Metodos de Analisis de Contaminantes

Mtodos de anlisis de contaminantes
Mtodos de anlisis
de contaminantes
Mtodos de anlisis de contaminantes

Nelio R. Vettorazzi1, Mara A. Zon1, Patricia G. Molina1, Adrian M.
Granero1, Fernado J. Arvalo1, Sebastin N. Robledo2, Paulo C. Daz
Toro1, Csar H. Daz Nieto1, Hctor Fernndez1*
1Departamento de Qumica. Facultad de Ciencias Exactas, Fsico-Qumicas y Naturales. 2Departamento de Tecnologa Qumica, Facultad de Ingeniera. Universidad Nacional de Ro Cuarto.
Agencia Postal N 3. (5800) RIO CUARTO, ARGENTINA.
Telfono: +543584676440 Fax: +543584676233
*e-mail: hfernandez@exa.unrc.edu.ar
Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales
Introduccion
Los mtodos de anlisis de contaminantes del ambiente, requieren
de la aplicacin conjunta de los principios de la Qumica Analtica y
de la Qumica Ambiental, que juntas configuran la Qumica Analtica
Ambiental (QAA).
La Qumica Analtica es una disciplina cientfica que desarrolla y
aplica mtodos, instrumentos y estrategias para obtener informacin
sobre la composicin y naturaleza de la materia en el espacio y el
tiempo, qu y cunto hay, con qu exactitud, precisin, conveniencia
o relacin costos/beneficio. Tambin informacin de estados de oxidacin, especiacin de los analitos, estructuras cristalinas, distribucin
superficial y espacial de un analito, tiempos de vida de especies inestables, etc (Miltiades I. et al, 1993).
Con respecto a la Qumica Ambiental, J.G. Ibanez y cols. (J.G. Ibanez et al, 2009), proponen que la Tierra equivale a un vaso de reaccin (sistema cerrado), con reacciones qumicas, simples o complejas. Los tomos y molculas (reactivos) se transforman, intercambian
energa (E), y se alcanzan equilibrios. Esos reactivos estn en algn
compartimiento medio-ambiental AIRE, TIERRA o AGUA en distintos
compuestos, estados fsicos, o en organismos vivos. Son naturales o
antropognicos, sometidos a flujos multidireccionales, procesos de
adsorcin, redox, cido-base, de complejos, fotofsicos, etc. Medio
Ambiente: elementos abiticos (E solar, suelo, agua, aire), y biticos
de la Biosfera, sustento y hogar de los seres vivos. La acabada comprensin de todos estos fenmenos es la esencia de la Qumica Ambiental. Contaminacin: alteracin fisicoqumica del medio ambiente,
por aumento o disminucin de un compuesto natural, introduccin
Nelio R. Vettorazzi, Mara A. Zon, Patricia G. Molina, Adrian M. Granero, Fernado J. Arvalo,
Sebastin N. Robledo, Paulo C. Daz Toro, Csar H. Daz Nieto, Hctor Fernndez
de sustancias, energas o ruidos antropognicos, que provocan modificaciones peligrosas para los seres vivos, recursos naturales y ecosistemas(Miltiades I. et al, 1993; J.G. Ibanez et al, 2009).
Qumica Analtica Ambiental Entonces la Qumica Analtica
Ambiental aparece como una ciencia relativamente nueva, por yuxtaposicin de ambas Qumicas, Analtica y Ambiental, pero con su
propio perfil. La esencia de la QAA, es el anlisis fsico-qumico de
los procesos antropognicos o naturales, en los distintos ecosistemas,
con caracterizacin cuali-cuantitativa de las reservas naturales, y el
monitoreo de su estado. Los perfiles del trabajo de un Qumico Analtico Ambiental (R. Reeve, 2002) pueden resumirse como:
1.- Estudio de los fenmenos fsico-qumicos o bioqumicos en la naturaleza, compuestos participantes, funcin y la interrelacin entre
los ciclos naturales del O3, N2, O2, H2, H2O, S, Ca, Na, P, K, etc, y el
ambiente (produccin y descomposicin).
2.- Identificacin de un problema de contaminacin ambiental: fuentes, reacciones, transporte (tiempos de residencia), destino final
(reservorios). Determinar la extensin del problema.
3.- Elegir los mtodos analticos ms aptos para el muestreo y la valoracin de sus concentraciones en los distintos sitios.
4.- Control final para determinar si el problema est solucionado y/o
controlado.
Pero qu particularidades tiene la Qumica Analtica Ambiental,
posiblemente diferencias, con respecto a la Qumica Analtica? (Chunlong Zhang, 2012).
1.- Bajas concentraciones: ppm (10-6), ppb (109

), ppt (10-12) e incluso ppq (10-15). Cun difcil es
medir la cantidad 10-15 ?
Equivale a hallar una gota de agua en un cubo de 368 m de arista
(Figura 1). Esto condiciona la eleccin del mtodo analtico.
Figura 1
Excepto para algunos parmetros convencionales, la mayora de

los contaminantes estn presentes al nivel de trazas o ultra-trazas.
Muchos contaminantes emergentes se hallan en algn reservorio en
el nivel de ppt, y es probable que tambin en el nivel de ppq. Semejantes valores pequeos condicionan el instrumental y los lmites de
deteccin del mtodo analtico, que se resumen en la tabla 1 (Daz de
Santos, 1992):
Funciones lineales
LDI
LD
LDM
LC
LCP
Medio analtico de
aplicacin
Blancos y patrones en
un solvente
Blancos y patrones en
un solvente
Blancos y patrones en la
matriz.
matriz
matriz
Criterio
Seal > 3sb
Escala
relativa
1
Seal/Ruido >
2
5 3s/m
3 s/m
10 s/m
10
5 x LDM
20
Funciones sigmoideas
LDM
3,3[sY/(dY/dX)]
matriz.
Tabla 1. LDI: lmite de deteccin instrumental. LD: lmite de deteccin.

LDM: lmite de deteccin del mtodo. LC: lmite de cuantificacin.
LCP: lmite de cuantificacin prctica, empleado en las pruebas inter-laboratorios (control de calidad externo). sb : desviacin estndar
del blanco. s/m: relacin desviacin estndar (ordenada regresin)/
pendiente. sY : desviacin estndar de la seal. dY/dX : derivada de
curva de calibracin.
En el caso de una funcin curvilnea como la respuesta de un ELISA

competitivo, se obtiene el LDM cuando el coeficiente de variacin es
30 % (Yuzuru Hayashi et al, 2005).
2.- Matrices complejas: aire, aguas, suelos,

sedimentos, lodos, residuos, materiales
biolgicos, aerosoles, etc.
La matriz compleja tiene al menos dos problemas, que impactan
en la relacin costos/beneficio: la cantidad y naturaleza variada de
interferentes, que necesariamente complejiza los mtodos analticos
de separacin, y la dificultad de obtener la muestra representativa,
cuyo promedio del analito, debe ser un estimador no desviado del
verdadero valor. Estadsticamente, se logra una muestra representativa si cada porcin tiene la misma chance de integrarla. Adems, la
muestra debe proveer una estimacin no desviada de la varianza de
la poblacin, lo que ocurre si cada muestra tiene la misma chance de
ser elegida para el anlisis. En matrices complejas, la varianza entre
las muestras suele ser mayor que la varianza dentro de las muestras,
porque es probable que haya una desigual distribucin del analito en
el material, y entonces se estratifica el universo con criterios no estadsticos. Esto ocurre con frecuencia en materiales slidos como suelos,
sedimentos, donde la desigual distribucin del tamao y naturaleza
de las partculas, ms las posibles variaciones espaciales y temporales
de los analitos contaminantes, hacen impensable mtodos de adicin
estndar o estndar interno en la muestra slida.
3.- Costos (C) elevados para el muestreo y los

anlisis.
Considerando que el error (en unidades de desviacin estndar
relativa, DER) en la obtencin de parmetros fsico-qumicos puede
llegar a 25 %; en los biolgicos a 50 %, y que los errores de muestreo
por variaciones naturales a 100-400 % (Mar, B. W et al, 1986), es
comprensible la afirmacin de que la calidad de un anlisis empieza
en la toma de muestra: el anlisis exacto de una muestra sesgada
proporciona inevitablemente un resultado sesgado (J. C. Miller, J. N.

