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REVIEW: INFLUENCIA DE LOS REGULADORES DE CRECIMIENTO EN LA

EMBRIOGENESIS SOMATICA
Eder Durango Ballesteros, Maracay 2010

INTRODUCCION
El cultivo de tejidos y la regeneracin de plantas en diferentes especies han tenido
serias dificultades relacionadas con la eficiencia y la repetibilidad. Las clulas pueden
ser inducidas a un estado embriognico por una variedad procedimientos que
generalmente incluyen exposicin de la planta a reguladores de crecimiento, shock de
pH, shock trmico o tratamiento con sustancias qumicas, pero el nmero de clulas
que responden es limitado, esta respuesta est determinada por factores:
Estructurales (Simetra Celular, Polaridad del embrin), Fisiolgicos (Disposicin del
tejido, calidad de la luz) y la composicin y concentracin de los reguladores de
crecimiento en el medio de cultivo, los cuales son determinantes para la formacin y
regeneracin de plantas en los sistemas de cultivo de tejidos. La adicin de
reguladores de crecimiento es la va para inducir respuesta morfogenticas in vitro en
la mayora de los cultivos de tejidos de plantas
Los niveles endgenos de reguladores de crecimientos, es uno de los elementos
cruciales en la determinacin del potencial embriognico de los explantes, dicha
respuesta para inducir Embriognesis Somtica (ES) es muy diversa y dependen de la
especie; es frecuente observar en un mismo explante que clulas genticamente
idnticas, responden diferencialmente a estmulos particulares, originndose varios
cambios en la reprogramacin de las clulas, a clulas embriognicas competentes.
Por esta razn los niveles endgenos de hormonas y su relacin con la competencia
embriognica de los explantes pueden ser la clave para la induccin y expresin de
embriognesis somtica en genotipos recalcitrantes. Las auxinas son consideradas
como las hormonas ms importantes en la regulacin de la ES, esta regulacin ocurre
con el establecimiento de un gradiente de auxina durante la fase de induccin, ambos,
tanto el nivel endgeno, como la aplicacin de cantidades exgenas, son
determinantes en la etapa de expresin e induccin de ES. Se ha observado que el
transporte polar de auxinas es esencial para el establecimiento de una simetra
bilateral durante la embriognesis en embriones somticos y cigticos en
dicotiledneas, esto tambin se ha demostrado para embriones cigticos de
monocotiledneas. Niveles endgenos de ABA tambin perecen ser significativos para
la iniciacin de cultivos embriognicos en algunas monocotiledneas, como inhibidor
de germinaciones precoces cuando se usa como explante embriones cigticos
inmaduros, favoreciendo esto la formacin de callo (Jimnez, 2001, 2005)
NIVELES ENDGENOS DE AUXINAS
Uno de los mayores problemas en la produccin de plantas gimnospermas derivadas
de ES, es el prolongado periodo de proliferacin, adems de los efectos en la
maduracin del embrin y que no todos los cultivos embriognicos iniciados de igual
forma producen el mismo rendimiento. Estas desventajas limitan a algunas conferas
para incluirlas en un programa de mejoramiento. Para mejorar el sistema de

