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Conceitos bsicos
e aplicados em
imuno-hematologia
FUNDAO OSWALDO CRUZ

Presidente
Paulo Gadelha
ESCOLA POLITCNICA DE SADE JOAQUIM VENNCIO
Diretor
Paulo Csar de Castro Ribeiro
Vice-diretora de Ensino e Informao
Pulea Zaquini Monteiro Lima
Vice-diretora de Pesquisa e Desenvolvimento Tecnolgico
Marcela Alejandra Pronko
Vice-diretor de Gesto e Desenvolvimento Institucional
Jos Orbilio de Souza Abreu
Conceitos bsicos
e aplicados em
imuno-hematologia
Maria Beatriz Siqueira Campos de Oliveira

Flvia Coelho Ribeiro
Alexandre Gomes Vizzoni
organizao
Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio

Rio de Janeiro2013
2013
Copyright 2013 dos organizadores

Todos os direitos desta edio reservados
Escola Politcnica da Sade Joaquim Venncio/Fundao Oswaldo Cruz
Coordenao editorial
Marcelo Paixo
Edio de texto
Lisa Stuart
Capa, projeto grfico e diagramao
Maycon Gomes
Catalogao na fonte
Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio Biblioteca Emlia Bustamante
O48c
Oliveira, Maria Beatriz Siqueira Campos de (org.)

Conceitos bsicos e aplicados em imuno-hematologia. / Organizao de
Maria Beatriz Siqueira Campos de Oliveira, Flvia Coelho Ribeiro e Alexandre
Gomes Vizzoni. - Rio de Janeiro: EPSJV, 2013.
156 p. : il.
1. Imunologia. 2. Hemoterapia 3. Pessoal de laboratrio. 4. Segurana do
sangue. 5. Exposio a agentes biolgicos. I. Ttulo. II. Ribeiro, Flvia Coelho.
III. Vizzoni, Alexandre Gomes.
CDD 616.079
ISBN: 978.85.98768-69-4
Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio

Avenida Brasil, n 4.365 Manguinhos
21040-360 Rio de Janeiro RJ
( (21) 3865-9717
Sumrio
7
Prefcio

Apresentao

11

Bioqumica eritrocitria

35

Elmo Eduardo de Almeida Amaral

Valter Viana de Andrade Neto
Hematologia e imunologia
aplicadas imuno-hematologia

65
Paulo Roberto S. Stephens

Flvia C. Ribeiro
Valmir L. da Silva
Marcos Antonio P. Marques
Imuno-hematologia eritrocitria

99

Paulo Marcelo T. Cotias
Biossegurana em laboratrios de sade

153
Margarida de Oliveira Pinho

Joseli Maria da Rocha Nogueira
Os autores
Prefcio
Ter sido convidada para prefaciar um livro sobre imuno-hematologia
voltado para tcnicos de laboratrio foi muito gratificante, no s pelo
tema, mas tambm pelo elevado nvel tcnico-cientfico da equipe de
autores, integrantes do quadro de profissionais da Fundao Oswaldo
Cruz, instituio reconhecida internacionalmente pela excelncia de seu
desempenho na pesquisa.
A imuno-hematologia constitui uma especialidade dentro da imunologia. Sua incluso de forma mais especfica na formao de tcnicos de laboratrio de grande relevncia para os laboratrios clnicos
e para a medicina transfusional, um segmento da hemoterapia.
A imuno-hematologia o estudo dos antgenos presentes nas hemcias (eritrcitos), dos anticorpos a eles correspondentes e de seu
significado clnico. A descoberta dos primeiros grupos sanguneos A,
B e O, em 1901, pelo mdico austraco Karl Landsteiner, foi o marco
entre a era emprica e a era cientfica na histria da hemoterapia. O
incio da era cientfica possibilitou a descoberta de outros antgenos de
grupos sanguneos, utilizando-se o mtodo sorolgico para detectar
aglutinao direta decorrente da reao antgenoanticorpo. Em 1945,
foi descrito por Coombs, Mourant e Race o teste de Coombs, preferencialmente chamado de teste de antiglobulina humana, uma das tcnicas
mais importantes usadas no estudo dos grupos sanguneos humanos. O
soro antiglobulina humana utilizado para detectar anticorpos que no
causam aglutinao direta das hemcias, o que revolucionou a sorologia
dos grupos sanguneos, possibilitando a descoberta de anticorpos produzidos por aloimunizaes decorrentes de transfuso ou gestao.
Na ltima dcada, a biologia molecular foi responsvel por mais
um avano, com especial foco no estudo da estrutura e funo do
material gentico e seus produtos de expresso, as protenas membranares, que geram os antgenos de grupos sanguneos.
7
A compreenso da imuno-hematologia eritrocitria depende do

conhecimento multidisciplinar em gentica, imunologia e bioqumica, para apoio bsico indispensvel aos laboratrios de diagnstico e,
principalmente, aos servios de hemoterapia.
A qualidade da imuno-hematologia na execuo dos exames
imuno-hematolgicos como tipagem sangunea, prova de compatibilidade, pesquisa e identificao de anticorpos irregulares,
teste direto de antiglobulina humana e fenotipagens e na correta
utilizao do soro antiglobulina humana fundamental para o
diagnstico da doena hemoltica perinatal, da anemia hemoltica
autoimune e da conduta transfusional nos transplantes ABO e/ou
Rh incompatveis, contribuindo para a segurana transfusional.
A importncia da imuno-hematologia para a formao de tcnicos
de laboratrio fez os autores escreverem este livro. E a incluso de um
captulo sobre biossegurana complementa e contribui para a adoo de
boas prticas de laboratrio.
Por causa da minha experincia na rea de hemoterapia, com nfase em imuno-hematologia, e tambm como docente, contribuindo
na formao e na capacitao de profissionais da sade, tenho a satisfao de cumprimentar os autores, que, oportunamente, decidiram preencher esta lacuna, de forma simples e clara, possibilitando o
avano no conhecimento da imuno-hematologia para a formao de
tcnicos de laboratrio.
Dra. Margarida de Oliveira Pinho
Responsvel pelo Laboratrio de Imuno-hematologia
do Servio de Hemoterapia
do Instituto Nacional do Cncer (Inca)
Apresentao
Este livro fruto do trabalho coletivo de profissionais de diferentes
unidades da Fiocruz com um mesmo objetivo: o do ensino de qualidade para tcnicos de laboratrio. Professores da Escola Politcnica de
Sade Joaquim Venncio (EPSJV), da Escola Nacional de Sade Pblica Sergio Arouca (Ensp), do Instituto Oswaldo Cruz (IOC), do Instituto Fernandes Figueira (IFF) e do Instituto de Pesquisa Clnica Evandro
Chagas (Ipec) se uniram para elaborar o livro Conceitos bsicos e aplicados em imuno-hematologia, que pretende atender a demanda nacional dos cursos tcnicos na rea. Alm disso, a presena no Curso de
Imuno-Hematologia da EPSJV de estudantes provenientes de pases
africanos de lngua portuguesa fortalece a necessidade de uma produo didtica para esses alunos, reforando a cooperao tcnica internacional firmada entre a Fiocruz e esses pases.
A rea de imuno-hematologia complexa. Abarca a origem e as
funes das clulas sanguneas e a interao molecular entre antgenos e anticorpos que so a base para o entendimento de questes fundamentais na prtica do servio de sade e para a deciso de transfundir considerando a necessidade do paciente, o risco e o benefcio.
Nessa perspectiva, o livro introduz aos tcnicos de laboratrio, por
meio de uma linguagem clara, objetiva e acessvel, contedos tericos
para a compreenso das bases da imuno-hematologia bsica e aplicada.
Os captulos 1 e 2 resgatam conceitos bsicos de bioqumica, imunologia e hematologia, tais como biossntese dos grupos sanguneos,
caractersticas das clulas sanguneas e bases dos testes laboratoriais
em imuno-hematologia eritrocitria. O captulo 3 d continuidade
anlise das aplicaes prticas dos principais antgenos de grupos
sanguneos eritrocitrios sistemas ABO, Rh e outros , importantes na hemoterapia, dos princpios e fundamentos tcnicos da rotina
imuno-hematolgica e bases para a sua aplicao aos processos imuno9
hematolgicos. O captulo 4 aborda a biossegurana, apresentando um

panorama geral das normas internacionais, publicadas periodicamente
pela Organizao Mundial da Sade (OMS), e das normas nacionais,
recomendadas pelo Ministrio da Sade, para profissionais da rea da
sade, enfocando principalmente agentes e riscos a que esto expostos
esses trabalhadores.
Este livro pretende preencher uma lacuna na rea da produo de livros tcnicos, ao atender a demanda do tcnico de laboratrio especialista na rea de imuno-hematologia por um material direcionado para
o seu trabalho, mas com contedo abrangente e com bastante fundamentao terica.
Pela realizao de mais um sonho, agradecemos Fiocruz, instituio qual nos orgulhamos de pertencer, direo da Escola
Politcnica de Sade Joaquim Venncio, que incentivou e apoiou
a produtiva parceria que culminou na produo deste livro, aos queridos colegas, autores e revisores dos captulos, responsveis diretos pela idealizao e realizao desta obra, doutora Margarida
Pinho, que gentilmente aceitou o convite para prefaciar esta edio, e um agradecimento especial a Josane Ferreira Filho, que secretariou este livro com carinho e eficincia.
10
Elmo Eduardo de Almeida Amaral
Valter Viana de Andrade Neto
Introduo
A membrana plasmtica importante para a vida da clula, pois,
alm de englobar e definir seus limites, ela mantm as diferenas essenciais entre os meios intra e extracelular. Podemos definir a membrana plasmtica como um filme muito fino, composto de lipdeos
e protenas que permanecem unidos por interaes no covalentes.
A composio da membrana plasmtica do eritrcito contm
39,5% de protenas, 35,1% de lipdeos e 5,8% de carboidratos esses
ltimos presentes no lado extracelular da bicamada lipdica.
Os lipdeos da membrana plasmtica se arranjam numa camada dupla contnua, com espessura de aproximadamente 5 nm. Essa bicamada
lipdica responsvel pela estrutura fluida da membrana e serve como
uma barreira relativamente impermevel passagem da maioria das
molculas hidrossolveis. As protenas presentes na bicamada lipdica
atuam como mediadoras para praticamente todas as outras funes
da membrana, entre elas o transporte de molculas especficas atravs da
bicamada lipdica. Tambm atuam como ligantes estruturais que conectam o citoesqueleto, por meio da bicamada lipdica, tanto matriz celular
quanto s clulas adjacentes, servindo como receptores para a deteco
e a transduo de sinal, fazendo a clula interagir com o ambiente que a
envolve. Quando comparamos a camada interna (camada citoslica) e
a camada externa (camada extracelular) da bicamada lipdica, encontramos diferenas na composio dos lipdeos. Essas diferenas refletem as
vrias funes das duas monocamadas da membrana plasmtica.
11
Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto
Todos os lipdeos que formam a membrana plasmtica so anfipticos (ou anfiflicos), isto , apresentam uma parte hidrofbica (apolar) e
uma parte hidroflica (polar). Essa caracterstica anfiptica dos lipdeos
responsvel pela formao espontnea da bicamada lipdica em ambiente aquoso. Isso faz que a poro hidroflica esteja voltada para a gua,
enquanto a poro hidrofbica est voltada para o interior.
Existem trs principais classes de lipdeos de membrana: os fosfolipdeos, o colesterol e os glicolipdeos. Os fosfolipdeos so os lipdeos mais abundantes representam 60% dos lipdeos de membrana.
Eles apresentam uma extremidade polar (cabea polar) e duas caudas
apolares, compostas de hidrocarbonetos. As caudas apolares normalmente so cidos graxos, que podem apresentar diferentes nmeros
de tomos de carbono, variando assim o seu comprimento. Uma cauda
pode ser insaturada e a outra, saturada. Essas diferenas na saturao e
no comprimento dos cidos graxos presentes nos fosfolipdeos influenciam na fluidez da membrana plasmtica (fig. 1).
Cabea polar
cidos
graxos
Figura 1. Fosfolipdeos que compem a bicamada lipdica.
A membrana plasmtica contm 30% de colesterol. A finalidade

do colesterol na membrana plasmtica diminuir a permeabilidade da
membrana a pequenas molculas. Isso acontece porque o colesterol interage com os fosfolipdeos presentes na bicamada lipdica: com o seu
anel esteroide rgido e em forma de placa, o colesterol posiciona-se na
bicamada lipdica, interagindo com a cadeia de cido graxo do fosfolipdeo e ocasionando a reduo da sua mobilidade.
Os glicolipdeos, que representam 10% dos lipdeos da membrana
plasmtica, so lipdeos que contm acar. Essas molculas so encontradas exclusivamente na camada extracelular (camada externa)
da membrana plasmtica. Eles tm como funo permitir que a clula
interaja com o ambiente extracelular.
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Os aminocidos so molculas que tm na sua estrutura um grupamento carboxlico, um grupamento amino e um grupamento R
diferenciado substituinte, todos ligados ao carbono . A substituio do grupamento R faz que existam vinte tipos de aminocidos.
As protenas so macromolculas biolgicas presentes em todas
as clulas. Elas possuem grande variedade de funes biolgicas.
Todas as protenas so formadas a partir do mesmo conjunto de vinte
aminocidos, ligados covalentemente e linearmente, sendo a linearidade da ligao dos aminocidos caracterstica de cada protena.
A maior parte das protenas da membrana plasmtica do eritrcito
pode ser dividida em protenas perifricas e protenas integrais. As protenas perifricas so protenas presentes no lado citoslico da bicamada
lipdica que no atravessam a membrana plasmtica do eritrcito. Como
exemplo de protenas perifricas, podemos citar as espectrinas. As protenas integrais esto inteiramente embebidas na bicamada lipdica. Elas
atravessam a membrana plasmtica e so encontradas tanto na poro
extracelular quanto na poro intracelular (camada citoslica). As protenas integrais podem atravessar a membrana uma nica vez ou vrias
vezes. Chamamos domnio transmembranar cada uma das passagens da
protena atravs da membrana. Como exemplo de protenas integrais,
temos as glicoforinas (fig. 2).
Cabea
polar
cido
graxos
Figura 2. Tipos de protenas encontradas na membrana plasmtica dos

eritrcitos: em azul, as protenas perifricas, ligadas membrana plasmtica
dos eritrcitos apenas em um dos lados da membrana; em verde, as protenas
integrais, que atravessam toda a bicamada lipdica e podem ser encontradas
nos dois lados da membrana.
De acordo com a sua funo, as protenas tambm podem ser divididas em trs grupos: protenas estruturais integrais de membrana (ban13
da 3 glicoforina); protenas do citoesqueleto (banda 4.1 espectrina,

actina); protenas de ancoragem (anquirina).
Banda 3 uma protena majoritria integral de membrana presente na
membrana celular dos eritrcitos. composta de 911 aminocidos e apresenta de 12 a 14 domnios transmembranares. A regio da protena voltada para o citosol chamada domnio citoplasmtico est associada a
diversas protenas. Esse domnio responsvel pela ancoragem de vrias
protenas, como a anquirina, a protena 4.2 e protenas do citoesqueleto.
A banda 3 existe na forma de dmero duas formas idnticas das
mesmas protenas unidas ou na forma de tetrmero quatro bandas 3 unidas, formando uma nica protena.
As glicoforinas A so protenas integrais de membrana que contm um resduo de cido silico. Os resduos de cido silico (fig. 3)
so abundantes na membrana plasmtica do eritrcito: 60% da carga
negativa presente na membrana do eritrcito so provenientes da presena do cido silico. A manuteno da carga negativa nos eritrcitos
importante nas interaes eritrcitoeritrcito e eritrcitoclulas
sanguneas, como veremos mais adiante.
Figura 3. Estrutura qumica do cido silico.
A glicoforina A ou sialoglicoprotena formada por 131 aminocidos e apresenta apenas um domnio transmembranar. A glicoforina A
est intimamente ligada protena banda 3, que importante para a
sntese e a estabilidade da glicoforina A.
Apesar de o cido silico presente na glicoforina A ser responsvel
pela carga negativa da membrana plasmtica dos eritrcitos, clulas
deficientes em glicoforina A no apresentaram mudanas na carga da
superfcie da membrana plasmtica.
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O citoesqueleto da membrana plasmtica do eritrcito formado

por trs protenas principais: a espectrina, a protena 4.1 e a actina.
Essas protenas, presentes no lado citoslico da bicamada lipdica,
formam uma rede horizontal, essencial na manuteno da forma caracterstica da hemcia.
A espectrina constituda por duas cadeias as cadeias e que
se unem para formar uma estrutura heterodimrica. Os heterodmeros
ligam-se cabea com cabea, formando uma estrutura tetramrica. As
extremidades caudais de quatro ou cinco tetrmeros esto agrupadas
pela ligao com filamentos curtos de actina e com a protena 4.1. Essa
unio forma o que chamamos de complexo de juno. O resultado final
do complexo de juno uma estrutura malevel, em forma de rede,
que recobre toda a superfcie citoslica da membrana plasmtica do eritrcito. essa estrutura que permite s hemcias suportarem a presso
quando passam atravs de capilares muito finos (fig. 4).
O citoesqueleto est ligado membrana plasmtica mediante a interao entre protenas. A anquirina e a protena 4.2 so as responsveis
por essa interao. Essas protenas ligam a banda 3 ao complexo de
juno. Especificamente, a anquirina uma protena de ancoragem que
promove a ligao da banda 3 com a espectrina. A ligao da banda 3
com a espectrina por meio da anquirina tambm reduz a difuso da
banda 3 pela bicamada lipdica (fig. 4).
Resduos de carboidratos
Glicoforina A
Anquirina
Protena 4.1
Actina
Banda 3
Glicoforina A
Protena 4.2
Espectrina cadeias e
Actina
Protena 4.1
Figura 4. Estrutura da membrana plasmtica do eritrcito.
Algumas anomalias na forma da membrana plasmtica do eritrcito por exemplo, a esferocitose e a eliptocitose podem ser decorrentes de defeitos nas protenas que compem a bicamada lipdica.
15
Quadro 1. Anomalias nas formas da membrana plasmtica

do eritrcito ocasionadas por defeito nas protenas.
Protena afetada
Anormalidade
Anquirina
esferocitose
Banda-3
esferocitose
Espectrina
esferocitose, eliptocitose
Protena 4.1
esferocitose, eliptocitose
Outra anomalia da membrana plasmtica observada a alterao na

composio lipdica causada por anomalias congnitas ou pela mudana
nos quantitativos de colesterol e fosfolipdeos. Por exemplo, o grande aumento seletivo do colesterol pode causar a formao de acantcitos.
1. Caractersticas bioqumicas da reao antgenoanticorpo:

ligaes de hidrognio, foras eletrostticas, foras de van
der Waals e ligaes hidrofbicas
Os linfcitos do sistema imune atuam identificando e combatendo
uma ampla quantidade de patgenos; eles se desenvolveram para reconhecer grande nmero de diferentes antgenos ou seja, toda partcula
ou molcula capaz de iniciar uma resposta imune , provenientes de
bactrias, vrus e outros organismos causadores de doena. A resposta
imune especfica realizada de forma coletiva e coordenada por molculas e clulas, cada uma das quais realiza uma funo. Os linfcitos
B reconhecem os antgenos por intermdio de molculas de reconhecimento chamadas imunoglobulinas (Ig). Essas protenas atuam de
forma especfica a uma ampla variedade de antgenos: cada Ig produzida possui especificidade nica. As imunoglobulinas que possuem a
mesma especificidade de antgeno so secretadas como anticorpos por
linfcitos B diferenciados ou plasmcitos (linfcitos B ativados). Esses
anticorpos ligam-se ao seu antgeno especfico e representam a principal funo efetora dos linfcitos B na resposta imune. Os linfcitos B
so as nicas clulas capazes de produzir anticorpos.
A secreo de anticorpos ativada pelo contato com algum antgeno. As funes efetoras dos anticorpos so desencadeadas quando
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ocorre a sua ligao com o antgeno especfico. Vrios efeitos biolgicos dos anticorpos so conhecidos: neutralizao do antgeno, opsonizao, ativao de fatores do complemento, entre outros. A qualidade e a
quantidade de anticorpos produzidos que circulam no nosso sangue ao
final de uma resposta contra determinado antgeno esto reguladas por
um sistema de controle muito elaborado e complexo.
Para entender como ocorre a ligao antgenoanticorpo, antes preciso analisar a estrutura tpica de uma molcula de anticorpo. Os anticorpos so molculas solveis, secretadas em grande quantidade pelos linfcitos B; tm a forma de um Y (fig. 5). A estrutura do anticorpo permite
que ele exera duas funes: de ligao a uma variedade de antgenos e
de ligao a um nmero limitado de clulas e molculas efetoras. Cada
funo exercida por diferentes pores da molcula. As extremidades
dos dois braos do Y variam dependendo da molcula de anticorpo, e
so designadas regies V regio amino (N) terminal varivel. Essas extremidades esto envolvidas na ligao ao antgeno, ao passo que a base
do Y, ou regio C regio carboxi (C)-terminal constante , conservada
e interage com outras molculas e clulas efetoras do sistema imune.
S
co tio
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Figura 5. Estrutura da molcula de anticorpo: CP cadeia pesada constante;

CL cadeia leve constante; VP cadeia pesada varivel;
VL cadeia leve varivel; SS ligaes dissulfdricas.
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A estrutura bsica da molcula de imunoglobulina consiste em

quatro cadeias polipeptdicas no caso da IgG, com cerca de quinhentos aminocidos sendo duas cadeias leves (L) e duas cadeias
pesadas (H), unidas por ligao covalente as pontes dissulfdicas ,
formando uma protena globular. Em cada molcula de imunoglobulina, as duas cadeias pesadas e as duas cadeias leves so idnticas, de
modo que uma molcula de anticorpo possui dois stios de ligao ao
antgeno. A haste do Y denominada fragmento Fc (do ingls fragment crystallizable); definida pela estrutura de sua cadeia pesada, ela
responsvel pela atividade biolgica (funo efetora) dos anticorpos.
Diferenas estruturais na regio Fc definem os cinco subtipos
principais, ou classes, de imunoglobulinas: IgM, IgD, IgG, IgE e
IgA. Esses subtipos diferem entre si em tamanho, carga eltrica,
composio de aminocidos e contedo de carboidratos. Os braos
das molculas de imunoglobulina so denominados fragmentos Fab
(do ingls fragment antigen binding) e constituem a regio de ligao com o antgeno. As molculas de imunoglobulina, ou anticorpos,
apresentam diferenas na sequncia de aminocidos nas pores Fab,
em regies denominadas regies determinantes de complementaridade
(CDRs, do ingls complementary determinig region).
Essas regies formam uma superfcie complementar para o eptopo o stio ou local de ligao do antgeno com o anticorpo. No antgeno, o eptopo determina a especificidade do anticorpo, conferindo
atividade especfica nos domnios de ligao. A diversidade nesses
stios de ligao ao antgeno garante que haja um repertrio quase
ilimitado de especificidades de anticorpos. As CDRs determinam a
conformao dos stios de ligao antgenoanticorpo.
Os antgenos podem se unir ao anticorpo de diferentes maneiras. A
variao nas sequncias dos domnios de cadeia varivel do anticorpo
determina a especificidade em relao ao antgeno. As regies de cadeia
varivel de um anticorpo so diferentes para cada molcula de anticorpo,
e essa variao concentrada em alguns locais. As regies localizadas
na sequncia hipervarivel formam o stio de ligao com o antgeno. A
ligao antgenoanticorpo feita de forma reversvel e pode ser entendida como uma interao de macromolculas com seus ligantes em geral.
O complexo antgenoanticorpo exibe alto grau de complementaridade
qumica e estrutural, com interao das suas superfcies.
18
O princpio bsico da termodinmica na interao antgeno

anticorpo o mesmo daquele de uma reao de ligantes reversveis.
A reao antgenoanticorpo obedece ao princpio da lei de ao das
massas. A constante de equilbrio (Keq) mede a afinidade intrnseca
do anticorpo pelo antgeno. A Keq definida como a concentrao de
ligao [ac-ag] sobre a concentrao de [ag] e [ac]. Esta a frmula
da constante de equilbrio:
Keq =
k1
[ac - ag]
=
[ac] - [ag]
k2
Os anticorpos ligam-se aos antgenos pelo contato, nas CDRs, com

os aminocidos, porm os detalhes da ligao dependem do tamanho
e da forma do antgeno. As cadeias leves e pesadas das CDRs criam um
stio de ligao com o antgeno. As sequncias das CDRs diferem entre
os anticorpos, assim como as formas criadas por essas CDRs. Como
ideia geral, os anticorpos se unem a ligantes cujas superfcies lhes
sejam complementares.
As foras de ligao envolvidas nas interaes especficas entre antgenos e anticorpos no apresentam ligao covalente de natureza fsicoqumica. Essas interaes especficas envolvem uma variedade de foras
e podem ser desfeitas por altas concentraes de sal, pH extremo, temperatura, detergente e, algumas vezes, competio com altas concentraes
do prprio eptopo puro. As foras envolvidas nessas condies interferem na interao antgenoanticorpo, ocasionando o seu rompimento.
Na figura 6, esto exemplificadas as diferentes foras envolvidas na
ligao antgenoanticorpo. As foras eletrostticas ligao inica
podem ser repulsivas ou atrativas, dependendo de sua ao sobre cargas
iguais ou sobre cargas de sinais opostos. Interaes eletrostticas entre
antgeno e anticorpo so resultado da presena de um ou mais stios ionizados do eptopo. Esses stios so tipicamente formados por grupos
COO e NH2+ ou NH3+ de aminocidos de molculas de antgeno ou anticorpo (nos quais o antgeno uma protena ou peptdeo), ou similarmente, alterando estruturas de carboidratos ou outros antgenos
no proteicos. Um tomo de hidrognio compartilhado entre tomos eletronegativos (F, N, O) leva formao das ligaes de hidrognio.
19
Na prtica, o encaixe de ligaes de H entre eptopo e anticorpo possui

pequena relevncia, porque nem todas as ligaes de hidrognio so
realmente feitas.
Figura 6. Foras de interao antgenoanticorpo.
As foras de van der Waals, ou foras eletrodinmicas, so flutuaes nas nuvens de eltrons em torno de molculas polarizando de
maneira oposta os tomos vizinhos. H uma atrao geral entre todos
os tomos e molculas que ficam suficientemente perto para que ocorra
a ligao. Em soluo aquosa, essas foras so frequentemente atrativas
e representam menos de 10% da interao total.
As foras hidrofbicas, ou interaes atrativas cidobase, so
grupos hidrofbicos interagindo desfavoravelmente com a gua que
tendem a se agrupar para a excluso de molculas de gua. A atrao tambm envolve foras de van der Waals.
As foras de interao mencionadas acima contribuem para a ligao antgenoanticorpo; a distncia entre as molculas de antgeno e
as do anticorpo podem alterar as foras envolvidas na ligao especfica e importante ferramenta no estudo dessas interaes.
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As interaes eletrostticas ocorrem entre cadeias laterais de aminocidos carregados. Nas ligaes de hidrognio e nas foras de van der
Waals de menor alcance, tambm podem ocorrer interaes entre dipolos eltricos. Altas concentraes de sal e pH extremos enfraquecem
as interaes eletrostticas e/ou as ligaes de hidrognio, rompendo a
ligao antgenoanticorpo. Essas duas interaes, a interao eletrosttica entre cadeias laterais com carga e as ligaes de hidrognio, possuem
caractersticas especficas, fortalecendo completamente a interao.
Para alguns antgenos, as interaes hidrofbicas certamente so as
responsveis pela maior parte da energia de ligao. Molculas de gua
que so captadas na interface do antgeno e do anticorpo podem contribuir para a ligao, especialmente entre resduos de aminocidos polares.
Interaes de van der Waals e interaes hidrofbicas agem sobre
distncias muito pequenas e servem para unir superfcies de formatos complementares. A interao entre essas foras depende muito do
anticorpo especfico e do antgeno envolvido. Os anticorpos possuem
muitos aminocidos aromticos em seus stios de ligao com o antgeno; esses aminocidos participam principalmente na formao das
foras de van der Waals e nas ligaes hidrofbicas, mas podem tambm formar ligaes de hidrognio.
A complementaridade total da superfcie tem um papel importante
nas interaes antgenoanticorpo, mas ligaes hidrofbicas e interaes eletrostticas especficas parecem determinar a especificidade
ou a afinidade do anticorpo. As ligaes antgenoanticorpo consistem principalmente de foras eletrostticas e foras polares, em todas
as propores possveis.
As interaes antgenoanticorpo, como mencionado anteriormente, dependem de alguns fatores, como especificidade (determinada
pela combinao das estruturas reativas do antgeno e do anticorpo),
reversibilidade (determinada pela dissociao do complexo antgenoanticorpo), equilbrio (determinado pela constante de associao K do
complexo antgeno-anticorpo), exotermia (liberao de calor pelas reaes antgenoanticorpo), afinidade (fora de atrao entre o antgeno
e o anticorpo), avidez (fora de unio entre o antgeno e o anticorpo).
A membrana dos eritrcitos formada por protenas, que so subdivididas por grupos funcionais e estruturais, e carboidratos, que
podem funcionar como antgenos, estimulando o sistema imune.
21
Os anticorpos produzidos se ligam aos componentes da membrana

da hemcia reconhecidos como antgenos. A interao antgeno
anticorpo observada realizada pelas foras descritas acima.
As protenas presentes na membrana eritrocitria desempenham
diversos papis, como os de receptoras do complemento 1 (protena
regulatria), receptoras de quimiocina e aquaporinas (protenas que
formam canais para o transporte da gua), receptoras de adeso,
de banda 3 (protena que forma canais para nions) e de glicoporina
A e transportadoras de ureia, dentre outros. Algumas protenas da
membrana eritrocitria, reconhecidas como antgenos, esto envolvidas na formao de complexos imunes e na regulao do complemento, causando destruio das hemcias por exemplo, a protena
receptora de complemento 1 (CR1), importante na aderncia imune.
Como j mencionado, banda 3 e glicoporina A (GPA) so as duas
protenas integrais mais abundantes na membrana dos eritrcitos.
Observa-se a produo de anticorpos contra essa protena das hemcias em condies fisiolgicas e patolgicas.
A produo de anticorpos contra os componentes da membrana eritrocitria pode causar anemias hemolticas. Essa condio, que pode ser
hereditria ou adquirida, resulta do aumento no ritmo de destruio dos
eritrcitos. Dentre as anemias hemolticas adquiridas, podemos citar as
autoimunes, aloimunes (reaes hemolticas em transfuses de sangue)
e aquelas associadas ao uso de drogas.
As anemias hemolticas autoimunes so causadas pela produo
de anticorpos contra protenas da membrana dos eritrcitos do prprio organismo. Essas protenas so reconhecidas pelos anticorpos
como antgenos, como um corpo estranho, e isso leva, ento, destruio das hemcias. O autoanticorpo liga-se a estruturas da membrana dos eritrcitos, principalmente da circulao perifrica. Esses
anticorpos so principalmente IgM bastante eficientes na fixao de
complemento, ocorrendo hemlise extra e intravascular.
As anemias hemolticas aloimunes so observadas em reaes a
transfuses de sangue, quando os anticorpos produzidos pelo doador
reagem com os eritrcitos do receptor da transfuso. Os anticorpos do
doador reconhecem as estruturas da membrana da hemcia protenas, carboidratos etc. como um antgeno, e isso ocasiona a destruio
das hemcias.
22
Anemias hemolticas tambm podem ser induzidas por alguns

