REA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADMICO DE QUMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL
GRUPO
QU304
MATERIA
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TITULO
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS
DE LA MATRIZ AMBIENTAL: ______SUELO____________
ASESORA
Dr. ROSA RICO MATA
DATOS DE IDENTIFICACIN DE LOS ANALISTAS
Fecha de inicio del anlisis: 30/06/15
Fecha de termino: 09/07/15
Nombre
Flores Ojeda Eduardo Emmanuel

Cargo
Responsable

Torres Barco Alma Viridiana

Administrador

Gonzlez Martnez blanca Fabiola

Laboratorista 1

Ornelas Rodrguez Nataly

Laboratorista 2

Prez Serna Aid Sarahi

Laboratorista 3

GENERACIN: 2014-2016

MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL

ASESORA:

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DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO

1.- Breve descripcin del estatus ambiental del sitio de estudio:
La Presa Blanca se ubica en el estado mexicano de Guanajuato en el municipio de Len, localizado en una
altura de 1784 metros sobre el nivel del mar. En Len se cuenta con una presa de aguas negras y residuales
(Presa Blanca) donde desembocan todo tipo de desechos industriales y domsticos, el agua de dicha presa se
conduce a travs de un canal a cielo abierto, hacia las Comunidades de Santa Rosa, Plan de Ayala y San Pedro
del Monte y su destino final es para el riego de alfalfa y lechuga, estas aguas estn fuertemente contaminadas
qumica y bacteriolgicamente, al no sufrir ningn tratamiento de remediacin.
Nombre

Presa Blanca

SITIO DE
MUESTREO

Ubicacin
/coordenadas GPS

Imagen de mapa satelital

Municipio Len del

Estado de
Guanajuato Mxico
Las coordenadas
GPS:
Longitud (dec): 101.698333
Latitud (dec):
21.088889

2. Evidencia fotogrfica del sitio

Fecha: 06/11/2015
Hora: 11:40 AM

Fecha: 06/11/2015
Hora: 12:00 PM

MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL

ASESORA:

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DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

1. Identificacin
Hora de toma de muestra: 06/11/2015 Hora de siembra: 06/11/2015 12:47
11:55 AM
AM
Punto de Muestreo (ubicacin /coordenadas GPS):
Tiempo de exposicin (aplica solo para muestra de aire)
Puente #1 coordenadas: N 21 0536.2 W 101 4225.3
Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra:
Nombre del/ los analistas que sembr la muestra:
Torres Barco Alma Viridiana, Ornelas Rodrguez Nataly y
Flores Ojeda Eduardo Emmanuel, Prez Serna Aid Sarahi
Gonzlez Martnez Blanca Fabiola
Matriz ambiental: Suelo

2.Parmetros Fisicoqumicos
Color: Caf

Temperatura (oC) ambiental: 22C

Olor: Ausente

Describir condiciones climatolgicas: clima clido, cielo

despejado, viento mnimo y humedad considerable al
tacto.

pH: 4

3. Evidencia fotogrfica del sitio de toma de muestra

MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL

ASESORA:

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
1. Justificacin del proceso para la identificacin bacteriana
Toda la gama de procedimientos y pruebas dedicadas a la identificacin de la bacteria se basa
principalmente en el uso de medios selectivos y pruebas bioqumicas, que nos indiquen una serie de
caractersticas metablicas, donde estas en conjunto, nos permitan diferenciar la bacteria de alguna otra
bacteria que se le asimile. Estos van desde los simplemente descriptivos (morfologa colonial, tincin),
pasando por pruebas bioqumicas simples para deteccin de productos metablicos o de una determinada
reaccin enzimtica, sin embargo hay ciertos aspectos que debemos tomar en cuenta para saber que
pruebas se realizaran, las cuales se basan en; Origen de la cepa, condiciones bajo las que ha sido aislada,
Morfologa, Posibilidad de formacin de poros y por la posibilidad de formacin de capsula. Y as, con estas
pruebas, bajo el criterio de reacciones negativas o positivas tenemos la capacidad de ir aislando esta bacteria
de una enorme lista.
2. Dos medios de siembra (Nombre y Receta)
CITRATO DE SIMMONS
E.M.B AGAR
Formula (gr por litro)
Citrato de Sodio
Nacl
Fosfato dipotasico
Fosfato
monopotasico
Fosfato
monoamonico
Sulfato de magnesio
Azul de bromotimol

Formula (gr por litro)

2.0gr
5gr
1.0gr
1.0gr

Peptona
Lactosa
Sacarosa
Fosfato dipotasico
Agar
Eosina
Azul de metileno

1.0gr

10.0gr
5gr
5.0gr
2.0gr
13.5.0gr
0.2gr
0.08gr

0.2gr
0.08gr
15.0gr

Morfologa Colonial (Medio 1)

Descripcin
Color azul, borde regular y centro obscuro

Morfologa Colonial (Medio 2)