Miller, 2008). Por ejemplo (Zhang, J.; Zhang, C., 2012), por simulaciones Monte Carlo se ha correlacionado el error total con el error
analtico, y tambin con el error de muestreo, hallndose una fuerte
correlacin en el ltimo caso (coeficiente de determinacin R2 = 0,97).
En cualquier programa de muestreo de contaminantes ambientales, antes de decidir el lugar, tiempo, frecuencia y nmero de muestras,
hay que examinar las variaciones espaciales y/o temporales del analito
y su comportamiento en el ambiente (Zhang, J.; Zhang, C., 2012).
Los procedimientos basados en el juicio experto y la experiencia,
no parecen ser adecuados. Si bien reducen el nmero de muestras
posibles, son desviados y no soportan inferencias estadsticas.
Existen procedimientos de muestreo, como estratificado-azar, sistemtico o compuestos, que lamentablemente son sub-empleados. El
muestreo estratificado en materiales slidos en partculas, ha permitido minimizar costos para una varianza s2 prefijada, o viceversa (H. A.
Laitinen, W.E. Harris. , 1975), pero estn basados en una distribucin
binomial de componentes estticos, y no se pueden aplicar para sustancias trazas, por sus concentraciones muy bajas y las variaciones
espaciales y temporales.
El muestreo compuesto (las muestras son mezcladas para dar una
concentracin promedio) es empleado para el estudio de reas o flujos heterogneos en espacio o tiempo.
El muestreo es una ciencia interdisciplinaria, que deber ser abordada por cientficos, tcnicos, y agencias de gobierno para su desarrollo pleno (Zhang, J.; Zhang, C., 2012). Por el momento, no existe
un mtodo cientfico adecuado para distintos escenarios de muestreo
en el ambiente.
4.- Monitoreos in situ y automatizacin.

Con muchos contaminantes atmosfricos, como los primarios:
(NO; SO2; CO; CO2; combustin), (H2S; H3N; HCl; HF; industriales),
(alifticos, aromticos, VOC o compuestos orgnicos voltiles: solventes y combustibles), PAH (hidrocarburos aromticos policclicos), dioxinas, etc.; o los secundarios (H2SO4; NO2; HNO3; O3; partculas PM,
nieblas), se requiere su medicin en un lugar de modo automtico.
La automatizacin disminuye el error, aumenta la precisin, baja los
costos y brinda rapidez. Ejemplos de modos de monitoreo no-automticos, pero con muestreos in situ son las determinaciones de las
demandas qumica o bioqumica de O2 en efluentes de plantas de
tratamiento o industriales (BOD-COD).
5.- Sujeta a Leyes y Regulaciones.

Las regulaciones determinan los protocolos de muestreo y tcnica
analtica, instrumental, lmites de deteccin, de cuantificacin, rango
de cuantificacin, etc. Por ejemplo en EEUU, Safe Drinking Water Act,
National Pollutant Discharge Elimination System, National Ambient
Air Quality Standards, Environmental Protection Agency. En Argentina hay 58 Leyes de Energa y Ambiente (1956-2004). En cambio, los
Mtodos de consenso son sugeridos por institutos o agrupaciones
cientficas como ASTM, NIOSHA, NIST, IRAM, etc.
6.- Responsabilidad social.

Aunque esta denominacin es propuesta para la Qumica Analtica (M. Valcrcel, R. Lucena, 2012), podemos extender el concepto
a la QAA: si con la QA producimos informacin (bio) qumica para
facilitar la resolucin de un problema real, el procedimiento analtico
global deber tener un impacto mnimo en los operadores y el ambiente.
10
Anlisis de contaminantes ambientales

Dijimos que la contaminacin es la alteracin fsico-qumica del
medio ambiente, por aumento o disminucin de un compuesto natural, o sustancias o energas que provocan modificaciones peligrosas
para los seres vivos, recursos naturales y ecosistemas. Dado que los
contaminantes son numerosos y variados segn el reservorio que se
trate, es adecuado seguir sugerencias internacionales para hacer foco
en aquellos de inters reciente. Por ejemplo, en la Conferencia Internacional de la Qumica y el Ambiente de 2011, los temas centrales
fueron (ICCE 2011):
1.- Qumica atmosfrica y aerosoles
2.- Agua potable: calidad y tratamiento
3.- Contaminacin de suelos y sedimentos
4.- Contaminantes emergentes
5.- Nano-materiales
6.- Procesos de transformacin
7.- Predicciones mediante modelos
8.- Efectos sobre organismos y ecosistemas
Puede apreciarse, que la extensin del temario habilitara para un
texto especializado. Sin embargo, es posible comentar mtodos que
puedan adaptarse a laboratorios de mediana complejidad. A continuacin se comentan aspectos analticos de los tres primeros temas.
1.- Qumica atmosfrica y aerosoles
Dentro de los contaminantes primarios (N. Vettorazzi, 2013), el gas
CO2 [350 ppm] es originado por combustiones, uso de combustibles,
11
respiracin de la biomasa y descomposicin de la materia orgnica

(MO). Su eficiencia invernadero es 1 y el tiempo de residencia de unos
5 aos, pero se acumula en la atmsfera porque aumenta a razn de
3,3 GTn C/ao. El mtodo de anlisis de eleccin es la espectroscopa
IR no dispersiva (NDIR), a 2350 cm-1 (estiramiento asimtrico de la
molcula); LDM: 20-50 ppm. El mtodo electroqumico (EQ) potenciomtrico (EQp) Alphasense Ltd. de estado slido mide CO2 como
un electrodo especfico, LDM: 170 ppm.
El gas CO [30-120 ppb], aparece por combustiones incompletas,
volcanes, disociacin de los intermediarios de CO2 en smog, industrias, transformaciones fotoqumicas de H4C y otros VOCs. Compite
con O2 de la hemoglobina en la sangre. Los mtodos de anlisis son
NDIR (LDM < 10 ppb), EQ amperomtrico (EQa) (LDM < 5-20 ppb),
GC-FID o cromatografa gaseosa con deteccin por ionizacin en
llama (LDM 10 ppb), la generacin de mercurio vapor segn CO +
HgO Hgvapor (LDM 20 ppb), TDLS (espectroscopa LASER de efecto
tnel, LDM < 5 ppb), RF (fluorescencia de resonancia, 3 ppb).
NO [10 ppb; 200 ppb en smog] que proviene de la combustin de nitrgeno N2 (g) + O2 (g) 2 NO (g) a temperaturas altas,
incendios, emisiones de automviles, plantas de potencia elctrica y
relmpagos, causa irritacin ocular, nasal, dao foliar y muerte en las
plantas. Es un radical que destruye la capa de O3. Justamente el mtodo de anlisis de eleccin se basa en la quimioluminescencia (QL)
del proceso NO + O3 NO2 + O2 + hv (LDM 0,4 ppb). El mtodo EQa
(celda de estado slido de 4 electrodos, Alphasense Ltd.) tiene un
LDM < 5 ppb.
NO2 [1 ppb] es precursor del smog y lluvias cidas, con origen
vinculado a NO, se fotodisocia en la tropsfera formando NO y O3
componentes del smog. A partir de VOCs (compuestos orgnicos
voltiles) y NO2 se forma PAN (peroxiacetilnitrato) presente tambin
en el smog. Con H2O (v) forma lluvia cida. Se analiza por QL previa
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reduccin a NO catalizada en caliente, con un LDM = 0,4 ppb. La deteccin EQa (Alphasense Ltd.) alcanza un LDM = 5 ppb. El mtodo
Griess-Saltzman NO2/TEA/NO-2/I.I. captura el gas de una muestra de
3 L de aire en trietanolamina. Nitrito se mide por intercambio inico, pero el LDM = 190 ppb. Ambos NO y NO2 tienen un tiempo de
residencia en la atmsfera de 4 das. El smog fotoqumico es una
niebla amarillo-castao que irrita el tracto respiratorio, reduce la visibilidad y aumenta la secrecin ocular. Color: NOx. Irritacin: O3, aldehdos alifticos y nitratos orgnicos. Estas 4 condiciones favorecen su
formacin: 1.- NOx, 2.- Hidrocarburos (HC), 3.- Luz solar, 4.- T > 18 oC.
N2O [500 ppb; tiempo de residencia 25 aos] de fuentes antropognicas, cultivos, procesos bacterianos (secundario de la nitrificacin
e intermediario en la desnitrificacin), ocanos, etc, con eficiencia invernadero 300, aumenta 0,25 %/ao, probablemente por las prcticas de fertilizacin. Destruye O3 atmosfrico N2O + h N2 + O; O
+ N2O 2 NO. Se mide por GC con deteccin de captura electrnica, con LDM = 50 ppb.
Con respecto a los compuestos orgnicos como H4C, no-metnicos (NMOC) y VOCs, la Global Methane Initiative indica que en 2010,
de las emisiones antropognicas mundiales de H4C, 50 % derivaron
de la agricultura, minas de carbn, vertederos, sistemas de petrleo,
gas natural y aguas de desecho. H4C tiene un efecto invernadero 21
veces mayor que CO2 proyectado a 100 aos.
Los VOCs tienen mltiples orgenes. Entre 60-140 MTn C/ao son
antropognicos: procesos industriales, depsitos de combustibles,
solventes y residuos. Adems, quema de combustibles, naftas, gas-oil,
madera, carbn o gas natural. Tambin son liberados por productos
para los hogares o lugares de trabajo, como pinturas, lacas, barnices,
disolventes, adhesivos, colorantes, productos de limpieza, cosmticos, pesticidas, desinfectantes, materiales de construccin, copiadoras, impresoras, correctores, marcadores, soluciones para fotografas,
13
productos farmacuticos, refrigerantes, etc. Por su parte 1150 MTn C/