frmacos. A penicilina, por exemplo, pode ligar-se membrana dos
eritrcitos, e dessa forma induzir a produo de anticorpos contra o
complexo penicilina + eritrcito, levando a um quadro de hemlise.
Podemos compreender, ento, a relevncia do estudo dos antgenos
das hemcias, que fornecem ferramentas importantes para a investigao da superfcie dos glbulos vermelhos e so muito teis como marcadores genticos na famlia e em estudos populacionais e forenses.
2. Potencial zeta
A superfcie da clula possui carga eltrica que principalmente
conferida por stios terminais das glicoprotenas e dos glicolipdeos.
Essa carga geralmente negativa, e seu grau de negatividade pode variar de acordo com o nmero e a carga de ons expressos na superfcie.
A membrana plasmtica possui gangliosdeos (cerca de 6% ou menos),
os quais so glicoesfingolipdeos que contm cabeas oligossacardicas
polares. Essas cabeas carregam uma carga negativa atravs de seus resduos de cido silico. As glicoprotenas de membrana so as principais responsveis pela carga negativa da superfcie celular.
A carga negativa da superfcie celular varia no s entre diferentes
tipos de clula, mas tambm nas diferentes fases do ciclo de desenvolvimento de um mesmo tipo de clula. Existe uma correlao entre o
estado de maturao da clula e a intensidade de ligao de partculas
de ferritina cationizada (FC) superfcie de clulas hematopoiticas.
Essa intensidade de ligao FC varia de acordo com a carga de superfcie de cada clula. Quanto maior a quantidade de carga negativa
maior ser a ligao da FC.
Todas as clulas da medula ssea apresentam ligao para a ferritina cationizada na sua superfcie. A extenso de ligao a partculas
de FC difere de clula para clula e est relacionada ao estgio de
maturao das clulas de uma dada linhagem. As sries neutroflica
e mieloblstica possuem moderada ligao com a FC, ao passo que promielcitos e mielcitos ligam-se apenas minimamente. A ligao de FC
aumentada sequencialmente em metamielcitos, neutrfilos segmentados e bastes. Eosinfilos e mielcitos eosinoflicos apresentam padres
23
similares de diferenciao de membrana, mostrando afinidade de ligao semelhante; j os basfilos apresentam ligao mais forte FC do
que outras clulas precursoras de granulcitos. Os linfcitos ligam-se
fortemente FC, ao passo que os moncitos e seus precursores, apenas
moderadamente. A intensidade de ligao de clulas nucleadas eritrocitrias semelhante dos linfcitos. A intensidade de ligao dos
pr-eritroblastos e normoblastos FC idntica no incio, mas vai aumentando na fase final dos normoblastos e diminuindo em seguida nos
reticulcitos e eritrcitos maduros.
Essa propriedade de superfcie, de ligao e afinidade pela ferritina cationizada, que est diretamente relacionada com a interao clula
clula ou clulasubstrato, tambm conhecida como tenso superficial. Ela resulta, principalmente, da exposio superficial de segmentos
moleculares hidrofbicos (aminocidos hidrofbicos) de glicoprotenas.
As hemcias comportam-se como partculas eletronegativas, e os grupos
carboxlicos (COOH-) das sialoglicoprotenas integrantes da membrana
eritrocitria so os maiores responsveis pela eletronegatividade.
Como cargas iguais se repelem, os eritrcitos em suspenso permanecem separados uns dos outros em meio salino. Os eletrlitos
contidos no meio envolvem cada hemcia como uma nuvem de ons
positivos que se torna menos densa medida que se distancia do glbulo. Na figura 7, observamos a representao esquemtica do eritrcito em soluo fisiolgica.
Figura 7. Eritrcito em soluo fisiolgica (NaCl 0,85%).
24
A diferena de potencial entre a nuvem de ctions atrados pelas

cargas eltricas negativas da membrana eritrocitria e o meio chamada de potencial zeta. O potencial zeta a medida da interao das
foras de atrao de van der Waals e as foras eletrostticas, ou seja,
a medida do potencial eltrico que circunda as partculas em suspenso de um coloide. Quanto maior o potencial zeta mais estvel
um coloide, pois as partculas carregadas se repelem umas s outras,
e essa fora supera a tendncia natural agregao, o que significa
menor agregao e menor coagulao.
O potencial zeta se reduz a partir da superfcie da partcula e se torna
zero onde a concentrao de cargas eltricas igual. O potencial zeta aumenta medida que diminui a distncia em relao superfcie da partcula, e a sua reduo se consegue pelo ajuste do pH prximo do ponto
isoeltrico. O ponto isoeltrico o valor de pH em que uma molcula
por exemplo, um aminocido ou uma protena apresenta carga eltrica
igual a 0, ou seja, um pH no qual h equilbrio entre as cargas negativas
e positivas dos grupamentos inicos. O potencial zeta pode ser reduzido pela adio de ons ou coloides com carga oposta ao sistema coloidal.
Quanto o potencial zeta se aproxima de zero (perto do ponto isoeltrico),
o sistema est menos estvel, podendo ocorrer a coagulao; quanto maior
a diferena de potencial, mais estvel o sistema.
O sangue um exemplo de coloide biolgico sujeito ao potencial
zeta. Se o potencial zeta estiver baixo, pode haver agregao eritrocitria, alterao no fluxo nos vasos sanguneos e at trombose. Os
sistemas coloidais (como o sangue) so mantidos estveis por meio
de uma pequena carga eltrica que conserva as partculas afastadas
umas das outras. Essa carga eltrica gera uma diferena de potencial
na superfcie das partculas coloidais.
Por terem grande quantidade de cido N-acetilneuramnico e
outros grupos carregados negativamente ancorados na superfcie de
outras glicoprotenas de membrana, os eritrcitos possuem carga negativa elevada, ou seja, um potencial zeta elevado.
O potencial zeta pode ser determinado experimentalmente e, como
reflete a carga efetiva nas partculas, correlaciona-se com a repulso eletrosttica entre as cargas e com a estabilidade da suspenso. Determinando-se o potencial zeta, possvel estimar a carga de superfcie de
partculas como as hemcias. Algumas tcnicas utilizadas atualmen25
te para medir o potencial zeta so eletroforese, eletro-osmose, potencial de esgotamento e potencial de sedimentao.
A eletroforese a tcnica mais utilizada para medir o potencial
zeta. Ela consiste da medio da mobilidade eletrofortica das partculas carregadas em uma suspenso aquosa (as partculas eletricamente carregadas movimentam-se sob a ao de um campo eltrico aplicado). Quando um campo eltrico aplicado atravs de um
eletrlito, partculas carregadas em suspenso so atradas para o
campo de carga oposta. A velocidade da partcula no campo definida como mobilidade eletrofortica, que a relao entre a velocidade da partcula e o campo eltrico aplicado, e convertida em
potencial zeta, a partir da equao de Helmholtz-Smoluchowski.
Quanto maior a carga superficial, maior ser a velocidade com que as
partculas se deslocam em direo aos eletrodos de carga. O potencial zeta, que est relacionado com a fora de repulso entre as hemcias, pode ser calculado atravs da seguinte frmula, desenvolvida
por Pollack:
Z=

onde:
g
D ,
Z = potencial zeta
= eletronegatividade da hemcia
D = constante dieltrica do meio
= fora inica do meio.
O potencial zeta de um sistema pode ser modificado de duas maneiras:

1) Reduo da carga eltrica das hemcias (), que pode ser obtida:
por fixao de anticorpos como os eptopos dos anticorpos
so carregados positivamente, quando se fixam membrana
eritrocitria neutralizam as cargas dos antgenos especficos,
reduzindo o potencial zeta; ou por tratamento enzimtico a
adio de enzimas proteolticas, como a tripsina, remove fragmentos de protenas da membrana, clivando glicoprotenas
da superfcie celular e diminuindo a carga negativa da membrana plasmtica dos eritrcitos.
26
2) Variao da composio do meio: pela adio de substncias

macromoleculares como albumina bovina, polietilenoglicol
(PEG), polibreno que alteram a constante dieltrica do meio
(D) (quanto maior a constante dieltrica do meio, menor ser
o potencial zeta e, consequentemente, maior ser a sensibilizao/aglutinao das hemcias);
3) Modificao da fora inica (), utilizando-se, por exemplo,
soluo de baixa fora inica.
Outros fatores podem modificar o valor do potencial zeta: pH
modifica a constante de equilbrio; temperatura; exposio aguda ao
frio alteraes no potencial zeta na membrana dos eritrcitos so observadas durante a exposio ao frio, podendo ocorrer a preveno da
agregao eritrocitria; concentrao de sais; concentrao de ons; efeito
do palmitato, modificando o potencial de membrana do eritrcito, dentre
outros. Medicamentos, como a vancomicina, um antibitico policatinico que pode causar agregao espontnea nos eritrcitos por causa da
diminuio do potencial zeta, tambm podem influenciar na agregao das hemcias.
Grande parte das doenas, como a hipertenso arterial, a doena
obstrutiva coronariana, a diabetes e algumas infeces, apresenta aumento de agregao eritrocitria, portanto potencial zeta diminudo.
Evidncias quantitativas e qualitativas mostram alterao de
protenas da membrana dos eritrcitos em pacientes com diabetes. A diabetes mellitus tipo 2 uma sndrome responsvel pelo
desenvolvimento de aterosclerose e doenas cardacas. Evidncias
mostram que a diabetes uma desordem de estresse oxidativo que
produz espcies reativas de oxignio (ROS, do ingls reactive oxygen species), contribuindo para o incio e a progresso de aterosclerose e outras complicaes. A hiperglicemia observada nesses
pacientes induz um estresse oxidativo que provoca alterao nas
propriedades dinmicas e eletrocinticas das hemcias. O potencial zeta pode ser utilizado para o diagnstico de doenas hemolticas
e para estudos de permeabilidade da membrana e de alteraes que
levam destruio de eritrcitos. Por causa da alterao no comportamento dinmico e eletrocintico da bicamada lipdica dos
27
eritrcitos, levando alterao no potencial zeta, e que resulta da

hiperglicemia dos pacientes com diabetes, o potencial zeta pode ser
usado como marcador para o diagnstico de doena cardiovascular
em pacientes diabticos.
Pacientes que so homozigotos para hemoglobina CC, ou seja, portadores de hemoglobinopatia C, causada pela substituio de cido
glutmico por lisina da cadeia da hemoglobina, e que apresentam
cristais nos eritrcitos e uma leve anemia hemoltica tm alterao
na estrutura da membrana e na carga de superfcie dos eritrcitos.
Para avaliar essas alteraes, foi utilizado um ensaio de mobilidade
eletrofortica para determinar o potencial zeta de eritrcitos normais
(AA) e de eritrcitos portadores da hemogloblina CC. Foram observadas diferenas nas suas estruturas de membrana associadas a alteraes da fisiologia de clulas inteiras. Nos eritrcitos com hemoglobina
CC, existe uma mudana na fora repulsiva das hemcias como resultado da reduo no potencial zeta. Essa diferena no potencial zeta
pode ser reflexo da associao de protenas do plasma nas membranas
desses eritrcitos.
Enzimas proteolticas so utilizadas com frequncia na sorologia
para identificao de grupos sanguneos. O tratamento com essas enzimas permite que o eritrcito se torne aglutinvel por anticorpo que no
consegue efetuar a aglutinao em eritrcitos normais. Muitos estudos
tm sido realizados para explicar esse mecanismo pela interferncia do
potencial zeta. O fenmeno da no aglutinao dos eritrcitos com determinados anticorpos causado pela reduo do potencial zeta das clulas
vermelhas do sangue.
A neuraminidase, enzima que remove o cido N-acetilneuramnico
ou o cido silico, causa a reduo da carga de superfcie da membrana
dos eritrcitos. Essa remoo do cido silico permite que os eritrcitos possam ser aglutinados por algumas substncias como o dextran,
um polissacardeo natural. Em eritrcitos no tratados com a enzima
neuraminidase, o dextran promove o aumento do potencial zeta, provavelmente por causa da diminuio da fora inica, provocando a
desagregao desses eritrcitos. Esse resultado demonstra a importncia
do cido silico e do potencial zeta para a manuteno da homeostasia
das clulas sanguneas e como as alteraes nos eritrcitos podem afetar
a aglutinao.
28
O potencial zeta um fenmeno fundamental, com importante

implicao na estabilidade dos coloides existentes na natureza. Quanto maior o valor absoluto de potencial zeta, maior a probabilidades de
que a suspenso seja estvel, pois as partculas carregadas se repelem e
essa fora supera a tendncia natural de agregao. O potencial zeta est
presente no sangue, mantendo o equilbrio do meio e controlando a
agregao e a coagulao sanguneas.
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33
Hematologia e imunologia
aplicadas em imuno-hematologia
Paulo Roberto Soares Stephens
Valmir Laurentino da Silva
Marcos Antonio Pereira Marques
Este captulo objetiva dar subsdios aos estudantes para o entendimento de algumas associaes da imuno-hematologia com outras
reas, como a imunologia e a hematologia. Para isso, necessrio descrever determinados mecanismos imunolgicos e, tambm, conceitos
hematolgicos, mostrando os aspectos mais importantes dessas reas.
Este captulo permite que o aluno compreenda os conceitos bsicos
da imuno-hematologia sem o auxlio de bibliografia suplementar.
A hematologia uma rea da cincia que estuda as clulas sanguneas (hemcias, leuccitos e plaquetas), assim como a hemostasia.
Essas clulas encontram-se imersas no plasma, lquido constitudo
basicamente de gua, sais minerais, lipdeos, glicdeos e protenas
que formam o sangue. Aps sofrer coagulao, o plasma passa a ser
representado pelo soro e pelo cogulo. O soro apresenta composio
menos rica que a do plasma, pois, ao ser formado, o cogulo incorpora e consome algumas substncias. O enfoque da hematologia neste
captulo ser o estudo dos eritrcitos, incluindo a eritropoese, a estrutura, a funo e as alteraes morfolgicas dessas clulas.
A imunologia a rea da cincia que estuda os mecanismos imunolgicos relacionados s clulas e s molculas do sistema imune. O
enfoque neste captulo ser o de introduzir as reaes imunolgicas
(hipersensibilidade, autoimunidade e ao do sistema complemento)
aos antgenos eritrocitrios.
35
Paulo Roberto S. Stephens Flvia C. Ribeiro Valmir L. da Silva Marcos Antonio P. Marques
1. Hematologia
1.1 A eritropoese
A eritropoese o processo pelo qual os eritrcitos se formam, amadurecem e passam a fazer parte do sangue circulante. Esse processo
ocorre, no indivduo adulto, na medula ssea vermelha dos ossos longos
e chatos por intermdio da linhagem eritroblstica. Nos fetos e em anemias graves, esse processo pode ocorrer no fgado e no bao. A formao
dessas clulas um processo contnuo, por causa da necessidade diria de reposio das hemcias que compensa a destruio fisiolgica e
no fisiolgica delas. A regulao da eritropoese se d pelo hormnio
eritropoetina, produzido principalmente pelas clulas renais peritubulares. A sntese desse hormnio determinada pela quantidade de
oxignio nos tecidos, e tambm pode ser estimulada por outros hormnios, como o hormnio estimulante da tireoide (TSH, do ingls thyroidstimulating hormone). Em regies onde existe baixa tenso de oxignio,
como em altitudes elevadas, ocorre um estmulo para que a produo
de hemcias seja aumentada que ocasiona um maior transporte de oxignio para os tecidos. Na figura 1, possvel observar a relao entre a
produo de hemcias, o transporte de O2 e a produo de eritropoetina.
Estmulo: hipxia devido diminuio da
contagem de glbulos vermelhos, diminuio
da disponibilidade de O2 para o sangue, ou
aumento das demandas de tecido para O2
Aumento da capacidade
de transporte
de O2 no sangue
Reduz os nveis
de oxignio no sangue
Eritropoetina estimula
a medula ssea
Rins (e em menor
quantidade o fgado)
liberam eritropoetina
Figura 1. Correlao entre a produo de hemcias, o transporte

de O2 e a produo de eritropoetina.
Fonte: Reproduzido de Teva, Fernandez e Silva, 2009.
36
Hematologia e imunologia aplicadas em imuno-hematologia
Os diferentes estgios de desenvolvimento da linhagem eritrocitria so caracterizados por alteraes nucleares e citoplasmticas.
A medula ssea vermelha est envolvida nas seguintes atividades:
produo, maturao, reserva, amadurecimento, estoque e liberao de clulas. Essas atividades nos permitem compreender melhor
o processo de formao celular para sua reposio no sangue perifrico, podendo tambm ser aplicada linhagem mieloide. Desse
modo, possvel observar na medula ssea nitidamente as trs etapas fundamentais no desenvolvimento da eritropoese: diminuio
do tamanho celular, perda da basofilia citoplasmtica e picnose
nuclear, e sua posterior expulso, ainda na fase de eritroblasto ortocromtico. medida que a clula se desenvolve, ela passa por todas
essas etapas at ser liberada na circulao.
O reticulcito, clula precursora dos eritrcitos, amadurece ainda
na medula ssea. Essas clulas so encontradas no sangue perifrico na proporo de at 1,5%, sendo de extrema importncia para a
avaliao teraputica da anemia, pois sinalizam o comportamento da
medula ssea do paciente ante a teraputica utilizada. Abaixo so descritas as principais clulas que representam as fases de diferenciao
do eritrcito, com as suas respectivas caractersticas bsicas.
a) Hemocitoblasto
Apresenta um dimetro superior a 140 , com citoplasma basoflico.
O ncleo celular, que tem cromatina fina e delicada, encontra-se bem
no centro da clula; o ncleo pode apresentar de dois a trs nuclolos
bem visveis. Os hemocitoblastos apresentam ribossomos em sua estrutura citoplasmtica; esto presentes na medula na porcentagem de 0,5 a 1%.
b) Pr-eritroblasto
Apresenta contorno irregular com proeminncias, citoplasma basoflico e ncleo com membrana fina e delicada, contendo geralmente
dois nuclolos, que podem estar muito ou pouco visveis.
c) Eritroblasto basfilo
Essas clulas tm citoplasma basfilo e com cromatina mais condensada, sem a presena de nuclolos visveis. Apresentam uma rea
esbranquiada, perinuclear, como resultado do incio da condensao
da cromatina nuclear.
37
d) Eritroblasto policromatfilo
Clula menor que a sua precursora, possui cromatina mais condensada. O citoplasma apresenta cor acinzentada caracterstica, em decorrncia do incio do processo de hemoglobinizao da clula.
e) Eritroblasto ortocromtico
Apresenta cromatina condensada, sendo que, nessa fase, o ncleo
se desloca em direo membrana citoplasmtica. As contraes e
ondulaes do citoplasma levam extruso do ncleo. O citoplasma
acidfilo, por causa da presena da hemoglobina.
f) Reticulcito
Nesse estgio, a clula ainda permanece de um a dois dias na medula ssea antes de migrar para o sangue. A identificao dessa clula
requer o emprego do corante azul de cresil brilhante, que a torna azulada, como resultado da presena dos fragmentos de RNA que se coram,
exibindo o aspecto de retculo filamentoso. Nessa fase, algumas clulas
j circulam no sangue perifrico, recebendo o nome de eritrcitos policromatfilos, que so maiores que os eritrcitos maduros.
g) Eritrcito ou hemcia
A perda dos resduos nucleares e a reduo do tamanho dos reticulcitos caracterizam os eritrcitos. Em mamferos, apresentam forma de
discos bicncavos anucleados. A colorao vermelha conferida pela hemoglobina, que ocupa um tero do volume da clula. A principal caracterstica fisiolgica dos eritrcitos a maleabilidade, ou deformabilidade,
que facilita a sua passagem pelos capilares. Na circulao, essas clulas
so viveis por um perodo mdio de 120 dias. Aps a perda da maleabilidade, os eritrcitos so retirados da circulao e levados para o bao,
onde ocorre a hemocaterese1.1
importante ressaltar que os eritrcitos podem sofrer alteraes
fisiolgicas e morfolgicas durante a sua produo. As alteraes
morfolgicas podem ser agrupadas em trs grandes grupos:
anisocitose: alterao no tamanho da hemcia, que pode ser microctica, normoctica ou macroctica;
1
Destruio das hemcias por clulas fagocticas.
38
anisocromasia: alterao na cor da hemcia, de acordo com a

carga de hemoglobina, podendo ser hipocrmica, normocrmica ou hipercrmica;
poiquilocitose: alterao na forma da hemcia, que pode apresentar forma de foice, na anemia falciforme, dacricitos, estomatcitos etc.
1.2 Estrutura do eritrcito
Os eritrcitos so clulas bicncavas, com dimetro mdio de 7,2

e com vida mdia de 120 dias. Essas clulas encontram-se no sangue de
um indivduo adulto normal na quantidade de 4,5 a 6,5 x 106/mm3; essa
quantidade varia segundo o gnero: a mulher apresenta quantidade menor de eritrcitos.
Os eritrcitos so responsveis pelo transporte de gases respiratrios, como o oxignio (O2) e o gs carbnico (CO2). Para o transporte
desses gases, o eritrcito carreia O2 dos alvolos pulmonares para os
tecidos. Nesse local, o CO2 captado e levado aos alvolos, a fim de
que ocorra a troca gasosa.
O principal componente do eritrcito a hemoglobina (Hb), que
responsvel pela cor vermelha do sangue por causa da presena
do ferro (Fe) e tem peso molecular aproximado de 64.500 Da. A
produo de hemoglobina iniciada na medula ssea, na fase de
eritroblasto policromtico. Nesse processo, utilizado o ferro captado da circulao, obtido por meio da alimentao. A molcula de
hemoglobina composta de globina uma protena com dois pares
de cadeia de aminocidos, chamadas e , e quatro grupos heme,
os quais apresentam um tomo de ferro cada um. O grupo heme, uma
porfirina,2 contm um tomo de ferro no estado ferroso (Fe 2+), localizado no centro da molcula, e sintetizado em todas as clulas do organismo. A maior porcentagem de Hb de um indivduo adulto normal
a Hb-A, que apresenta as caractersticas j mencionadas. Apenas
aproximadamente 2% das hemoglobinas so do tipo A 2. Essa hemo2
Classe de molculas orgnicas formadas por quatro anis pirrlicos, que geralmente
albergam no centro um on metlico, como o ferro.
39
globina tem quatro pares de cadeias polipeptdicas, sendo duas do

tipo alfa e duas do tipo delta. Outro tipo de hemoglobina a do tipo
F, presente durante a vida fetal at aproximadamente um ano de vida e
que tambm possui quatro pares de cadeias polipeptdicas, sendo duas
do tipo alfa e duas do tipo gama. Essa hemoglobina possui maior afinidade pelo O2 do que os outros tipos de hemoglobina, e permite mais
captao do O2 pelo feto.
Estudos cientficos acerca das hemoglobinas descreveram dezenas
de molculas com estrutura alterada, sendo que em aproximadamente
10% desses casos foram observadas, como resultado, alteraes funcionais e clnicas no indivduo. As alteraes genticas no cromossomo 11
ocorrem devido presena das Hb-SS ou Hb-AS, que acarretam, respectivamente, a anemia falciforme ou traos dessa doena, por causa
das alteraes dos eritrcitos.
As alteraes na molcula de globina tambm podem levar a anemias,
como o caso das talassemias (anemia de Cooley). A doena, que ocorre
predominantemente em populaes do Mediterrneo, frica e sia,
decorrente das modificaes nas cadeias alfa e beta que constituem a
globina. Como resultado, observa-se o surgimento de globina com pigmentao e funes alteradas.
A associao do CO2 com a hemoglobina forma um complexo chamado carboxi-hemoglobina, que impede a ligao do ferro com o oxignio. No entanto, desde que haja disponibilidade adequada de oxignio
para o indivduo respirar, essa reao reversvel. Nesse caso, cada molcula de O2 se liga a um tomo de ferro presente em cada grupo heme da
hemoglobina, formando o complexo chamado oxi-hemoglobina.
Para a liberao do oxignio, necessrio o cofator 2-3 difosfoglicerato (2,3-DPG), encontrado no interior dos eritrcitos, que altera a
hemoglobina geometricamente, tornando-a deoxi-hemoglobina. Esse
cofator tem potencial de reduzir a fora de ligao entre o oxignio e a
hemoglobina, permitindo a liberao desse gs para os tecidos.
Um importante fator que influencia a captao do oxignio a presso atmosfrica, pois, medida que ela diminui, ocorre menor liberao de oxignio para os tecidos. Dessa forma, o organismo produz mais
2,3-DPG a fim de compensar a baixa presso de O2 (hipxia).
40
1.3 Antgenos da membrana eritrocitria
Os aglutinognios eritrocitrios so estruturas macromoleculares

que podem ser de natureza proteica, glicdica ou glicoproteica. Localizados na superfcie da membrana, possuem funes fisiolgicas especficas, podendo atuar na estrutura celular e no transporte como
as molculas de adeso com ao enzimtica.
Na funo estrutural, podemos citar as glicoforinas, que so protenas altamente glicosiladas, importantes na manuteno da carga negativa do glicoclix. A interao da glicoforina com a fosfoprotena
da membrana eritrocitria, juntamente com o complexo espectrinaactina (protenas estruturais), desempenha papel importante na manuteno da forma celular e na estabilidade da membrana.
Uma alterao quantitativa dessas protenas resulta na caracterstica diminuio da estabilidade da membrana, o que leva alterao
na forma discoide das hemcias, formando-se eliptcitos (fig. 2) em
graus variados na poiquilocitose.
Outra protena de importncia a banda 3, que funciona como
ponto de ancoragem para o citoesqueleto da membrana, mediante a interao com a anquirina. Determinados resduos da banda
3 so cofacilitadores dos eritrcitos na retirada de gs carbnico
dos tecidos, subsequentemente liberando oxignio nos pulmes
por meio da anidrase carbnica. Apresenta tambm trs interaes com a glicoforina as quais sugerem que sua presena ou ausncia pode alterar a eficcia do transporte de nions. Uma das
funes mais importantes est associada atividade hemocatertica, quando a protena banda 3 liga-se a resduos desnaturados de
hemoglobina, formando agregados que geram eptopos na superfcie eritrocitria e podem ser reconhecidos por autoanticorpos da
classe IgG, que promovem a sua remoo da circulao sangunea.
Dentre as alteraes mais conhecidas da forma (poiquilocitose),
esto a esferocitose e a estomatocitose (fig. 3), que so alteraes causadas pela interao da anquirina e da banda 3 com o complexo proteico Rh; por causa dessa interao, indivduos com fentipo nulo
podem ter uma sndrome caracterizada por anemia hemoltica crnica, de intensidade varivel, cujo resultado o aumento da fragilidade
osmtica e anormalidades na morfologia dos eritrcitos.
41
Na acantocitose, a ausncia da protena Xk, chamada de fentipo McLeod, caracterizada pela associao de acantocitose, distrofia
muscular e cardiopatia. Nos eritrcitos, a protena Xk est ligada glicoprotena Kell por uma ponte de dissulfeto, formando um complexo
que afeta suas expresses reciprocamente.
2. Imunologia
2.1 Antgenos
Convencionou-se denominar antgeno a qualquer substncia solvel, celular ou particulada, que pode ser especificamente ligada aos
anticorpos ou receptores de clulas T (TCR, do ingls T cell receptor)
previamente sensibilizados. Existem dois tipos de antgenos: a) o antgeno completo, que rene propriedades imunognicas e antignicas, ou seja, a capacidade de induzir resposta imune especfica (fala-se
ento de imungeno e imunogenicidade), bem como a competncia
para interagir com anticorpos e receptores de linfcitos sensibilizados (antigenicidade); b) o antgeno incompleto, ou hapteno, dotado
apenas de antigenicidade, que a capacidade de interagir com os anticorpos e TCRs que lhe correspondem, mas no capaz de estimular
uma resposta imunolgica.
Os stios de ligao dos anticorpos e dos receptores de antgeno
de clulas T interagem com o determinante antignico ou eptopo,
a menor rea da molcula de antgeno, responsvel pela ligao ao
TCR ou ao anticorpo. A presena de vrios determinantes iguais
chamada de polivalncia ou multivalncia, e cada um pode interagir com a regio varivel das molculas de TCR. As superfcies
celulares, incluindo os eritrcitos, geralmente possuem grande
quantidade de antgenos que renem vrios determinantes antignicos. Os determinantes antignicos de protenas, glicoprotenas ou
lipoprotenas tanto podem ser formados pela sequncia de aminocidos (determinantes sequenciais) quanto por aminocidos adjacentes
(determinantes no sequenciais), no ligados por ligaes peptdicas,
que se encontram prximos por causa da preservao da estrutura
da molcula.
42
A estimulao de linfcitos de uma espcie animal com protena

de outro animal da mesma espcie resulta em uma resposta imune
muito baixa, frequentemente indetectvel. Por sua vez, se essas protenas forem inoculadas em animal de outra espcie, tendem a desencadear reaes imunitrias bastante elevadas. Isso acontece porque quanto mais prxima for a relao filogentica, menor ser o
estmulo e vice-versa. Embora esse atributo da relao filogentica
reflita boa parte das aplicaes imunolgicas, no pode ser tomado
como regra. A rejeio de transplantes e a reao por incompatibilidade em transfuses de sangue so causadas por uma resposta
imune potente aos antgenos que compem o complexo principal
de histocompatibilidade (MHC, do ingls major histocompatilibily complex) e s clulas do tecido transplantado, bem como pelas
diferenas nos antgenos do grupo sanguneo do doador. Essas diferenas so ditas alognicas, e a resposta imune que esses antgenos induzem chamada alorreao. Antgenos como as molculas
correspondentes ao MHC e ao grupo sanguneo, que variam entre
membros de uma mesma espcie, so denominados aloantgenos.
Para a maioria dos antgenos proteicos, quanto maior for a molcula, maior ser o nmero de eptopos e quanto maior a complexidade,
maior ser a imunogenicidade. Um antgeno complexo contm vrios
determinantes antignicos; os determinantes mais eficientes na induo da resposta imune so chamados imunodominantes.
A imunogenicidade e a antigenicidade de uma protena no dependem apenas de sua estrutura primria (isto , da sequncia
de aminocido), mas tambm das estruturas secundrias, tercirias e at quaternrias. A configurao espacial e a acessibilidade
de diversos eptopos em uma nica molcula de protena permitem a ligao do anticorpo de vrias formas, desde que esse stio de
ligao esteja acessvel na superfcie da molcula-alvo da resposta imunitria.
As reaes dos anticorpos so mais intensas ao interagirem com
antgenos homlogos (antgenos especficos que induziram a formao desses anticorpos), quando comparadas s reaes ante os antgenos heterlogos (reaes cruzadas), em virtude da similaridade entre
os determinantes antignicos de antgenos diferentes.
43
2.1.1 Antgenos eritrocitrios
Os antgenos presentes nos eritrcitos e nas plaquetas desempenham

papel preponderante na prtica transfusional, pela sua capacidade de induzir resposta imunitria. A utilizao de sangue seja com a inteno de
salvar vidas, seja com propsito vitalizante e rejuvenescedor, como praticado por antigas civilizaes egpcia, grega, romana , invariavelmente
era malsucedida, pois no se conhecia o sistema da circulao sangunea,
o sangue nem sempre era administrado por via endovenosa e frequentemente se utilizava sangue de outras espcies animais.
A demonstrao por William Harvey (1578-1657) da circulao contnua do sangue atravs do sistema vascular contribuiu para a administrao intravenosa de medicamentos e possibilitou a realizao das
primeiras transfuses sanguneas entre animais, de modo que j no
sculo XVII se injetavam substncias no interior da corrente sangunea com alguns xitos e muitos fracassos. Assim, era de uso corrente injetar vinho nos ces de caa para o tratamento de algumas enfermidades.
Johann Daniel Major (1634-1693) administrava medicao intravenosa mediante o uso de finos cilindros de prata. Sugeriu, como haviam
feito outros autores, que era possvel injetar sangue nas veias, mas no h
provas de que o tenha feito em homens. No sculo XVII, Richard Lower
(1631-1691) foi, talvez, o primeiro a realizar uma transfuso de um animal
para outro segundo Samuel Pepys (1633-1703), administrou sangue de
ovelha num jovem com a inteno de mudar seu carter. Desconhecemse os resultados de tal experimento.
Jean-Baptiste Denis (1643-1704) considerado o primeiro a realizar uma transfuso humana. Em 1667, administrou trs frascos
de sangue de carneiro a um rapaz de vida agitada, com a finalidade
de suavizar seu carter violento (torn-lo manso como um cordeirinho). Isso produziu no jovem grave reao que culminou na sua
morte. No julgamento que se seguiu, Denis foi exonerado de toda a
culpa, mas a Faculdade de Paris proibiu futuras transfuses. Dez anos
mais tarde, o Parlamento as declarou ilegais. O governo italiano tambm proibiu as transfuses de pessoa a pessoa, mas a Real Sociedade
de Londres no colocou objeo a elas.
Durante os sculos XVIII e XIX, ficou demonstrado, mediante transfuses experimentais em animais e tambm em homens, que o sangue
44
retirado de animais podia ser restitudo a eles; que o sangue transportava o oxignio; e que o sangue no coagulava se houvesse extrao de
seu contedo de fibrina, podendo ser administrado, assim, a animais.
Finalmente, ficou demonstrado que as transfuses de animais para o homem eram perigosas, mas durante muitos anos as transfuses de sangue
e as injees intravenosas de diversas solues eram s vezes acompanhadas de reaes febris, interpretadas como algo inerente natureza
do processo. Assim, pouco a pouco, foram iniciadas as transfuses de
homem a homem. Cientistas como Blundell, Ponfick, Landis, Arthur e
Pager demonstraram os efeitos fisiolgicos e qumicos das transfuses,
mas foram os trabalhos imunolgicos de Ehrlich, Bordet e Gengou, entre outros, que permitiram a Karl Landsteiner (1868-1943) descrever a
existncia dos grupos sanguneos, classificando-os, e isso possibilitou
a incorporao da transfuso sangunea na prtica mdica.
Em 1901, Landsteiner descreveu os tipos A, B e O das hemcias;
posteriormente, Decastello e Sturli descreveram o tipo AB. Assim,
uma pessoa com o antgeno A em suas clulas sanguneas tem anticorpos contra o antgeno B no soro ou plasma, e o indivduo com
antgeno B tem anticorpos contra o antgeno A. O doador universal, termo inventado por Ruben Ottenberg em 1911, no tem antgenos em suas clulas, mas tem anticorpos circulantes contra A e B no
plasma ou no soro. As transfuses de sangue incompatvel causam
reaes gravssimas, acarretando leses renais e, por vezes, levando
morte. Porm, isso no era conhecido at 1908, quando Ottenberg comeou a testar o sangue do doador e do receptor antes de cada transfuso. No entanto, ainda que no se proceda determinao prvia
de incompatibilidade como resultado da distribuio matemtica dos
grupos sanguneos, as reaes de incompatibilidade no ocorrem
com frequncia, e cerca de um tero das transfuses casuais no apresentava incompatibilidades ABO. Contudo, e apesar da preocupao
de estabelecer a tipagem dos grupos sanguneos e sua equiparao, at
que mtodos de comprovao dos diferentes tipos de hemcias fossem
descobertos, ocasionalmente havia graves reaes no explicveis.
Hoje em dia, mais de 600 antgenos eritrocitrios foram descritos,
antgenos esses que, em suas diferentes combinaes, obedecendo a
um padro de herana mendeliana, geram mais de 300 mil combinaes fenotpicas.
45
2.2 Anticorpos
Os anticorpos, sintetizados por linfcitos B e plasmcitos, so

glicoprotenas com funo imunitria. Ao interagirem com antgenos especficos, promovem a ativao de vrios mecanismos
efetores: ativao da via clssica do sistema complemento, opsonizao dos antgenos para fagocitose e citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC, do ingls antibody-dependent cell
mediated cytotoxicity). Essas aes que resultam em proteo so
as mesmas que resultam em reaes adversas na hemoterapia, em
doenas hemolticas autoimunes, na doena hemoltica do recmnascido (DHRN) e em reaes a tecidos transplantados.
As funes dos anticorpos so exercidas em stios estruturalmente separados na molcula. A regio que se liga ao antgeno varia
amplamente, sendo conhecida como regio varivel, ou regio V.
A regio que participa da funo efetora conhecida como regio
constante, ou regio C, e ela se mantm preservada, embora tenha
cinco formas principais especializadas na ativao de diferentes
mecanismos efetores.
As molculas de anticorpos apresentam notvel diversidade por
causa de um mecanismo que faz os genes expressos nas molculas
serem reunidos por rearranjos de DNA que juntam dois ou trs diferentes segmentos para formar um gene de regio varivel. Rearranjos nucleicos subsequentes podem reunir o gene da regio varivel a
qualquer gene da regio constante, formando os diferentes isotipos:
IgG, IgA, IgM, IgD e IgE (ver fig. 4).
A imunoglobulina formada estruturalmente por duas cadeias
leves (L, do ingls light) idnticas e por duas cadeias pesadas (H, do
ingls heavy) tambm idnticas (fig. 2). As cadeias leves esto ligadas s cadeias pesadas por pontes dissulfdicas. Cada uma das duas
cadeias, leve e pesada, possui uma regio varivel e outra constante.
Logo, uma imunoglobulina apresenta uma regio constante (CL) e
uma regio varivel (VL) na cadeia leve; as mesmas caractersticas esto presentes na cadeia pesada, que tem uma regio constante (CH) e
uma regio varivel (VH).
46
VL = varivel da cadeia leve

VH = varivel da cadeia pesada
CL = constante da cadeia leve
Cg1 = primeiro domnio constante
da cadeia pesada da IgG
Cg2 = segundo domnio constante
Cg3 = terceiro domnio constante
Figura 2. Estrutura bsica de uma molcula de IgG.

