 o muy cercano a ese valor.

Respecto del margen normal de pH a los que crecen las bacterias, stas se pueden clasificar
en:
Neutrfilas, si crecen de modo ptimo en torno a la neutralidad (entre pH 5.5 y
8).
Acidfilas, si crecen normalmente entre pH 0 y pH 5.
Alcalfilas, si crecen entre pH 8.5 y pH 11.5.
La mayor parte de las bacterias son neutrfilas. Muchas bacterias neutrfilas
modifican el pH del medio, y resisten entornos relativamente cidos o alcalinos. Por
ejemplo, algunas bacterias fermentativas excretan cidos, mientras otras alcalinizan el
medio, p. ej., produciendo amonio a partir de desaminacin de aminocidos. Por otro lado,
la mayor parte de los hongos y levaduras requieren pHs ligeramente cidos (en torno a 4-5).
Aunque los microorganismos pueden crecer en un margen ms o menos amplio de
pH (alrededor de un ptimo), los cambios bruscos pueden ser lesivos (afectando a la
membrana y al transporte de solutos, e inhibiendo enzimas). Si el pH citoplsmico cae
rpidamente hasta 5 o menos, la bacteria puede morir.
Uno de los mecanismos que, al menos en neutrfilos parece controlar el pH interior
es un sistema de antiporte H+/K+: a pH cidos, el interior celular puede quedar en principio
ms alcalino que el exterior. Este sistema introduce protones en el interior y saca iones
potasio. De esta manera neutralizan el pH interior y siguen teniendo un potencial de
membrana para establecer una fuerza protn motriz que les suministre energa.
Si el pH interior cae en torno a 6 o 5.5, bacterias como E. coli o S.
typhimuriuminducen una respuesta de tolerancia a cidos, consistente en ATPasas
translocadoras de protones (expulsan protones al exterior) y chaperonas (protenas
celadoras) para corregir las protenas desnaturalizadas.
Existen algunos notables procariotas cuyo pH ptimo es muy bajo (acidfilos
extremos u obligados): Algunas eubacterias del gnero Thiobacillus (T. thiooxidans, T.
ferrooxidans) y las arqueas de los gneros Sulfolobus, Thermoplasma y Ferroplasma tienen
su ptimo a pH 2, y generan ellas mismas estos bajos pH al oxidar sulfuros hasta cido
sulfrico. (Sulfolobus es un Secciones un termoacidfilo). De hecho, estas bacterias
necesitan esas altas concentraciones de H+ para mantener la integridad de sus membranas y
envueltas: a pH neutro esas envueltas se desintegran. Una arquea sorprendentemente
acidfila es Picrophilus oshimae, cuyo pH ptimo es nada menos que 0.7 (aparte de que es
una termfila que necesita temperaturas de ms de 60C).

Las especies alcalfilas obligadas tienen ptimos de pH en torno a 10-11. Por

ejemplo, Bacillus alcalophilus , cuyo pH interno es de 9. Sus hbitats tpicos son suelos
carbonatados y lagunas alcalinas (algunos son tambin halfilos, como Natronobacterim
gregoryi). Estos organsimos tienen gran inters industrial, porque de ellos se obtienen
enzimas hidrolticas como proteasas y lipasas que se usan como aditivos en detergentes.