ao de VOCs son biognicos como la vegetacin que libera isoprenos,
terpenos, metanol, 2-metil-3-buten-2-ol y linalool.
NOx y VOCs son removidos del aire por procesos fsicos hmedos o
secos, o transformados por fotlisis y oxidacin por los radicales OH*,
NO3*, y por O3.
Para anlisis de VOCs, el mtodo TO-14 (EPA, 1989), puede determinar 41 VOCs de puntos de ebullicin entre -20 y 215 oC. Rango
de cuantificacin 0,2-20 ppb. Emplea enriquecimiento de las muestras (400 mL) a -160 oC en perlas de vidrio, desorcin trmica, GC/
MS (espectroscopa de masas). LDM: 0,01-0,03 ppb. Se considera un
mtodo de referencia. El mtodo TO-15 (EPA, 1999), detecta hasta
70 VOCs, incluidos alcoholes, cetonas y steres (polares), con tcnica
de purga seca multi-absorbente. La cuestin es la rapidez que a veces
se requiere para definir situaciones extremas. En este caso, los instrumentos porttiles con deteccin de fotoionizacin (PID), o incluso de
captura electrnica (ECD) son los indicados, pues tienen compensadores de temperatura y humedad incorporados, con LDM de 5 ppt en
los ms sensibles.
El ozono [35-40 ppb, a nivel de tierra] en la tropsfera es un contaminante vinculado al smog. Los compuestos precursores son principalmente xidos de nitrgeno (NOX) y VOCs. En la naturaleza, el suelo
y las plantas tambin emiten NOX y VOCs (fuentes biognicas). El radical HO* (0,01-1 ppt) principal oxidante atmosfrico durante el da,
y el radical NO3*, oxidante nocturno, se forman principalmente por:
14
O3 + h (Sol) O + O2 ( < 310 nm)

O + O2 + M O3 + M
O + H2O HO*
N2 + O2 2 NO
NO2 + O3 NO3* + O2
NO + O3 NO2 + O2
NO + HO2 ( RO2) NO2 + OH ( OR)
NO2 + h NO + O
( < 400 nm)
O2 + O + M O3 + M
Tabla 2
Un 40 % del radical HO* reacciona con CO. Cerca de 30 % reacciona con VOCs, 15 % con H4C y 15 % con O3, HO2* y H2. Algunos mecanismos complejos y reacciones globales que generan O3 se
muestran en la tabla 3:
CO + HO* CO2 + H
CO + HO* CO2 + H
H + O2 HO2
H + O2 HO2
HO2 + NO NO2* + HO*
HO2 + O3 HO+ + 2 O2
NO2* + O2 + h NO + O3
CO + 2 O2 + h CO2 + O3
CO + O3 CO2 + O2
15
H2CO + HO* H2O + HCO
H4C + HO* H3C + H2O
HCO + O2 HO2 + CO
H3C + O2 H3COO
HO2 + NO NO2 + HO*
H3COO + NO H3CO + NO2*
NO2 + O2 + h NO + O3
H3CO + O2 H2CO + HO2

HO2 + NO NO2 + HO*
2 NO2 + 2 O2 + h 2 NO + 2 O3
H4C + 4 O2 + h CH2O + H2O + 2 O3
CH2O + 2 O2 + h CO + H2O
+ O3
Tabla 3
La concentracin nocturna del radical NO3* fue estimada (Swein

Li et al, 2007) en 15 ppt. Durante la noche las emisiones de NO se
restringen a zonas urbanas, y en ellas ocurre que NO3* + NO NO2 +
NO2. Tambin NO3* se adiciona a los dobles enlaces de VOCs y terpenos, butenos o isoprenos biognicos (zonas rurales): >C=C< + NO3
>C(ONO2)C<. Este radical nitrato-alquilo reacciona con oxgeno para
dar el radical nitrato-alquil-peroxi, y en ausencia de NO principalmente en la noche, reacciona a su vez con otros radicales peroxi para dar
nitrato-perxidos, nitrato-carbonilos y nitrato-alcoholes.
El ozono es muy oxidante; afecta la salud humana, con irritacin
y afecciones respiratorias, especialmente en nios, ancianos y personas con problemas respiratorios. Afecta a la vegetacin, con daos
foliares, reduccin de cosechas y produccin de semillas, etc. y a diversos materiales (corrosin y envejecimiento). En Espaa, los lmites
de proteccin son 120 g/m3 (promedio de 8 horas) o de informacin
en 180 g/m3 (promedio de una hora). Los mtodos de deteccin
16
cuantitativos de O3 son espectrofotomtricos, como la reaccin con

ioduro y medicin de la absorcin del triyoduro a 352 nm (se debe
evitar SO2 y NO2 en la muestra), o la medicin en continuo por absorcin de luz UV a 254 nm emitida por una lmpara de Hg, con paso
ptico de 70-100 cm. En este caso, el aire pasa por dos cmaras y en
una de ellas se convierte catalticamente: as se resta la absorcin del
polvo y otros contaminantes (LDM = 1 ppb). La quimioluminiscencia,
se fundamenta en la reaccin de O3 con etileno que da formaldehido
excitado, que al decaer emite fotones a 350-550 nm detectados con
un fotomultiplicador (la respuesta es lineal entre 1 ppb y 100 ppm).
Tambin puede medirse la QL en su reaccin con NO. Existe un sensor
EQa de estado slido Alphasense , que tiene un LDM < 5 ppb (1 ppb
2 g/m3 a P = 1 a y T = 293,15 oK).
2.- Agua potable: calidad y tratamiento
El agua para consumo es 0,025 %, con grandes desigualdades
territoriales y poblacionales para su disponibilidad, y proyecciones
como: para 2025 unos 50 pases (35 % de la poblacin mundial
proyectada) tendrn dficit en la provisin de agua, y el 70 % del
agua dulce contenida en ros, lagos y acuferos subterrneos habr
sido consumida (GT Laboratorio SRL, 2006). Esta matriz vital, se contamina por (World Healt Organization 2011): 1.- Microorganismos
patgenos: bacterias, virus, protozoos, etc. Por este tipo de contaminacin, ms de 3 106 nios menores a 5 aos mueren/ao. 2.- Desechos y sustancias orgnicas: derivados del hombre y los animales.
Procesos que consumen O2. Petrleo, gasolina, plsticos, plaguicidas,
herbicidas, fungicidas, disolventes, detergentes. 3.- Inorgnicos: sales, cidos, metales pesados (Hg, Pb), industria y minera. Arsnico
natural (HACRE). 4.- Nutrientes vegetales: actividades agropecuarias,
fertilizantes, purinas. Eutrofizacin. 5.- Sedimentos y suspensiones.
6.- Radioactivos. 7.- Contaminacin trmica por centrales de energa
e industria. 8.- Emergentes (L. Dami Barcel y Mara Jos Lpez de
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Alda, 2012): a) Retardantes de llama bromados. b) Cloroalcanos. c)

Pesticidas polares. d) Compuestos perfluorados. e) Frmacos, antispticos, qumicos, etc. en cuerpos de aguas.- Eliminacin por animales y
humanos. Industria farmacutica, residuos hospitalarios, laboratorios,
instituciones de investigacin y desarrollo de frmacos, vencidos o
no usados. f) Drogas de abuso. g) Surfactantes. h) Metabolitos y/o
productos de degradacin de las clases de sustancias anteriores. i)
Productos de cuidado personal, filtros U.V. j) Aditivos de gasolinas,
aditivos industriales. k) Esteroides y hormonas. l) Subproductos de la
desinfeccin del agua.
Los mtodos analticos para control de aguas de bebida, presentan
LDM que van desde 1:103 hasta 1:1012 (ppt) (World Healt Organization 2011):
Analitos orgnicos
Cromatografa lquida de alta performance
Cromatografa gaseosa
Cromatografa gaseosa- Espectrometra de masas
Cromatografa gaseosa-espacio de gasEspectrometra de masas
Cromatografa gaseosa-purga-adsorcin-desorcin trmica
Cromatografa gaseosa-purga-adsorcin-desorcin trmica- Espectrometra
de masas
Analitos
inorgnicos
Volumetra, Colorimetra
Electrodos especficos
Cromatografa inica
HPLC
Espectrometra de absorcin atmica de llama
Espectrometra de absorcin atmica electro trmica
Espectrometra de emisin atmica con plasma inducido acoplado
Espectrometra de masas con plasma inducido acoplado
Tabla 4
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En el caso de los contaminantes emergentes, los mtodos de eleccin son Extraccin en fase slida (SPE) seguida de LC TOF-MS, y Extraccin con barras magnticas (SBSE) seguida de GCxGC-TOF-MS,
con LDM en el orden de ppt.
Pero la instrumentacin compleja del final de la Tabla, no necesariamente es excluyente de otras plataformas analticas de contaminantes ambientales, al menos en lo que a la obtencin de muy bajos
LD se refiere. En efecto, el herbicida triaznico organoclorado atrazina
(AT) ha sido analizado con xito en muestras de agua superficiales de
ro (A. Gonzlez-Techera, et al, 2014), con un magneto-inmunosensor
EQ, usando fagos pptido-mimticos, que reconocen al inmunocomplejo formado por AT y su anticuerpo monoclonal K4e7 inmovilizado
en partculas magnticas, base de la separacin de las fracciones libre-unida. El LD es 0,2 ppt, con una reproducibilidad aceptable (% CV
< 10 %) y buenos porcentajes de recuperacin.
El herbicida molinato (azepan-1-carbotioato de S-etilo, tiocarbamato sistmico), muy usado en los cultivos de arroz, puede contaminar cursos de agua por drenaje, o a la atmsfera por evaporacin. Fue
analizado (F. J. Arvalo, 2012) con la metodologa fagos pptido-mimticos, en un magneto-inmunosensor EQ competitivo en aguas de
ro contaminadas ex profeso. El LD es de 4,4 ppt.
Otro mtodo para AT es la electroquimioluminescencia con Ru(bpy)32+ sobre electrodos de Au/1-dodecanotiol, donde AT funciona
como co-reactante. El LD se halla cerca de 3 ppm (D. J. Gobelli et al,
2005). Del mismo modo, el glifosato (GF) ha sido cuantificado por
EQL sobre Au/1-dodecanotiol, acido 11-mercaptododecanoico con
un LDM 0,21 ppb (G. Marzari et al, 2011). En la figura 2, AT o GF son
los co-reactantes.
19
AT
AT
AT
Figura 2
Au-DDT-MUA
1-DODECANOTIOL
CIDO 11MERCAPTODODECANOICO
Monocapas
autoensambladas
Atrazina (AT)
Glifosato (GF)
20
Seal de luz
I luz vs. [AT]