A molcula de imunoglobulina pode ser digerida por enzimas proteolticas (fig. 3), como a papana e a pepsina. A papana cliva a molcula em trs fragmentos: dois chamados Fab (do ingls fragment antingen
binding), que se ligam ao antgeno especfico, e um fragmento Fc (do
ingls fragment crystallizable), chamado fragmento cristalizvel por
formar cristais quando armazenado em locais frios. J a pepsina cliva
na mesma regio, mas na poro carboxiterminal das pontes dissulfdicas, produzindo o (Fab)2, no qual os dois braos do anticorpo se
encontram unidos.
Figura 3. Fragmentos enzimticos da molcula de

imunoglobulina, aps ativao enzimtica.
47
2.2.1 Gerao da diversidade na resposta imune humoral e maturao

da afinidade3
Para produzir uma molcula de Ig, ocorrem combinaes ao acaso dos diferentes componentes gnicos, levando enorme diversidade,
com muitas molculas de Igs, cada uma com afinidade nica e especificidade acurada em resposta a um antgeno.
A imunoglobulina IgM produzida como receptor de membrana durante as fases iniciais do linfcito B e h mudana de isotipo nessa clula
quando estimulada pelo antgeno. Isso permite a manuteno da regio varivel especfica para o antgeno correspondente, garantindo a
especificidade ao antgeno correspondente, nos diferentes isotipos, e
orientando as suas distintas funes efetoras.
A afinidade do anticorpo ao antgeno na resposta primria menor
do que na resposta secundria. Na resposta primria, o anticorpo da
classe IgM tende a ser de afinidade relativamente baixa e pode contar
com avidez adicional, decorrente da sua estrutura pentamrica. Na resposta secundria, IgG e outras classes de imunoglobulinas tendem a ter
afinidade maior.
2.2.2 Distribuio e propriedades dos isotipos
Os agentes infectoparasitrios se alojam em stios do organismo

que lhes proporcionem as melhores condies de sobrevivncia. Desse modo, os anticorpos tambm devem alcanar as vrias partes do
organismo a fim de controlar ou inativar tais agentes.
Os anticorpos apresentam variaes denominadas isotpicas que
lhes permitem, entre outras caractersticas, melhor adequao aos diferentes stios do organismo.
Os primeiros anticorpos a serem produzidos numa resposta imune humoral so sempre da classe IgM. Eles so produzidos antes que a
clula B tenha sofrido hipermutao somtica; portanto, tendem a ser
de baixa afinidade, como visto anteriormente. A IgM forma pentmeros nos quais os dez stios de ligao com o antgeno podem se unir
simultaneamente a antgenos multivalentes, como os polissacardeos
de parede celular bacteriana. Essa estrutura pentamrica tambm
3
Parte do texto deste item foi reproduzida de Teva, Fernandez e Silva, 2009.
48
torna a IgM capaz de ativar o complemento de maneira mais eficaz, e

isso contribui para o controle mais eficiente de uma infeco. Quanto
IgD, no se conhece muito bem a sua funo, mas ela parece exercer
um papel na diferenciao dos linfcitos B induzida pelo antgeno.
O principal isotipo de imunoglobulina no sangue e nos fluidos extracelulares a IgG, com todas as suas subclasses (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4).
A IgG tem propriedades diversas, dentre elas, confere proteo ao feto,
pois a nica classe de imunoglobulina humana que pode ser transportada atravs da placenta diretamente para a corrente circulatria do feto. A
IgG tambm atua na neutralizao de toxinas, na imobilizao de bactrias, na sensibilizao para clulas NK, na ativao do complemento e na
opsonizao. A IgA a principal imunoglobulina presente em secrees
externas, como saliva, muco, suor, suco gstrico e lgrimas. Alm disso,
a principal imunoglobulina contida no colostro e no leite, e constitui a
principal fonte de proteo contra patgenos no intestino do neonato.
A IgE est difundida de maneira moderada nos espaos extravasculares e sua principal propriedade a sensibilizao de mastcitos
e basfilos que promove a reao inflamatria mediante a liberao
de mediadores qumicos, como a histamina que provoca vasodilatao , e permite a passagem de anticorpos atravs dos vasos sanguneos em direo rea lesada e fatores quimioatraentes que recrutam fagcitos para o local de infeco. Alm disso, podem participar em processos alrgicos e na eliminao de helmintos.
Figura 4. Isotipos de imunoglobulinas humanas.

49
2.2.3 Anticorpos monoclonais
Em 1975, Georges Khler e Csar Milstein planejaram um mtodo para

a preparao do anticorpo monoclonal (Ac Mo), por meio da fuso da clula B ativada normal produtora de anticorpo com uma clula de mieloma
(uma clula plasmtica cancerosa). Nesse evento, produziram uma clula
hbrida (hibridoma) que possua as propriedades de crescimento imortal
da clula do mieloma de secreo de anticorpo produzido pela clula B.
Aps a obteno dos hibridomas, eles devem ser diludos e distribudos em placas de cultura apropriada, na concentrao de 0,5 clula
por poo. Tal procedimento nos dar a certeza de que o anticorpo produzido oriundo de um nico clone e, como no existe meia clula, teoricamente teremos um poo vazio e outro com apenas uma clula. Feito
isso, cada hibridoma, aps multiplicao e produo de anticorpo, ser
examinado por teste sorolgico tendo em vista a identificao dos hibridomas desejados, ou seja, aqueles que sintetizam o anticorpo monoclonal que reage com o antgeno correspondente. Uma vez identificados os
hibridomas, so induzidos proliferao, e se tornam, assim, uma fonte
inesgotvel de anticorpos altamente especficos.
Os Ac Mo so muito teis como reagentes para testes de diagnstico, exames de imagem e procedimentos teraputicos na prtica mdica.
No diagnstico, podem ser utilizados para deteco de gravidez, diagnstico de diversos microrganismos patognicos, medidas de nveis
sanguneos de vrias drogas, tipagem sangunea, tipagem de antgenos
de histocompatibilidade, caracterizao fenotpica de diversos tipos celulares e deteco de antgenos produzidos por determinados tumores.
Por exemplo, para esse ltimo propsito, Ac Mo radiomarcados podem
ser utilizados in vivo na deteco ou localizao de antgenos tumorais. Isso permite diagnstico precoce de alguns tumores primrios ou
metastticos em pacientes sob investigao. Na imunoterapia, o Ac Mo
especfico para determinado antgeno tumoral de superfcie acoplado a
um quimioterpico ou radioterpico pode ser potente agente teraputico.
2.2.4 Anticorpos antieritrocitrios
a) Aloanticorpos
A presena de anticorpos antieritrocitrios secundrios gravidez, transfuso sangunea ou transplante de rgos pode comprome50
ter transfuses subsequentes e, em algumas situaes, at uma futura

gravidez. Esses anticorpos so chamados de aloanticorpos.
Aloanticorpo o nome dado a qualquer anticorpo surgido em um
membro de uma espcie contra um antgeno alotpico de outro membro da mesma espcie. Os aloanticorpos correspondentes aos antgenos de grupo sanguneo podem ser divididos em duas categorias:
naturais e imunes. Os anticorpos chamados de naturais existem em
baixos ttulos no plasma de uma pessoa normal e so o resultado de
estimulao espontnea das bactrias que compem a microbiota intestinal e que expressam molculas com elevada homologia aos antgenos de grupo sanguneo. Quando a criana nasce, suas hemcias
contm as molculas grupo-especficas s quais seu sistema imune
tolerante por lhe serem prprias. No entanto, o soro do recmnascido no contm as aglutininas, de sntese prpria, para o sistema
ABO. A partir do 3 ao 6 ms de idade, geralmente, podem-se detectar os aloanticorpos anti-A (em crianas B), anti-B (em crianas A) ou
ambos os aloanticorpos (em crianas O), em decorrncia principalmente da crescente microbiota intestinal. Nos indivduos A e B, esses
anticorpos naturais so predominantemente IgM.
Os indivduos de grupo sanguneo O possuem ainda outro tipo de
anticorpo natural, designado anti-A,B. Anti-A,B geralmente IgG e possui atividade sorolgica no encontrada em misturas de anti-A e anti-B
(de pessoas B e A, respectivamente). Assim, fazendo-se reagir o soro de
indivduos O com hemcias A e, em seguida, eluindo-se esse anticorpo
das hemcias, verifica-se que o eluato reage no apenas com hemcias A,
mas tambm com hemcias B, embora mais fracamente.
Os anticorpos anti-Lewis podem ser encontrados em indivduos Le
(a-b-), so da classe IgM geralmente e fixam complemento. Indivduos
no secretores de Lewis podem apresentar anticorpos naturais antiLeb, enquanto os secretores podem apresentar anti-Lea.
Os anticorpos dirigidos contra as substncias de grupo que se desenvolvem por transfuso de sangue incompatvel ou por gravidez heteroespecfica (por exemplo, feto B em me A ou O, feto Rh+ em me Rh-) so
designados anticorpos imunes e so predominantemente da classe IgG.
Alm dos anticorpos naturais e imunes encontrados em indivduos A, B ou O, outros soros e reagentes podem ser utilizados nas
tipagens dos diferentes grupos sanguneos.
51
Assim, a especificidade H pode ser reconhecida por certas lectinas

(extradas de Ulex europeus e Lotus tetragonolobus) que aglutinam hemcias contendo H e no aglutinam clulas de indivduos com fentipo
de Bombaim. O soro de enguias e certos soros bovinos tambm podem
reagir com a substncia H. Lectina extrada de Bandeiraea simplicijolia
aglutina predominantemente hemcias B e, em menor escala, AB;
j a lectina de Dolichos biflorus aglutina hemcias A.
Os aloanticorpos do sistema Rh, ao contrrio do que ocorre com
os do sistema ABO, no existem de forma natural no soro. So predominantemente IgG e no fixam complemento. Esses anticorpos so
encontrados em casos de imunizao com antgenos do sistema Rh
(em casos de transfuses incompatveis e em multparas cujos fetos
apresentem especificidade Rh diferente da me).
Hemcias podem ser fenotipadas quanto ao sistema Rh utilizando-se
antissoros especficos. Assim, o soro anti-D reage somente com hemcias
Rh+. O soro anti-C reage com hemcias Rh+ e Rh-, desde que apresente
o antgeno C, e o soro anti-E tambm reage com hemcias Rh+ e Rh-.
Dois tipos de anticorpos anti-Rh podem ser obtidos por imunizao: a) anticorpos que em soluo salina aglutinam hemcias; e b) anticorpos designados incompletos e que somente aglutinam hemcias
caso elas estejam diludas em altas concentraes de albumina ou caso
as hemcias tenham recebido tratamento prvio com certas enzimas
proteolticas. Os anticorpos, equivocadamente designados incompletos, podem ainda ser usados nas tipagens do sistema Rh, utilizando-se
o teste de Coombs indireto.
Quanto aos anticorpos dirigidos para os antgenos do sistema
Duffy, anti-Fya e anti-Fyb, sabe-se que o primeiro relativamente raro
e a maioria imune ao isotipo IgG, podendo ser encontrado alguns naturais do isotipo IgM. Tanto anti-Fya quanto anti-Fyb so passveis de
causar reao transfusional e DHRN.
Os anticorpos dirigidos contra antgenos Kidd so clinicamente
significantes, resultando de transfuses ou gestaes; alm de serem
capazes de fixar complemento, constituem causa frequente de reao
transfusional hemoltica tardia com hemlise intravascular e insuficincia renal aguda. Alm disso, so capazes de provocar DHRN.
Os anticorpos que reagem aos antgenos do sistema MNSs (anti-M,
anti-N, anti-S, anti-s e anti U) podem ser naturais ou imunes. Os natu52
rais no so encontrados em todos os indivduos nos quais falta o antgeno correspondente, como ocorre com o sistema ABO. Os anticorpos
desse sistema so encontrados raramente. O anti-M o mais comum.
A transfuso incompatvel para esses anticorpos causa reaes transfusionais, algumas vezes graves. Os anti-S, anti-s e anti-U so os que
mais se relacionam DHRN quando comparados aos anti-M e anti-N.
b) Autoanticorpos
A doena hemoltica nos adultos e nos recm-nascidos pode ser causada pela presena de autoanticorpos antieritrocitrios. Tais anticorpos,
ligados membrana eritrocitria in vivo, podem ser detectados no teste direto de antiglobulina. Esses anticorpos podem ser IgM ou IgG. No
que se refere IgG, importante determinar a sua subclasse, porque a
sequestrao dos eritrcitos sensibilizados depende da subclasse do anticorpo. Isto decorre das diferenas existentes na capacidade de ativar o
complemento e de se ligar aos receptores Fc dos fagcitos. De modo geral, a ao hemoltica das subclasses da IgG abrange um espectro de elevado a reduzido, na seguinte ordem: IgG3>IgG1>IgG2>IgG4.
Uma das caractersticas dos autoanticorpos antieritrocitrios consiste na sua natureza fsico-qumica: em sua maioria (80 a 90%), eles
reagem mais favoravelmente com seus alvos em temperaturas que
giram em torno de 37C, sendo esses anticorpos denominados autoanticorpos quentes. Os demais, chamados de autoanticorpos frios,
so autoaglutininas frias, ou crioglobulinas, que reagem com seus
alvos em temperaturas abaixo de 37C, apresentando reatividade
tima entre 0C e 5C (quadro 1).
As anemias hemolticas mediadas por anticorpos quentes resultam da presena de IgG que revestem os eritrcitos circulantes, em
geral dirigidos contra os antgenos Rhesus. Esses eritrcitos opsonizados so sequestrados no bao e, em certos casos, no fgado por macrfagos residentes nesses rgos.
As autoaglutininas frias so anticorpos da classe IgM, dirigidos
contra a membrana das hemcias. Ocorrem na populao normal,
porm nunca em ttulos superiores a 1/32. Interferem na tipagem sangunea, na prova cruzada, em anlises hematolgicas e em reaes
imunolgicas. A anemia hemoltica por anticorpos frios pode ser crnica, caso em que ocorre com mais frequncia como doena prim53
ria. Pode manifestar-se tambm como uma complicao transitria

e autolimitada de infeco por determinados agentes. Altos ttulos
surgem em infeces pelo Mycoplasma pneumoniae, influenza, vrus
Epstein-Barr, bem como em doenas do colgeno, linfomas e, ocasionalmente, na cirrose.
Quadro 1. Principais causas das anemias hemolticas autoimunes.
Tipo quente
Tipo frio
Primria ou idioptica
Primria ou idioptica
Secundria:
Secundria:
. lpus eritematoso sistmico

e outros distrbios do tecido
conjuntivo
. pneumonia por Mycoplasma

pneumoniae
. outras doenas autoimunes, por

exemplo, hepatite autoimune
mononucleose infecciosa
. leucemia linfoctica crnica
. leucemia linfoctica crnica
. linfoma no Hodgkin
linfoma maligno
. teratoma de ovrio
. colite ulcerativa
. frmacos (metildopa, fludarabina)
. hemoglobinria paroxstica ao frio:

doena rara que pode ser primria
ou estar associada a infeces
2.3 Complexo principal de histocompatibilidade
Todo organismo multicelular possui algum sistema de defesa

que identifica os agentes infecciosos e parasitrios e elimina-os do
hospedeiro. Os grandes vertebrados tm um sistema imune mais
evoludo que lhes permite discriminar o que estranho do que no
estranho e ter uma resposta seletiva. A vantagem de tal imunidade especfica a rpida adaptao do sistema imune aos agentes
patognicos mais frequentemente encontrados no meio ambiente
local. Essa capacidade resulta do complexo principal de histocompatibilidade (MHC, do ingls major histocompatibility complex),
cujos produtos desempenham um papel no reconhecimento intercelular e na discriminao entre o prprio e o no prprio. A
54
identificao das molculas do MHC ocorreu aps investigao

da sua funo na resposta imunolgica aos tumores, na rejeio de
transplantes de pele e no controle da resposta imune.
2.3.1 Estrutura das molculas do MHC
Os genes que codificam as molculas do MHC esto localizados no

cromossomo 6 humano e no cromossoma 17 em camundongos, e so
denominados, respectivamente, antgenos leucocitrios humanos (HLA,
do ingls human leukocyte antigens) e de histocompatibilidade (H-2).
O MHC pode ser dividido em quatro subconjuntos de genes ou classes: classes I, II, III e IV, sendo que os de classe I e II esto ligados ao
processamento e apresentao de antgenos, enquanto os genes que
compem as classes III e IV codificam para outras protenas, algumas
delas relacionadas com a resposta imune, tais como componentes do
sistema complemento, algumas citocinas etc. Em humanos, existem
trs loci gnicos que codificam as molculas de classe I, denominados
HLA-A, HLA-B e HLA-C, e trs loci gnicos do MHC de classe II,
denominados HLA-DP, HLA-DQ e HLA-DR. Normalmente, um
indivduo herda duas cpias de cada locus gnico (uma de cada progenitor). Assim, em humanos, temos seis loci de classe I e seis loci de classe II. Todos esses loci apresentam alto grau de polimorfismo, ou seja,
tm mltiplos alelos na populao. As molculas do MHC de classe I,
que esto presentes na maioria das clulas nucleadas, so reconhecidas
principalmente pelo TCR de linfcitos T CD8, ao passo que as molculas de classe II, presentes principalmente na superfcie das clulas
apresentadoras de antgenos profissionais, so reconhecidas pelo TCR
dos linfcitos T CD4.
a) MHC de classe I
As molculas do MHC de classe I so expressas na membrana
celular da maioria das clulas nucleadas dos vertebrados. Sua estrutura constituda por uma cadeia de aproximadamente 45 kDa,
que atravessa a membrana plasmtica. A outra a 2-microglobulina
de 12 kDa, que se encontra fracamente ligada membrana. Os genes que codificam a cadeia (varivel) esto localizados dentro da
55
regio genmica do MHC, enquanto os genes que codificam a 2microglobulina (invarivel) esto localizados fora da regio do MHC
no cromossomo 15 humano. A cadeia formada por trs segmentos: 1, 2 e 3. A regio em que o peptdeo se liga corresponde
regio amino-terminal e composta pelos segmentos 1 e 2, que
formam uma fenda ou bolsa onde ele se encaixa. O tamanho dessa
fenda permite ligar peptdeos de 8 a 11 aminocidos e corresponde
regio do MHC de classe I que interage com o TCR do linfcito T.
Por essa razo, os antgenos proteicos precisam ser processados a fim de
gerar peptdeos suficientemente pequenos para se ligarem molcula
do MHC. A regio invarivel, que corresponde ao segmento 3, se liga ao
correceptor CD8 do linfcito T. Essa ligao confere a especificidade da
molcula de classe I com a clula T CD8. O domnio 3 tambm se liga
de forma no covalente molcula 2-microglobulina, sendo esse complexo estabilizado pelo peptdeo processado que se liga aos domnios 1
e 2. A molcula de MHC de classe I expressa na superfcie das clulas
somente nessa forma estvel.
b) MHC de classe II
As molculas do MHC de classe II tambm so expressas na membrana celular, mas na superfcie de clulas apresentadoras de antgenos
profissionais. Essas clulas incluem as clulas dendrticas, os macrfagos e os linfcitos B. A molcula de classe II formada por uma cadeia
e uma . A cadeia tem 32-34 kDa; a cadeia tem 29-32 kDa. As duas
cadeias do MHC de classe II so codificadas dentro da regio genmica
do MHC e ambas so polimrficas, ou seja, so variveis. As cadeias e
na poro extracelular possuem domnios 1 e 2 e 1 e 2; a poro
varivel das duas cadeias so os segmentos 1 e 1. Os domnios 1 e 1
interagem para formar a fenda de ligao ao peptdeo, que estruturalmente bastante similar molcula do MHC de classe I. Nessa fenda
ou bolsa, encaixa-se o peptdeo a ser apresentado clula T. Assim,
como seria de se esperar, essa tambm a regio da molcula do MHC
de classe II que apresenta maior variabilidade. Na molcula de classe II,
as extremidades da fenda de ligao do peptdeo so abertas; isso permite a ligao de peptdeos com 10 a 30 aminocidos, mas pode ocorrer
ligao de peptdeos maiores, o que no acontece com a molcula de
classe I, que tem as extremidades fechadas.
56
2.3.2 Complicaes hemotransfusionais relacionadas ao HLA
Vrias complicaes decorrentes das transfuses de produtos hemoterpicos esto associadas incompatibilidade entre o HLA do
doador e o do receptor. Mltiplas transfuses podem levar sensibilizao dos pacientes, que passam a desenvolver aloanticorpos contra
antgenos de superfcie das clulas alognicas, principalmente contra antgenos correspondentes ao HLA. Desse processo podem advir
graves complicaes com importante significado clnico, como refratariedade plaquetria em pacientes trombocitopnicos, reao febril
no hemoltica, insucincia pulmonar aguda relacionada transfuso
(TRALI, do ingls transfusion related acute lung injury) e o potencial
para desenvolvimento da doena do enxerto versus hospedeiro, associada transfuso (DEVH-AT), em pacientes imunodeprimidos.
A aloimunizaco pode ocorrer tanto pelos antgenos HLA classe
I, presentes na superfcie das plaquetas e leuccitos, quanto pelos antgenos HLA classe II, presentes na superfcie de alguns leuccitos.
Uma das grandes preocupaes da hemoterapia minimizar ou
evitar essa sensibilizao. Alguns dos procedimentos indicados pela
medicina transfusional foram apresentados com o propsito de diminuir a alossensibilizao e garantir maior segurana para os pacientes
politransfundidos. Dentre esses procedimentos, a afrese realizada
em grandes centros hemoterpicos , quando possvel, a mais indicada, porm os mtodos mais acessveis incluem a filtrao e a radiao.
2.4 Aspectos gerais do sistema complemento
O sistema complemento compreende um grupo de mais de quarenta protenas presentes no plasma e encontradas na forma de prenzimas (zimognios) as quais, ao reagirem sequencialmente, formam enzimas que, por sua vez, clivam outras pr-enzimas. Essas
outras pr-enzimas se combinam e formam novas enzimas, em uma
reao em cascata que culmina na lise celular.
Existem trs mecanismos de ativao do sistema complemento: pelas vias clssica, alternativa e das lectinas. Em cada uma dessas vias,
observamos uma sequncia peculiar de protenas, ou seja, apesar dos objetivos das trs vias serem os mesmos (os de promover a lise), o incio da
formao das cascatas constitudo por uma sequncia diferente de pro57
tenas. Alm disso, para a ativao do sistema complemento pela via clssica, necessria a presena do anticorpo ligado a um antgeno especfico. J nas outras duas vias, a ativao se d apenas com a presena
do antgeno. Por isso, as vias alternativa e das lectinas so mecanismos
imunolgicos mais simples e inerentes imunidade inata.
As protenas do sistema complemento so designadas pela letra C
seguida de nmeros por exemplo, C3 ou de letras e nmeros, no
caso de a protena ter sofrido clivagem, por exemplo, C3b. O C3, que
clivado em condies fisiolgicas gerando o subproduto C3b ou
uma molcula similar o C3i , o componente mais abundante do
sistema complemento. As reaes enzimticas que ocorrem durante
o processo de ativao desse sistema requerem a presena de alguns
ons, como os de magnsio. A interao desses ons com determinadas protenas do sistema propicia a formao de outras molculas
que apresentam atividade enzimtica sobre algum substrato. Como
exemplo dessa situao, temos a interao do componente C3 com
o fator B, uma protena presente no plasma. Essa interao mediada pelo magnsio, e a formao desse complexo favorece a exposio, na protena B, de um stio que reconhecido e clivado por
outra protena presente no sangue, o fator D. O produto final de toda
essa reao o complexo C3bBb, que a enzima C3 convertase. A
representao desse complexo com um trao em cima caracteriza
a sua atividade enzimtica especfica sobre o componente C3. J as
letras minsculas, como o b, representam o subproduto, resultado
da clivagem dos componentes C3 e B.
O excesso de enzimas C3 convertases aderidas aos carboidratos
presentes na superfcie dos microrganismos favorece a clivagem de
molculas C3, gerando os subprodutos C3b necessrios formao
da enzima C3 convertase. Alm disso, a deposio de C3b a C3 convertase gera outra enzima, chamada C5 convertase, cuja funo clivar o
componente C5, gerando dois fragmentos: C5a e C5b. Esse ltimo fragmento mantm-se ligado ao C3b de forma fraca. Subsequentemente,
ocorre a ligao de C6 e C7 ao C5b. Finalmente, a ligao do C8 membrana do microrganismo leva o C9 a sofrer alterao conformacional,
transformando-se em uma molcula anfiptica capaz de se inserir na
bicamada lipdica e promover a polimerizao em um complexo de
ataque membrana denominado MAC (do ingls membrane attack
58
complex). O canal transmembranar formado permevel gua e a

eletrlitos e, por causa da grande presso osmtica coloidal no interior
da clula, ocorre um influxo de Na+ e gua, acarretando a lise celular.
A via clssica do sistema complemento, como mencionado, requer a presena do anticorpo ligado ao antgeno a fim de que a formao da cascata ocorra. Nessa fase inicial, o primeiro componente,
chamado C1q, assemelha-se ao colgeno e consiste de seis cadeias
polipeptdicas cada uma das quais possui uma subunidade de ligao ao anticorpo. Essa ligao de C1q imunoglobulina ocorre
no domnio constante 2 da cadeia pesada (CH2), localizado na poro Fc da molcula. A regio CH2 da molcula rica em prolina, e
essa composio de aminocidos faz que a molcula tenha flexibilidade naquele local, permitindo a exposio do stio de ligao com
o componente C1q. Porm, a mudana conformacional da molcula
na regio CH2, que permite a ligao de C1q, s possvel pelo fato
de a imunoglobulina estar ligada ao antgeno por intermdio de sua
poro Fab.
Aps a ligao de C1q imunoglobulina, as outras duas subunidades do componente C1, C1r e C1s, assumem o stio enzimtico da
enzima formada, a qual age em dois substratos: C4 e C2. Ambos os
componentes so clivados em uma regio, originando dois fragmentos:
a e b. Aps C4b ligar-se de forma covalente s hidroxilas e aminas existentes nas membranas dos microrganismos, o C2b liga-se ao C4b, de
forma fraca, ligao essa dependente do clcio. O produto dessa reao
a molcula C4b2a, enzima responsvel por clivar o componente C3,
gerando C3a e C3b. Esse ltimo, por conter o radical tioster, liga-se aos
radicais amina e hidroxila da membrana. Diferentemente da via alternativa, nessa via a enzima C5 convertase formada pelo C4bC2bC3b.
A partir do MAC, ou seja C5bC6C7C8C9, a cascata apresenta a mesma
sequncia nas duas vias.
2.5 Aspectos gerais das reaes de hipersensibilidade
As reaes de hipersensibilidade foram descritas a partir da observao de que alguns indivduos, aps terem contato repetido com o
mesmo antgeno, desencadeavam respostas imunolgicas exacerbadas,
contrariamente ao que se sabia acerca da memria imunolgica, ou
59
seja, de que o indivduo, ao entrar em contato pela segunda vez com

o mesmo antgeno, em geral no apresenta nenhum sinal ou sintoma.
De acordo com Coombs e Gell (1968), foram definidos quatro tipos
de reao de hipersensibilidade: tipos I, II, III e IV. Exceto a reao de
tipo IV, que uma reao mediada por clulas e considerada tardia,
as outras trs reaes so mediadas por anticorpos. No caso do tipo I,
tambm conhecida como anafiltica ou imediata, os anticorpos so da
classe IgE; j as reaes dos tipos II e III so mediadas por IgG e IgM.
A ocorrncia da reao de hipersensibilidade tipo I est associada
participao de mastcitos e basfilos, assim como de seus mediadores
qumicos, entre eles a histamina.
A diferena bsica entre as reaes de hipersensibilidade tipos II e III
a localizao do antgeno. Na reao tipo II, o antgeno, que se localiza
na superfcie da clula, induz formao de anticorpos naquele local,
inclusive com a subsequente ativao do sistema complemento pela via
clssica, levando lise de toda a estrutura inserida naquele contexto. J
na reao tipo III, conhecida tambm como reao por imunocomplexo,
o antgeno se encontra ligado a um anticorpo, formando um imunocomplexo livre e circulante. A deposio desses imunocomplexos em superfcies celulares, como as regies das articulaes e vasculares, pode levar,
respectivamente, artrite e vasculite. Por causa da presena do imunocomplexo ligado aos tecidos, ocorre a ativao do sistema complemento
pela via clssica, com consequente lise de toda aquela estrutura.
2.5.1 Reaes transfusionais e hipersensibilidade tipo II
As hemcias dos seres humanos apresentam vrias molculas diferentes em sua superfcie, muitas das quais esto envolvidas na caracterizao dos grupos sanguneos, como o grupo ABO e o fator Rh,
dentre outros. A presena de um ou outro antgeno na superfcie das
hemcias por exemplo, do grupo A leva formao, no organismo, de anticorpos, principalmente da classe IgM. Esses anticorpos
so gerados como resultado de contatos prvios com antgenos de
microrganismos presentes na flora intestinal, que apresentam similaridade estrutural com os carboidratos dos grupos sanguneos e, portanto, ocasionam reatividade imunolgica cruzada, que so os graves
problemas decorrentes das transfuses sanguneas incompatveis.
60
2.5.2 Anemia hemoltica e hipersensibilidade tipo II
Nas reaes de hipersensibilidade tipo II, evidenciamos o direcionamento de anticorpos a antgenos ligados s clulas ou tecidos do
prprio indivduo. Tais antgenos tornaram-se molculas estranhas ao
sistema imune pelo fato de terem sido alteradas de alguma forma por
exemplo, pela ligao com alguma droga ou antgenos microbianos.
Caso a reao imunolgica mencionada ocorra na hemcia, chamamos
essa reao de anemia hemoltica. A agregao dos anticorpos aos antgenos eritrocitrios reduz muito a vida mdia da clula, pois facilita o
reconhecimento pelos fagcitos e, consequentemente, o seu transporte
para o bao. Alm da ao de clulas fagocticas, pode ocorrer a ao do
sistema complemento pela via clssica, levando lise celular e, portanto, anemia hemoltica, em se tratando de hemcias.
2.6 Aspectos gerais das reaes autoimunes
As reaes autoimunes so decorrentes da ao do sistema imunolgico sobre estruturas prprias, ou seja, antgenos autlogos, causando
danos teciduais. De modo geral, as reaes autoimunes ocorrem pela
participao de linfcitos autorreativos, clulas que escaparam da seleo negativa nos rgos linfoides primrios e secundrios e que so capazes de reconhecer os antgenos endgenos, tornando efetiva a resposta
imunolgica. A seleo negativa que ocorre nos rgos linfoides impede
a maturao de linfcitos especficos aos autoantgenos, mecanismo conhecido como autotolerncia imunolgica. Por meio de mecanismos de
anergia clonal, apoptose e supresso, possvel manter a autotolerncia
imunolgica e, portanto, evitar processos autoimunes mediados pelos
linfcitos autorreativos.
Os processos autoimunes so multifatoriais. Eles incluem aspectos
genticos hormnio sexual feminino, HLA, repertrio de linfcitos e
externos processos infecciosos e inflamatrios. No caso dos processos
infecciosos, pode-se observar o mimetismo molecular, que consiste na
reatividade cruzada da clula imunolgica com os eptopos dos antgenos, presente tanto no agente infeccioso (exgeno) quanto nos antgenos
prprios (endgenos). J nos processos inflamatrios decorrentes de alteraes anatmicas, ocorre a exposio de stios localizados em estruturas
prprias que no haviam sido expostas antes ao sistema imunolgico
61
sendo passveis, portanto, de resposta imune.