produccin de plantas va ES, en el 2008, Ken y Kang, evaluaron el efecto de dos


inhibidores (TIBA y PCIB) de auxina endgena (AIA) en la maduracin de embriones
somticos de dos lneas (T2 y T4) de cultivos embriognicos de la especies Picea
morrissonicola, encontrando que los niveles endgenos de AIA son 7 veces ms altos
en la lnea T4 que en la T2 en la fase de proliferacin de los embriones y que las
aplicaciones de antiauxinas 2,3,5-acido triiodobenzoico (TIBA) o 2,4-acido Clorofenoxi2-metilpropionico (PCIB), demostraron ser significativas en la disminucin de los
niveles endgenos de AIA en las dos lneas tratadas, sin embargo la disminucin en la
concentracin de AIA endgena en la lnea T2 no es benfico para la embriognesis
somtica; concluyendo que es mejor trabajar con aplicacin de otras hormonas, como
ABA, con la cual despus de 8 semanas se produjeron embriones somticos maduros
solamente en la lnea T2.
APLICACIONES EXGENAS DE AUXINAS Y ABA.
Las aplicaciones de protocolos para ES, dependen ampliamente de la habilidad de los
embriones para convertirse en plantas, en Man el mayor obstculo en la ES, es la baja
frecuencia de conversin de embriones somticos a plantas, debido a un desarrollo
anormal de la plmula. Joshi, et al en el 2008, partiendo de embriones cigticos
maduros obtenidos de flores inmaduras, indujeron en medio Basal MS, suplementado
con 90.5 M de 2, 4-D, la formacin de masas embriognicas (ME) despus de 4
semanas, las cuales fueron transferidas a un medio para desarrollo embriognico
conteniendo 13,6 M de 2, 4-D y varias concentraciones de TDZ (2.27 a 45.41 M),
encontrando que se obtienen mejores respuestas en el porcentaje de embriones con
estructuras multilobulares y protrusiones, cuando se utilizan concentraciones de 9.08
M de TDZ, y concentraciones de 13,6 M de 2, 4-D. Las respuestas varan con la
concentracin y exposicin a TDZ, concentraciones muy bajas (menores de 9.08 M)
de TDZ, responden ms rpido que a altas concentraciones, las cuales gradualmente se
necrosan.
En muchas especies la embriognesis puede tardar mucho tiempo para dar respuesta,
en plantas de cultivos de gran importancia econmica, como la papa (Solanum
tuberosum L.) el sistema de embriognesis somtica involucra el cambio de dos medios
de cultivo y el largo periodo de ms de 9 semanas, para una completa expresin de la
ES.
La simplificacin del sistema existente de ES en papa y mejorar la fase de induccin son
la clave para reducir el tiempo de respuesta. Kumar et al, 2007, experimentaron con
pulsos de 2, 4-D a concentraciones de 0 a 5,210 M, en diferentes tiempos (0 a
300min) de exposicin, aplicados a explantes de secciones internodales primarias de
cultivos de 4 a 6 semanas, para mejorar el tiempo de respuesta de papa en la ES,
encontrando que; aun cuando el pulso no reduce significativamente el periodo
requerido para los procesos de ES en papa, si se obtienen mejores repuestas con
pulsos a concentraciones de 20 M de 2, 4-D durante 1 hora, adems que el 2, 4-D
indirectamente inhibe la elongacin de las clulas por promover la divisin celular,
estimula la divisin celular asimtrica y afecta la regulacin y el balance de hormonas
endgenas; estas respuestas a los pulsos de auxina, indican que el uso de auxina