Figura 3
3.- Contaminacin de suelos y sedimentos

El suelo y los sedimentos reciben aportes de contaminantes del aire
y el agua, y en la compleja estructura de la litsfera, sus tiempos de
residencia suelen ser mayores. Se destacan 3 tipos de contaminacin:
1.- Fsica: agentes que originan variaciones en parmetros como
temperatura y radiactividad.
2.- Biolgica: se induce la proliferacin de especies ajenas a los microorganismos naturales del suelo.
3.- Qumica: agentes que por su presencia o por su elevada concentracin alteran la composicin original del suelo, o que afectan su
biota natural.
21
Si centramos la atencin en los agentes qumicos, los metales, compuestos inorgnicos y orgnicos son los principales contaminantes (M
del Carmen Sabroso Gonzlez, 2004). Metales: Ag (fotografa, conductores elctricos, soldaduras, galvanizacin, acuacin, bateras,
catalizador.), Al (construccin, transporte, envasados, industrias elctrica y farmacutica), As (medicina, veterinaria, aleaciones, pirotecnia,
esmaltes, insecticidas, pigmentos, pintura, productos electrnicos,
tintes.), Cd (galvanizacin, pigmentos, bateras, aleaciones de bajo
punto de ebullicin), Co (aleaciones, pigmentos, esmaltes, barnices,
galvanizacin)., Cr (metalurgia, materiales refractarios, galvanizacin,
curtidos, pinturas, conservacin de madera, industria qumica). Cu
(industrias elctrica y automovilstica, construccin, fontanera, latn,
alguicidas, conservacin de madera). Fe (industrias del hierro y acero), Hg (produccin de cloruro y sosa custica, insecticidas, industrias
farmacutica y metalrgica, odontologa, catalizador en produccin
de polmeros sintticos). Mn (metalurgia, bateras, industria qumica,
cermica). Mo (metalurgia, pigmentos, catalizador, fabricacin de vidrio, aditivo en leos lubricantes). Ni (metalurgia, bateras, equipos
solares, galvanizacin, catalizador en la produccin de aceite combustible). Pb (bateras, gasolina, pigmentos, municin, soldadura, pintura, industria automovilstica). Sb (plsticos, cermica, vidrios, pigmentos, productos qumicos incombustibles). V (metalurgia, catalizador,
pigmentos). Zn (aleaciones, bronce y latn, galvanizacin, bateras,
pintura, productos agrcolas, cosmticos y medicinales). Inorgnicos:
CN- (industria qumica, minera, siderurgia, pesticidas). F- (industria
del vidrio, la madera, esmaltes, soldaduras, ptica, etc). Br- (sntesis
orgnica de plaguicidas, aditivo de combustibles, ignfugos, colorantes, medicamentos, emulsiones fotogrficas y medios de contraste).
SO42-, SO32-, S2- (agentes blanqueantes y conservantes, fertilizantes,
celulosa, manufactura de caucho, colorantes, plvora, medicamentos,
insecticidas, preparacin de derivados qumicos, etc). P (industria qumica, detergentes, acondicionadores, preservadores alimenticios, far-
22
macuticos, tintas, fertilizantes, retardadores de combustin y otros).

H4N+, NO3-, NO2-, (industrias electrnica, del petrleo y alimentaria,
propelentes de aerosoles y extintores, sus compuestos son numerosos y se encuentran en alimentos, venenos, fertilizantes, explosivos,
etc. Orgnicos: Plaguicidas organoclorados (derivados halogenados
de HC alifticos: fumigantes 1,2 dicloropropano y metilbromuro), (derivados halogenados de HC alicclicos: insecticidas-fungicidas HCH,
clordano, aldrn, dieldrn, endrn), (derivados halogenados aromticos: insecticidas-acaricidas-herbicidas-fungicidas DDT, DDD, metoxiclor, hexaclorobenceno). Plaguicidas organofosforados (insecticidas
paratin, metilparatin, malatin, forano). Plaguicidas carbamatos
(insecticidas-herbicidas aldicarb y vapn). Plaguicidas de la urea (herbicidas fenurn, monurn y linurn). Plaguicidas heterocclicos (herbicidas zimazina y clorazina). Plaguicidas inorgnicos (compuestos de
Cu, S, Hg, halogenados alifticos, cido cianhdrico, xido de metileno, fosfina, anhidro sulfuroso, etc., de acciones diversas). Hidrocarburos aromticos policclicos (HAPs): no tienen sustituyentes o heterotomos, y estn en el petrleo, carbn, alquitrn y aparecen por uso de
combustibles fsiles o de biomasa. Son los HC ms txicos junto a los
monoaromticos. El benzo (a) pireno es de referencia para el impacto
ambiental. HAPs persisten en suelos, sedimentos y partculas en aire.
La Administracin de Salud y Seguridad Ocupacional (OSHA) ha establecido un lmite de 0,2 mg HAPs/m3 de aire. El Lmite de Exposicin
Permisible (PEL) establecido por OSHA para vapor de aceite mineral
que contenga HAPs es 5 mg/m3 promediado durante un perodo de
exposicin de 8 horas. Benceno y derivados: en EEUU es una de las
20 sustancias de mayor produccin. Se usa para producir estireno (en
Styrofoam y otros plsticos), cumeno (en varias resinas) y ciclohexano (en niln y fibras sintticas kevlar y en ciertos polmeros). Tambin se usa en la manufactura de ciertos tipos de caucho, lubricantes, tinturas, detergentes, medicamentos y plaguicidas. Se encuentra
naturalmente en el petrleo, la gasolina y en el humo de cigarrillos.
23
Los niveles de benceno al aire libre oscilan entre 0,02 y 34 partes de

benceno por billn de partes de aire (ppb). El agua potable contiene tpicamente menos de 0,1 ppb de benceno. Bifenilos policlorados
(PCBs): son lquidos aceitosos o slidos, incoloros a amarillo claro, que
se empleaban como refrigerantes y lubricantes en transformadores,
condensadores y otros equipos elctricos ya que no se incendian fcilmente y son buenos aislantes. EPA ha fijado un lmite de 0,5 ng /L de
agua potable. Se requiere que las industrias le notifiquen de derrames
o de la liberacin accidental al ambiente de 1 libra (0,45359237 Kg) o
ms de BPCs. La Administracin de Alimentos y Drogas (FDA) requiere
que la leche, los huevos y otros productos lcteos, la grasa de las aves,
pescados, mariscos, y alimentos para nios, no contengan ms de 0,2
a 3 ppm de BPCs.
Los anlisis en suelos tienen el inconveniente de la obtencin de
una muestra representativa: los componentes normales y los contaminantes, estn sometidos a variaciones espaciales y temporales, dentro
de una matriz donde la desigual distribucin del tamao y naturaleza
de las partculas, hacen impensable mtodos de adicin estndar o
estndar interno en la muestra slida. Las caractersticas fsico-qumicas del suelo influyen la transformacin, retencin, y movimientos
de los contaminantes por el suelo. El contenido de arcilla, materia orgnica, textura, permeabilidad, pH, Eh, capacidad de intercambio catinica influyen en la velocidad de migracin y especiacin del analito.
Estos factores deben ser considerados cuando se disea un protocolo
de muestreo para anlisis de contaminantes, que es distinto de un
anlisis de suelos rutinario para agricultura (Benjamin J. Mason, 1992;
M. R. Carter, E. G. Gregorich, 2006).
Los anlisis de suelos urbanos (Carl R. Crozier and Matthew Polizzotto) estn centrados en contaminantes inorgnicos (Pb, Zn, Hg,
Cd, As, Ba, Cr y Se), y orgnicos (hidrocarburos totales de petrleo
(TPH, especialmente aromticos policclicos, PAH, solventes como tricloroetileno y percloroetileno (TCE, PCE/PERC), pesticidas (atrazina,
24
carbaril), dioxinas, y bisfenol A (BPA). Para el anlisis de metales, la