Os processos autoimunes podem ser classificados como fisiolgicos e patolgicos, e o potencial para a ocorrncia desses processos
onipresente, pois reflete a diversidade dos receptores das clulas T e B.
Em algumas situaes esses processos so fisiolgicos por exemplo,
a destruio de hemcias velhas (hemocaterese) que perderam a sua
maleabilidade e, consequentemente, a funo de transporte de gases
respiratrios. Nesse caso, a retirada dessas clulas da circulao um
processo benfico para o organismo, pois permite a renovao celular
na circulao sangunea.
A autoimunidade patolgica rara (em torno de 5%) e resultante de
complexas interaes genticas e de fatores do meio ambiente. O espectro das doenas autoimunes vai desde doenas rgo especficas caso
da anemia hemoltica autoimune , rgo inespecficas e as que incluem
esses dois grupos.
2.6.1 Aspectos imunolgicos da anemia autoimune
A anemia hemoltica autoimune (AHA) uma doena pouco frequente, que ocorre na sua forma mais branda como anemia normocrmica compensada, mas pode se apresentar como doena hemoltica de
grande gravidade, inclusive potencialmente fatal. Essa doena pode ser
uma condio primria ou mesmo secundria a vrias doenas inflamatrias, autoimunes ou infecciosas.
O processo de destruio dos eritrcitos, conhecido como hemlise, caracterizado por uma reao imunolgica direcionada a antgenos presentes na superfcie dessas clulas. Nessa reao, predominam
os autoanticorpos eritrocitrios quentes, os quais so eficazes em temperaturas em torno de 37C. Contudo, no se pode descartar a ocorrncia da reao mediada pelos anticorpos conhecidos como frios, por
agirem melhor em temperaturas abaixo de 37C.
Em geral, os autoanticorpos quentes, as IgG, so direcionados para
os antgenos do fator Rh presentes na superfcie dos eritrcitos. Em
decorrncia desse processo, a ativao da via clssica do sistema complemento deflagrada. Como resultado dessa reao, so evidenciados vrios achados clnicos e laboratoriais maior produo celular
e diminuio de sua vida mdia, dentre outros.
62
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formao de profissionais em laboratrios de sade: volume 4. Rio de Janeiro:
Escola Politcnica de Sade Joaquim VenncioInstituto Oswaldo Cruz,
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Zago, M. A.; Falco, R. P.; Pasquini, R. Hematologia: fundamentos e prtica. Rio de Janeiro: Atheneu, 2004.
63
Paulo Marcelo T. Cotias
Introduo
A imuno-hematologia eritrocitria uma cincia que estuda os grupos sanguneos mediante a anlise dos mais diversos antgenos eritrocitrios e de seus correspondentes anticorpos sricos, estando diretamente
relacionada a trs disciplinas:
Imunologia: que identifica os antgenos eritrocitrios e os distribui
em sistemas, e que estuda, tambm, as imunizaes provocadas por
esses antgenos e os problemas imunolgicos resultantes das reaes antgenoanticorpo;
Gentica: que estuda a transmisso hereditria dos grupos sanguneos de acordo com as leis de Mendel;
Bioqumica: que estuda os antgenos inseridos na membrana eritrocitria como estruturas reativas (lipdeos, protenas, glicdios).
As bases cientficas da transfuso de sangue foram adquiridas somente no incio do sculo XX. Os grupos sanguneos A, B e O foram
descritos, em 1901, por Landsteiner o grupo AB, por Decastello e Sturli
em 1902.
As tcnicas de hemaglutinao direta ou indireta permitiram o
conhecimento dos grupos sanguneos, sendo hoje relatados mais de
280 antgenos agrupados em 30 sistemas notadamente o ABO, o Rh
e o MNS, alm de outros mais complexos.
65
Alexandre Gomes Vizzoni Paulo Marcelo T. Cotias
1. Sistema ABO
o mais importante e mais conhecido sistema de grupos sanguneos. Em decorrncia da presena de antgenos ABO na maioria dos
tecidos do organismo, trata-se mais de um sistema de histocompatibilidade, do que simplesmente de um sistema de grupos sanguneos.
Os genes ABO esto localizados no brao longo do cromossoma
9 (posio 9q34.1-q34.2 ), contando com quatro genes: A1, A2, B e O.
Os genes responsveis pela sntese dos antgenos A e B das hemcias codificam a produo de enzimas denominadas glicosiltransferases, que so responsveis por catalisar as reaes entre o
substrato e o acar receptor (transglicolizao). A atividade das
glicosiltransferases dos antgenos A e B varia em diversos subgrupos do sistema ABO.
As glicosiltransferases adicionam carboidratos terminais substncia H, que serve como estrutura bsica para esses dois antgenos
(fig. 1). O gene A, por meio da enzima alfa(1,3)N-acetilgalactosaminiltransferase, responsvel pela adio de N-acetil-D-galactosamina, formando o antgeno A; o gene B, por intermdio da
enzima alfa 3-galactosiltransferase, adiciona D-galactose, formando o antgeno B. A substncia H formada pela ao da enzima
alfa-2-L-fucosiltransferase, que adiciona L-fucose galactose terminal. Essa enzima codificada no locus FUT1 do cromossomo
19, na posio q13.3, sendo, portanto, geneticamente independente
do locus ABO.
= N-acetilgalactosamina
= frutose
= N-acetilglicosamina
= galactose
= glicose
Figura 1. A) Antgeno H; B) antgeno A; C) antgeno B.

66
Quadro 1. Biossntese dos antgenos ABO.

Locus Transferase
ABO
Acar
Alelo
alfa-3-Nacetilgalactosaminiltransferase
N-acetil-Dgalactosamina
alfa-3-galactosiltransferase
D-galactose
nenhuma
nenhum
Os antgenos do sistema ABO no esto restritos membrana eritrocitria, sendo encontrados na saliva e nos lquidos biolgicos de
indivduos que apresentem o gene secretor. So encontrados tambm
na maioria das clulas epiteliais e endoteliais. Sua presena nos linfcitos e nas plaquetas parece estar relacionada absoro do plasma.
Os antgenos ABO esto expressos desde a 5-6 semanas de vida
intrauterina, porm somente ao redor dos 2 a 4 anos de vida que o
nmero de stios antignicos apresenta expresso plena.
Os anticorpos ABO so dirigidos contra os antgenos ausentes
nas hemcias do prprio indivduo. So de classe IgM e IgG, ativos a
37C e capazes de fixar e ativar o complemento, provocando hemlises intravasculares severas em casos de incompatibilidades transfusionais. Tambm esto relacionados com a doena hemoltica do
recm-nascido (DHRN), geralmente de intensidade leve.
Os anticorpos do sistema ABO aparecem espontaneamente
depois dos 3-6 meses de idade, com pico de produo dos 5 aos
10 anos de idade e com diminuio progressiva na velhice. Uma
das explicaes para o seu aparecimento a ampla distribuio
de estruturas semelhantes a esses antgenos na natureza, principalmente nas bactrias. Por isso, esses anticorpos so chamados
de ocorrncia natural. As bactrias presentes no trato intestinal,
na poeira e em alimentos promovem uma exposio constante de
todos os indivduos a essas estruturas, semelhantes aos acares A
e B presentes nas hemcias.
A identificao dos fentipos ABO (quadro 2) est relacionada
presena ou ausncia dos antgenos A e/ou B na membrana das hemcias (prova direta) e deteco ou ausncia de anticorpos contra
os antgenos eritrocitrios que no esto presentes na superfcie das
hemcias (prova reversa).
67
Quadro 2. Principais fentipos ABO.

Grupo ABO
Antgenos
Anticorpos
Gentipos possveis
A1
A1
Anti-B
A1A1; A1A2; A1O
Anti-A
BB; BO
AB
A1 e B
Nenhum
Anti-A, Anti-B e Anti-A,B
OO
A2
A2
Anti-B e eventual Anti-A1
A A 2 ; A 2O
A 2B
A2 e B
Nenhum
A1B
Nenhum e eventual
Anti-A1
A 2B
Diferentes expresses dos antgenos A ou B (variaes quantitativas) podem ser encontradas na fenotipagem direta ABO. Essas diferenas podem revelar discrepncias entre a prova direta e a prova reversa.
Por exemplo, a prova direta, indicando o grupo sanguneo A, alm da
presena de anticorpos no soro e/ou plasma do indivduo a ser testado que
aglutinam as hemcias fenotipadas da tipagem reversa do grupo A e B.
Embora sejam formados pelo mesmo acar, os subgrupos do grupo A apresentam diferenas quantitativas e qualitativas. Sabe-se que o
gene A1 difere do gene A2 por uma deleo de base na regio C-terminal,
alm de apresentar uma mutao que determina uma substituio de
aminocidos (prolina para leucina) na glicosiltransferase resultante.
O fentipo A 2 , comum em caucasianos, detectado, sorologicamente, por meio da capacidade desses eritrcitos aglutinarem
com o soro anti-A e de no aglutinarem com o soro lectina anti-A1
(Dolichos biflorus), ao contrrio do fentipo A1, cujas hemcias so
aglutinadas na presena desse reagente. A elucidao de subgrupos
sanguneos pode ser realizada mediante fenotipagem das amostras com
lectinas anti-A1 e anti-H (Ulex europaeus), alm de tcnicas de fixao e
eluio e pesquisa de antgenos na saliva de indivduos secretores.
A ausncia do gene H e, consequentemente, do antgeno H , denominada fentipo Bombaim ou Oh, foi descrita em 1952. Esse fentipo
distingue-se pela perda total da atividade das transferases ABH nos
eritrcitos e nas secrees corpreas e pelas grandes quantidades de
anticorpos anti-H. Por causa da presena do antgeno H na superfcie
dos seus eritrcitos, indivduos com fentipos Bombaim so incompatveis com os eritrcitos de doadores do tipo O.
68
Quadro 3. Identificao dos principais subgrupos ABO.

Reaes das hemcias
com antissoros
Reaes com hemcias-teste
Fentipos
Soro
Anti-A
Soro
Anti-B
Soro
Lectina Lectina
Anti-AB Anti-A1 Anti-H
A1
4+
4+
4+
Aint
4+
4+
A2
4+
A3
2+CM
Am
Hem
A1
Hem
A2
Hem Hem
B
O
Saliva do
secretor
4+
AeH
2+
3+
AeH
4+
2+
4+
AeH
2+CM
3+
4+
AeH
0/W
0/W
4+
AeH
Ax
0/W
1+/2+
4+
2+/0
0/1+
4+
Ael
4+
2+/0
4+
4+
4+
4+
4+
BeH
B3
+/CM
2+/
CM
4+
4+
4+
BeH
Bm
0/W
4+
4+
4+
BeH
Bx
0/W
0/2+
4+
4+
4+
* a ocorrncia de anticorpos anti-A1 nesses fentipos varivel.

W = intensidade fraca (do ingls weak) de aglutinao.
CM = campo misto (presena de hemcias aglutinadas e hemcias livres).
Fonte: Adaptado de American Association of Blood Banks, 1996.
Outro variante deficiente do gene H caracterizado como fentipo

para-Bombaim (Ah, Bh e ABh). Os eritrcitos de indivduos portadores desse fentipo apresentam quantidades mnimas dos antgenos A
e B e pouco ou nenhum antgeno H. Esse fentipo difere do fentipo
Bombaim clssico por apresentar uma transferase H com atividade
muito fraca, o que leva as poucas quantidades de substncia H produzidas a serem convertidas aos antgenos A e B pelas suas respectivas transferases.
Por causa da presena regular de anticorpos naturais hemolticos
no sistema ABO, uma regra bsica no transfundir hemcias portadoras de antgenos que possam ser reconhecidos pelos anticorpos do
receptor. Assim, de acordo com essa norma, podemos estabelecer as
seguintes regras de compatibilizao no sistema ABO:
69
1) transfuses de isogrupos sempre que possvel;

2) transfuses de heterogrupos apenas excepcionalmente, respeitando-se o seguinte esquema:
Grupo A
Grupo O
Grupo AB
Grupo B
2. Sistema Rh
O sistema Rh o mais complexo sistema de grupos sanguneos,
e, depois do sistema ABO, o de maior importncia clnica. Descoberto em 1939, tornou-se o sistema de grupo sanguneo com mais alto
polimorfismo entre os marcadores conhecidos da membrana eritrocitria. At o presente momento, 49 antgenos foram identificados no
sistema Rh, e os estudos genticos e bioqumicos tm sido caracterizados pelas controvrsias.
O perodo de descoberta dos primeiros antgenos do sistema Rh
(D, C, E, c, e) pode ser descrito pelo breve histrico a seguir:
1939: Levine e Stetson atribuem a causa da eritroblastose fetal
de um recm-nascido atividade de anticorpos maternos contra
suas hemcias;
1940: Landsteiner e Wiener produzem, por imunizao de coelhos com hemcias de macaco rhesus, soros anticorpos capazes
de aglutinar 85% das hemcias humanas;
1941: Wiener e Levine publicam um trabalho preciso sobre doena hemoltica do recm-nascido provocada pelo anti-Rh, demonstrando como os indivduos no portadores do antgeno Rh podem
se imunizar e as consequncias dessa imunizao;
70
1941-1943: foram observados em indivduos politransfundidos e

em multparas outros anticorpos capazes de aglutinar hemcias
humanas cuja frequncia variava em indivduos Rh positivos e
Rh negativos.
As complexidades sorolgica e fenotpica associadas a esse sistema levaram elaborao de nomenclaturas diferentes: o sistema
Rh-Hr (Wiener), a terminologia CDE (Fischer e Race) e o sistema numrico (Rosenfield), que se basearam em diferentes teorias
quanto gentica desse sistema de grupo sanguneo (quadro 4).
Quadro 4. Nomenclaturas propostas para antgenos do sistema Rh.
Gentipos
Ocorrncia
comum
Ocorrncia rara
Wiener
Fisher-Race
Rosenfield
R1r
DCe/dce
Rh:1,2,-3,4,5
R1R1
DCe/DCe
Rh:1,2,-3,-4,5
rr
dce/dce
Rh:-1,-2,-3,4,5
R1R2
DCe/DcE
Rh:1,2,3,4,5
Rr
DcE/dce
Rh:1,-2,3,4,5
R 2R 2
DcE/DcE
Rh:1,-2,3,4,-5
rr
dCe/dce
Rh:-1,2,-3,4,5
rr
dCe/dCe
Rh:-1,2,-3,-4,5
rr
dcE/dce
Rh:-1,-2,3,4,5
rr
dcE/dcE
Rh:-1,-2,3,4,-5
R0 r
Dce/dce
Rh:1,-2,-3,4,5
R0 R0
Dce/Dce
Rh:1,-2,-3,4,5
r yr
dCE/dce
Rh:-1,2,3,4,5
Fonte: Adaptado de Harmening, 2006.
A localizao cromossmica dos genes pode ser definida por

1p36-34. Mediante a anlise do DNA genmico de diferentes fentipos Rh, indivduos RhD positivos possuem os genes RHD e RHCE,
enquanto indivduos RhD negativos apresentam somente o gene
RHCE. Na maioria dos indivduos RhD negativo o gene RHD est
71
deletado, portanto no existe o alelo d. O gene RHD codifica o polipeptdeo D, e o gene RHCE (alelos RHCe, RHcE, RHce e RHCE)
codifica os polipeptdeos C/c e E/e.
Os genes RHD e RHCE apresentam um elevado grau de homologia, com uma variao de 36 aminocidos em 416 posies. O polimorfismo E/e resulta da substituio de um nico aminocido no
xon 5, na quarta ala extracelular, quando da substituio de uma
prolina (E) na posio 226 para uma alanina (e). No polipeptdeo Rh,
que carreia os antgenos C e c, ocorre uma substituio de quatro
aminocidos em uma cadeia de 416 aminocidos, embora apenas
uma substituio parea ser crtica para o polimorfismo C/c: a substituio de uma serina (C) na posio 103 por uma prolina (c). Por
outra parte, o polipeptdeo codificado pelo gene RHD difere daquele
codificado pelo RHCE em 36 aminocidos.
Essas diferenas talvez possam explicar em parte a imunogenicidade
do antgeno RhD, pois quando um indivduo RhD negativo exposto a
hemcias RhD positivo, o seu sistema imune estimulado por uma protena que difere em 36 aminocidos daquela que ele possui.
Na prtica transfusional, o sistema Rh o sistema mais importante
depois do sistema ABO, tendo sido responsvel por casos de doena
hemoltica do recm-nascido de intensidade varivel, chegando mesmo a ser grave e levar at a bito fetal, alm de ter sido responsabilizado por reaes transfusionais hemolticas que podem ser graves.
Ainda que 49 antgenos estejam relacionados ao sistema Rh, apenas
5 (D, C, c, E, e) so responsveis pela grande maioria dos problemas
clnicos associados a esse sistema.
2.1 D fraco e D parcial
Os antgenos D fraco apresentam-se como uma expresso enfraquecida do antgeno D, reagindo de maneira varivel com os
antissoros anti-D comerciais. Normalmente esse antgeno no
detectado por tcnicas de aglutinao direta, e sim por tcnicas complementares, como tratamento enzimtico das hemcias e tcnica de
Coombs indireto.
Esse fentipo ocorre por uma variao qualitativa do antgeno
RhD que produz uma alterao quantitativa de stios antignicos ex72
pressos na membrana eritrocitria. As hemcias contendo D fraco

devem ser consideradas Rh positivas, podendo provocar, dessa forma,
aloimunizao transfusional ou feto-materna.
A incidncia de D fraco tem sido descrita como presente em
0,2 a 0,5% da populao da Europa e em 3% da populao dos
Estados Unidos. Aloanticorpos anti-D no ocorrem na maioria
dos pacientes portadores de D fraco, mas alguns pacientes com
fentipo D fraco, incluindo aqueles com tipo 21, podem produzir
anticorpos contra eptopos no prprios do antgeno D (McGann
e Wenk, 2010).
Figura 2. Pontos de substituio de aminocidos na poro intracelular

da membrana eritrocitria nos fentipos D fraco.
Fonte: Adaptado de Flegel, 2007.
Antgenos D parciais apresentam alteraes qualitativas e quantitativas quando comparados com o antgeno D normal. Essas alteraes podem ser caracterizadas pela ausncia de um ou mais eptopos
do antgeno D que foram substitudos por eptopos da protena
CcEe e podem ocorrer por mutaes de ponto missenses no gene
RHD que levam a substituies de aminocidos predominantemente nas alas extracelulares, mas tambm dispersas na protena, por
isso possuem eptopos alterados, com aminocidos diferentes, que
os reagentes monoclonais no reconhecem.
As mutaes de ponto missenses podem ser nicas (uma nica
mutao num determinado xon do gene RHD) ou dispersas (mais de
uma mutao de ponto em mais de um xon do gene RHD). As mutaes podem ocorrer tambm por rearranjos gnicos entre os genes
RHD e RHCE (alelos hbridos).
A diferenciao entre D fraco e D parcial por mtodos sorolgicos
em nossa populao de difcil resoluo, pois possvel encontrar
mais de um tipo de D fraco numa mesma amostra, resultado de uma
73
grande miscigenao. Portadores do antgeno D parcial e alguns D

fracos esto propensos a imunizaes de anti-D. Consequentemente,
uma correta classificao do antgeno pode evitar desperdcio de unidades RhD negativas e/ou imunizao decorrente de transfuso de
hemcias RhD positivas. Os mtodos moleculares podem confirmar ou
excluir a presena desses antgenos; entretanto, no devem ser analisados
de forma isolada, ou seja, sem a realizao de testes sorolgicos, pois nem
sempre a presena do gene resulta na expresso da protena. No sistema Rh ocorre essa exceo e h pessoas que possuem o gene RhD mas
no expressam a protena: so os famosos pseudogenes. Dessa forma, ao
utilizarmos os mtodos moleculares em imuno-hematologia, devemos
confrontar os resultados dos testes (gentipos) com os fentipos, que so
evidenciados por testes de sorologia de grupos sanguneos.
2.2 Anticorpos Rh
Os anticorpos anti-Rh resultam, praticamente, de uma aloimunizao por transfuso sangunea ou por gravidez, pertencendo quase
sempre classe IgG (IgG 1 ou IgG 3). Alguns anticorpos da classe IgM
podem ocorrer transitoriamente no incio da aloimunizao. Raros
anti-E e anti-Cw podem ser observados sem um estmulo antignico
conhecido, sendo considerados naturais.
A transfuso a via mais frequente de imunizao contra antgenos
Rh. No caso especfico do antgeno D, estima-se em 80% a probabilidade de imunizao aps uma transfuso incompatvel. J a imunizao
por gravidez representa a maioria dos casos de doena hemoltica do
recm-nascido, sendo devida ao anti-D. Entretanto, com a profilaxia
por imunoglobulinas anti-RhD, o nmero de aloimunizaes maternas contra o antgeno D diminuiu, mas o mesmo no ocorreu com os
antgenos E, c, e C.
Os anticorpos Rh so clinicamente significativos, reativos a 37C
e na fase de antiglobulina humana (AGH). Em geral, esses anticorpos
no fixam complemento, e a hemlise resultante de uma transfuso
incompatvel ser extravascular, caracterizando uma reao transfusional hemoltica retardada.
O receptor da transfuso contendo antgeno Rh correspondente ao
anticorpo previamente formado pode apresentar febre inexplicvel, com
74
elevao da bilirrubina e reduo da hemoglobina e haptoglobina. De

modo usual, a tcnica da antiglobulina direta (Coombs direto) apresenta
resultado positivo principalmente por IgG, tendo os estudos de eluio
importante papel na elucidao da especificidade do anticorpo.
3. Outros sistemas de grupos sanguneos

3.1 Sistema P
O grupo sanguneo P foi descrito em 1927 por Landsteiner e

Levine. Em sua busca por novos antgenos, injetaram eritrcitos humanos em coelhos e produziram um anticorpo inicialmente chamado anti-P, que dividia os eritrcitos humanos em dois grupos: P+ e P-.
Em 1959, Levine et al. (1951) descreveram o anticorpo anti-Tja (atualmente conhecido como anti-PP1Pk).
A expresso de P1 no desenvolvimento fetal varivel. O antgeno encontrado em eritrcitos fetais desde a 12 semana, mas sua
expresso diminui com a idade gestacional (Ikin et al., 1961). O antgeno fracamente expresso ao nascimento, e sua expresso completa
acontece perto dos 7 anos.
O antgeno P1 deteriora rapidamente quando estocado. Se clulas
antigas so tipadas, ou utilizadas como controles para reagentes de
tipagem ou na deteco de anti-P1 no soro, podem ocorrer reaes
falso-negativas.
Anti-P1 um anticorpo da classe IgM comum, de ocorrncia natural no soro dos indivduos P2 e no determina reao transfusional ou doena hemoltica perinatal. Apenas em raros casos trata-se
de uma potente IgG ativa a 37C com importncia transfusional.
Esse anticorpo reage mediante a aglutinao direta em baixas temperaturas com hemcias P1 positivas. Cerca de 20% dos doadores de
sangue so P1 negativos.
Habitualmente uma aglutinina com fraca reao a frio em salina,
no observada nos testes de rotina. A atividade do anticorpo pode ser
contornada pelo uso de mtodos de teste de pr-aquecimento.
Como a expresso do antgeno P1 nos eritrcitos varia e se deteriora durante o armazenamento, anticorpos podem reagir apenas com as
75
clulas com expresso mais intensa ou com a adio de enzimas para

intensificar as reaes. O fornecimento de bolsas compatveis a 37C e
na fase de AGH uma abordagem aceitvel para a transfuso.
Raros exemplares de anticorpos P1 que reagem a 37C podem causar destruio de eritrcitos in vivo; entretanto, h relatos de reao
hemoltica transfusional imediata e tardia. A DHRN no est associada anti-P1, presumivelmente porque o anticorpo habitualmente de
natureza IgM.
3.2 Sistema MNSs
Aps a descoberta do sistema ABO, a busca por novas especificidades de anticorpos por meio da imunizao de coelhos com
eritrcitos humanos foi iniciada por Landsteiner e Levine. Dentre os anticorpos recuperados dos soros desses coelhos, foram detectados anti-M e anti-N, ambos divulgados num artigo em 1927
(Landsteiner e Levine, 1927).
Com a implantao da tcnica da antiglobulina em 1947, Walsh
e Montgomery descobriram o antgeno S, que, embora distinto, era
geneticamente ligado ao MN. Seu alelo s foi descoberto em 1951, e o
sistema MN passou a ser conhecido como MNSs, um sistema de dois
loci. Em 1953, Wiener comunicou a descoberta de um anticorpo para
um antgeno de alta frequncia, que foi denominado U. Esse antgeno encontra-se em uma glicoprotena bem caracterizada chamada
MN-sialogligoprotenas (MN-SGP) ou glicoforina A (GPA).
3.2.1 Antgenos MNSs
Os antgenos MN podem ser detectados na 9 semana de gestao

e esto bem desenvolvidos ao nascimento. Uma vez que os antgenos MN esto na extremidade externa da GPA, podem ser facilmente
destrudos ou removidos por enzimas proteolticas. M e N so basicamente eritrocitrios e esto localizados no cromossomo 4.
Embora dados mais antigos tenham sugerido a presena do antgeno M em linfcitos, M e N no foram detectados em linfcitos, moncitos ou granulcitos por citometria de fluxo e imunofluorescncia.
Antgenos MN foram detectados no epitlio e endotlio de capilares
renais (Hawkins, 1985).
76
Os antgenos Ss, muito parecidos com os antgenos MN, esto localizados em uma glicoprotena menor chamada Ss-sialoglicoprotena
(Ss-SGP) ou glicoforina B (GPB). Existem cerca de 2x105 cpias de
GPB por eritrcito, entretanto nem todas esto disponveis para a ligao do anticorpo.
Os antgenos Ss encontram-se bem desenvolvidos ao nascimento e
esto presentes nos eritrcitos a partir da 12 semana de idade gestacional. So menos degradados por enzimas porque os antgenos esto
localizados em um local mais remoto da glicoprotena e os locais sensveis enzima so menos acessveis. A atividade de Ss pode ser destruda por papana, ficina e bromelina, embora o grau de degradao
dependa da concentrao da soluo enzimtica, da sua durao e da
proporo utilizada.
Ss so considerados antgenos eritrocitrios, no sendo encontrados em plaquetas, linfcitos, moncitos ou granulcitos. Assim como
MN, esto localizados no cromossomo 4.
3.2.2 Anticorpos anti-M
Os anticorpos anti-M so, em sua maioria, crioaglutininas reativas

em salina, de ocorrncia natural e sem importncia transfusional.
A maioria dos exemplos de anti-M so IgG reativos a baixa temperatura (TA/4C), entretanto foram descritos casos raros reativos a
37C capazes de promover reao transfusional importante. Devido
ao efeito de dose, anticorpos anti-M podem reagir melhor com hemcias M+N- (gentipo MM).
Anti-M muito fraco pode no reagir com hemcias M+N+, tornando difcil sua deteco no painel de identificao. A reatividade
do anticorpo pode ser acentuada ao se aumentar a relao entre as
clulas do painel e o volume de soro e/ou o tempo de incubao. Podese adicionar um meio potencializador como a albumina ou um meio de
baixa fora inica (LISS, do ingls low ionic strenght solution).
Esse anticorpo pode ser detectado no plasma, que ligeiramente
mais cido em decorrncia do anticoagulante. Anti-M raramente responsvel por reaes hemolticas transfusionais, diminuio
da sobrevida das clulas ou doena hemoltica do recm-nascido.
suficiente fornecer unidades compatveis na prova cruzada a 37C
77
e na fase de antiglobulina sem ser necessria a fenotipagem para o

antgeno M.
3.2.3 Anticorpos anti-N
Esse anticorpo uma aglutinina fria reativa em salina, de classe