Color violeta obscuro, circular y con el centro
obscuro

Imagen

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ASESORA:

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3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y receta)

CITRATO DE SIMMONS
E.M.B AGAR
Formula (gr por litro)
Citrato de Sodio
Nacl
Fosfato dipotasico
Fosfato
monopotasico
Fosfato
monoamonico
Sulfato de magnesio
Azul de bromotimol
Agar

2.0gr
5gr
1.0gr
1.0gr

Formula (gr por litro)

Peptona
10.0gr
Lactosa
5gr
Sacarosa
5.0gr
Fosfato dipotasico
2.0gr
Agar
13.5.0gr
Eosina
0.2gr
Azul de metileno
0.08gr

1.0gr
0.2gr
0.08gr
15.0gr

Morfologa Colonial (Medio 1)

Descripcin
Color azul, borde regular y centro obscuro

Imagen

Morfologa Colonial (Medio 2)

Descripcin
Verde metlico, circular y con el centro
obscuro
Imagen

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ASESORA:

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4. Procedimiento de Aislamiento
(describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)
MATERIALES
1 Matraz Erlenmeyer de 250ml
1 Agitador
1 Vidrio de reloj
1 Esptula
1 Salmonella Shigella Agar
1 Autoclave y/o olla express
1 Parrilla
1 Incubadora
1Campana de esterilizacin
1 Balanza analtica
Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, seleccin de la colonia y resiembra):
Investigacin de donde puede desarrollarse mejor la bacteria que se quiere aislar.
Siembra:
Investigacin de en qu matriz puede desarrollarse mejor la bacteria que se quiere aislar.
Esterilizacin del material:
1. Empapelar 3 cajas Petri, pipetas, y preparacin de tapones para los matraces a utilizar para la
esterilizacin del agar (solo de ser necesario).
2. Esterilizar el material en autoclave u olla de presin.
Preparacin del agar:
1. Checar en el frasco del agar su preparacin.
2. Realizar clculos de cuantos mililitros se utilizaran por cada caja Petri para la siembra y resiembra de la
bacteria.
3. Calcular cuntos gramos se deben de pesar de agar para los mililitros necesarios para las cajas de acuerdo
a la frmula del frasco del agar.
4. Pesar los miligramos de agar y disolverlos en agua destilada.
5.Verificar las instrucciones del fabricante en el frasco contenedor del medio si es necesario esterilizar en
autoclave..
6. Vert r aproximadamente 20 ml de agar a cada una de las cajas Petri.
7. Esperar que el agar gelifique
Siembra de la muestra de agua:
1. Con una pipeta estril de 5 ml se toma un mililitrito de muestra de agua.
2. Se vierte sobre la caja Petri que contiene el agar.
3. Se agita la placa con 6 movimientos a la derecha, 6 a la izquierda y 6 de arriba a abajo.
4. Se mete a incubar por 24 h o 48 h a 370C esto depender de la bacteria.
Seleccin de la colonia:
1. Verificar si en la caja del agar hay una colonia con estas caractersticas.
2. En caso de que la colonia que se quiere aislar no se encuentra en el cultivo donde se sembr, se debe
de averiguar qu fue lo que hizo que no creciera en ese agar.
3. Volver a sembrar la colonia haciendo los ajustes necesarios de seleccin de medio.
Resiembra de la colonia:
1. Flamear el asa de nicromo para su esterilizacin.
2. Se debe de seleccionar dos colonias con las caractersticas ya elegidas anteriormente, marcar la caja
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ASESORA:

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por debajo con un plumn las dos colonias enumerarlas como 1 y 2.

3. La caja Petri donde se resembraran las colonias seleccionadas se divide en dos cuadrantes con un
plumn por la parte de abajo y se enumeran colonia 1 y 2.
4. Con un asa de nicromo se toma una de las colonias seleccionadas y se siembra en el nmero
correspondiente.
5. Se realiza en forma de estras e tal forma que las lneas queden cerradas unas de las otras, girarla
caja 90 y realizar una vez ms hasta estriar toda la caja.

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ASESORA:

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5. Esquema del Perfil bioqumico (metablico )

para la identificacin del microorganismo seleccionado
Muestra presa Blanca
Tincin de Gram

R= -

R= +

Prueba de capsula

R= -

R= +

Prueba de RM-VP

R= +

R= -

Prueba movilidad

R= +

R= -

Prueba de indol

R= +

R= -

Produccin de H2S

R= +

R= -

Prueba de Ureasa

R= -

R= +

Prueba de catalasa

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RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN

1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)
Citrato de Simmons
Citrato de Simmons

2. MORFOLOGA COLONIAL OBSERVADA

Tipo de colonia 1: Descripcin

FOTO 1

En la imagen se puede observar la presunta bacteria

Citrobacter Freundii que tiene colonias puntiformes con un
borde entero con una elevacin plana con una superficie
seca con un color azul marino adems de que Presenta
colores caractersticos y difusin de pigmentos en el medio.