fluorescencia de rayos X es el mtodo de eleccin. Un espectrmetro XRF se usa rutinariamente para anlisis qumico no-destructivo de
elementos trazas en rocas, minerales, sedimentos y fluidos (metalurgia, medicina forense, polmeros, electrnica, arqueologa, anlisis
ambientales, geologa y minera), siempre que el objeto irradiado sea
mayor que 2-5 micrones. El haz de rayos X (0,01-10 nm; 125-0,125
KeV) o gamma puede expulsar electrones internos y el hueco ser
ocupado por otro electrn emitindose rayos X propios del elemento
o fotones de fluorescencia (transiciones LK: K; MK: K; ML: L,
etc) cuyas intensidades son proporcionales al contenido del elemento.
Existen 2 mtodos, de energas o longitud de onda dispersivas (EDXRF
o WDXRF). Se pueden analizar elementos Z > 11 (Z = 4 con WDXRF)
y hasta Z 90, pero no es posible distinguir estados de oxidacin
diferentes del mismo elemento. Los LDM son del orden de ppm, y ya
existen instrumentos portables para trabajos in situ. La espectroscopa atmica (AAS, EAS, GFAA) y la de masas (MS) con plasma de Ar
(ICP-MS) permiten el anlisis de trazas o ultra-trazas de metales, pero
las muestras deben remitirse al laboratorio, y en su mineralizacin, se
pueden cometer ms errores que en la tcnica en s. Los procesos de
mineralizacin sin hornos de micro-ondas, con los clsicos cidos HCl,
HNO3, HClO4, H2SO4 y H3PO4, son un contrasentido de la Qumica
Verde. Los LD LDM pueden variar: ICP-MS, 1 ppb-1ppm; GFAA, 10
ppb-1 ppm; ICP-AES, 1-100 ppm y AA de llama, 1-1000 ppm, lo que
depende de la calidad del instrumental y operador.
Con respecto a los contaminantes orgnicos, sabemos que el aumento de la produccin y usos de compuestos orgnicos sintticos
(plaguicidas, productos del petrleo, lubricantes, disolventes, gasolinas, etc.) han multiplicado los incidentes de arribo de estas sustancias
a la atmsfera, hidrsfera, suelos y sedimentos. Otras fuentes de contaminantes orgnicos son las prcticas agrcolas, el control de plagas,
las actividades industriales, comerciales, pesqueras y el turismo.
25
VOCs: las muestras se tratan con el mtodo 5035-EPA, en sistemas cerrados de extraccin purga-atrapamiento. Los no halogenados
se analizan por inyeccin directa, o previa purga-atrapamiento. Los
VOCs son extrados generalmente de fase acuosa, por saturacin de
un gas inerte (He), concentrados en una trampa con carbn hidrfugo y por un suave calentamiento desorbidos e inyectados en el cromatgrafo, con deteccin GC-FID. El procedimiento est basado en el
mtodo 8015B-EPA (LDM 2-48 ppb).
El mtodo estndar ms empleado es EPA 8260B, aplicable a la mayora de VOCs (121 analitos), gran parte de los cuales pueden aislarse
de la muestra empleando el procedimiento de purga-atrapamiento
(EPA 5035). Aunque pueden usarse otros mtodos de preparacin/
introduccin como la extraccin con hexadecano (EPA 3820), espacio de cabeza para slidos (EPA 5021), destilacin azeotrpica (EPA
5031), destilacin a vaco (EPA 5032), y los cartuchos de sorcin-desorcin (EPA 5041A). Se alcanzan LCP entre 0,12-250 ppb.
VOCs semi-voltiles deben extraerse por lquido-lquido en continuo (EPA 3520C), o soxhlet para slidos Este mtodo (EPA 3540C) se
considera exhaustivo para extraer los contaminantes de las matrices
slidas, y es de referencia para validar otros mtodos de extraccin.
El uso de fluidos supercrticos (EPA 3560) permite extraer una muestra slida en condiciones de presin y temperatura elevadas (mxima
eficiencia) cuyo extractante CO2 se elimina con facilidad (340 atm, 80
C, flujo de 500-1000 mL/min).
Los compuestos orgnicos semi-voltiles se analizan mediante cromatografa de gases con columna capilar y detector de masas (GC/
MS; EPA 8270C), con LDM estimados entre 10-50 ppb.
La determinacin de plaguicidas clorados puede efectuarse por
GC-ECD (captura electrnica) o GC-ELCD (conductividad electroltica)
con columna capilar (EPA 8081A). Este mtodo incluye PCBs junto a
26
los plaguicidas clorados como analitos, no obstante los PCB deben

analizarse empleando el mtodo EPA 8082, que considera procedimientos especficos para la purificacin y cuantificacin. Por tanto si
se espera la presencia de PCB, el extracto de la muestra puede dividirse en dos antes de llevar a cabo las etapas de purificacin, una para
el mtodo 8081 (plaguicidas clorados), y la otra para el mtodo 8082
(PCBs). La determinacin de herbicidas clorados mediante GC con
columna capilar y deteccin ECD (EPA 8151 A) tiene LCP 1-1000 ppb.
La determinacin de bifenilos policlorados (PCB) puede hacerse por
cromatografa capilar y deteccin GC-ECD o ELCD (EPA 8082). Existen
alrededor de 206 congneres de PCB. Segn la IUPAC se clasifican en
homlogos de acuerdo a la cantidad de tomos de cloro que presenta la molcula y estos se pueden subdividir en ismeros indicando la
posicin del tomo de cloro. El mtodo de anlisis de hidrocarburos
clorados, cromatografa de gases capilar y detector ECD (EPA 8121),
tiene LDM 1,4-240 ppb.
Los organofosforados se analizan por cromatografa de gases (EPA
8141A) con detector fotomtrico de llama (FPD) para fsforo o el
detector de nitrgeno-fsforo (NPD). Ambos poseen una gran selectividad para las molculas que contienen P y/o N. El FPD contiene
una llama que quema la muestra e ioniza cualquier tomo de P que
exista en el eluyente. El P ionizado se detecta en el fotodetector. El
detector NPD es una perla de cermica recubierta por una sal de un
material fcilmente ionizable, generalmente Rb. El calor crea una plasma superficial sobre la perla. Los compuestos de N y/o P se ionizan
y originan una corriente entre los polos cargados del dispositivo. Los
analitos ms usuales que se estudian con estos detectores son los
plaguicidas fosforados, aunque algunos disolventes de uso industrial
muy frecuentes tambin se estudian con este sistema. LCP 1 ppb. Los
hidrocarburos aromticos policclicos (PAH) se determinan por HPLC
con deteccin UV y fluorescente (EPA 8310). Los N-metil carbamatos
por HPLC (EPA 8318), con LDM 1,7-50 ppb.
27
Micotoxinas
El cambio climtico puede alterar la exposicin humana hacia las
micotoxinas. Los cambios fsicos en la temperatura, vientos y lluvias
causados por el clima, pueden afectar la distribucin de micotoxinas
de formas complejas. El efecto en la exposicin humana vara segn
las propiedades especficas de las micotoxinas, suelos y condiciones
de humedad, flujos de vientos, topografa, usos del suelo, nivel de
desarrollo y caractersticas de la poblacin. La exposiciones a estos
qumicos relacionadas con el cambio climtico pueden ejercer efectos desproporcionados en los grupos de riesgo alto. La desnutricin,
particularmente en los nios puede agravar la exposicin a las micotoxinas. Como las rutas de exposicin pueden ser comer alimentos o
beber lquidos con toxinas, respirar aire en ambientes de excesiva humedad, y absorcin por piel, uno debe concluir que las micotoxicosis
son un problema ambiental (World Health Organization, 2011).
Los mtodos de anlisis presentan las fases de muestreo, extraccin
y cuantificacin. La mayora de los pases tienen regulaciones o lmites
aceptables de micotoxinas en alimentos u otras matrices, y as queda vinculado el mtodo analtico. Los mtodos oficiales normalmente
son HPLC de fase inversa, con deteccin UV, fluorescencia o MS, con
LD entre 0,015 ppb. Estos mtodos suelen usar procedimientos de
preconcentracin y purificacin de los extractos para remover los interferentes de la matriz, como columnas de inmunoafinidad (IAC),
de extraccin en fase slida (SPE) o extraccin lquido-lquido (LLE). A
veces hay que derivatizar el analito para su deteccin ptica.
En los ltimos aos, se disearon mtodos o plataformas analticas (J. C. Vidal et al, 2013; M. A. Zon et al, 2013) donde aparecen
elementos biolgicos (anticuerpos, receptores, clulas, fagos, aptmeros, enzimas, etc.) que interaccionan con los analitos y dan lugar
a los biosensores con seales fsico-qumicas variadas, en plataformas
clsicas o del tipo ELISA/EIA/RIA/IRMA/LIA. Si la seal del sistema es
28
electroqumica (amperometra, impedancia, potenciometra, conductimetra, voltametra de onda cuadrada, etc) tenemos biosensores
electroqumicos. Tambin, hay electrodos que solos o modificados
responden a los analitos, y el sistema no cuenta con elementos biolgicos: son sensores electroqumicos.
Hasta el ao 2002, podemos resumir los mtodos empleados para
analizar ocratoxina A (OTA) en muestras de vinos tintos (A. Leitner et
al., 2002), en la tabla 5:
OTA en Vinos
Preparacin de
la muestra
Separacin/Determinacin
LD ppt
Extraccin en
I n m u n o Doble extraccin
Inmuno
fase
slida
afinidad lquida/IAC L/L/
afinidad IAC
RP-18SPE
IAC
IAC
LC-MS-MS
LC-MS-MS
LC-FL
LC-FL
50
50
10
10
Tabla 5
Recientemente (P. R. Perrotta et al, 2011) OTA fue determinada en