IgG ou IgM, que no liga complemento e nem reage com hemcias
tratadas previamente com enzimas. Anti-N demonstra efeito de dose,
reagindo melhor com hemcias com fentipo M-N+. No clinicamente significativo, a menos que reaja a 37C.
Anti-N mais raro que anti-M. Numa srie de 86 mil pacientes, foram detectados apenas dois exemplares de anti-N (Mollison, Engelfriet e
Contreras, 1997). Tambm foi observado em pacientes renais, dialisados
em equipamento esterilizado com formaldedo, independentemente do
tipo MN.
3.2.4 Anticorpos anti-S e anti-s
Quase todos os exemplares de anti-S e anti-s so IgG; eles so reativos a 37C e na fase de antiglobulina. Alguns exemplares expressam
reatividade tima em temperaturas mais baixas (4C). Os anticorpos
podem ou no reagir com hemcias previamente tratadas.
Embora detectados menos frequentemente que anti-M, anticorpos
anti-S ou anti-s tm maior probabilidade de ser clinicamente significativos. Podem ativar o sistema complemento, tendo sido implicados em reao hemoltica grave causada por transfuso. Tambm causam DHRN.
Unidades de sangue selecionadas para transfuso devem ser negativas para o antgeno correspondente a esses anticorpos e compatveis nas provas cruzadas. Tendo em vista que apenas 11% dos
brancos e 3% dos negros so s-, pode ser difcil obter sangue para
um paciente com anti-s.
3.2.5 Anti-U
Anti-U um anticorpo raro, encontrado na raa negra. Cerca de

1% dos negros americanos (e de 1 a 35% dos negros africanos) no
apresenta o antgeno U, o que torna muito difcil encontrar sangue
compatvel. Pode determinar reao transfusional e DHRN. Habitualmente, os pacientes apresentam fentipo S-s-U-.
78
3.3 Sistema Lutheran
Esse sistema foi descoberto em 1945, por causa da presena de antiLua, um antgeno de baixa frequncia, no soro de um paciente aps
transfuso. Seu par antittico, um antgeno de alta frequncia, tambm
foi descoberto no mesmo ano, tendo recebido a denominao de antiLub. O sistema de grupo sanguneo parecia completo at o incio da
dcada de 1960, quando Crawford et al. (1961) descreveram o primeiro
fentipo Lu(a-b-).
3.3.1 Antgenos Lua e Lub
Antgenos Lua e Lub so antgenos produzidos por genes codominantes allicos. No foi detectada a presena de antgenos Lutheran
em plaquetas, linfcitos e moncitos, mas h presena no crebro,
pulmo, pncreas, placenta (Reid e Lomas-Francis, 1997). Embora
tenham sido detectados em eritrcitos fetais com apenas 10-12 semanas de gestao, esto fracamente desenvolvidos ao nascimento e no
atingem nveis adultos at os 15 anos de idade.
Os antgenos demonstram efeito de dose, sendo notadas diferenas ntidas entre membros homozigotos e heterozigotos em uma mesma famlia.
3.3.2 Anticorpos anti-Lua
A maioria dos exemplares de aglutininas de ocorrncia natural,

com reao em salina e que reagem melhor em temperatura ambiente
que a 37C. Alguns exemplares reagem a 37C e no teste de antiglobulina humana (AGH).
Frequentemente, o anti-Lua passa despercebido nos testes de rotina
porque a maioria das clulas de triagem para anticorpos irregulares
so Lua negativo.
A reatividade do anticorpo no profundamente alterada pelas enzimas de rotina do banco de sangue. Em sua maioria, os
anticorpos Lua no so clinicamente significativos em transfuso,
e tendem a desaparecer alguns meses depois de terem sido detectados. Podem ocasionar DHRN, embora, na maioria dos casos, de
forma branda.
79
3.3.3 Anticorpos anti-Lub
A maioria pertence classe IgG, sendo reativos a 37C e na fase de

AGH. So produzidos em resposta gravidez ou transfuso.
Anti-Lub reage com todas as clulas testadas exceto o autocontrole,
sendo mais fracas as reaes com clulas do cordo e com fentipo
em heterozigose Lu(a+b+).
Anti-Lub tem sido implicado na diminuio da sobrevida de clulas transfundidas e na ictercia ps-transfusional, mas no foi descrita a ocorrncia de hemlise grave ou aguda. Pode ser considerado
clinicamente significativo, mas no se deve deixar de administrar o
sangue em situaes de emergncia apenas porque no puderam ser
encontradas unidades compatveis.
3.4 Sistema Kell
O sistema Kell um sistema eritrocitrio descoberto em 1946, aps

a implantao da tcnica de Coombs, no soro de uma paciente, a sra.
Kellacher, que reagiu com as hemcias de seu filho recm-nascido, de seu
marido e de sua filha mais velha. o terceiro mais importante e imunognico sistema de grupos sanguneos. Seu correspondente antittico
foi descrito por Levine et al. (1949) e denominado k (cellano), sendo um
antgeno de alta frequncia.
3.4.1 Antgenos Kell
So codificados pelo gene KEL, que est localizado no brao longo do cromossoma 7. A expresso desses antgenos tambm controlada por um gene regulador XK, localizado no brao curto do
cromossoma X.
Os antgenos do sistema Kell no esto presentes em plaquetas,
linfcitos, granulcitos ou moncitos. Podem ser detectados nas
clulas fetais a partir da 10 semana de gestao, estando bem desenvolvidos ao nascimento.
So antgenos extremamente imunognicos, sendo o antgeno K
o segundo mais imunognico de todos os antgenos de grupos sanguneos (o antgeno D o mais imunognico deles). Um paciente
com fentipo K(-) que receba uma nica transfuso com a presena
80
do antgeno tem uma probabilidade de at 10% para a formao do

anticorpo correspondente (Hughes-Jones e Gardner, 1971).
O antgeno K de baixa frequncia, ao passo que o antgeno k de
alta frequncia e pode ser encontrado em aproximadamente 99,8%
da populao.
Os antgenos Kell no so desnaturados por enzimas como bromelina, ficina e papana; entretanto, so inativados por tripsina,
quimiotripsina, solues de ditiotreitol (DTT), 2-mercaptoetanol
(2-ME), 2-aminoetilisotiournio (AET) e ZZAP (que contm DTT
e enzima proteoltica papana ativada com cistena).
3.4.2 Anticorpos Kell
Dentre os anticorpos irregulares mais detectados pelos servios de

hemoterapia, com exceo do anti-D, o anti-K o anticorpo mais comumente encontrado. De forma geral, apresenta-se como um anticorpo de classe IgG reativo na fase de antiglobulina; no entanto, alguns
poucos anticorpos aglutinam clulas suspensas em soluo fisiolgica.
Aproximadamente 20% dos anticorpos do sistema Kell fixam complemento at C3, mas no possuem capacidade hemoltica. Porm os
anticorpos anti-K e anti-k tm sido implicados em casos de DHRN e
envolvidos em reaes transfusionais hemolticas.
Alguns exemplares de anti-K reagem fracamente com hemcias
suspensas em meios de baixa fora inica, como o LISS, e em alguns sistemas automatizados (Schultz, 1990).
O anti-K pode apresentar efeito de dose, embora a percepo desse efeito nem sempre seja evidente. Quase todos os autoanticorpos
Kell esto associados aos antgenos de alta frequncia do sistema Kell;
no entanto, a identificao desses autoanticorpos revelou especificidades anti-K, anti-Kpb e anti-K13 (Marsh, Dinapoli e Oyen, 1979).
3.5 Sistema Lewis
O sistema de grupo sanguneo Lewis apresenta a caracterstica de no

ser produzido pelos eritrcitos e no estar integrado na estrutura membranar, o que o torna um sistema diferente dos demais. Os antgenos desse sistema so elaborados por clulas teciduais e secretados nos fluidos
corporais, principalmente nas secrees e no plasma (Harmening, 2006).
81
O gene Lewis (Le) produz uma L-glicosiltransferase que acrescenta

uma L-fucose a uma substncia precursora bsica para a produo dos
antgenos do sistema Lewis. O gene Le encontra-se localizado no brao
curto do cromossomo 19 p13.3, estando ligado ao locus do complemento C3 (Oriol, Le Pendu e Mollicone, 1986).
Uma vez que os antgenos do sistema Lewis so produzidos por
clulas teciduais, a produo dos antgenos dependente tanto da herana dos genes Lewis quanto da herana do gene secretor (Sese) de
substncias ABH. H uma interao gnica entre os genes Lewis e os
genes ABO, uma vez que a quantidade de antgeno Lewis detectada
no eritrcito influenciada pelos genes ABO herdados.
3.5.1 Antgenos Lewis
A substncia Lea secretada por todos os indivduos, independentemente da presena do gene secretor, de modo que indivduos no
secretores (sese) de antgenos ABH podem conter antgenos Lea nos
fluidos corporais que sero posteriormente adsorvidos membrana
dos eritrcitos, produzindo o fentipo Le(a+b-). Dessa forma, os indivduos Le(a+b-) so no secretores de substncias ABH (Henry, Oriol
e Samuelson, 1995). A enzima Lewis est presente na saliva, no leite,
nas glndulas submaxilares, na mucosa gstrica e em fluidos de cistos
(Salmon, Cartron e Rouger, 1984).
A formao do antgeno Leb est associada interao dos genes
Sese, ABO, Hh e Lewis. Cabe destacar que os antgenos Lea e Leb no
so alelos. O resultado da interao gnica entre os genes Lele e Sese
a produo do fentipo Le(a-b+).
O fentipo Le(a-b-) no decorrente da ausncia do gene i (FUT 3),
mas de mutaes pontuais especficas no gene Le que vo originar uma
transferase Lewis no funcional ou parcialmente ativa, determinando
assim a expresso negativa nos eritrcitos (Henry, Oriol e Samuelson,
1995; Elmgren et al., 1996).
A diminuio dos antgenos Lewis tem sido demonstrada em
mulheres grvidas, resultando no fentipo Le(a-b-) no decorrer da
gestao (Churchill e Kutz, 1988; Harmening, 2006). Pacientes com
cncer, cirrose alcolica, infeces virais e parasitrias podem no
expressar os antgenos Lewis nos eritrcitos. Essa modificao do fe82
ntipo positivo para fentipo negativo decorrente de metabolismo

lipdico anormal, por alteraes de triglicerdeos e de protenas de
alta densidade (Henry, Oriol e Samuelson, 1995) e/ou outras alteraes neoplsicas que ocorrem em pacientes com cncer (Langkilde,
Wolf e Orntoft, 1990; Idikio e Manickavel, 1991).
No so encontrados nos eritrcitos do sangue do cordo ou em
recm-nascidos, de forma que, se forem testadas, essas clulas apresentaro o fentipo Le(a-b-). No demonstram efeito de dose nas reaes sorolgicas.
3.5.2 Anticorpos Lewis
So produzidos geralmente por indivduos Le(a-b-) sem qualquer

exposio prvia ao antgeno; frequentemente so de natureza IgM e
no atravessam a placenta, no sendo, assim, responsveis por DHRN.
So capazes de ativar o complemento, podendo provocar hemlise
in vitro e in vivo. Apresentam reatividade exacerbada quando as clulas so tratadas por enzimas proteolticas.
3.5.3 Anticorpo anti-Lea
o anticorpo mais frequente do sistema Lewis, sendo produzido

por aproximadamente 20% dos indivduos que apresentam fentipo
Le(a-b-). Embora na maioria das vezes o anticorpo seja uma IgM, foram relatados casos de anticorpos IgG aps transfuses macias contendo o antgeno Lea (Cowles, Spitalnik e Blumberg, 1989).
O comportamento sorolgico do anticorpo revela melhor afinidade por clulas suspensas em salina em temperatura ambiente, embora
algumas vezes reaja a 37C e na fase da antiglobulina humana (AGH),
podendo ocasionar reaes transfusionais hemolticas.
Anti-Lea pode ser facilmente neutralizado por plasma ou saliva
que contenha a substncia Lea . Indivduos portadores do fentipo
Le(a-b+) no produzem anti-Lea pelo fato de a estrutura do antgeno Lea estar contida dentro do eptopo de Leb e por apresentarem a substncia Lea no seu plasma e na sua saliva (Henry, Oriol e
Samuelson, 1995; Petz et al., 1995).
83
3.5.4 Anticorpo anti-Leb
No encontrado rotineiramente nos testes pr-transfusionais,

sendo habitualmente uma IgM que no se fixa ao complemento to
facilmente quanto o anti-Lea.
produzido por indivduos apresentando o fentipo Le(a+b-) e
ocasionalmente por indivduos Le(a-b-). Pode ser neutralizado facilmente por plasma ou saliva contendo a substncia Leb.
3.5.5 Anticorpo anti-Lex
Apresenta aglutinao com todos os eritrcitos Le(a-b+) e Le(a+b-),

sendo formado em indivduos de fentipo Le(a-b-). Apresenta aglutinao de aproximadamente 90% dos sangues de cordo inicialmente
fenotipados como Le(a-b-). Anti-Lex no pode ser separado por tcnicas de adsoro utilizando-se clulas Le(a+b-) ou de cordo.
3.6 Sistema Duffy
Foi identificado em 1950 em um paciente hemoflico chamado

Duffy, que fora submetido a mltiplas transfuses, o primeiro exemplar de anti-Fya (Cutbush, Mollinson e Parkin, 1950). No ano posterior, Ikin et al. (1951) descreveram o anticorpo que definiu o seu
par antittico, denominado anti-Fyb, no soro de uma mulher multpara. Os principais antgenos do sistema Duffy na rotina imunohematolgica so Fya e Fyb. O gene Duffy est localizado perto do
centrmero, no brao longo do cromossomo 1q22-23.
3.6.1 Antgenos Fya e Fyb
Os antgenos Fya e Fyb so produtos de alelos codominantes que

residem em uma glicoprotena cida (gp-Fy) que transpassa a membrana sete vezes e tem um N-terminal no domnio extracelular e um
C-terminal no domnio intracelular.
Esto expressos em eritrcitos fetais a partir da 6 semana de idade gestacional, estando bem desenvolvidos ao nascimento. Esses antgenos no foram detectados em plaquetas, linfcitos, granulcitos ou
moncitos; entretanto, puderam ser detectados no crebro, endotlio,
bao, tireoide, timo e rins (Cartron e Rouger, 1995). So destrudos por
84
enzimas proteolticas, como a papana, bromelina, ficina e quimiotripsina, alm do ZZAP, que tem a capacidade de clivar a IgG. Tambm
so desnaturados por formaldedo ou pelo aquecimento a 56C durante 30 minutos (Harmening, 2006).
Antgenos Duffy se degradam com a estocagem, mesmo quando
congelados. Possuem a capacidade de eluir dos eritrcitos estocados em meio com baixa concentrao inica ou pH baixo (Mollison,
Engelfriet e Contreras, 1997).
H associao entre os antgenos Duffy e a infeco pelo parasito
causador da malria, estando resistentes infeco por P. vivax os
indivduos negros americanos e africanos com fentipo Fy(a-b-).
3.6.2 Anticorpos anti-Fya e anti-Fyb
Geralmente pertencem classe IgG e reagem melhor fase da antiglobulina humana, sendo rara a ligao ao complemento. Alguns
anticorpos podem apresentar reatividade na fase salina, principalmente aps estmulo secundrio.
Os anticorpos podem apresentar efeito de dose e no reagem com hemcias tratadas por enzimas, sendo essa uma caracterstica til na anlise da identificao de mltiplos anticorpos no soro que contenha anti-Fya
ou anti-Fyb.
Esto associados a reaes transfusionais hemolticas com grau moderado de hemlise. Na presena de anticorpos anti-Fya ou anti-Fyb no
soro do paciente, o mesmo deve obrigatoriamente receber sangue com
ausncia do antgeno correspondente.
Anticorpos Duffy esto implicados em reaes transfusionais tardias, principalmente em pacientes com anemia falciforme e mltiplos
anticorpos apresentando o fentipo Fy(a-b-) (Harmening, 2006).
Anti-Fya um anticorpo encontrado com certa frequncia e que
pode causar reao transfusional hemoltica (RTH) e algumas vezes DHRN.
Anti-Fyb um anticorpo pouco frequente, porm imune. Em raras
ocasies foi relacionado com RTH de leve a severa e ocasionalmente
pode causar DHRN de intensidade leve.
85
3.6.3 Anticorpo anti-Fy3
produzido por indivduos com fentipo Fy(a-b-) que no expressam nenhuma glicoprotena Duffy. Reagem com fentipos Fy(a+b-) e
Fy(a-b+) e, como os antgenos Fy3 no so destrudos por tratamento
enzimtico, esses anticorpos mantm a sua reatividade mesmo quando as clulas Fy3 so tratadas por enzimas proteolticas.
3.7 Sistema Kidd
O sistema Kidd foi descoberto em 1951, aps a implantao da tcnica de Coombs em uma paciente (sra. Kidd) que gerou um feto com
DHRN, em decorrncia de um anticorpo ento denominado anti-Jka
(Allen, Diamond e Niedziela, 1951). Posteriormente foi revelado o
anti-Jkb.
3.7.1 Antgenos Jka e Jkb
Os antgenos Jka so detectados em eritrcitos fetais a partir da

11 semana de idade gestacional; para o antgeno Jkb, essa deteco
possvel a partir da 7 semana.
Antgenos Jka e Jkb esto bem desenvolvidos ao nascimento e no
so alterados por enzimas proteolticas, ZZAP, DTT, AET e difosfato de cloroquina. Os antgenos Jka tm maior expresso na membrana
eritrocitria quando presentes em indivduos homozigticos (JkaJka)
quando comparados com indivduos que apresentam os antgenos em
heterozigose (JkaJkb) (Masouredis et al., 1980).
Os antgenos no so encontrados em plaquetas, linfcitos, moncitos ou granulcitos usando-se tcnicas sensveis de radioimunoensaio
ou de imunofluorescncia (Mollison, Engelfriet e Contreras, 1997).
3.7.2 Anticorpos anti-Jka e anti-Jkb
O anticorpo anti-Jk um perigoso anticorpo encontrado no

soro humano que pode determinar severa reao hemoltica transfusional imediata ou tardia. uma IgG e reage melhor com AGH
poliespecfica; em geral, fixa complemento e, em alguns casos, determina ligeira hemlise ou aglutinao direta com hemcias tratadas com enzimas.
86
Anticorpos anti-Jkb podem determinar reao hemoltica transfusional imediata ou tardia e raramente esto relacionados DHRN.
Geralmente so uma IgG detectada pela tcnica de Coombs indireto.
A reatividade desses anticorpos pode ser acentuada pelo uso de
solues de baixa fora inica (LISS) ou polietilenoglicol (PEG), mediante o aumento do volume de soro a ser acrescentado no teste ou
seja, utilizam-se 4 gotas em vez de 2, procurando aumentar a relao
entre o anticorpo e o antgeno.
Apresentam a propriedade de demonstrar efeito de dose, o que dificulta a identificao desses anticorpos para imuno-hematologistas
iniciantes. Observa-se, ainda, a necessidade de utilizar uma amostra
recente para identificao desses anticorpos.
Anticorpos Kidd podem causar reaes hemolticas transfusionais
especialmente do tipo tardio. Observa-se, em alguns casos, a ocorrncia de hemlise intravascular em reaes graves, embora a remoo
desses anticorpos possa ocorrer no nvel extravascular pelo fgado.
Os ttulos de anti-Jka e anti-Jkb declinam rapidamente in vivo. Isso
significa que um anticorpo identificado num primeiro momento pode
no ser perceptvel posteriormente, o que torna a verificao dos registros dos pacientes com esses anticorpos previamente formados uma
necessidade que no deve ser negligenciada.
Anti-Jk3 um anticorpo pertencente classe IgG que reage com a
antiglobulina. Indivduos portadores desse anticorpo apresentam o fentipo nulo (Jka-Jkb-). O anti-Jk3 est associado DHRN leve e a reaes
hemolticas transfusionais tardias.
3.8 Coleo de grupo sanguneo I
A existncia de crioaglutininas no soro de pessoas com anemia

hemoltica adquirida conhecida h muito tempo. Wiener, Unger e
Feldman (1956) nomearam essas crioaglutininas como antgeno I,
de individualidade.
O anticorpo reagiu com apenas 5 de 22 mil amostras de sangue
testadas ou seja, a maioria das amostras era I+. Acredita-se que as
amostras I no reativas possuam um raro gene homozigoto, produtor do antgeno i. Verificou-se que muitas crioaglutininas tinham
especificidade para I.
87
Tendo em vista que I e i no so antgenos antitticos distintos

produzidos por genes alelos, eles no so classificados como um sistema, e sim como uma coleo.
3.8.1 Antgenos Ii
Tanto os antgenos I quanto os antgenos i so encontrados em

alta frequncia na populao. Ao nascimento, os eritrcitos do recmnato so ricos em i; j I praticamente no detectvel. Durante os
primeiros 18 meses de vida, a quantidade de i decresce lentamente, ao
passo que I vai aumentando at serem atingidas as propores normais de um adulto.
Algumas pessoas parecem no mudar sua situao com relao a i depois do nascimento. Esses indivduos constituem o raro fentipo i adulto
ou fentipo I negativo (Harmening, 2006).
3.8.2 Anticorpos anti-I
O anti-I um autoanticorpo que pode ser benigno ou patolgico

(Beck, 1991; Issitt, 1998). Ele apresenta reaes fortes com clulas de
adultos e reaes fracas com clulas de cordo. A utilizao de mtodos enzimticos e albumina na identificao dos anticorpos podem
acentuar a reatividade de anti-I.
De forma habitual, uma aglutinina fraca da classe IgM, reativa
em salina e de ocorrncia natural, que no detectada em testes de
rotina, pois geralmente reage apenas a 4C e, em alguns casos, a temperatura ambiente.
Anticorpos patolgicos so aglutininas da classe IgM mais potentes, com ttulos mais altos e com uma faixa trmica mais ampla de
reatividade (at 32C).
A produo de autoanti-I pode ser estimulada por microrganismos que contm o antgeno similar a I em sua superfcie. Pacientes
com Mycoplasma pneumoniae formam, frequentemente, fortes crioaglutininas com especificidade para I.
3.8.3 Anticorpos anti-i
Na maioria, o anticorpo anti-i um autoanticorpo IgM que reage

melhor com clulas suspensas em salina a 4C. Exemplares potentes
88
esto associados a mononucleose infecciosa, leucemias mielides, reticuloses e cirrose alcolica.

Ttulos altos e ampla faixa trmica podem contribuir para a hemlise, mas, tendo em vista que a expresso de i fraca, raramente causam
hemlise significativa. Tambm foi descrito anti-i de classe IgG, que foi
associado DHRN.
4. Teste da antiglobulina humana

A tcnica de antiglobulina para a deteco de anticorpos do sistema Rh no aglutinantes que se apresentavam de forma fraca foi
descrita primeiramente por Coombs, Mourant e Race (1945). No
ano seguinte, os mesmos pesquisadores descreveram o uso de antiglobulina humana na deteco da sensibilizao in vivo das hemcias de bebs com DHRN (Coombs, Mourant e Race, 1946).
A tcnica de antiglobulina pode ser utilizada na deteco de hemcias sensibilizadas por aloanticorpos, autoanticorpos e/ou componentes do complemento. A sensibilizao pode ocorrer in vivo ou
in vitro. A deteco da sensibilizao das hemcias in vitro determinada pela tcnica de antiglobulina indireta ou Coombs indireto,
e pode ser aplicada para os testes de compatibilidade, triagem de
anticorpos, identificao de anticorpos, fenotipagem de hemcias
e estudos de titulao de anticorpos, ao passo que a sensibilizao
in vivo realizada pela tcnica de antiglobulina direta (TAD) ou
Coombs direto.
4.1 Caractersticas importantes da tcnica de antiglobulina
direta (TAD)
Mtodo de pesquisa de hemcias sensibilizadas in vivo por IgG

e/ou fraes de complemento;
Importante no auxlio ao diagnstico de anemia hemoltica autoimune, DHRN, hemlise induzida por drogas e reaes hemolticas pstransfusionais;
89
Lavar as hemcias importante, pois globulinas e substncias como

lipdeos, protenas presentes no plasma, podem neutralizar o soro
antiglobulina humana, provocando resultados falso-negativos; alm
disso, as cargas eltricas das substncias bioqumicas do plasma
formam o potencial zeta, um potencial que interfere no processo
de sensibilizao e aglutinao. Outro composto responsvel por
interferncias nesse teste a geleia de Wharton, um tecido conjuntivo mucoso presente no sangue coletado de cordo umbilical
que gera resultados falso-positivos;
A demora na realizao do teste pode ocasionar falsos resultados,
pois as amostras estocadas h muito tempo e em condies diferentes das ideais tendem eluio natural dos anticorpos que inicialmente estavam ligados hemcia;
A centrifugao inadequada pode promover falsos resultados.
A interpretao de TAD positivo exige conhecimento do diagnstico do paciente e da histria gestacional e transfusional, e avaliao das
medicaes em uso, assim como a informao de presena de anemia
hemoltica autoimune. O resultado sorolgico do teste apenas no
diagnstico. Ele deve ser avaliado em conjunto com os dados clnicos
e demais dados laboratoriais: hematcrito, bilirrubina, haptoglobina e
contagem de reticulcitos.
Testes prtransfusionais em pacientes com autoanticorpos podem
apresentar os seguintes problemas:
1) autoanticorpos reativos a frio podem apresentar autoaglutinao, causando tipagens ABO e Rh errneas;
2) eritrcitos fortemente cobertos por globulinas podem sofrer
aglutinao espontnea, com reagentes usados para tipagens;
3) a presena de autoanticorpos livres no soro pode dificultar a
identificao de anticorpos irregulares e a realizao de provas cruzadas.
Embora a resposta a esses problemas sorolgicos seja importante,
o adiamento da transfuso na esperana de encontrar sangue sorolo90
gicamente compatvel pode, em alguns casos, causar maior dano ao

paciente. Avaliar bem cada caso na clnica transfusional importante
para o bom aproveitamento da transfuso sem o agravamento do estado clnico do paciente.
5. Pesquisa e identificao de anticorpos irregulares

A deteco e a identificao dos anticorpos so as duas reas mais
interessantes em toda a imuno-hematologia, em especial para os iniciantes. Elas representam grande desafio para o estudante que est aprendendo os princpios e procedimentos do banco de sangue. Na maioria
das amostras de sangue testadas em um laboratrio de imunohematologia feita uma triagem de anticorpos no soro desses pacientes. Em geral, essa deteco de anticorpo compreende a triagem
do soro do paciente testado contra duas ou trs hemcias fenotipadas do grupo O de um reagente de avaliao. As hemcias reagentes tambm so referidas como painel de triagem ou seleo. Elas
so sempre do grupo O (para que possveis anticorpos anti-A e anti-B
dos indivduos a serem testados no interfiram na deteco dos anticorpos) e contm os antgenos mais comumente encontrados e clinicamente importantes. Essas clulas so encontradas por meio de
teste de fabricao comercial. Um diagrama relacionando a constituio antignica de cada clula de avaliao fornecido com cada
exemplar pelo fabricante (quadro 5).
Quadro 5. Perfil antignico das hemcias de triagem:
diagrama para triagem de anticorpos.
Sistemas
Rh
Kell
MNS
Kidd
Duffy
Lewis
Lutheran
P1
Lua
Lub
Clulas
Jk
II
Jk
Fy
Fy
Le
Le
Antgenos destrudos pelo tratamento com enzimas proteolticas.
Anticorpos irregulares podem ocorrer em 0,3% a 2% da populao

em geral (Giblett; 1977; Boral e Henry, 1977), embora essa prevalncia
possa estar aumentada em determinados grupos de pacientes, principal91
mente os politransfundidos e os portadores de anemia falciforme (Orlina,

Sosler e Koshy, 1991).
Os testes de deteco de anticorpos usando mtodos em tubo de
ensaio podem ser realizados por diferentes tcnicas. Entretanto, qualquer que seja a metodologia empregada, ela deve ser capaz de detectar
anticorpos clinicamente significantes atravs da fase de temperatura
ambiente, incubao a 37C e utilizao da antiglobulina humana.
Dependendo do tipo de potencializador utilizado na reao, determinadas fases podem ser suprimidas, como a supresso da leitura a 37C
quando utilizamos o PEG.
Toda pesquisa de anticorpos irregulares (PAI) positiva deve ter a
especificidade do anticorpo investigada. Esse procedimento realizado pela identificao de anticorpos irregulares (IAI) por meio de um
painel de hemcias industrializadas, contendo de 10 a 30 frascos de hemcias do grupo O de diferentes indivduos, previamente fenotipados
para os principais sistemas sanguneos. Esse painel geralmente denominado painel de identificao de anticorpos (quadro 6).
Quadro 6. Perfil antignico das hemcias de identificao de anticorpos:
diagrama para identificao de anticorpos irregulares.
Sistemas
Rh
Kell
MNS
Kidd
Duffy
Lewis
P Lutheran
Clulas
Jka
Jkb
Fya
Fyb
Lea
Leb
P1
Lua
Lub
10
11
Antgenos destrudos pelo tratamento com enzimas proteolticas.
A avaliao e a interpretao dos resultados do painel devem ser realizadas utilizando-se diagrama elaborado da forma acima, procurando-se
92
assegurar a identificao apropriada sem que as especificidades passem

despercebidas ou possam estar encobertas por outros anticorpos. importante avaliar a presena de autoanticorpos quando o resultado negativo do autocontrole e o painel apresentando reaes positivas indiquem
a presena de aloanticorpos.
Outra abordagem deve dizer respeito s fases e intensidade das reaes encontradas, pois reaes de mesma intensidade sugerem a presena
de apenas um anticorpo embora possam ocorrer excees , e as reatividades em determinadas fases revelam o comportamento sorolgico
dos anticorpos. Dessa forma, anticorpos direcionados contra antgenos
destrudos por tratamento enzimtico podem apresentar reatividade nas
fases de temperatura ambiente, trmica e de antiglobulina, mas no reagiro quando se faa um painel enzimtico.
Os anticorpos so excludos quando h ausncia de reatividade do
soro do paciente com uma clula portadora do antgeno correspondente.
Ateno especial deve ser dada s clulas heterozigotas, pois determinados anticorpos podem apresentar efeito de dose e no reagir com as hemcias teste.
Sempre que possvel, deve ser feita a fenotipagem do paciente; a
ausncia no paciente do antgeno correspondente ao anticorpo identificado demonstra que os resultados de identificao esto corretos
(quando se considera um autocontrole negativo).
possvel que seja necessrio testar o soro do paciente contendo
determinado anticorpo com um nmero suficiente de amostras (trs,
no mnimo) com o antgeno correspondente e com outras em que o
antgeno esteja ausente a fim de se comprovar a especificidade suspeita.
Deve-se considerar que a presena de mltiplos aloanticorpos
pode ocorrer quando o padro de reatividade no se encaixe na
reatividade de um nico anticorpo suspeito, ou quando ocorrem
variaes nas intensidades das reaes que no podem ser explicadas com base na dose (homozigose ou heterozigose) do antgeno.
Assim, outras tcnicas adicionais ou o encaminhamento da amostra para um centro de referncia podem ser necessrios.
93
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97
Biossegurana em laboratrios
de sade
Joseli Maria da Rocha Nogueira
A biossegurana em laboratrios de sade um tema complexo e

abrangente que inclui conceitos relacionados a biossegurana, biotica, conteno e infraestrutura laboratorial, boas prticas laboratoriais etc. (Borba et al., 2009).
No Brasil, a normatizao de segurana em laboratrios de sade segue parmetros internacionais, entre outros, da Organizao
Mundial de Sade (OMS), dos Centros de Controle e Preveno de
Doenas (CDC, do ingls Centers for Disease Control and Prevention) e dos Institutos Nacionais de Sade (NIH, do ingls National
Institutes of Health), os dois ltimos rgos do governo americano,
e normas brasileiras que podem ser gerais, como as definidas pelo
Ministrio da Sade por meio da Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria (Anvisa) e as normas regulamentadoras (NR) do Ministrio
do Trabalho e Emprego (MTE). Alm desses parmetros, existem
normas especficas, geralmente fixadas pela prpria instituio de
sade, com o objetivo de atender as recomendaes nacionais e internacionais e as peculiaridades de cada setor.
Tanto a OMS quanto o Ministrio da Sade publicam, periodicamente, manuais sobre segurana em laboratrios de sade. importante que os laboratrios conheam essas normas e as mantenham
atualizadas. Segundo a Anvisa, as boas prticas de laboratrio (BPL)
so princpios aplicveis a laboratrios de servios, de controle de
qualidade e de pesquisas, relacionados sade humana, vegetal e animal e ao meio ambiente (Borba et al., 2009).
99
Maria Beatriz Siqueira Campos de Oliveira Joseli Maria da Rocha Nogueira
A biossegurana e suas aplicaes evoluram muito com o passar