Tipo de colonia 1: Descripcin

FOTO 2

Se puede observar en las imgenes algunas colonias que se

presume que pueden ser hongos de un color blanco con
colonias circular con un borde ondulado y superficie seca.

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ASESORA:

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3. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO PURO ( RESIEMBRA)

FOTO 1 Citrato de Simmons

FOTO2 Citrato de Simmons

4. MORFOLOGIA COLONIAL OBSERVADA

FOTO 1
Descripcin
NO OBTENIDO
NO OBTENIDO

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ASESORA:

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IDENTIFICACIN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: _______SUELO________________________________
1.- Nombre cientfico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los resultados
del perfil bioqumico planteado ( gnero y especie)
Gnero: Citrobacter
Especie: C. freundii
2. Taxonoma del o los microorganismo identificados
Reino: Bacteria
Orden: Enterobacteriales

Filo: Proteobacteria
Familia: Enterobacteriaceae

Clase: Gammaproteobacteria
Gnero: E. citrobacter

3. Caractersticas generales
Son bacterias mviles, con capacidad variable para fermentar la lactosa, algunos pueden utilizar citrato y otros no,
algunas especies tienen antgenos somticos O, flagelar H y de superficie K, lo que hace que den reacciones cruzadas
con otras Enterobacteriaceae. El gnero Citrobacter es un grupo de bacilos Gram negativos aerobios que se encuentran
frecuentemente en el agua, el suelo, la comida, vegetacin y como flora saprfita en el tracto intestinal de muchos
animales adems del hombre. Se trata de microorganismos ubicuos que son causa frecuente de infecciones
importantes, especialmente en huspedes inmunodeprimidos. Es uno de los patgenos ms importantes en unidades
decuidados neonatales hospitalarios. En los seres humanos producen, por ejemplo, infecciones urinarias, meningitis
neonatal y abscesos cerebrales. Destruyen las microvellosidades, formando lesiones muy caractersticas denominadas
de adherencia y eliminacin. El gnero Citrobacter descrito en el ao 1932 por Werkman y Gillen, En la actualidad el
gnero Citrobacter estcompuesto por las siguientes genomoespecies: complejo C. freundii (C. freundii, C. braakii, C.
sedlakii, C.werkmanii, C. youngae, C. gillenii, C. murliniae y C. rodentium), C. koseri, C. amalonaticus y C. farmeri. En lo
que respecta a estas nuevas especies, en particular a las que integran el denominado "complejo C.freundii", existen
pocos estudios acerca de su significado clnico y de su distribucin y frecuencia en especmenes clnicos.

4. Ciclo(s) biogeoqumicos en el(los) que intervienen

Ciclo del nitrgeno

5. La funcin que juegan en la transformacin de la materia orgnica a travs

de los ciclos biogeoqumicos
Como antes se mencion la citrobacter como perteneciente a la familia de las enterobacterias tiene la capacidad de
descomponer la materia orgnica metablicamente para as, propicia de los nutrimentos esenciales a las plantas
directamente en la biota, ya que estos utilizan el citrato de la materia orgnica como fuente de carbono, ms aun,
especficamente en el ciclo del nitrgeno, citrobacter interviene directamente al proceso de fijacin de N atmosfrico en
estado libre, influenciado por la humedad, temperatura y la disponibilidad de energa.

6. Conclusin parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de la

microbiologa en el rea ambiental
Sin duda las bacterias del genero citrobacter tiene gran influencia y son participes intimas de las reacciones y
acontecimientos de cada uno de los ciclos biogeoqumicos, ya sea a manera de biodegradacin o biosntesis de materia
orgnica para la produccin de componentes primarios en la biota. Por otro lado cabe mencionar que en base a la
marcha de las pruebas bioqumicas concluimos que tiene un enorme impacto la caracterizacin de bacterias de este
tipo, ya que nos ayuda a comprender el comportamiento de los microorganismos en la matriz donde fue extrada, y
cules pueden ser las causas de su reproduccin, ya que, con los anlisis correspondientes podemos deducir que el
suelo circundante a la presa blanca posee las caractersticas de humedad, temperatura y pH necesarios para su
desarrollo. Cabe mencionar que, en cuestiones ambientales es importante conocer el impacto que sugiere el tener
concentracin de bacterias al suelo, ahora se sabe que generalmente aportan nutrimentos al suelo gracias a su funcin
como biodescomponedoras de la materia orgnica, pero tambin producen enfermedades a los seres humanos, por lo
cual debe de existir su debido control y en base a los resultados de identificacin de las bacterias proponer soluciones
de mejora, de aqu parte la importante de las pruebas bioqumicas, que aportan las herramientas para identificar las
bacterias, gracias a que cada bacteria es tan especifica, que reacciona diferente a cada prueba.

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ASESORA:

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