vinos tintos, sobre un electrodo de Au modificado con una monocapa
de cisteamina autoensamblada (SAM). El procedimiento de pre-tratamiento es una doble extraccin L/L, y las seales electroqumicas
son de voltametra de onda cuadrada (VOC). Este dispositivo sensor
electroqumico tuvo un LDM de 4 ppt.
La performance operativa fue luego superada (P. R. Perrotta et al.,
2012) con una plataforma ELISA competitiva con anticuerpos monoclonales inmviles en nanopartculas magnticas, y electrodos de
carbono de lmina impresa, con seales VOC. El LDM es de 8 ppt, y
lo ms notable es que con este biosensor electroqumico con separacin magntica de las fracciones libre y unida, no se requiere
pretratamiento de la muestra.
29
Figura 4
Los resultados obtenidos con ambos, sensor y biosensor electroqumicos, son sorprendentes en comparacin con mtodos instrumentales ms complejos como PTGC-MS (purge trap gas chromatography-mass spectroscopy); GC x GC-TOF-MS (two-dimensional gas
chromatography-time of fly-mass spectroscopy); HPLC-MS-MS; etc,
mtodos cuyos LD son ppt.
CONCLUSIONES
El medio ambiente y sus compartimientos aire-tierra-agua son el
patrimonio inconmensurable de la humanidad y de los seres vivos, tal
vez la verdadera maravilla del mundo. Establecida la naturaleza de
los procesos fsico-qumicos que los inter-relacionan, existe la obligacin de los estados e individuos de garantizar que los ciclos naturales
y la interaccin entre las especies puedan desarrollarse segn su naturaleza.
30
Por eso, los Qumicos Analticos Ambientales deben fundirse con

la idea de controlar que los analitos estn en concentraciones aceptables para que no se perturbe el equilibrio medio-ambiental, pero
empleando mtodos de anlisis de bajo impacto ambiental.
Pensamos que lo que antecede es una contribucin para entender
las bases operativas para proceder con criterios suficientes para cuidar
la verdadera maravilla del mundo.
REFERENCIAS
Agua y biosfera. GT Laboratorio SRL., Ed. Rosario. Argentina. (2006).
F. J. Arvalo, A. Gonzlez-Techera, M. A. Zon, G. Gonzlez-Sapienza, H.
Fernndez. Biosensors and Bioelectronics 32 (2012) 231237.
Carl R. Crozier and Matthew Polizzotto,.Soil Facts Minimizing Risks of Soil
Contaminants in Urban Gardens. Department of Soil Science, North
Carolina State University. Lucy Bradley.Department of Horticultural
Science, North Carolina State University. North Carolina Cooperative
Extension Service Pubs.
Dami Barcel y Mara Jos Lpez de Alda Contaminacin y calidad
qumica del agua: el problema de los contaminantes emergentes. L..
Instituto de Investigaciones Quimicas y Ambientales-CSIC (Barcelona),
2012.
Diaz de Santos Mtodos normalizados para el anlisis de aguas potables
y residuales. APHA, AWWA, WPCF. Ed., S.A., Espaa, 1992.
A. Gonzlez-Techera, G. Gonzlez-Sapienza, M. A. Zon, P. G. Molina, H.
Fernndez, F. J. Arvalo. XXI Congreso de la Sociedad Iberoamericana
de Electroqumica (SIBAE), La Serena, Chile, 06 al 11 de Abril de 2014.
Soil sampling and methods of analysis, 2nd. Ed., M. R. Carter, E. G.
Gregorich, Canadian Society of Soil Science. 2006/8. CRC press. Taylor & Francis Group, LLC.
H. Fernndez. Electroanalysis 2011, 23, No. 7, 1585 1592.
31
Yuzuru Hayashi, Rieko Matsuda, Katsutoshi Ito, Waka Nishimura, Kazuhiro Imai, Masako Maeda. Analytical Sciences, 21, 2005, 167-169.
J.G. Ibanez, M. Hernandez-Esparza, C. Doria-Serrano, A. Fregoso-Infante, M. Mohan Singh. Environmental Chemistry. Springer, 2009.
H. A. Laitinen, W.E. Harris. Chemical Analysis., 2a Ed. Mc. Graw Hill, Inc.
(1975).
A. Leitner et al./Analytica Chimica Acta 453 (2002) 3341.
Suwen Li , Wenqing Liu, Pinhua Xie, Ang Li, Min Qin, Ke Dou, Advances
in Atmospheric Sciences, September 2007, Volume 24, Issue 5, pp
875-880.
Mar, B. W.; Horner, R. R.; Richey, J. S.; Palmer, R. N.; Lettenmaier, D. P.
(1986), Data acquisition: cost effective methods for obtaining data on
water quality, Environ. Sci. & Tech., 20:545- 551.
Benjamin J. Mason, Ph.D. Preparation of soil sampling protocols: sampling techniques and strategies. Environmental Research Center. University of Nevada-Las Vegas. EPA/600/R-92/128. July 1992. EEUU.
G. Marzari, D. J. Gobelli, M. V. Cappellari, G. M. Morales y F. Fungo. Deteccin de Atrazina por Quimioluminiscencia electrogenerada. XVIII
Congreso Argentino de Fisicoqumica y Qumica Inorgnica. Abril,
2013, Rosario. Argentina.
G. Marzari, G. Morales y F. Fungo Deteccin de Glifosato por Quimioluminiscencia electrogenerada sobre autoensamblados en Oro. XVII
Congreso Argentino de Fisicoqumica y Qumica Inorgnica. Mayo
2011, Crdoba. Argentina.
Miltiades I. Karayannis and Constantinos E. Efstathiou, 8th Euroanalysis
Conference in Edinburgh in 1993.
J. C. Miller, J. N. Miller. Estadstica y Quimiometra para Qumica Analtica.
Ed. Pearson. 2008.
P. R. Perrotta, N. R. Vettorazzi, F. J. Arvalo, A. M. Granero, S. N. Chulze,
M. A. Zn,
32
P. R. Perrotta. N. R. Vettorazzi, F. J. Arvalo, M. A. Zn, H. Fernndez.