dos anos. No Brasil, ela est atrelada legalmente aos organismos geneticamente modificados (OGMs) e s clulas-tronco embrionrias pela
lei n 11.105/2005, que estabelece
[...] normas de segurana e mecanismos de fiscalizao sobre a construo, o cultivo, a produo, a manipulao, o
transporte, a transferncia, a importao, a exportao, o armazenamento, a pesquisa, a comercializao, o consumo, a
liberao no meio ambiente e o descarte de organismos geneticamente modificados OGM e seus derivados, tendo como
diretrizes o estmulo ao avano cientfico na rea de biossegurana e biotecnologia, a proteo vida e sade humana,
animal e vegetal, e a observncia do princpio da precauo
para a proteo do meio ambiente. (Brasil, 2005)
Estabelece tambm normas de uso, apenas para fins de pesquisa e

terapia, de clulas-tronco embrionrias obtidas de embries humanos
produzidos por fertilizao in vitro e no utilizados no respectivo procedimento (Brasil, 2005).
Na rea da sade, a biossegurana est contextualizada na preveno de acidentes e agravos gerados por agentes de riscos biolgicos,
qumicos, fsicos, ergonmicos e psicossociais, no mbito ocupacional, comunitrio e ambiental (Borba et al., 2009).
Nesse sentido, podemos definir a biossegurana como sendo a condio de segurana alcanada por um conjunto de aes destinadas a
prevenir, controlar, minimizar ou eliminar riscos inerentes s atividades que possam comprometer a sade humana, animal, vegetal e o ambiente, bem como afetar um trabalho a ser realizado (Brasil, 2010b).
O decreto n 3.029, de 6 de abril de 1999, aprovou o regulamento da
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, visando necessidade de prevenir e reduzir os riscos sade e ao meio ambiente. A partir da, a diretoria colegiada da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, no uso de suas
atribuies, aprovou vrias resolues da diretoria colegiada (RDCs) com
o intuito de estabelecer normas e padres sobre limites de contaminantes,
resduos txicos, desinfetantes, metais pesados e outros materiais que envolvam risco sade.
100
A RDC n 57, de 16 de dezembro de 2010, estabelece o regulamento sanitrio para servios que desenvolvam atividades relacionadas ao
ciclo produtivo do sangue humano e seus componentes, e para procedimentos transfusionais. Segundo essa resoluo, o servio deve disponibilizar os equipamentos de proteo individual e coletiva necessrios
para a segurana dos seus funcionrios e deve haver treinamento peridico de toda a equipe acerca dos procedimentos de biossegurana.
As normas legais so instrumentos de ao sanitria que regulamentam as caractersticas de instalaes fsicas e infraestrutura para
estabelecimentos de sade. Essas normas, em conjunto com as normas regulamentadoras do Ministrio do Trabalho e Emprego1 e com
as normas de biossegurana, devem nortear o funcionamento de laboratrios especializados para que a qualidade e o desempenho humano
materializem a efetivao dos objetivos na evoluo da pesquisa e na
melhoria da sade das populaes (Bahia, 2001, p. 61).
Com base nessa complexidade temtica, entendemos que a biossegurana deve considerar as vrias dimenses que norteiam a questo, sejam elas referentes a procedimentos (boas prticas) ou infraestrutura
(instalaes fsicas e equipamentos de proteo), ou, ainda, associadas
informao/educao (qualificao das equipes), reconhecendo-se
que o gerenciamento e a organizao do trabalho tambm devem ser
analisados como possveis objetos geradores de acidentes, doenas
e sofrimentos ou como integrantes fundamentais de um programa de
biossegurana nas instituies.
Quando pensamos em escrever um captulo sobre segurana laboratorial dentro do segmento da hemoterapia, e mais especificamente da
imuno-hematologia, tivemos a certeza que no poderamos falar apenas das patologias ocupacionais, mas principalmente dos acidentes de
trabalho associados a esse segmento e suas consequncias, que muitas
Em relao s normas regulamentadores que podem estar relacionadas com o tema da biossegurana, destacamos: NR1: Informao sobre riscos e cumprimento de recomendaes; NR5:
comisso interna de preveno de acidentes (Cipa); NR6: Equipamentos de proteo individual;
NR7: Programa de Controle Mdico e Sade Ocupacional (PCMSO); NR8: Edificaes; NR9:
Programa de Preveno de Riscos Ambientais (PPRA); NR10: Instalaes e servios em eletricidade; NR15: Atividades e operaes insalubres; NR16: Atividades e operaes perigosas;
NR17: Ergonomia; NR19: Explosivos; NR20: Lquidos combustveis e inflamveis; NR23: Proteo contra incndios; NR24: Condies sanitrias e de conforto nos locais de trabalho; NR25:
Resduos industriais; NR26: Sinalizao de segurana; e NR32: Segurana e sade no trabalho
em estabelecimentos de assistncia sade.
101
vezes podem ser graves. A preveno um item de absoluta importncia ao se trabalhar com essas metodologias e com qualquer material de
origem humana, principalmente sangue e hemoderivados.
Podemos conceituar a segurana do trabalho, de modo geral, como
um conjunto de medidas adotadas visando prevenir, minimizar e/ou
controlar acidentes de trabalho e doenas ocupacionais, bem como proteger a integridade e a capacidade produtiva do trabalhador.
Inicialmente, necessrio definir adequadamente os conceitos de
doena ocupacional e de acidente de trabalho, pois, apesar de distintos,
podem ocasionar alguma confuso. As doenas ou patologias ocupacionais so aquelas que se originam do exerccio de determinadas profisses por uma ao lenta e contnua, sendo comprovadas pela relao
causaefeito. Em outras palavras, so enfermidades especificamente
ocasionadas por determinado trabalho ou pelas condies insalubres
em que ele se realiza (Brasil, 1999b).
Na atualidade, para evitar enganos dentro dos conceitos, alguns autores optaram por considerar os problemas relacionados ao trabalho
dentro da mesma categoria; todavia preferimos manter essa diviso, de
forma a que o leitor perceba bem essa diferena e possa se prevenir
de forma mais adequada.
1. Doenas ocupacionais
Quando falamos de doenas ocupacionais, estamos nos referindo
tanto quelas ocasionadas por agentes biolgicos quanto s decorrentes
de fatores fsicos e qumicos associados ao risco do trabalho (Brasil,
2001a). Como nem sempre fcil definir uma patologia como ocupacional, o conhecimento dos fatores desencadeantes em cada uma das
atividades de trabalho, seus meios de preveno e o diagnstico precoce so uma excelente associao para prevenir essas doenas.
Entre as patologias ocupacionais mais conhecidas, podemos citar
as pneumoconioses, que so doenas do trato respiratrio associadas acumulao de determinadas partculas nos pulmes ou s
reaes dos tecidos na sua presena. Sua preveno depende da natureza do agente nocivo. Assim, alm da ventilao adequada para o
trabalho em lugares insalubres, os trabalhadores devem ter sua dis102
posio equipamentos de proteo individual (EPIs) e equipamentos

de proteo coletiva (EPCs), educao e medicina preventiva.
1.1 Doenas ocupacionais causadas por agentes fsicos
Alm das pneumoconioses, outras patologias ocupacionais esto associadas a agentes fsicos, como calor, frio, radiaes, rudos
e trepidaes.
1.1.1 Temperatura
Nos laboratrios, os trabalhadores podem estar submetidos a altas

temperaturas os profissionais que trabalham com esterilizao, por
exemplo. Esse tipo de atividade exige um local especfico para a instalao de fornos e autoclaves, que no devem ficar na mesma rea fsica dos laboratrios que realizam tcnicas de imuno-hematologia e dos
bancos de sangue. Nesses ambientes, o mais comum a necessidade
de se trabalhar em baixas temperaturas, tanto pela prpria refrigerao do local quanto pelas atividades desenvolvidas em cmaras frias ou
manipulando produtos criopreservados. Dois exemplos de doenas que
podem estar relacionadas a esse tipo de atividade so a urticria fsica,
ocasionada pelo calor ou pelo frio (CID-L50.2), e a geladura (frostbite)
superficial (CID-T33) ou com necrose de tecidos (CID-T34), que so
leses localizadas resultantes da ao direta da exposio ao frio, por
perodo curto ou longo, a temperaturas abaixo dos 0C (Brasil, 1999c).
1.1.2 Radiaes
Chamamos ateno, tambm, para o risco das radiaes, muitas vezes usadas com fim de esterilizao ou diagnstico. Tanto as radiaes
ionizantes como os raios-X quanto as no ionizantes como os
raios ultravioleta (UV) podem ser perigosas para os trabalhadores.
No segmento laboratorial, a exposio radiao UV, bastante utilizada como germicida em laboratrios, um risco para os profissionais e
pode gerar no s problemas dermatolgicos, mas at mesmo o cncer.
1.1.3 Rudos e trepidaes
No que diz respeito ao rudo, as normas do Ministrio do Trabalho

NR15 (Brasil, 2008a) e NR9 (Brasil, 1994) estabelecem que o limite acei103
tvel no banco de sangue de 50 decibis, com o limite de conforto situado na faixa dos 40 decibis. Logo, esse fator, apesar de no ser dos mais
graves, pode ter consequncias na sade do trabalhador a longo prazo. As
atividades desenvolvidas nos bancos de sangue no oferecem, no entanto, risco de perda auditiva, uma vez que em geral os rudos ficam abaixo
do permitido por lei. E, em comparao com outros tipos de laboratrio
principalmente da rea de produo, rudos e trepidaes como os causadas por centrfugas, exaustores e cabines de segurana no representam
um risco to grande de aquisio de doenas ocupacionais. Todavia o
profissional deve ficar atento e informar qualquer possvel desconforto
sua gerncia.
1.1.4 Ergonometria
A ergonomia objetiva modificar os sistemas de trabalho para adequar

a atividade neles existentes s caractersticas, habilidades e limitaes das
pessoas, com vistas aos seus desempenhos eficientes, confortveis e seguros (Hermosilla, 2006). O sentido do termo ergonometria vai alm da definio de ergonomia, pois inclui tambm a ideia de preveno e cuidado.
Podemos dizer que a ergonometria um ramo da ergonomia que visa
principalmente ajustar o ambiente ao indivduo. Em locais de trabalho,
as mquinas e mobilirios devem estar de acordo com o biotipo de cada
trabalhador para que ele no venha a ter problemas sseos, musculares
ou at mesmo de constituio.
Como todo trabalhador, o tcnico de laboratrio tambm est
exposto a problemas ergonmicos que podem, ao longo do tempo,
causar danos graves. Para que isso no acontea, os bancos utilizados ao se trabalhar em bancadas devem ser altos e com possibilidade de ajuste de acordo com as necessidades de cada trabalhador
(estatura, peso etc.). O mobilirio deve seguir as normas bsicas
de ergonometria.
A leso por esforo repetitivo (LER) que acomete profissionais da
rea, ou, na terminologia mais atual, o distrbio osteomuscular relacionado ao trabalho (Dort), doena ocupacional com maiores ndices de
notificao na previdncia social, podem ser evitados com medidas preventivas, como imposio de limites de horas dirias na mesma posio
e instruo quanto correta postura. Sugere-se como medida preventiva
104
para profissionais que trabalham em bancadas a preocupao de manter

eventualmente intervalos alternados, com alongamento e relaxamento
dos braos, punhos, mos e, principalmente, da coluna.
2. Acidentes de trabalho
Os acidentes de trabalho, diferentemente das doenas ocupacionais, ocorrem no por uma exposio prolongada, mas por um agravo imprevisto no exerccio da atividade e que pode ser extremamente
desastroso, principalmente para profissionais que lidam com fluidos
biolgicos como o sangue. Sabemos que, em laboratrios de imunohematologia, o sangue testado amplamente, no s quanto aos sistemas antignicos (ABO, Rh etc.) e anticorpos, mas tambm quanto a
possveis doenas transmissveis por meio dele, como hepatite e Aids,
entre outras. A exposio acidental do profissional a sangue contaminado pode acarretar srios prejuzos sua sade, de acordo com os
agentes que venham a ser transmitidos.
Em todos os casos, o uso adequado de equipamentos de proteo, a
imunizao e o conhecimento dos riscos so fundamentais, em qualquer rea, para o desempenho seguro das atividades especficas; entretanto, lembramos que, na rea de laboratrio, um pequeno descuido
pode trazer consequncias muito graves para a sade do trabalhador.
Nesse contexto, destacamos os tcnicos de laboratrio de anlises clnicas, principalmente os que coletam, analisam e processam sangue e seus
derivados, inclusive os profissionais de bancos de sangue, porque esto
especialmente expostos a doenas de cunho ocupacional e a acidentes
de trabalho.
Esses profissionais devem possuir uma carteira de vacinao que
contemple os principais agentes imunoprevenveis. No Brasil, o programa de vacinao do Ministrio da Sade (Toscano e Kosim, 2003)
comea no primeiro ms de vida do beb e segue ao longo de toda a
vida do indivduo. Os profissionais de sade, alm do esquema normal de vacinao, devem estar imunizados contra aqueles agentes
que representem risco em sua atividade. Destacamos, assim, a necessidade da vacina antitetnica, que deve ser administrada a cada
dez anos, e da vacina contra o vrus da hepatite B (HBV), que deve
105
ser administrada em trs doses (0, 1 e 6 meses), com a realizao do

esquema vacinal completo necessria para a imunizao (Garcia e
Facchini, 2008).
O laboratrio, por si s, j possui caractersticas crticas, tais como
o manejo de materiais perfurocortantes, de vidrarias diversas e de produtos qumicos prejudiciais sade. Somando-se a isso, ainda temos
a rotina e, muitas vezes, uma carga excessiva de trabalho, que acabam
gerando um ambiente propcio a acidentes. Esses riscos so ampliados
quando as dependncias do laboratrio esto no interior de um hospital, pois pacientes com doenas infectoparasitrias funcionam como
constantes fontes de contaminao de pessoas, materiais e ambientes.
Alm disso, como j foi dito, os trabalhadores dessa rea, independentemente do layout do laboratrio, lidam com materiais potencialmente
infectados, e a exposio a possveis agentes etiolgicos pode ocasionar
srios agravos.
Os profissionais da rea de sade que trabalham em bancos de
sangue e laboratrios de hematologia, como j comentamos, esto
tambm expostos, direta e/ou indiretamente, a riscos qumicos diversos. Em muitos casos, cilindros de gs comprimido, assim como
botijes de nitrognio lquido e de reagentes qumicos utilizados na
rotina de diferentes anlises, esto localizados, de forma inadequada,
na rea comum dos laboratrios de biodiagnstico. Dessa forma, o
conhecimento dos riscos inerentes aos produtos qumicos fundamental para o profissional de sade de maneira geral.
2.1 Riscos qumicos
Os produtos qumicos podem ser classificados de diferentes formas, e isso causa muitas divergncias e problemas normativos. A
variao nas informaes sobre o risco dos diversos produtos qumicos existentes traduz-se no apenas em problemas de segurana
(pases que no tm exigncias especficas podem possuir rtulos
ou fichas que trazem diferentes informaes para o mesmo produto qumico), mas tambm em questes de natureza comercial (substncias restritas apenas em alguns pases). Alm disso, o nmero de
produtos qumicos existentes e a velocidade com que novos produtos
so criados dificultam a regulamentao de todos os produtos qu106
micos perigosos. Acredita-se que a maioria das substncias qumicas

atualmente em utilizao no tenha sido submetida a ensaios de toxicidade (Di Vitta, 2005).
Segundo o Manual de biossegurana do Ncleo de Biossegurana da Fundao Oswaldo Cruz (s.d.), risco qumico o perigo
a que determinado indivduo est exposto ao manusear produtos
qumicos que podem prejudicar sua sade ou causar danos fsicos.
Os danos fsicos relacionados exposio qumica incluem desde
irritao dos olhos e da pele e queimaduras, at outros de maior
severidade, causados por incndio ou exploso. Os danos sade
podem ocorrer por exposio de curta ou longa durao a produtos
txicos; as vias de penetrao no organismo podem ser a inalao, a
absoro e a ingesto, resultando em doenas respiratrias crnicas,
doenas do sistema nervoso, doenas nos rins e fgado, e at mesmo
alguns tipos de cncer. Em outras palavras, o risco igual ao perigo associado exposio (risco = perigo x exposio). Portanto, a
boa comunicao quanto aos perigos alerta o profissional para que
ele possa reduzir ao mnimo a sua exposio, diminuindo, assim, o
risco inerente atividade.
2.1.1 Smbolos de risco
Representados geralmente no interior de figuras geomtricas, os

smbolos de risco so pictogramas (smbolos que representam um objeto ou um conceito) que devem ser utilizados para informar sobre uma
propriedade importante de um produto, ou mesmo para simbolizar
o risco inerente a determinado local. No caso de produtos qumicos,
muitas vezes os smbolos comunicam o principal risco que a substncia
representa quando entramos em contato com ela (por exemplo, exploso, queimadura e intoxicao).
No Brasil, os smbolos de risco correspondem norma NBR-7500,
da Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT), mas existem normativas internacionais, como as sugeridas pela Organizao
Mundial de Sade (OMS), pela Organizao Internacional do Trabalho (OIT) e pelo Programa Internacional de Segurana Qumica
(PISQ) (World Health Organization, International Programme on
Chemical Safety e International Labour Organization, 2003). Segun107
do esses organismos, os smbolos e indicaes de perigo que devem

ser utilizados so:
corrosivo (cdigo C): um smbolo de um cido ativo;
explosivo (cdigo E): uma bomba detonante;
comburente ou oxidante (cdigo O): uma chama acima de um
crculo;
inflamvel (no possui cdigo), facilmente ou altamente inflamvel (cdigo F) e extremamente inflamvel (cdigo F+): uma
chama;
txico (cdigo T) e muito txico (cdigo T+): representao de
uma caveira sobre tbias cruzadas;
irritante (cdigo Xi) ou nocivo (cdigo Xn): uma cruz de Santo
Andr;
perigoso para o ambiente (cdigo N): representao de agravos
a um peixe e a uma rvore.
Quadro 1. Smbolos internacionais de risco qumico:
definio, precauo e exemplos.
Smbolo e nome
Definio / precauo
Corrosivo
Classificao: nesse grupo esto

includos, principalmente, cidos,
anidridos e lcalis. Podem causar
destruio de tecidos vivos e/ou
materiais inertes, ocasionar danos aos
recipientes e contaminar as reas
de armazenagem.
Precauo: deve-se evitar o contato
com olhos, pele e roupa, e tambm
impedir a inalao, mediante medidas
de proteo especiais, como mscara
com filtros especficos.
108
Exemplos
cido
clordrico
cido
fluordrico
Explosivo
Comburente
ou oxidante
Inflamvel
Classificao: so compostos qumicos

extremamente instveis e sensveis
a choques ou frices, e que podem
explodir sob o efeito de calor excessivo.
Precauo: frascos com esse tipo de
material devem ser mantidos longe de
fontes de calor e armazenados em local
ventilado e isolado da ao do fogo, do
calor e de fascas. Em caso de cilindros
de gases comprimidos, deve-se tambm
evitar pancadas. Esse composto pode
facilitar a combusto, dificultando a
extino de algum provvel incndio. Em
geral os perxidos tambm so irritantes
do aparelho respiratrio, pele e olhos.
Nitroglicerina
Trinitrotolueno
(TNT)
Classificao: produto qumico que

alimenta a combusto (ato de
queimar processo de combinao
de uma substncia com o oxignio).
O material pode iniciar ou facilitar a
combusto quando em contato com
substncias inflamveis, dificultando
o combate ao fogo.
Precauo: evitar contato com
substncias combustveis que possam
desencadear um incndio. A longo
prazo, o uso de produtos oxidantes
pode danificar metais e outras
superfcies (Oliveira e Nogueira, 2009).
A utilizao de EPIs fundamental
para a segurana do trabalhador.
Oxignio
Nitrato de
potssio
Perxido de
hidrognio
Classificao: materiais inflamveis;

para rotular as substncias e
formulaes com a notao de
inflamvel, seu ponto de fulgor deve
estar entre + 21C e + 55C.
Precauo: evitar contato dos produtos
com materiais ignitivos. Manipular longe
de chamas ou calor. Manipular com
proteo adequada e em capela de ar
forado ou exausto.
leo de
terebentina
109
Altamente
inflamvel
Extremamente
inflamvel
Txico
Classificao: materiais altamente

inflamveis, gases inflamveis,
combustveis lquidos; substncias e
preparaes que podem se aquecer e,
finalmente, inflamar-se em contato com
o ar a uma temperatura normal, sem
fornecimento de energia; substncias
slidas que podem inflamar-se
facilmente por breve ao de uma fonte
incandescente e que continuam a arder
ou a se consumir aps o afastamento
da fonte; substncias em estado lquido
cujo ponto de fulgor seja inferior a 21C;
ou substncias gasosas inflamveis em
contato com o ar a presso normal, ou
que, em contato com a gua ou o ar
mido, desenvolvam gases facilmente
inflamveis em quantidades perigosas.
Precauo: evitar contato dos produtos
com materiais ignitivos. Essas substncias
devem ser manipuladas longe de chamas
ou de emissores de calor. Quando
volteis, manipular com proteo
adequada e em capela de ar forado ou
exausto. Todas essas substncias devem
ser adequadamente identificadas.
Benzeno
Etanol
Acetona
Classificao: substncias e formulaes

lquidas cujo ponto de fulgor se situa
abaixo de 0C, possuindo tambm baixa
temperatura de ebulio (abaixo de
35C). Gases extremamente inflamveis
formam facilmente com o ar uma mistura
explosiva em condies normais.
Precauo: igual ao anterior.
Hidrognio
Propano
ter dietlico
Classificao: substncias e
preparaes que, por inalao, ingesto
ou penetrao cutnea, podem implicar
riscos graves (agudos ou crnicos) ou
mesmo morte.
Precauo: todo o contato com o corpo
humano deve ser evitado, observandose tambm cuidados especiais com
produtos cancergenos, teratognicos
ou mutagnicos.
Cloreto de
brio
Monxido de
carbono
Metanol
110
Muito txico
Irritante
Nocivo
Perigoso para
o ambiente
riscos graves (agudos ou crnicos) ou
mesmo morte.
Precauo: todo o contato com o corpo
humano deve ser evitado, observandose tambm cuidados especiais com
produtos cancergenos, teratognicos
ou mutagnicos.
Cianureto
Trixido de
arsnio
Nicotina
preparaes no corrosivas que, por
contato imediato, prolongado ou
repetido com a pele ou as mucosas,
podem provocar reao inflamatria.
Precauo: os gases no devem ser
inalados, e o contato com a pele e os
olhos deve ser evitado.
Cloreto
de clcio
Carbonato
de sdio
riscos de gravidade limitada;
Precauo: deve ser evitado o contato
com o corpo humano, assim como a
inalao dessa substncia.
Etanol
Diclorometano
Cloreto de
potssio
Definio: a liberao da substncia

no ambiente pode provocar dano ao
ecossistema a curto ou longo prazo,
contaminando corpos dgua, solo e
animais.
Precauo: por causo do seu risco
potencial, no deve ser liberada em
encanamentos, solo ou ambiente. Esse
tipo de composto deve ser tratado antes
de ser descartado, ou ento guardado
e entregue a local onde receber
tratamento adequado.
Hicrocarbonetos
de petrleo
Cianureto
de potssio
Tetracloreto
de carbono
Fonte: Knig, 2009.
111
Quadro 2. Esquema simplificado de incompatibilidades

dos produtos qumicos e que deve ser adotado
em reas de estocagem de substncias qumicas.
Proibido
Precaues
Autorizado
Fonte: Carvalho, 1999.
Alm dos smbolos qumicos de periculosidade descritos acima, outros pictogramas de perigo, como presena de material radioativo ionizante ou material infectante/risco biolgico, so de uso obrigatrio j a
partir da porta do laboratrio em que o risco exista.
Smbolo internacional da
presena de radiao ionizante
Smbolo internacional de perigo

biolgico (biohazard)
2.2 Riscos biolgicos
Os tcnicos de sade que coletam e manipulam sangue e seus derivados esto expostos a vrios tipos de acidentes. Um deles o contato
112
acidental com materiais biolgicos. Para isso, importante a vacinao contra os agentes imunoprevenveis, o conhecimento do ciclo
biolgico dos microrganismos possivelmente infectantes e de suas
vias de contaminao e o uso correto dos EPIs.
Podemos definir materiais biolgicos como qualquer material que
contenha informao gentica e seja capaz de autorreproduo ou
de ser reproduzido em um sistema biolgico (Brasil, 2010a). Essa informao gentica pode ser proveniente de microrganismos (agentes
biolgicos), entre eles bactrias, fungos, vrus, prons e protozorios.
A melhor preveno contra os riscos biolgicos no se acidentar. Para isso, alm dos cuidados mencionados, o profissional de
sade deve estar concentrado no seu trabalho e ter conhecimento
das normas de biossegurana. Nessa rea, o uso de luvas indispensvel, alm de culos de segurana ou protetor facial, para proteo
dos olhos e rosto. A caixa de descarte de material perfurocortante,
com dispositivo para encaixe de agulha, deve conter no seu interior soluo de hipoclorito de sdio a 2% para descontaminao do
material. Lembramos que o recapeamento de agulhas terminantemente proibido pelas normas de biossegurana. Alm do sangue,
ainda podemos ter amostras biolgicas provenientes de fluidos corporais, peas cirrgicas e bipsias.
2.2.1 Avaliao de risco
Para uma avaliao de risco mais precisa, principalmente no que

se refere aos agentes biolgicos, alguns critrios devem ser considerados. O primeiro ponto que destacamos a virulncia do agente
biolgico, por ser um parmetro importante na classificao do risco biolgico, como descreveremos mais abaixo. Outros critrios que
tambm devem ser considerados na avaliao de risco so o modo
de transmisso do microrganismo, sua capacidade de sobrevivncia
no ambiente, o volume do material manipulado, a dose infectante,
a origem do agente biolgico, a disponibilidade de medidas profilticas e a existncia ou no de tratamento eficaz.
Os profissionais que trabalham diretamente com sangue devem no
apenas conhecer em profundidade o ciclo biolgico dos possveis microrganismos infectantes, mas tambm participar constantemente de
113
cursos de desenvolvimento profissional e de congressos na rea, para

estarem sempre atualizados, uma vez que novas descobertas so feitas
a cada dia, modificando paradigmas historicamente conhecidos.
Um exemplo desse fato a transmisso do Trypanosoma cruzi
por via oral. Segundo Dias (2006), em alimentos como o leite ou
caldo de cana, temperatura ambiente, o parasita pode manter-se
vivel por 24 horas ou mais. Em acidentes de laboratrio, a contaminao oral foi comprovada em tcnicos que se infectaram pela
ingesto de formas de cultura ou de sangue contaminado (Dias,
2000). Assim, confirma-se que os fluidos biolgicos podem funcionar como veculo de contaminao por diversas vias de penetrao area, cutnea, ocular, oral , apresentando a capacidade
de conter organismos de diferentes classes de risco, como protozorios, vrus e bactrias.
Alguns vrus so responsveis por graves doenas, tanto pelo elevado ndice de mortalidade quanto por no existirem tratamentos
eficazes at o momento. Isso representa um alto risco para os trabalhadores da rea da sade.
Estudos comprovam que o vrus Ebola, que causa quadros gravssimos nos seres humanos, parasita animais selvagens no continente africano, com os quais mantm relao pouco agressiva. Ao explorar as
florestas, o ser humano destri o ambiente natural do vrus, causando
um desequilbrio ecolgico, ao mesmo tempo em que proporciona a
ele a possibilidade de adaptao a novos reservatrios, podendo gerar
novas patologias. Da o termo vrus emergente.
Outro vrus de classe 4 que causa quadro semelhante ao Ebola
o Marburg, bastante conhecido pelos profissionais de sade. Ele se
manifestou pela primeira vez na cidade alem de Marburg, de onde
se originou o seu nome, por causa do manejo inadequado realizado
pelo tcnico responsvel pelos animais de laboratrio; ao final desse surto, 31 pessoas haviam sido infectadas e 7 morreram da a
importncia de se conhecer os riscos inerentes s profisses ligadas
rea da sade e atender as normativas de biossegurana (Klenk e
Feldmann, 2004).
Alguns organismos bacterianos tambm podem representar risco
para quem trabalha em laboratrios de anlises clnicas. Alm disso,
o uso indiscriminado de antibiticos pode propiciar a seleo de bac114
trias cada vez mais resistentes. Em vrios hospitais brasileiros j se

tem notcia da existncia, atualmente, de diferentes tipos de bactrias
multirresistentes, entre elas o Staphylococcus aureus resistente meticilina (MRSA), a mesma espcie resistente vancomicina (VRSA) e
a Klebsiella pneumoniae, que possui a enzima carbapenemase (KPC).
Essa ltima vem sendo chamada pela mdia de superbactria, pois
a carbapenemase gera resistncia da bactria s penicilinas, cefalosporinas, carbapenemas e ao aztreonam, todos eles antimicrobianos
(Hirsch e Tam, 2010).
Na atualidade, essas bactrias so consideradas muito perigosas
para pacientes com sistema imunolgico debilitado. Alm disso,
seu contgio ocorre de forma direta, podendo ser transmitidas por
um simples aperto de mo. Com base nisso, a lavagem cuidadosa
das mos com detergente neutro e a higienizao com desinfetante
devem ser aes obrigatrias e rotineiras no ambiente laboratorial.
Profissionais de sade que executam coletas sanguneas em quartos e enfermarias de hospitais tambm devem seguir rigorosamente as normas de biossegurana para evitar o agravamento desse
quadro e sua disseminao.
Um trabalho publicado na revista Nature (Jones et al., 2008) analisou 335 doenas emergentes no perodo 1940-2004. O estudo reuniu
pesquisadores da Sociedade Zoolgica de Londres, da Escola de Ecologia da Universidade da Georgia, do Centro para o Recolhimento de
Informao Internacional em Cincias da Terra (Ciesin) e do Consrcio para uma Medicina Ambiental, do Wildlife Trust, e serviu, principalmente, para elaborar mapas que identificaram os pontos quentes
(hotspots) do planeta, aquelas localidades onde futuras doenas infecciosas emergentes podem surgir.
A cartografia das zonas de risco significa um avano na preveno de
patologias importantes, uma vez que ser possvel prever, de forma cientfica, onde as doenas surgiro. De acordo com esse trabalho, a principal ameaa para a sade pblica vem de zonas onde a populao cresce
e avana para reas de matas e florestas virgens, causando modificaes
na geografia local ou alteraes na biodiversidade da vida selvagem. Dessa forma, a melhor maneira de prevenir a emergncia de doenas infecciosas proteger o desenvolvimento das zonas ricas em biodiversidade
(Jones et al., 2008).
115
Alm disso, os pesquisadores tambm concluram nessa pesquisa