endgena puede ser requerida solo en la primera fase de la ES, induciendo las clulas a
una embriognesis somtica, y esta puede continuar en ausencia de auxina exgena.
Los efectos de diferentes factores en la embriognesis y la regeneracin de plantas de
embriones maduros de genotipos de trigo resultan normalmente en callos, pero la
regeneracin de stos a plantas resulta fallida, por ello Filippov et al, 2005, se
propusieron determinar las condiciones optimas para una efectiva induccin de callos
y regeneracin de plantas a partir de embriones maduros de trigo derivados de callos,
estudiando 6 cultivares de trigo en dos estaciones, Primavera e invierno, aplicando 5
concentraciones (6,8,10,12,14 mg/L) de 3 auxinas(2,4-D; 2,4,5-T y Dicamba),
observaron que las mayores porcentajes el mayor numero de brotes por callo se logra
con concentraciones de 12 mg/L de Dicamba, a los 21 das. Ensayos adicionales
suplementado el medio MS con Dicamba 12 mg/L y AIA, IBA y NAA en concentraciones
de 0,1; 0,5; 1,0 y 5,0 mg/L, se logra un efecto positivo en el porcentaje de callo
embriognico formado, mientras que el nmero de brotes no fue afectado. El mejor
porcentaje de callo embriognico se observ con la adicin de 0,5 mg/L de AIA con
Dicamba; las respuestas diferenciales de especie a las estaciones es significativa,
manifestndose que en invierno todos los cultivares estudiados mostraron una
disminucin en la formacin de callos embriognicos, a diferencia de la primavera
donde se obtuvieron los mejores porcentajes de callos embriognicos.
La embriognesis somtica ha sido usada en muchas especies conferas y frutales,
incluyendo Pino (pinus taeda) y nogal (Junglans regia L.). Las especies conferas como
el pino presentan recalcitrancia para cultivo de tejidos por va embriognesis somtica.
La ES en general incluye 4 estados, induccin, proliferacin, maduracin y
germinacin, la baja eficiencia de los embriones para pasar de estados y conversin a
planta es el mayor problema en muchas especies, incluyendo nogal y plantas
maderables como los pinos. Vales et al, 2006, estudiaron el efecto del cido Abscico
(ABA) en la maduracin de embriones somticos, encontrando que el ABA juega un
papel importante en la maduracin de embriones cigticos y somticos en conferas.
Se ha demostrado que en estados tempranos de la ES la mayora de las conferas
requiere entre 20 a 50 M de ABA exgena, para desarrollar el estado cotiledonal. El
desarrollo de embriones somticos, depende en gran medida de la concentracin
endgena de ABA, el aumento del tiempo de maduracin de los embriones somticos
a 4 meses, increment en rendimiento y la germinacin de los embriones de 22 a 66%.
De igual forma Vadhati et al, 2008, estudiaron el efecto de de la adicin al medio de
maduracin de 6 concentraciones de ABA(0, 0.5, 1, 2, y 3 mg/L) y 3 concentraciones
de sacarosa(3, 4, y 6%), encontrando que el mejor tratamiento para germinacin de
embriones somticos, en el cual se produce brotes y races es cuando se usan
concentraciones de ABA de 2 mg/L, resultando en la conversin del 41% de los
embriones en plantas. La regeneracin disminuye cuando se usan altos niveles de ABA
exgena, producindose solamente brotes apicales y no races. La mejor concentracin
de sacarosa fue la del 4%, incrementando significativamente el nmero de embriones
secundarios. Se ha comprobado que la sacarosa tiene poca influencia en la maduracin
de los embriones. El acido Abscsico es esencial para la acumulacin de sustancias de
reserva y la sincronizacin de la maduracin de embriones somticos.

REFECENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Filippov, Mikhail, et al. 2005. The effect of auxin, time exposure to auxin and
genotypes on somatic embryogenesis from mature of wheat. Plant cell tissue Organ
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Jimenez, Victor M. 2001. Involvement of plant hormones and plant growth regulators
on in Vitro somatic embryogenesis. Revista Brasilera de Fisiologa Vegetal. Vol 13, No
2. p 196-223
Jimenez, Victor M. 2005. Involvement of plant hormones and plant growth regulators
on in Vitro somatic embryogenesis. Plant growth regulator. Vol 47. p 91-110
Joshi, Madhuamita, et al. 2008. Effect of TDZ and 2, 4-D on peanut somatic
embryogenesis and in vitro bud development. Plant cell tissue Organ culture. Vol. 94.
p 85-90
Ken yue et al. 2008. Maturation of somatic embryos in two-embryogenesis culture of
Picea morrisonicola, Hayata as effect by alteration of endogenous IAA content. Plant
cell tissue Organ culture. Vol. 93. p 257-268
Kumar, Sanjeev et al. 2007. Auxin pulse treatment holds the potential to enhance
efficiency and practicability of somatic embryogenesis in potato. Plant cell rep. Vol. 26.
p 945-950.
Vadhati, Kourosh et al. 2008. Effect of exogenous ABA in somatic embryo maturation
and germination in Persian walnut (Juglans regia, L). Plant cell tissue Organ culture.
Vol. 93. p 163-171

Vales, Teresa et al. 2006. Improved somatic embryo maturation un loblolly pine by
monitoring ABA responsive gene expretion. Plant cell rep. Vol. 26. p 133-143.