Sensors & Actuactors B 162 (2012) 327-333.
R. Reeve; Introduction to Environmental Analysis, J. Wiley & Sons (2002).
M del Carmen Sabroso Gonzlez, Ana Pastor Eixarch Gua sobre suelos
contaminados. CEPYME, ENTECSA, Gobierno de Aragn,, Zaragoza,
2004.
M. Valcrcel, R. Lucena, Trends in Analytical Chemistry, Vol. 31, 2012, 1-7.
International Conference on Chemistry and the Environment (ICCE
2011), Emerging Issues in Environmental Chemistry: from Basic Research to Implementation. ETH Zurich Campus Science City Hoenggerberg Switzerland.
N. Vettorazzi, Jornadas RIARTAS 2013, Ro Cuarto, Crdoba, Argentina.
J. C. Vidal, L. Bonel, A. Ezquerra, S. Hernndez, J. R. Bertoln, C. Cubel, J.
R. Castillo. Biosensors and Bioelectronics, 49 (2013) 146158.
World Healt Organization, Guidelines for Drinking-water Quality, Fourth
Ed., 2011.
WHO, Childrens Health and the Environment. Training Package for the
Health Sector. World Health Organization, October 2011.
Chunlong Zhang, Environmental Analytical Chemistry, University of
Houston-Clear Lake, Houston, Texas, U.S.A. Environmental Monitoring. Encyclopedia of Life Support Systems (EOLSS).
Zhang, J.; Zhang, C., Sampling and sampling strategies for environmental
analysis, International J. of Environmental Analytical Chemistry, 92 (4)
2012, 466-478.
M. A. Zon, N. R. Vettorazzi, M. B. Moressi, P. G. Molina, A. M. Granero,
F. J. Arvalo, S. N. Robledo, H. Fernndez, Voltammetric techniques
applied on organic compounds. Applications to some compounds
related to agroalimentary and health systems; Chap. 3, en Voltammetry: Theory, Types and Applications. Eds: Y. Saito y T. Kikuchi.
Nova Science Publishers, Inc. NY, EEUU. 2013. Pgs. 87 119. ISBN:
978-1-62948-057-2.
33
Procedimientos de preparacin
de muestras
Paula Guedes*, Eduardo Mateus
CENSE, Departamento de Cincias e Engenharia do Ambiente, Faculdade de Cincias e Tecnologia, Universidade Nova de Lisboa, Caparica, Portugal
*p.guedes@campus.fct.unl.pt
Procedimientos de preparacin de muestras
35
1. Introduccin
Contaminantes orgnicos en los lodos de
depuradora
En los ltimos aos, los efectos adversos que incluyen trastornos
endocrinos y la resistencia a los antibiticos de algunos compuestos,
se han observado en los seres humanos, animales y otros organismos
y algunos pueden mostrar una respuesta biolgica incluso en concentraciones muy bajas (Lapworth et al., 2012).
Estos contaminantes orgnicos emergentes comprenden una
amplia gama de diferentes compuestos (as como los metabolitos y
productos de transformacin) incluyendo: productos farmacuticos
y productos de cuidado personal, pesticidas, productos veterinarios,
compuestos industriales / subproductos, aditivos alimentarios, as
como los nanomateriales artificiales (Clarke and Smith, 2011).
La va principal de transferencia de contaminantes orgnicos (COs)
para entrar en el medio ambiente es a travs de plantas de tratamiento de aguas residuales (Boleda et al., 2009; Kuster et al., 2005; Madureira et al., 2010). Varios anticonceptivos orales se han detectado en
los efluentes de plantas de tratamiento de aguas residuales urbanas
(Golet et al., 2002), el suelo y el agua del ro (Golet et al., 2001), los
lodos de depuradora (Gbel et al., 2005), as como el suelo y el estircol (debido al uso veterinario) (Golet et al., 2003).
La utilizacin de los lodos se considera una opcin viable para mantener / mejorar el reciclaje de los elementos con valor socio-econmico, como los nutrientes y la materia orgnica y, por tanto en 2004 se
36
Paula Guedes, Eduardo Mateus
utiliz el 37% de los lodos tratados en la agricultura (Fytili and Zabaniotou, 2008). No obstante, la aplicacin al suelo de los bioslidos
municipales (por lo general a los campos agrcolas) es una va potencial de exposicin del suelo a los COs. Los riesgos a largo plazo asociados con la aplicacin al suelo de los bioslidos estn pobremente
caracterizados y, en algunos casos, difcil de cuantificar con precisin
(NRC, 2002). Los anticonceptivos orales, una vez en el suelo, pueden
ser trasladadas a las plantas cultivadas, y por lo tanto potencialmente
entran en la cadena de los alimentos (Wu et al., 2012). De hecho, el
consumo de estas plantas puede aumentar la exposicin tanto del
ganado como de los humanos a los COs (Zohair et al., 2006). Por
ejemplo, triclocarbano (3,4,4 -triclorocarbanilida) y triclosn (5-cloro-2-(2,4-diclorofenoxi)-fenol), que son txicos, persistentes y lipfilos, se encuentran en vegetales de tejidos de calabaza y calabacn
(Aryal and Reinhold, 2011). En un estudio de laboratorio, se detectaron tambin la carbamazepina, la difenhidramina y triclocarbano en
plantas (pimienta, tomate, la acelga, lechuga y rbano) que se haban
cultivado en suelos tratados con bioslidos (Wu et al., 2012).
Actualmente, existe un proyecto de una futura directiva de lodos
Europea (Comisin Europea, 27 Abril 2000) para mejorar la vigilancia de la calidad del lodo (Tabla 1) incluyendo bis (2-etilhexil) ftalato
(DEHP), sulfonatos de alquilbencenos lineales (LAS), etoxilados de nonilfenol (NPEs), hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs), bifenilos
policlorados (PCB), compuestos orgnicos halogenados (AOX) y dibenzodioxines policlorados (PCDD) y dibenzonfuranos (PCDF).
37
Tabla 1. Los valores lmite propuestos para la concentracin de los

compuestos orgnicos y metales pesados en los lodos para uso en
suelo (Comisin Europea, 2000).
Compuestos orgnicos
AOX
LAS
DEHP
NP/NPE
PAH
PCB
Dioxinas
PCDD7/F
Valores lmite (mg/kg DM)

500
2600
100
50
6
0.8
Valores lmite (ng TE/kgDM)
100
2. Procedimientos de preparacin
de muestras
Rpido, fcil, barato, eficaz, robusto y seguro, el mtodo QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, and Safe - Rpido, Fcil, Barato, Efectivo, Robusto y Seguro, RaFaBERS) se basa en el trabajo realizado y publicado por Anastassiades et al. (Anastassiades et al.,
2003). QuEChERS fue desarrollado utilizando un mtodo de extraccin de los plaguicidas en las frutas y verduras, junto con el mtodo
de limpieza que elimina los azcares, lpidos, cidos orgnicos, esteroles, protenas, pigmentos, y el exceso de agua. Esta tcnica ofrece una
alternativa fcil de usar para extracciones lquido-lquido tradicional
y en fase slida. El mtodo QuEChERS es un proceso de dos etapas:
extraccin y limpieza (clean-up). En la primera etapa, las muestras son
homogeneizadas y extractadas mediante salting-out con una sal y un
38
solvente orgnico. Luego el sobrenadante es limpiado usando una extraccin en fase slida dispersiva (d-SPE) para remover interferencias.
Su eficacia depende de las propiedades del analito, composicin
de la matriz, equipos, y la tcnica analtica disponible en el laboratorio
[Wang et al., 2012]. Existen dos normas divergentes en relacin con el
tipo de tampn empleado en QuEChERS: la norma americana AOAC
[Method AOAC, 2007], que implica el uso de un tampn de acetato;
y, la norma europea EN15662 [EN15662, 2009], que implica el uso de
un tampn de citrato. Las sales y los adsorbentes utilizados en los kits
de dSPE son :
Sulfato de magnesio (MgSO4) - elimina el exceso de agua de la
muestra;
Amina primaria/secundaria (PSA) - elimina los cidos orgnicos,
cidos grasos, azcares y pigmentos de antocianina de la muestra;
C18 Sorbente Endcapped (C18E) - elimina grasas, esteroles, y otras
interferencias no polares de la muestra;
carbon negro grafitizado (GCB) - elimina los pigmentos de la muestra, pero no debe usarse con pesticidas planares.
El mtodo QuEChERS es popular especialmente para la determinacin de la amplia gama de residuos qumicos, principalmente pesticidas en diversas matrices de alimentos, debido a su simplicidad,
bajo costo, susceptibilidad a un alto rendimiento y alta eficiencia con
un nmero mnimo de pasos [Anastassiades et al., 2003; Pinto et al.,
2010]. QuEChERS tambin se han utilizado para la extraccin de diversos compuestos orgnicos tales como medicamentos veterinarios,
plaguicidas, hormonas y fenoles en matriz slida tal como suelo [Vera
et al., 2012].
La eleccin del solvente(s) es una de las decisiones ms importantes en cualquier extraccin. Hay muchos aspectos tienen que ser
39
considerados. Que, incluyendo: la capacidad de cubrir el espectro