que 60% das doenas emergentes so originrias de doenas de animais que podem ser transmissveis ao homem (zoonoses), a maioria
delas (71%) proveniente de patgenos com uma fonte de vida selvagem.
Segundo Jones et al. (2008), as zonas em que h mais riscos de zoonoses
so a totalidade do Sudeste Asitico, o subcontinente indiano, o delta
da Nigria e a regio dos Grandes Lagos africanos.
Outro ponto importante destacado pelos pesquisadores o aumento das doenas emergentes, cuja origem reside na resistncia de alguns
agentes aos tratamentos, principalmente em decorrncia da utilizao
crescente de antibiticos nos pases ricos. A pesquisa mostra ainda que
a dcada de 1980 conheceu um aumento de novas patologias, provavelmente devido pandemia de Aids, que tem como caracterstica fundamental a diminuio da imunidade; j os anos 1990 foram marcados
por um pico de doenas vetoriais causadas, por exemplo, por mosquitos o que pode estar relacionado com as alteraes climticas.
Os Centros de Controle de Doenas e Preveno dos Estados
Unidos publicaram, em 1988, a lista dos fluidos corpreos para
os quais devem ser aplicadas precaues: sangue, lquido crebroespinhal, lquido pleural, lquido sinovial, fluido pericrdico, fluido peritoneal, fluido amnitico, smen e secreo vaginal. Segundo
o CDC, as precaues s se aplicam a urina, fezes, leite humano,
saliva, secrees nasais, pus, suor, lgrimas ou vmito se esses fluidos contiverem sangue. Alm dessas amostras biolgicas, podem
ser fonte de contaminao aerossis, poeira, alimentos, gua e instrumentos de laboratrio (Mamizuka et al., 2000).
Por ltimo mas no menos importante, preciso levar em conta os
fatores inerentes a cada indivduo, tais como susceptibilidade, gentica,
condio imunolgica, idade, sexo, exposio prvia, gravidez, lactao, consumo de lcool e de medicamentos e higiene pessoal. Somado
a isso, enfatiza-se a experincia, a concentrao e a qualificao dos
profissionais, principalmente no que concerne percepo dos riscos e
aos cuidados em seguir as normas de biossegurana, incluindo o uso de
equipamento de proteo individual e coletiva de forma correta.
Segundo o Ministrio da Sade (Brasil, 2007a), os agentes biolgicos que afetam os seres vivos e o ambiente so classificados da seguinte forma:
116
Classe de risco 1: risco baixo individual e risco baixo para a coletividade compreende os agentes biolgicos conhecidos por
no originarem doenas de forma natural em pessoas ou animais
adultos sadios. Exemplos: Lactobacillus sp., Escherichia coli K12.
Classe de risco 2: risco moderado individual e risco limitado para
a comunidade compreende os agentes biolgicos que causam
infeces no homem ou nos animais e que possuem potencial de
propagao limitada na comunidade e no meio ambiente. Alm
disso, para esses agentes existem medidas teraputicas e profilticas
eficazes. Exemplos: Schistosoma mansoni, Entamoeba histolytica.
Classe de risco 3: risco individual alto e risco moderado para a comunidade compreende os agentes biolgicos potencialmente letais que podem ser transmitidos por via respiratria para o homem
ou animais, causando patologias para as quais existem usualmente
medidas de tratamento e/ou de preveno. Se disseminados na
comunidade e no meio ambiente, representam risco de grau moderado, visto que podem se propagar de pessoa a pessoa. Exemplos:
Bacillus anthracis, Mycobacterium tuberculosis.
Classe de risco 4: alto risco individual e para a comunidade
compreende os agentes biolgicos de transmisso desconhecida
ou com grande poder de transmissibilidade por via respiratria.
No se conhece at o momento nenhuma medida profiltica ou
teraputica eficaz contra sua infeco. Causam graves doenas
em humanos e animais, com alta capacidade de disseminao
na comunidade e no meio ambiente. Essa classe inclui principalmente os vrus. Exemplos: vrus Ebola, vrus Marburg.
Classe de risco especial: alto risco de causar doena animal
grave e de disseminao no meio ambiente compreende
agentes biolgicos de doena animal no existentes no pas,
e que, embora no sejam obrigatoriamente patgenos de importncia para o homem, podem gerar graves perdas econmicas e/ou na produo de alimentos. Exemplos: vrus da clera
suna, vrus da peste aviria.
117
2.2.2 Observaes sobre a classificao dos agentes biolgicos
Quando mais de uma espcie de um mesmo gnero tem potencial

patognico, sero apontadas aquelas mais importantes. As demais sero
representadas pelo nome do gnero seguido da denominao sp., com
a qual se indica que outras espcies do gnero podem ser patognicas.
A classificao de parasitas e as medidas de conteno associadas
a eles aplicam-se apenas para os estgios de seus ciclos em que eles
sejam infecciosos para o homem ou os animais.
Os agentes pertencentes classe especial precisam ser manuseados
obrigatoriamente em laboratrio com nvel de biossegurana 4 (NB-4)
antes de circularem no pas, devendo ter sua importao limitada
e sujeita prvia licena das autoridades competentes. Caso sejam
isolados dentro do territrio nacional, devero ser tratados no laboratrio com nvel de biossegurana determinado pelos critrios que
orientam seu nvel de risco.
Nessas classificaes, foram considerados somente os possveis efeitos
dos agentes em indivduos sadios. Os possveis efeitos em casos de portadores de transtornos imunolgicos, com patologia prvia, em uso de
medicao, durante a gravidez ou em fase de lactao no foram avaliados.
O estabelecimento de uma analogia direta entre a classe de risco do
agente biolgico e o nvel de biossegurana uma dificuldade frequente
no momento de definir o nvel de conteno. Por exemplo, estabelecer que,
para os agentes biolgicos da classe de risco 3, deve-se trabalhar em um laboratrio NB-3, sem considerar o procedimento diagnstico que ser utilizado, pode culminar em gastos desnecessrios, o que remonta ao que foi
dito no incio deste captulo sobre gerncia, conhecimento e organizao.
Assim, dependendo da tcnica utilizada para a realizao do diagnstico,
um laboratrio NB-2 poderia ser suficiente nesse caso. Da mesma forma,
um agente de classe de risco 2 que deva ser cultivado em grandes concentraes ou volumes provavelmente vai requerer um laboratrio NB-3.
2.2.3 Nveis de biossegurana
Os laboratrios podem ser classificados de acordo com o nvel de

biossegurana, que est relacionado com as normas que eles devem
seguir, os equipamentos de segurana como EPIs e EPCs de que
devem dispor e o projeto arquitetnico do laboratrio.
118
preciso no confundir o nvel de segurana de um laboratrio

com o risco biolgico de qualquer microrganismo nele manipulado.
Mesmo que, em geral, se trabalhe com organismos altamente perigosos em laboratrios de alto nvel de biossegurana, no h qualquer
problema de se trabalhar com microrganismos de risco 1 nesses ambientes. O contrrio no verdadeiro, dado que microrganismos de
risco 3 ou 4 s devem ser manipulados com conteno.
Os laboratrios podem ser divididos em laboratrios bsicos ou de
conteno, e subdivididos de acordo com os nveis de biossegurana
em quatro nveis: NB-1 a NB-4. Podemos observar as mesmas categorias definidas com outras siglas, como P (proteo) ou BSL (biosafety
level), dependendo do pas em que est localizado o centro de pesquisa e da norma seguida por ele.
Esses nveis crescentes em razo do nvel de proteo e complexidade permitem avaliar em que ambiente mais adequada a manipulao deste ou daquele material de acordo com o risco e/ou o
microrganismo presente na amostra. Quando no se conhece o potencial patognico do material a ser manipulado, deve-se proceder
anlise criteriosa de todas as condies experimentais a fim de se
determinar o ambiente adequado (Fundao Oswaldo Cruz, 1998).
Como j foi dito, entre as regras bsicas para o trabalho em qualquer nvel de biossegurana laboratorial, esto as de considerar todo
material biolgico como infeccioso, trabalhar sempre com muita
ateno, sempre lavar as mos aps os procedimentos, nunca sair do
laboratrio com jaleco (ou avental), nunca pipetar com a boca, sempre observar os sinais de aviso de risco e relatar qualquer acidente
imediatamente ao supervisor do laboratrio. Alm disso, o treinamento quanto s precaues e aos procedimentos de biossegurana
indispensvel.
Laboratrios bsicos: nveis de biossegurana 1 e 2
A denominao laboratrio NB-1 se aplica geralmente aos laboratrios de ensino bsico, para os quais no exigido nenhum projeto
arquitetnico especial, mas sim um bom planejamento espacial e funcional, com a adoo de boas prticas laboratoriais. Nesses ambientes,
geralmente so manipulados somente microrganismos pertencentes
classe de risco 1.
119
A designao laboratrio NB-2 se aplica comumente aos laboratrios clnicos ou hospitalares de nveis primrios de diagnstico. Alm
das boas prticas, preciso que esse tipo de laboratrio adote o uso de
barreiras fsicas, como cabine de segurana biolgica e equipamentos de proteo individual; o desenho, as instalaes e a organizao
do laboratrio tambm possuem regras obrigatrias mais consistentes que as do laboratrio NB-1, como sistema eltrico de emergncia,
acesso restrito a pessoas autorizadas, portas automticas e estrutura
fsica de fcil higienizao.
Laboratrios de conteno: nveis de biossegurana 3 e 4
O laboratrio NB-3 considerado de conteno. Para esse tipo de laboratrio, so requeridos, alm dos itens referidos no nvel de biossegurana 2, desenho e construo laboratoriais especiais, como ventilao
prpria com presso negativa e instalao de filtros HEPA (do ingls
high-efficiency particulate air) nas entradas e sadas de ar, com preveno de refluxo. Deve ser mantido controle rigoroso quanto operao,
manuteno e inspeo das instalaes e equipamentos. Alm disso, o
pessoal tcnico no pode trabalhar sozinho e deve receber treinamento especfico sobre procedimentos seguros na manipulao de grandes
volumes e altas concentraes de microrganismos da classe de risco 2,
bem como para microrganismos de risco 3, uma vez que laboratrios
desse nvel de biossegurana tm autorizao para manipular agentes desse grupo de risco. O laboratrio tambm deve contar com reas
separadas para a troca de roupa e deve-se utilizar protetor para os sapatos; em alguns casos, recomendado o uso de dois pares de luvas na
manipulao do material (Fundao Oswaldo Cruz, 1998).
O laboratrio NB-4 o de nvel de conteno mais alto. Nesse ambiente, a fonte de todo o ar provido aos profissionais deve ser externa
ao laboratrio, e o controle de entrada e sada da ventilao deve ser
feito com filtro absoluto tipo HEPA. A manipulao ocorre em cmaras de segurana biolgica de nvel 3. Alm disso, o laboratrio deve
estar posicionado geograficamente em reas que ofeream menor probabilidade de disperso de agentes de alto risco e ser funcionalmente
independente de outras reas necessrias s boas prticas, como centrais de preparao de material. Esses laboratrios requerem, alm
dos requisitos fsicos e operacionais dos nveis de conteno 1, 2 e 3,
120
barreiras de conteno (instalaes, desenho e equipamentos de proteo) e procedimentos especiais de segurana, como autoclaves de
porta dupla e tratamento obrigatrio do esgoto. Somente nesse tipo
de laboratrio podemos trabalhar com microrganismos da classe de
risco 4.
2.2.4 Resduos provenientes do laboratrio e seu descarte correto
Como comentado anteriormente, todo e qualquer material, seja

ele biolgico, qumico ou de outra categoria, deve ser avaliado quanto ao risco para a sade do ambiente e para os seres vivos. Todavia,
devemos nos preocupar com essas substncias no s no mbito do
laboratrio e de sua manipulao, mas tambm no que diz respeito
sua disposio na forma de resduo. A classificao inicial dos tipos de
resduos de servios de sade foi estabelecida pela RDC n 33/2003, da
qual, aps longa discusso tcnica, originou-se a RDC n 306/2004.
Essa resoluo aplica-se a todos os resduos gerados pela rea da sade, inclusive em trabalhos de campo e nos servios de acupuntura e
tatuagem. Essa resoluo s no se aplica aos resduos de fontes radioativas seladas, que so da alada da Comisso Nacional de Energia
Nuclear (CNEN).
importante, nesse caso, a existncia de um plano gestor (manejo,
segregao, acondicionamento, identificao, coleta, armazenamento,
transporte, tratamento e disposio final de todos os resduos) por parte
do estabelecimento gerador; esse plano deve ser composto de tcnicas,
processos e procedimentos que assegurem a minimizao de riscos ao
ambiente e sade pblica. A disposio dos resduos deve considerar a
responsabilidade solidria entre gerador e poder pblico.
Classificao dos diferentes tipos de resduo
Grupo A resduos com a presena de agentes biolgicos potencialmente infectantes, identificados pelo smbolo da substncia infectante (constante da NBR-7500 da ABNT);
Grupo B resduos contendo substncias qumicas (resduos qumicos), identificados pelo smbolo de risco associado, de acordo
com a NBR-7500 da ABNT, e com a discriminao da substncia
qumica e frases informando o tipo de risco;
121
Grupo C resduos com radionucldeos (rejeitos radioativos) (norma CNEN-NE-6.02);

Grupo D resduos comuns;
Grupo E materiais perfurocortantes, com presena de agentes
biolgicos; devem ser acrescidos da inscrio perfurocortante.
Classificao dos resduos slidos
Grupo A risco potencial sade pblica e ao meio ambiente decorrente de agentes biolgicos:
sangue, hemoderivados, bolsas de sangue etc.;
animais de experimentao, carcaas e vsceras, e materiais
contactantes (cama e forraes);
excrees, secrees e lquidos orgnicos (quando coletados);
meios de cultura e vacinas;
material descartvel que tenha tido contato com matria orgnica, como esparadrapo, gaze, gesso, luvas etc.;
membros humanos, produtos de fecundao e peas anatmicas;
resduos de reas de isolamento: fraldas, papis sanitrios,
absorventes higinicos etc.;
filtros de gases aspirados e de aparelhos de ar condicionado
de reas de isolamento;
resduos de laboratrios de anlises clnicas ou ambulatrios;
lodo de tratamento de esgoto de unidades de sade;
resduos do grupo D (ver abaixo) contaminados por material biolgico.
122
Grupo B risco potencial sade pblica e ao meio ambiente decorrente das caractersticas qumicas do resduo:
quimioterpicos e materiais descartveis por eles contaminados;
perfurocortantes contaminados com quimioterpico ou outro
produto qumico;
resduos farmacuticos: droga vencida, contaminada, interditada ou no utilizada;
antimicrobianos e hormnios sintticos;
mercrio de amlgamas e outros resduos de metais pesados;
saneantes e domissanitrios;
lquidos reveladores de filmes;
resduos do grupo D (ver abaixo) contaminados por material qumico;
demais produtos considerados perigosos pela norma da
ABNT NBR-10004, tais como resduos txicos, corrosivos,
inflamveis e reativos.
Grupo C risco potencial sade pblica e ao meio ambiente decorrente das caractersticas radioativas do resduo:
rejeitos radioativos, materiais radioativos ou contaminados
com radionucldeos provenientes de laboratrios de anlises clnicas ou de servios de medicina nuclear e radioterapia, em conformidade com a norma CNEN-NE-6.05;
servios com atividade em medicina nuclear devem observar ainda a norma CNEN-NE-3.05;
todos os resduos dos grupos A, B e D contaminados por
radionucldeos: seringas, frmacos, compressas, vestimenta,
luvas, sapatilhas etc.
123
Grupo D resduos comuns e todos os que no se enquadrem nos

grupos anteriores, porm, quando gerados em estabelecimentos de
sade de reas endmicas definidas pelo Ministrio da Sade sero
considerados como do tipo A:
sobras de alimento que tenham tido contato com secrees,
excrees e outros fluidos corpreos (excluem-se os alimentos provenientes de reas de isolamento);
papis sanitrios de funcionrios ou pacientes que no estejam em rea de isolamento;
embalagens secundrias de quaisquer medicamentos ou de produto mdico-hospitalar, frascos plsticos de soros, vidros ou plsticos de medicamentos ou outro produto no includo no grupo
B (aps o esvaziamento, so considerados materiais reciclveis).
Grupo E risco potencial sade pblica e ao meio ambiente em
decorrncia do risco associado a caractersticas perfurocortantes:
materiais perfurocortantes, como objetos e instrumentos contendo cantos, bordas, pontos ou protuberncias rgidas e agudas capazes de cortar ou perfurar: lmina de barbear, bisturi,
agulhas, escalpes, ampolas, pipetas, vidro quebrado etc.; podem
ser descartados separadamente, no local de sua gerao, imediatamente aps o uso, em recipientes com tampa, de paredes
rgidas, resistentes no s a punctura, ruptura e vazamento,
mas tambm ao processo de esterilizao, devidamente identificados com o smbolo internacional de risco biolgico acrescido da inscrio perfurocortante e de informao sobre os
riscos adicionais, qumico ou radiolgico.
Gerenciamento de resduos
Aps a segregao, deve-se proceder ao acondicionamento dos resduos seguindo a RDC n 306:
agulhas descartveis (grupo E) devem ser desprezadas juntamente com as seringas, quando descartveis, sendo proibido
reencap-las ou proceder sua retirada manualmente
124
recipientes coletores para resduos do grupo E devem ser confeccionados em material resistente desenvolvido especialmente para a
utilizao em servios de sade e possuir desconectador de agulhas;
o volume dos recipientes coletores ou de acondicionamento deve
ser compatvel com a gerao diria desse tipo de resduo;
os recipientes devem ser preenchidos somente at dois teros de
sua capacidade, ou o nvel de preenchimento deve ficar a 5 cm
de distncia da boca do recipiente;
os recipientes coletores devem estar localizados o mais prximo
possvel da rea de uso dos materiais a serem descartados neles;
expressamente proibido o esvaziamento desses recipientes para
o seu reaproveitamento;
resduos slidos dos grupos A, B e C devem ser dispostos em sacos
biodegradveis de cor branco-leitosa, com rtulos do smbolo de
risco biolgico e a expresso resduo biolgico, resduo txico
ou resduo radioativo de acordo com as suas caractersticas;
no caso de resduos classificados no grupo D, eles devem ser
acondicionados em sacos plsticos transparentes de cor clara,
exceto branca;
a identificao de resduos do grupo D destinados reciclagem
ou reutilizao deve ser feita nos recipientes e nos abrigos
de guarda de recipientes, usando-se o cdigo de cores, e suas
correspondentes nomeaes, baseado na resoluo do Conselho Nacional do Meio Ambiente (Conama) n 275/2001 (Brasil,
2001c), e smbolos do tipo de material reciclvel:
I azul: papis
II amarelo: metais
III verde: vidros
IV vermelho: plsticos
V marrom: resduos orgnicos
VI cinza: demais resduos do grupo D.
125
No caso das cores das lixeiras utilizadas para segregar o material a

ser reciclado, segue-se a mesma lgica de cores e numerao; apenas
no item VI, lixeiras que contm refugos que devem ser enviados ao
aterro sanitrio, a cor cinza substituda por preto.
Tipo de
resduo
Grupo
A1
Biolgico
Descrio
Acondicionamento
Resduos que necessitam

de tratamento prvio
(autoclavao);
Sobras ou amostras
utilizadas para exames
imunohematolgicos;
Segmentos de
hemocomponentes
utilizados para provas de
compatibilidade;
Soroteca de pacientes e
plasmateca de doadores.
Lixeira com tampa e pedal;

Identificar, na frente, com
smbolo de risco biolgico;
Tampa: deve trazer etiqueta
com descrio dos resduos;
Saco branco-leitoso, com
Recolhimento quando atingir
2/3 de sua capacidade ou ao
menos uma vez por dia.
Grupo
A4
Biolgico
NO necessitam tratamento
prvio:
luvas;
algodo;
gaze;
cartes e microplacas
usadas em exames
imuno-hematolgicos em
doadores e pacientes.

Identificar na frente com
Saco branco-leitoso, com
2/3 de sua capacidade ou ao
menos uma vez por dia.
Grupo D
Resduos que no apresentam

risco biolgico e podem
ser equiparados a resduos
domiciliares:
papel higinico;
papel-toalha utilizado para
secar as mos;
material administrativo;
sobras de alimentos;
resduos provenientes
da copa.

Identificar na parte da frente
com smbolo de lixo comum.
Saco plstico;
2/3 de sua capacidade.
126
Grupo E
Resduo perfurocortante
com risco biolgico:
agulhas;
seringas;
lancetas;
tubos de vidro;
frascos de vidro vazio;
tubos quebrados
todo material com
risco de acidente
perfurocortante
ou escarificante.
Coletor de perfurocortante:
recipientes rgidos, resistentes
a punctura, ruptura e
vazamentos, com smbolo de
resduo biolgico e inscrio
resduo biolgico, acrescida de
perfurocortante.
As caixas ou recipientes devem
ser lacrados quando atingirem
2/3 de sua capacidade e
colocados em saco brancoleitoso, com smbolo de risco
biolgico.
2.2.5 Acidente de trabalho por materiais perfurocortantes
Segundo Shimizu e Ribeiro (2002), a principal causa de contato

acidental com materiais biolgicos em laboratrio so agulhas contaminadas. Segundo esses autores, diversos estudos mostram que os
acidentes provocados por agulhas resultam, geralmente, da prtica de
reencape de agulhas antes do descarte, do uso de luvas de procedimentos de tamanho incorreto, da falta de habilidade e concentrao
do tcnico e da agitao psicomotora do paciente.
Um alerta dessa pesquisa diz respeito ao baixo registro oficial
de acidentes, aumentando, com isso, a subnotificao dos acidentes causados por materiais perfurocortantes e fluidos biolgicos. Os
autores atribuem esse problema pouca importncia que os profissionais da equipe de sade do a esse tipo de acidente, por causa da
percepo equivocada de que a leso pequena e que, por isso, no
ocasionar danos para a sua sade.
Em relao aos agentes biolgicos, Shimizu e Ribeiro (2002) destacam
estudos que mostram que a cada 1.000 punes acidentais ocorrem de 1
a 4 soroconverses positivas para o vrus da imunodeficincia humana
(HIV). J a contaminao de profissionais de sade por vrus da hepatite B (HBV), por causa do seu grande poder infectante, bem mais
alta, com um risco mdio de infeco de cerca de 3%. As consequncias da infeco pelo HBV so muito variveis, e o indivduo infectado
pode vir a se tornar um portador assintomtico (Stephens et al., 2009).
No entanto, esse fato atenuado pela existncia de vacina contra a he127
patite B, que faz parte do calendrio obrigatrio para os trabalhadores

da sade. O vrus da hepatite C, segundo essa mesma pesquisa, tem um
ndice de infeco um pouco mais baixo, ficando em torno de 1,8%.
Infelizmente, ainda no existe vacina para a hepatite C.
No caso de acidente com materiais perfurocortantes que contenham fluidos biolgicos, o profissional orientado pelo servio mdico a avaliar a necessidade de iniciar o tratamento contra HIV (entre 1
a 2 horas aps o acidente) enquanto a amostra ainda est sendo analisada. Caso a mesma seja positiva para HIV, o trabalhador deve dar
continuidade ao tratamento com orientao mdica. A durao da
quimioprofilaxia , em mdia, de um ms (Brasil, 2001a). A indicao do uso de antirretrovirais deve ser baseada em uma avaliao criteriosa do risco de transmisso do HIV em funo do tipo de acidente
ocorrido e da toxicidade dessas medicaes (Maia, 2002, p. 21).
O vrus da hepatite D defectivo, pois necessita do vrus da hepatite B para se replicar e, por isso, s pode ser adquirido junto com o
vrus da hepatite B (coinfeco) ou por portador crnico desse tipo de
hepatite. As vias de transmisso so semelhantes s do vrus da hepatite B, sendo a exposio percutnea a mais importante. As medidas
de controle so as mesmas utilizadas para a hepatite B, inclusive a
vacina (Stephens et al., 2009).
A Sociedade Brasileira de Infectologia e o CDC tm demonstrado preocupao com os acidentes causados por agulhas, sobretudo no que se refere notificao e monitorao dos acidentados, bem como adoo de
medidas-padro pelos trabalhadores da sade, visando preveno tanto
da transmisso do vrus HIV quanto das hepatites B e C.
Nessa perspectiva, listamos a seguir, sob a forma de itens, as recomendaes sobre biossegurana baseadas principalmente em publicao da Organizao Mundial de Sade (2004).
O principal ponto para a prtica da segurana biolgica a avaliao dos riscos. Para isso, o responsvel pelo laboratrio deve
assegurar-se da realizao de avaliaes de riscos adequadas e
trabalhar em estreita ligao com a comisso de segurana e o
pessoal da instituio, a fim de assegurar a disponibilidade de
equipamento e instalaes apropriadas para apoiar as atividades em questo.
128
Nunca pipetar com a boca. Existem os mais diversos formatos

de dispositivos que podem ser acoplados pipeta e, com isso,
proporcionar um procedimento seguro e eficaz.
obrigatrio utilizar cmaras de segurana biolgica sempre
que se manuseie material infeccioso, principalmente se houver
alto potencial de produo de aerossis.
importante que as autoclaves e as cmaras de segurana biolgica sejam validadas com mtodos apropriados antes de serem
utilizadas. A recertificao deve ser feita, segundo as instrues
do fabricante, a intervalos peridicos.
Deve ser feito um cronograma de vacinao para o pessoal que
trabalha nos laboratrios, constando as vacinas obrigatrias para
a rea da sade, tais como vacina contra hepatite B e antitetnica. Alm disso, preconizada a vacinao especial para determinados servios, tais como vacina antirrbica, para profissionais
que trabalham com experimentao animal, e vacina contra febre amarela, para profissionais que trabalham na produo desse
imunobiolgico. Cada peculiaridade do servio deve ser avaliada
por uma comisso mdica.
importante que haja vigilncia apropriada da sade do pessoal do laboratrio, de modo a se detectarem precocemente
infeces adquiridas no local; alm disso, deve haver regras
rgidas visando excluir as pessoas altamente susceptveis (mulheres grvidas e pessoas imunodeficientes) de trabalhos laboratoriais de alto risco.
essencial assegurar uma formao contnua in loco sobre medidas de segurana. Um programa eficaz nessa rea comea pelos
responsveis dos laboratrios, que devem assegurar a integrao de
prticas e procedimentos laboratoriais seguros na formao bsica
do pessoal.
A esterilizao pelo calor, em autoclave, o mtodo preferencial
para todos os processos de descontaminao.
129
Deve-se adotar um sistema de identificao e separao de materiais e recipientes infecciosos que siga os regulamentos nacionais e internacionais de descarte.
As agulhas hipodrmicas, uma vez utilizadas, no devem ser
reintroduzidas nos seus invlucros, partidas ou retiradas das
seringas descartveis. Todo o conjunto deve ser colocado num
recipiente para descartveis.
As seringas descartveis utilizadas, com ou sem agulhas, devem
ser colocadas em recipientes para descartveis e incineradas,
aps descontaminao em autoclave.
preciso preparar e implantar programa especfico sobre proteo biolgica em laboratrio segundo as exigncias do servio, o
tipo de trabalho realizado e as condies locais.
As precaues de segurana, tal como tcnicas de assepsia e prticas microbiolgicas seguras, devem fazer parte do trabalho de
rotina de laboratrio.
Deve estar afixada no laboratrio uma cpia dos procedimentos
necessrios em caso de derrames; todo o pessoal do laboratrio
deve ler e compreender esses procedimentos.
2.2.6 Checklist recomendado pela Organizao Mundial de Sade (2004)
para o trabalho em laboratrio
1) Para o seu trabalho normal, todos os profissionais dispem de

roupa de proteo, com modelos e tecidos aprovados, tais como
batas, jalecos, aventais, luvas?
2) Para trabalhar com produtos qumicos perigosos, o pessoal dispe de roupa e equipamento de proteo suplementar?
3) Os trabalhadores dispem de culos de proteo e protetor facial?
4) Existem locais para lavagem dos olhos?
5) Existem chuveiros de emergncia?
130
6) A proteo contra radiaes est de acordo com as normas nacionais e internacionais, inclusive com o fornecimento de dosmetros?
7) O laboratrio dispe de mscaras respiratrias que so regularmente limpas, desinfetadas, verificadas e guardadas em condies
de limpeza e higiene?
8) Essas mscaras so providas de filtros apropriados por exemplo,
filtros HEPA para reteno de microrganismos e filtros especiais
para gases e partculas?
9) As mscaras se adaptam bem aos seus usurios (conforto e
utilidade)?
2.2.7 Equipamentos de proteo individual
Com o objetivo de aplicar a norma regulamentadora NR6, o texto

da portaria da Secretaria de Inspeo do Trabalho (SIT) n 25, de 15 de
outubro de 2001 (Brasil, 2001d), considera equipamento de proteo
individual todo dispositivo ou produto, de uso individual pelo trabalhador, destinado proteo de riscos capazes de ameaar a segurana e a
sade no trabalho.
Para a comercializao de EPIs, necessrio atender a essa norma e obter um certificado de aprovao, que dever ser expedido/
renovado/fiscalizado por rgo competente em segurana e sade no
trabalho do Ministrio do Trabalho e Emprego. O mesmo rgo deve
definir os prazos de validade desses certificados, cabendo ao fabricante desses itens providenciar instrues em portugus, incluindo
orientao de utilizao e manuteno e restries de uso.
Compete ao Servio Especializado em Engenharia de Segurana e em
Medicina do Trabalho (SESMT) ou comisso interna de preveno de
acidentes (Cipa), nas empresas desobrigadas de manter o SESMT, recomendar ao empregador o EPI adequado ao risco existente em determinada atividade.
Criado em 17 de dezembro de 1996, o Conselho Deliberativo da ABNT
aprovou, em reunio ordinria, a criao do Comit Brasileiro de Equipamentos de Proteo Individual (ABNT/CB-32), visando agilizar a elaborao e a reviso das normas de equipamentos de proteo individual.
131
Fazem parte da lista de EPIs de uso em laboratrios jalecos ou roupas de proteo, mscaras cirrgicas e com filtros, proteo auditiva,
luvas de segurana, culos de segurana e protetor facial.
a) Avental ou roupas de proteo
Os jalecos devem ser de algodo, com mangas longas e comprimento na altura do joelho; os profissionais de laboratrio devem usar cala
comprida e jaleco de manga longa, de tecido resistente e cor clara, especfico para uso do funcionrio do servio, de forma a identific-lo de
acordo com a sua funo; sugere-se que esses EPIs devem ser descontaminados antes da lavagem, e que se a lavagem ocorrer na residncia do trabalhador, o mesmo deve realiz-la de forma individual e no
juntamente com outras roupas que no sejam de servio; os aventais
devem ficar no ambiente do laboratrio e no devem ser utilizados fora
do servio em espaos comuns, como corredores e refeitrios; aventais descartveis no protegem contra substncias qumicas, so altamente inflamveis e devem ser usados uma nica vez.
b) Luvas
Existem quatro parmetros para medir a eficcia das luvas:
1) bloqueio: capacidade de impedir o contato;
2) permeao: velocidade com que um produto passa atravs da mesma;
3) tempo de resistncia: tempo decorrido entre o contato inicial com
o lado externo da luva e a deteco do produto na parte interna
da luva;
4) degradao: mudanas em quaisquer propriedades fsicas da luva.
Materiais (nenhuma luva pode proteger de todos os produtos):
ltex: adequadas proteo biolgica e para uma ampla variedade
de solventes orgnicos, cidos e bases; todavia, so permeveis
em diferentes graus a produtos qumicos;
nitrlica: inadequadas para solues aquosas; indicadas para uso
prolongado com alguns produtos qumicos, sendo consideradas
de bom uso em solventes aromticos e halogenados;
132
PVA: bom uso para cidos e bases, ruim para a maioria dos solventes orgnicos;
PVC: bom uso para cidos, bases, perxidos, hidrocarbonetos,
alcois e fenis, e ruim para solventes aromticos e halogenados;
neoprene: bom uso para cidos e bases diludos, pssimas para
solventes orgnicos.
c) Equipamentos de proteo ocular e facial
So utilizados para proteo contra impactos de partculas, luminosidade intensa, radiao ultravioleta ou radiao infravermelha. A norma tcnica aplicvel a ANSI.Z.87.1/1989 (Fundao Oswaldo Cruz,
2003a). Os culos devem ser usados em todas as atividades de risco,
como manipulao de produtos biolgicos e de produtos qumicos,
alm daquelas que portam risco de radiao nesse caso, so recomendados culos especiais, com indicao de proteo contra radiao.
Caractersticas:
no devem distorcer as imagens ou limitar o campo visual;
devem ser resistentes aos produtos que sero manuseados;
devem ser confortveis e de fcil limpeza e conservao;
devem ter lente panormica incolor, ser de plstico resistente e
atxico, com armao flexvel e proteo lateral.
d) Mscaras e respiradores
Por causa da similaridade visual de certos respiradores descartveis e
de muitas mscaras cirrgicas e de procedimento, suas diferenas nem
sempre so bem entendidas. Entretanto, eles so muito diferentes na vedao facial, no tempo de uso e, principalmente, na finalidade de uso.
Os respiradores so projetados para auxiliar na reduo da exposio
respiratria do usurio a contaminantes dispersos no ar, tais como partculas, gases ou vapores. Alguns tipos so capazes de reter partculas menores que 100 m de tamanho. Isso inclui aerossis que podem conter
material biolgico, como fungos Bacillus anthracis e Mycobacterium
133
tuberculosis e vrios vrus. As mscaras cirrgicas e de procedimento

no tm propriedades de filtrao ou vedao facial adequadas para
fornecer proteo respiratria ao usurio. So usadas para ajudar a prevenir a contaminao do ambiente de trabalho ou campo estril com
partculas grandes geradas pelo usurio por exemplo, saliva e muco.
Mscaras cirrgicas tambm podem ser usadas para ajudar a reduzir o
risco de projees ou respingos de sangue, fluidos corpreos, secrees e
excrees atingirem a boca ou o nariz do usurio.
A utilizao correta desses EPIs recomendada, juntamente com
as capelas de exausto, sempre que no laboratrio forem manuseadas
substncias qumicas com alto teor de evaporao, ou na presena de
alta contaminao biolgica. Elas podem ser de proteo total (boca,
nariz e olhos) ou proteo facial (boca e nariz).
Quando necessrio, devem estar disponveis no laboratrio respiradores com filtros de acordo com a necessidade de uso, e os filtros
fora da validade ou que estejam saturados devem ser obrigatoriamente
substitudos por novos.
Quadro 4. Particularidades e diferenas entre mscaras e respiradores.
Mscara cirrgica
Composio
Tipo de
proteo
Respirador
Em geral tripla camada de

no tecido.
Tripla camada de no tecido e

filtro especial com tratamento
eletrosttico.
Protege de infeces por

inalao de gotculas.
Protege de infeces por inalao

de aerossis contendo agentes
biolgicos (vrus, bactrias, fungos).
Reduz o risco de projees

ou respingos de sangue,
fluidos corpreos e
secrees atingirem a
boca e o nariz do usurio.
Reduz o risco de projees ou

respingos de sangue, fluidos
corpreos e secrees atingirem
a boca e o nariz do usurio.
Minimiza a contaminao
Minimiza a contaminao
do ambiente com secrees do ambiente com
respiratrias (por exemplo, secrees respiratrias.
saliva e muco).
Certificaes e Possui registro no
registros
Ministrio da Sade.
No considerado pela
Anvisa um equipamento
de proteo respiratria.
134
Considerado pela Anvisa

equipamento de proteo
respiratria desde que com o
certificado de aprovao emitido
pelo Ministrio do Trabalho e com
registro do Ministrio da Sade.
Descarte
Imediato, aps
Imediato, aps atendimento,
atendimento, sendo
sendo importante a lavagem das
importante a lavagem das mos aps o descarte.
mos aps o descarte.
Recomendao Normalmente
de uso
recomendado por
enfermeiros/mdicos
do setor de controle de
infeco.
Diferenas
de uso
Composta por um filtro

comum, chamado de no
tecido. Pode ter uma ou
mais camadas.
Proteo mais limitada
porque a vedao no
rosto precria nesse
tipo de mscara
Normalmente recomendado
por profissionais de segurana
do trabalho que detm
conhecimento de programas de
proteo respiratria e/ou por
enfermeiras do setor de controle
de infeco.
tecnicamente denominada
respirador. formada por
filtros especiais com poder de
filtrar partculas extremamente
pequenas, como o caso de
vrus, bactrias e outros agentes
biolgicos. Proteo mais
adequada, porm exige o uso
correto, especialmente quanto
ao ajuste no rosto.
Tambm so considerados
respiradores outros
equipamentos com outros nveis
de proteo, como respiradores
com filtros qumicos, respiradores
motorizados, equipamentos de
ar mandado.
Fonte: 3M do Brasil, 2009.
e) Protetores auditivos
So recomendados para uso em locais cujos nveis de presso sonora
sejam superiores aos estabelecidos pela NR15 (anexo I e II), podendo ser
conjugados com capacete e protetor facial (Fundao Oswaldo Cruz,
2003b). Seu uso em laboratrios s est indicado nos casos em que
existam equipamentos que produzam alto grau de rudo, tais como
centrfugas, exaustores e cabines de segurana. Nos bancos de sangue, esse tipo de risco no representa um grave problema; no entanto,
os protetores auditivos devem ser fornecidos ao trabalhador caso ele
solicite (norma tcnica aplicvel: ANSI.S.12.6/1997).
2.2.8 Equipamentos de proteo coletiva (EPCs)
Esses equipamentos, tambm destinados a proteger a integridade

fsica dos profissionais ou minimizar os efeitos de um agravo, no pro135
tegem necessariamente ao mesmo tempo toda a equipe de trabalho

(como um exaustor); muitas vezes so apenas de uso coletivo (como no
caso do chuveiro).
a) Chuveiros e lava-olhos
Chuveiros e lava-olhos de emergncia ou segurana so equipamentos
especificamente projetados para fornecer um fluxo de gua abundante e
de baixa presso, suficiente para remover qualquer tipo de contaminante
ou calor, sem causar o agravamento de possveis leses.
Os lava-olhos podem estar acoplados ao chuveiro ou ter forma de
bisnagas de presso, que so recipientes portteis pequenos, feitos
de material flexvel e que projetam fluxos de gua quando apertados,
prestando-se ao objetivo de livrar os olhos de partculas e contaminantes sem necessidade de instalao hidrulica no local de trabalho.
Por serem equipamentos de emergncia, devem estar preparados
para uso imediato a qualquer instante, estando sempre presentes em
locais de manuseio de produtos qumicos e em situaes de risco de
contaminao ou de queimaduras por calor.
b) Cabines de segurana biolgica (CBSs) e fluxos laminares2
As cabines de segurana biolgica e as capelas de fluxo laminar so
usadas para manipulao de agentes biolgicos, produo de diluentes
e imunobiolgicos, meios de cultura e diversos materiais que precisam
ser processados em ambiente estril. Alm disso, algumas capelas de fluxo laminar, no apenas protegem o operador da exposio de produtos
biolgicos, como tambm precisam garantir a segurana do produto e do
ambiente. Existem diferentes modelos de cabines, mas todos possuem
filtros absolutos ou filtros HEPA, que apresentam alta eficincia no
mnimo 99,97% de partculas com at 0,3 m coletadas e devem ser
substitudos periodicamente, de acordo com a sua saturao.
Os fluxos, chamados de bancada limpa, podem ser encontrados
em dois modelos, que no so de cmaras de biossegurana, pois ou liberam ar filtrado (HEPA) para a superfcie de trabalho ou para o operador:
a) fluxo vertical: protege, principalmente, o operador das substncias que ele est manuseando;
2
Parte do texto deste item foi reproduzida de Oliveira e Nogueira, 2009.
136
b) fluxo horizontal: protege, principalmente, o produto que est

sendo processado; somente podem ser envasados ou manipulados materiais que no apresentem riscos de contaminao para
o operador.
As cabines se segurana biolgica podem ser divididas em trs
classes, sendo que a classe II tem vrias subdivises:
Classe I: fornece segurana pessoal e ambiental, mas no do produto, funcionando como uma coifa provida de filtro HEPA para
proteo ambiental; sua utilidade no laboratrio muito limitada;
geralmente usada para acondicionar equipamentos que podem gerar aerossis, como centrfugas.
Classe II: essa classe, que engloba cabines que fornecem proteo
pessoal, ambiental e do produto, pode ser subdividida em vrios
tipos (A, B1, B2 e B3). O ar captado pela grelha frontal, protegendo o operador, e passa por filtros HEPA, diminuindo a contaminao na superfcie interna de trabalho. Na cmara de tipo
A, a mais comum nos laboratrios brasileiros por causa do fator
custo/benefcio, o ar filtrado recirculado ao laboratrio. Nas cmaras do tipo B, o ar eliminado para o exterior do prdio. Dentre
as do tipo B, a B1 a mais simples, funcionando como a do tipo A,
porm com exausto externa. No tipo B2, no h nenhuma recirculao de ar dentro da cmara; o ar filtrado na entrada, com reteno
biolgica e qumica, e antes de ser eliminado para o exterior. Na B3,
a cmara mais cara dessa categoria, o cuidado para no haver nenhum tipo de vazamento de resduo qumico ou biolgico maior,
protegendo o ambiente com maior eficcia.
Classe III: fornece proteo mxima para o ambiente e o operador;
construda para atividades NB4, fechada hermeticamente e possui visor fixo e luvas resistentes de borracha acopladas. Seu acesso
feito por caixa de porta dupla, que poder ser descontaminada aps
a operao. Alm dos filtros, possui um incinerador de ar.
137
c) Capelas de exausto3
Equipamento imprescindvel em laboratrios onde se manuseiem
produtos qumicos ou particulados, a capela de exausto tambm pode
ser chamada de capela qumica ou gabinete de exausto. um gabinete que deve ser ventilado e projetado de forma que o sistema leve
para fora do edifcio os efluentes indesejveis provocados por qualquer procedimento efetuado no seu interior.
O sistema de exausto da capela s deve ser desligado 10 a 15 minutos aps o trmino dos trabalhos, para que todos os gases sejam
exauridos. Ao fazer operaes nas capelas, deve-se manter as janelas
das mesmas com o mnimo de abertura possvel, deixando na capela
apenas o material a ser analisado.
d) Extintor de incndio
Esse EPC de extrema importncia em qualquer ambiente de trabalho, e no s no laboratrio (mas nele principalmente). necessrio
identificar bem o tipo de incndio que se vai combater antes de escolher o agente extintor ou equipamento de combate ao fogo. Um erro
na escolha pode tornar intil o combate s chamas ou mesmo piorar a
situao, majorando ainda mais o fogo por espalhamento, ou criando
novas causas de incndio (curtos-circuitos). Os incndios, em seu incio, so relativamente fceis de controlar. Quanto mais rpido o ataque
s chamas, maiores sero as possibilidades de reduzi-las e elimin-las.
O aparelho contm diferentes tipos de produto ou uma mistura deles: gua, espuma, p qumico, dixido de carbono (CO2) e gases, entre
outros. Esses diferentes tipos de agentes extintores so usados de acordo
com o tipo especfico de incndio.
Classes de incndio
A: ocorrem em materiais de combusto fcil com a propriedade de
queimarem em sua superfcie e em profundidade, deixando resduos.
Exemplo: tecidos, madeira, papel, fibras etc.;
B: ocorrem em inflamveis e produtos que queimam somente
em sua superfcie, sem deixar resduos.
Exemplo: leos, graxas, vernizes, tintas, gasolina etc.;
3
Parte do texto deste item foi reproduzida de Oliveira e Nogueira, 2009.
138
C: ocorrem em equipamentos eltricos energizados.

Exemplo: motores, transformadores, quadros de distribuio,
fios etc.;
D: ocorrem em elementos pirofricos, aqueles que se inflamam
espontaneamente em contato com o ar.
Exemplo: magnsio, zircnio, titnio etc.
Uso e tipos de extintores portteis
o extintor tipo espuma usado em fogos classes A e B;
o extintor tipo dixido de carbono utilizado, preferencialmente, nos fogos classes B e C, embora possa ser usado tambm
nos fogos classe A em seu incio;
o extintor tipo qumico seco deve ser empregado nos fogos
classes B e C; as unidades de tipo maior, com 60 a 150 kg, devem
ser montadas sobre rodas;
nos incndios classe D, ser usado o extintor tipo qumico
seco, porm o p qumico ser especial para cada material;
o extintor tipo gua pressurizada ou gua-gs, com capacidade varivel entre 10 e 18 litros, deve ser usado em fogos classe A.
Em qualquer um desses casos de incndio, quando em um ambiente
tomado pela fumaa, deve-se usar um leno molhado para cobrir o nariz e a boca e sair rastejando, procurando respirar junto ao piso. Devese tambm molhar bem as roupas e manter-se vestido para se proteger.
Uma pessoa com as roupas em chamas deve ser obrigada a se jogar no
cho e ser envolvida em um cobertor, cortina etc.
2.3 Cuidados bsicos pessoais e de higiene no mbito do laboratrio
Cabelos: devem ser mantidos permanentemente presos na sua

totalidade; em reas de trabalho com riscos qumico e biolgico,
o uso do gorro obrigatrio.
139
Sapatos: devem ser exclusivamente fechados; no deve ser permitido o uso de sandlias dentro de reas hospitalares e laboratoriais. Em alguns casos, necessrio tambm a utilizao de
prop (sapatilha descartvel) ou sapato de uso exclusivo.
Joias e bijuterias: deve-se usar o mnimo possvel; no usar anis
com reentrncias ou incrustaes, nem pulseiras e colares.
Maquiagem: deve ser proibida, pois a rea laboratorial e hospitalar grande fonte de partculas que, na sua maior parte, so
aderentes, contendo glicerina, mica e titnio, entre outras substncias. Entre os produtos cosmticos, destacamos o batom, o
laqu e o rmel como fontes de contaminantes biolgicos.
Perfumes: devem ser evitados, porque so poluentes ambientais,
causam intolerncia em pacientes que esto com a sade debilitada
ou que fazem uso de medicamentos, como aqueles em tratamento de quimioterapia, podem causar enjoo nas mulheres grvidas,
agravar o estado de sade de muitos pacientes alrgicos, impregnar ambientes fechados que contenham filtros e afetar sistemas
de refrigerao.
Unhas: devem ser aparadas e bem cuidadas; preferencialmente,
no devem estar pintadas com esmalte, pois ele libera partculas
por microfraturas, principalmente em reas limpas e laboratrios de cultura celular.
2.4 Boas prticas de laboratrio
As boas prticas de laboratrio, conhecidas pelas siglas BPL ou GLP

(do ingls good laboratory practices), so definida pela Anvisa como um
sistema de qualidade relativo ao processo organizacional e s condies sob as quais estudos no clnicos referentes sade e ao meio ambiente so planejados, realizados, monitorados, registrados, arquivados e
relatados (Brasil, 2001b, p. 10). Os princpios das boas prticas de laboratrio so aplicveis a prticas que dizem respeito ao uso seguro de produtos relacionados sade humana, vegetal, animal e ao meio ambiente.
140
O conceito de boas prticas de laboratrio tem como alicerce quatro pilares, conhecidos como os quatros M, por causa das iniciais
dos termos homem, materiais, maquinrios e mtodos em ingls:
man, materials, machinery e methods. Esses pilares se referem a pontos estratgicos do laboratrio, os quais, por isso, merecem ateno
especial. No entanto, quem trabalha em laboratrios de sade sabe
que eles apresentam grande complexidade, fato que deve ser levado
em conta na hora de abordar as boas prticas de laboratrio. Listaremos a seguir os principais pontos (incluindo os quatro M):
a) Instalaes prediais: materiais utilizados para piso, teto e parede
devem ser fceis de limpar, no podem ter frestas e devem ser
resistentes ao uso de desinfetantes. Os cantos do teto e do cho
devem ser arredondados, para evitar o acmulo de sujeira e facilitar a limpeza e o uso de desinfetantes. A iluminao deve ser
feita por um nmero suficiente de luminrias de preferncia luminrias seladas para evitar o acmulo de sujeira , a fim de que
o ambiente fique bem claro. Em relao a esse ponto, importante lembrar que o contrrio tambm pode prejudicar o trabalho,
isto , o excesso de luz pode diminuir a qualidade da viso, pois
pode causar ofuscamento, principalmente quando a luz se reflete em superfcies brilhantes, ocasionando fadiga visual. A troca
das lmpadas deve ser feita pelo forro e no pela sala, evitando-se
assim aumento das fontes de contaminao. As portas devem ser
de material que facilite a limpeza, sem frestas, com vedao e com
abertura para fora. As janelas, fixas, no podem ser abertas e no
devem ser utilizadas cortinas.
b) Eletricidade: o sistema deve prever toda carga eltrica demandada pelos equipamentos utilizados no laboratrio. O uso de
benjamins deve ser evitado. Alm disso, alguns laboratrios
precisam observar a necessidade de instalao de geradores de
emergncia, a fim de suprir a falta de energia eltrica para equipamentos e servios que no possam ser interrompidos.
c) Banheiros, vestirios e airlocks: segundo a NR24 (Brasil, 2008b),
que dispe sobre as condies sanitrias e de conforto nos locais
de trabalho, as instalaes sanitrias devem ser separadas por
141
sexo e estar submetidas a processo permanente de higienizao,

de tal forma que sejam mantidas limpas e desprovidas de quaisquer odores, durante toda a jornada de trabalho. Todos os laboratrios de sade devem ter vestirios, tambm separados por sexo,
e que, por uma questo de funcionalidade, sirvam como entrada
ao local de servio, permitindo ao trabalhador a colocao de seu
uniforme e, em alguns casos, a troca de sapatos ou a colocao
de sapatilhas descartveis. O nvel de conteno para laboratrios
NB-3 exige a intensificao dos programas de boas prticas laboratoriais e de segurana, alm da existncia obrigatria de
dispositivos eletrnicos de segurana para o fechamento de portas, conhecidos como airlocks, e do uso, igualmente obrigatrio,
de cabines de segurana biolgica. Os trabalhadores devem usar
roupas de proteo especficas para a rea e equipamentos de proteo individual (Fundao Oswaldo Cruz, s.d.).
d) Instalaes para equipamentos: cada laboratrio deve prever os
equipamentos necessrios s suas anlises e s atividades de rotina. Dessa forma, parte eltrica, refrigerao, dreno, gua purificada e sistema de gerador de vapor limpo devem ser analisados
e projetados para cada caso, levando-se em conta o consumo, a
vazo, a produtividade e a eficincia de cada equipamento. Alguns equipamentos so de uso comum para os laboratrios
da rea da sade e, por isso, merecem ateno especial. So
eles: sistema de purificao de gua bidestilador, desmineralizador, deionizador e purificador por osmose reversa,
entre outros , autoclave, forno, estufa, sistema de filtrao
de ar, incubadoras, banho-maria, freezer, cmara fria, microscpio e centrfuga. O monitoramento e a validao dos
equipamentos reforam um dos elementos das boas prticas
de laboratrio que a preocupao com o maquinrio, e devem ser feitos diariamente, com a confeco de uma tabela
de registros com os principais parmetros do equipamento.
e) Pessoal: o pessoal um dos quatro pilares das boas prticas de laboratrio. Todos os laboratrios devem ter um organograma com
descrio dos cargos, funes e responsabilidades tcnicas de seus
142
trabalhadores. Os profissionais devem possuir qualificao tcnica

para ocupar e responder pelos cargos, inclusive por cargos gerenciais, uma vez que a liderana vai funcionar como determinante
estratgico na conduo da equipe. Um dos pontos nevrlgicos
nessa rea a moral da equipe. A maioria dos laboratrios tem necessidade de tarefas coletivas ou sequenciais e, dessa forma, o trabalho de um afeta o trabalho do outro, e a capacidade de se trabalhar
em equipe, sem perder o foco individual, faz toda a diferena. A
formao de pessoal com qualificao para o trabalho pea fundamental para a qualidade da execuo de rotinas e exames laboratoriais. A chefia do laboratrio deve desenvolver procedimentos
para identificar a necessidade de capacitao e atualizao dos profissionais, alm de propor, sempre que necessrio, a implantao de
programas de desenvolvimento profissional.
f) Alarmes: alguns equipamentos, como freezers, geladeiras, liofilizadores e incubadoras, no podem parar de funcionar por falta
de energia eltrica ou por falhas no equipamento, pois h risco
de perda de insumos, reagentes e produtos, ocasionando prejuzos financeiros, ou mesmo ao trabalho. Por isso, importante
que esses equipamentos avisem sobre a ocorrncia de alguma pane, para que se possa solucionar o problema rapidamente
ou, pelo menos, transferir os produtos para outro equipamento.
Esses alarmes podem ser localizados, isto , acoplados a cada equipamento, ou fazer parte de uma central de alarmes na qual o operador pode detectar o problema e encaminhar a soluo.
g) Manuteno: todo laboratrio deve prever a manuteno dos
equipamentos, na qual se incluem o seu controle e monitoramento. A manuteno pode ser classificada em trs categorias: preditiva, preventiva e corretiva (Paula, 2006). A manuteno preditiva
o acompanhamento peridico dos equipamentos, baseado na
anlise de dados coletados por meio da monitorao ou de inspees em campo. A manuteno preditiva tem sido reconhecida como uma tcnica eficaz de gerenciamento de manuteno.
A manuteno preventiva visa aproveitar ao mximo a vida til
de cada equipamento, e mant-lo sempre em perfeito estado pro143
dutivo, reduzindo, dessa forma, o nmero de paradas no programadas. A manuteno preventiva demanda a confeco de um
cronograma com foco na periodicidade de cada manuteno, como
troca de leo, ajuste de velocidade etc. As certificaes ISO, hoje
mais comuns no mercado, exigem uma rotina de manuteno
bem definida, com o registro de controles de processos para futuras auditorias. Por ltimo, a manuteno corretiva refere-se
manuteno no peridica que variavelmente poder ser necessria, por falhas e erros, demandando a correo de danos atuais
e no iminentes.
h) Extintores, lava-olhos e chuveiros: so equipamentos de uso coletivo cuja finalidade proteger os profissionais que trabalham
em laboratrios. importante que o trabalhador conhea algumas regras bsicas de biossegurana e identifique adequadamente os dispositivos de proteo, a fim de us-los apenas para
a finalidade a que se destinam; ele deve responsabilizar-se por
sua guarda e conservao, comunicar chefia imediata qualquer alterao que os torne imprprios para o uso, solicitando
a sua substituio, e compreender a importncia da obrigatoriedade de seu uso (Universidade Federal de Alfenas, s.d.).
i) Cronograma de proteo contra insetos e roedores: existncia de
proteo contra insetos e roedores, e um cronograma de dedetizao e desratizao peridico, observando-se os efeitos dessas medidas e as possveis incompatibilidades com os produtos qumicos
utilizados (Brasil, 2007b).
j) Controle de qualidade e garantia da qualidade: so dois setores
distintos. O controle de qualidade de um laboratrio de imunohematologia deve garantir que os resultados produzidos reflitam, de forma consistente e fidedigna, os ensaios realizados
dentro das normas tcnicas prescritas, assegurando que no
representem o resultado de alguma interferncia no processo.
J o setor da garantia da qualidade determina os procedimentos e metas para assegurar o controle sobre todas as etapas
do processo, incluindo o controle de insumos e reagentes, o
144
plano de amostragem, o controle de temperaturas do ambiente e

do maquinrio, a verificao de registros, a padronizao de todas as atividades e o uso correto dos equipamentos. No laboratrio de imuno-hematologia, a garantia da qualidade deve ter
um esquema de processos a serem controlados que vai desde
o atendimento ao paciente at a liberao do laudo. Segundo
Chaves (2010), todas essas atividades devem ser documentadas por meio de procedimentos operacionais-padro (POP)
ou instrues de trabalho (IT) que sempre devem estar acessveis aos funcionrios envolvidos nas atividades. Segundo a
mesma autora, com a incessante procura por qualidade nos
processos, foram criados os programas de acreditao brasileiros, visando atender s necessidades de ampla e melhor avaliao dos laboratrios clnicos laboratoriais. Fazem parte desses sistemas o Programa de Acreditao de Laboratrios Clnicos
(Palc) da Sociedade Brasileira de Patologia Clnica/Medicina Laboratorial (SBPC/ML), e o Departamento de Inspeo e Credenciamento da Qualidade (Dicq) da Sociedade Brasileira de Anlises Clnicas (Sbac). Vale a pena ressaltar que o setor da garantia da
qualidade deve ter autonomia e ser responsvel tambm pela validao de metodologias analticas e controle de padres.
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em: http://actrav.itcilo.org/actrav-english/telearn/osh/kemi/ctm2.htm.
Acesso em: 2 set. 2010.
150
Os autores
Alexandre Gomes Vizzoni: bilogo; mestre em Cincias, rea de
concentrao Doenas Infecciosas, pelo Instituto de Pesquisa Clnica
Evandro Chagas/Fiocruz, com especializao em Imuno-Hematologia
pela Universidade Federal do Rio de Janeiro e com proficincia tcnica
em Imuno-Hematologia pela Associao Brasileira de Hematologia e
Hemoterapia; chefe do Laboratrio de Imuno-Hematologia e da Agncia Transfusional do Instituto de Pesquisa Clnica Evandro Chagas/
Fiocruz; coordenador da Especialidade em Hemoterapia do Curso de
Especializao em Biologia Parasitria e Biotecnologia do Instituto
Oswaldo Cruz/Fiocruz e coordenador do Curso de Especializao em
Imuno-Hematologia da Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fiocruz e do Curso de Especializao Lato Sensu em Imuno-Hematologia da Universidade Federal do Rio de Janeiro.
Elmo Eduardo de Almeida Amaral: farmacutico; doutor em Cincias pela Universidade Federal do Rio de Janeiro e mestre em Qumica
Biolgica pela Universidade Federal do Rio de Janeiro; pesquisador do
Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz.
Flvia Coelho Ribeiro: mdica veterinria; doutora em Cincias
(Diagnstico de Doenas Infecciosas) pelo Instituto de Pesquisa Clnica Evandro Chagas/Fiocruz e mestre em Patologia Veterinria pela
Universidade Federal de Viosa, com especializao em Docncia
do Ensino Superior pela Universidade Cndido Mendes; professorapesquisadora da Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fiocruz.
Joseli Maria da Rocha Nogueira: biloga; doutora em Cincias
pela Escola Nacional de Sade Pblica Sergio Arouca/Fiocruz, mestre
em Microbiologia Veterinria pela Universidade Federal Rural do Rio
de Janeiro e especialista em Microbiologia e Anlises Clnicas pela
151
Conceitos bsicos e aplicados em imuno-hematologia
Sociedade Barramansense de Ensino Superior; tecnologista snior

da Escola Nacional de Sade Pblica Sergio Arouca/Fiocruz, professora
colaboradora da Universidade Federal do Rio de Janeiro, professora adjunta da Universidade do Grande Rio e professora convidada da Escola
Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fiocruz.
Marcos Antonio Pereira Marques: bilogo; mestre em Microbiologia Veterinria pelo Instituto de Veterinria da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, com especializao em Virologia pelo
Instituto de Microbiologia e em Hematologia pela Faculdade de Farmcia, ambos da Universidade Federal do Rio de Janeiro; professorpesquisador e coordenador de cursos tcnicos da Escola Politcnica
de Sade Joaquim Venncio/Fiocruz.
Maria Beatriz Siqueira Campos de Oliveira: doutora em Cincias
na rea de Ensino em Biocincias e Sade pelo Instituto Oswaldo Cruz,
mestre em Educao pela Universidade Estcio de S e especialista em
Microbiologia e Liofilizao pela Edwards, Inglaterra; tecnologista snior
em Sade Pblica lotada na Gerncia de Risco do Ncleo de Vigilncia
Hospitalar do Instituto Nacional de Sade da Mulher, da Criana e do
Adolescente Fernandes Figueira/Fiocruz.
Paulo Marcelo T. Cotias: farmacutico e bioqumico; graduado
em Farmcia e Bioqumica pela Universidade Federal de Pernambuco,
com especializao em Patologia Clnica pela Sociedade Brasileira
de Anlises Clnicas; imuno-hematologista do Instituto de Pesquisa Clnica Evandro Chagas/Fiocruz, exercendo at 2011 as seguintes
atribuies: chefia do Laboratrio de Imuno-Hematologia e da Agncia Transfusional do Instituto de Pesquisa Clnica Evandro Chagas/
Fiocruz, coordenador da Especialidade em Hemoterapia do Curso
de Especializao em Biologia Parasitria e Biotecnologia do Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz e coordenador e preceptor do Curso de Especializao em Imuno-Hematologia da Escola Politcnica de Sade
Joaquim Venncio/Fiocruz.
Paulo Roberto Soares Stephens: bilogo; mestre em Microbiologia
e Imunologia pela Universidade Federal do Rio de Janeiro; tecnologista
snior em Sade Pblica do Laboratrio de Imunologia Clnica do Ins152
Autores
tituto Oswaldo Cruz/Fiocruz, atuando na rea de HIV, coordenador

da rea de Virologia dos Cursos de Especializao e Tcnico em Biologia Parasitria e Biotecnologia do Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz e
professor dos cursos tcnicos do Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz e da
Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fiocruz.
Valmir Laurentino Silva: bilogo; doutor em Cincias pela Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro; professor das disciplinas de
Imunologia Bsica e Imunologia Mdica da Faculdade de Medicina
de Campos (Fundao Benedito Pereira Nunes), professor convidado
da Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fiocruz e tecnologista em Sade Pblica do Departamento de Cincias Biolgicas da
Escola Nacional de Sade Pblica Sergio Arouca/Fiocruz.
Valter Viana de Andrade Neto: farmacutico bioqumico; doutorando do Programa de Ps-graduao em Biologia Celular e Molecular do Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz, mestre em Biologia Celular e
Molecular pelo Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz, com habilitao em
Anlises Clnicas pela Universidade Federal do Rio de Janeiro.
153
Este livro foi impresso pela Suprema Grafica Editora, para a Escola
Politcnica de Sade Joaquim Venncio/Fiocruz, em agosto de 2013.
Utilizaram-se as fontes Minion Pro e Myriad Pro na composio, papel plen
bold 70g/m2 no miolo e carto supremo 250g/m2 na capa.
155
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Conceitos bsicos

FUNDAO OSWALDO CRUZ

Maria Beatriz Siqueira Campos de Oliveira

Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio

Copyright 2013 dos organizadores

Oliveira, Maria Beatriz Siqueira Campos de (org.)

Escola Politcnica de Sade Joaquim Venncio

Maria Beatriz Siqueira Campos de Oliveira

Elmo Eduardo de Almeida Amaral

Paulo Roberto S. Stephens

Alexandre Gomes Vizzoni

Biossegurana em laboratrios de sade

Margarida de Oliveira Pinho

Maria Beatriz Siqueira Campos de Oliveira

A compreenso da imuno-hematologia eritrocitria depende do

hematolgicos. O captulo 4 aborda a biossegurana, apresentando um

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

Figura 1. Fosfolipdeos que compem a bicamada lipdica.

A membrana plasmtica contm 30% de colesterol. A finalidade

Figura 2. Tipos de protenas encontradas na membrana plasmtica dos

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

da 3 glicoforina); protenas do citoesqueleto (banda 4.1 espectrina,

Figura 3. Estrutura qumica do cido silico.

O citoesqueleto da membrana plasmtica do eritrcito formado

Figura 4. Estrutura da membrana plasmtica do eritrcito.

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

Quadro 1. Anomalias nas formas da membrana plasmtica

Outra anomalia da membrana plasmtica observada a alterao na

1. Caractersticas bioqumicas da reao antgenoanticorpo:

Figura 5. Estrutura da molcula de anticorpo: CP cadeia pesada constante;

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

A estrutura bsica da molcula de imunoglobulina consiste em

O princpio bsico da termodinmica na interao antgeno

Os anticorpos ligam-se aos antgenos pelo contato, nas CDRs, com

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

Na prtica, o encaixe de ligaes de H entre eptopo e anticorpo possui

Figura 6. Foras de interao antgenoanticorpo.

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

Os anticorpos produzidos se ligam aos componentes da membrana

Anemias hemolticas tambm podem ser induzidas por alguns

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

Figura 7. Eritrcito em soluo fisiolgica (NaCl 0,85%).

A diferena de potencial entre a nuvem de ctions atrados pelas

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

O potencial zeta de um sistema pode ser modificado de duas maneiras:

2) Variao da composio do meio: pela adio de substncias

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

eritrcitos, levando alterao no potencial zeta, e que resulta da

O potencial zeta um fenmeno fundamental, com importante

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

Dierickx, D. et al. Autoimmune Hemolytic Anemia. Journal of Internal

Johnson, S. T. Drug-induced Immune Hemolytic Anemia. Transfusion and

Elmo Eduardo de Almeida Amaral Valter Viana de Andrade Neto

Riddick, T. M. Control of Emulsion Stability through Zeta Potential. Soap

Wilson, I. A. et al. Structural Aspects of Antibodies and Antibody-Antigen

Figura 1. Correlao entre a produo de hemcias, o transporte

Hematologia e imunologia aplicadas em imuno-hematologia

Destruio das hemcias por clulas fagocticas.

Hematologia e imunologia aplicadas em imuno-hematologia

anisocromasia: alterao na cor da hemcia, de acordo com a

Os eritrcitos so clulas bicncavas, com dimetro mdio de 7,2

globina tem quatro pares de cadeias polipeptdicas, sendo duas do

Hematologia e imunologia aplicadas em imuno-hematologia