analtico deseado (que va desde polares a compuestos no polares);
selectividad durante la extraccin; particin y limpieza; El logro de
la separacin de agua; susceptibilidad a tcnicas cromatogrficas de
separacin; costo; la seguridad; impacto ambiental; y cuestiones de
manejo (por ejemplo, la facilidad de evaporacin, volumen de transferencias). Extraccin con solvente ACN es el ms comnmente usado
en QuEChERS debido a su capacidad para separar fcilmente del agua
cuando se aade una mezcla apropiada de sales (MgSO4 y cloruro
de sodio, NaCl). Sin embargo, si ACN no proporciona recuperaciones
adecuados, otros solventes se pueden emplear, a saber: acetato de
etilo, acetona y metanol (MeOH).
Peysson et al., (2013) desarrollaron un mtodo basado en la extraccin de QuEChERS seguido por LC-TOF-MS que permite la extraccin
y el anlisis de 117 farmacuticos y de la hormona en residuos de lodo
de depuradoras). La etapa de extraccin se realiza con el tampn de
acetato y MgSO4 y el solvente es una mezcla de 0,1 M EDTA y + 1%
de cido actico ACN (v / v). En el caso de una matriz de gran complejidad como los lodos una etapa de purificacin adicional (dSPE) es
necesario para limitar la presencia de sustancias interferentes. En este
caso se utilizaron 150 mg de PSA y 900 mg de MgSO4.
Extraccin en fase slida (SPE; solid phase extraction) es una tcnica muy popular actualmente disponible para la preparacin rpida
y selectiva de muestras. La versatilidad de la SPE permite el uso de
esta tcnica para muchos propsitos, tales como la purificacin en
cantidades traza, desalinizacin, derivatizacin y fraccionamiento de
clase. El principio de SPE es similar a la de la extraccin lquido-lquido
(LLE), que implica una particin de los solutos entre dos fases. Sin
embargo, en lugar de dos fases lquidas inmiscibles, como en LLE, SPE
implica la particin entre un lquido (matriz de la muestra o solvente
con analitos) y una fase slida (absorbente). El procedimiento general
40
se basa en 5 pasos:
i. Elegir el adsorbente;
ii. Acondicionamiento;
iii. Adicin de la muestra;
iv. Eliminar interferencias (etapa de lavado);
v. Eluir el compuesto de inters.
Se han utilizado SPE con fase inversa, fase normal o en modo-mixto; y en formato de cartucho o columna, con el propsito de limpiar
extractos de lodos de depuradora (Tabla 2, en el fin del texto).
En SPE de fase inversa (C18, C8) el mecanismo de retencin es la
interaccin de los grupos no polares de los analitos de inters y los
grupos funcionales no polares del adsorbente, a travs de las fuerzas
de Van der Waals. Esta interaccin es interrumpida por los solventes
que tienen carcter no-polar y por lo tanto se utilizan como eluyentes
de los analitos.
Los adsorbentes polares ms utilizados para fase normal son de
slice (SiO2)x, almina (Al2O3), silicato de magnesio (MgSiO3) o Florisil.
Adsorbentes polares se utilizan para eliminar interferencias de la matriz a partir de extractos orgnicos de matrices slidas. Los componentes de la matriz hidrfilos son retenidos por el adsorbente polar mientras que el analito de inters se eluye del adsorbente por un solvente
no polar. SPE en fase normal de limpieza se ha aplicado hasta ahora a
la limpieza de muchas muestras de lodos de depuradora (Tabla 2, en
el fin del texto).
Un absorbente de modo-mixto est diseado qumicamente para
tener mltiples sitios de retencin sobre una partcula individual. Estos
sitios explotan diferentes mecanismos de retencin mediante la in-
41
corporacin qumicamente diferentes ligandos en el mismo sorbente.

Por ejemplo, se han fabricado adsorbentes que contiene cadenas de
alquilo hidrfobas y de cationes o de los sitios de intercambio aninico en la misma partcula adsorbente (MCX, MAX, respectivamente).
Absorbentes de modo-mixto se aprovechan de la interaccin con diferentes grupos funcionales en un nico analito o diferentes grupos
funcionales en mltiples analitos.
El acondicionamiento consiste en la adicin de un solvente con el
fin de eliminar las impurezas y activar la fase slida. Este paso hace
que el pH del solvente sea compatible con la solucin de la matriz,
evitando as los cambios qumicos no deseables cuando se aade la
misma. Adems, este paso mejora la reproducibilidad del mtodo
analtico (Fifield, 2000). La percolacin es el lento paso de la muestra
en la fase lquida bajo presin o succin del cartucho. El compuesto
de inters se distribuir entre el lquido de la muestra y la fase slida,
logrando as un equilibrio. Inicialmente, como resultado de las interacciones fuertes que tienen lugar, el analito es retenido por la fase slida
por lo tanto aislado de la matriz (retencin). El tamao de la muestra debe ser seleccionado con el fin de estar dentro de la capacidad
del lecho adsorbente y el caudal del solvente no debe ser demasiado
grande, de lo contrario la eficiencia de la retencin se deteriora y el
proceso de separacin ser incompleto (Fifield, 2000). Entonces, se
puede incluir una etapa de lavado de la columna de extraccin (fase
estacionaria) con un solvente orgnico para eliminar la interferencia o
una etapa de secado de la columna. Si este paso se excluye del proceso, los compuestos de interferencia son retenidos, y slo las molculas
de analito se retiran del adsorbente. La eleccin del solvente con que
se efecta el lavado, el pH y la fuerza inica de las soluciones acuosas,
en particular, su polaridad, son crticos en el control de la selectividad
y la eficacia de una extraccin (Tabla 3). La eliminacin del analito se
efecta por elucin usando un solvente apropiado (eluyente), a la que
el analito tiene ms afinidad qumica, y que el arrastre. El extracto de
42
volumen reducido puede ser analizado directamente por cromatografa o, alternativamente, se evapora y se reconstituye con un solvente
adecuado sobre el anlisis deseado.
Tabla 3 Caractersticas de los solventes ms utilizados en SPE (Adaptado de Sigma-Aldrich Co., 1998)
Polaridad
No-polar
Polar
Fase inversa Fase normal

fuerte
dbil
Solvente
Miscible con
agua
Hexano
No
Isooctano
Tetracloruro de
carbono
Cloroformo
diclorometano
tetrahidrofurano
ter de dietilo
Acetato de etilo
Acetona
Acetonitrilo
Isopropanol
Metanol
Agua
Fase inversa Fase normal
dbil
fuerte
cido actico
No
No
No
No
S
No
Mal
S
S
S
S
S
S
AOX
Condiciones de Limpieza / pre-conAnlisis

extraccin
centracin
Soxhlet: DCM
Soxhlet:
Activated
copper,
GPC (Bio-Beads SX3)
Hex:Ace
(1:1),
300 mL, 16 h
Sewage sludge
SPD: Alumina (3
g), copper (2 g),
SPE (C18)
DCM, 6 mL, 15
min, sonication
PLE:
DCM:Hex
Secondary and (1:1), 3 min, 3 cyb
digested sludge cles, 100 C, 10.1
Mpa
80-110
0.117 d.m. a
GCMS
0.050.5
UPLC-AP0.219.00
CI-MS/MS
1.2
77112
65112
47104
1.110.2e
4.5
<10
2-101
Recuperacin Precisin
(%)
(%)
Multidimensional
0.016 d.m. 81105
GC (HRMDGC-ECD)
GC/MS
Column clean-up:
multi-layer (i) SiO2
AgNO3,
H2SO4, GC/MS
NaOH. (ii) Macro
Al2O3 GPC
Sewage sludge
GPC (divinylbenzeSoxhlet: Ace:Hex
and landfill leane), Silica gel co- HPLC/MS
(1:1)
chates
lumn
Aerobically or
a n a e ro b i c a l l y
stabilized sewage sludge
LD
(ng g-1)
Silica, florisil and H R G C 0.076.5

alumina columns
HRMS
d.m.
Primary, secon- Soxhlet: Hex:Ace

dary, raw and (1:1), 300 mL, Silica gel column
digested sludge 16 h
Primary sludge,
secondary excess sludge and Soxhlet: Tol
(dewatered) digested sludge
Sewage sludge
Soxhlet: Activa- Silicaalumina coGCMS

Digested sludge ted copper, DCM, lumn and GPC (BioHRGCMS
280 mL, 18 h
Beads SX3)
Compuestos tipo de
orgnicos1
muestra
al.,
(Snchez-Brunete et al., 2009)
(Mascolo et al.,
2010)
(Morris et al.,
2004)
(Kupper et al.,
2008)
(Shin et
2007)
(Knoth et al.,
2007; Morris et
al., 2004)
(Meesters and
Schrder, 2002;
North, 2004)
(Stevens et al.,
2002)
Ref.
Tabla 2. Mtodos para el anlisis de compuestos orgnicos, divididos por clases, en los lodos de
depuradora.
43
DEHP
LAS
Seven
sludge
treatment (thermal drying) and
three composting sludge
USE:
Activated
copper,
DCM:H2O (5:1) pH:
SPE (Florisil)
1012, 36 mL, 10
min + mechanical
shaking, 2 h
GC/MS
3.35.4
HPLC-FLD
MAE: MeOH, 25
Anaerobic dimL, 25 min, 105 b
gested sludge
C, 1600 W
1010
HPLC-DAD 3002500
HPLC-FLD
3001800
Raw sludge
MAE: MeOH, 5
Digestive and
mL, 10 min, 250 b
compost sludge
W
Soxhlet: MeOH, Quaternary amine

HPLC-FLD
200 mL, 24 h
column SPE (C18)
Raw sludge
8394
85102
96100
1
3
56.6103
H P L C - U V;
d.m. (UV);
8097
HPLC-FL
5-18103
(FL)
Stirring: MeOH,
50 mL USE 20 SPE (Oasis HLB)
min
(la Farre et al.,

2001)
1.33.2f
3.25.2b
2.15.4b
et
(Abad
2005)
et
(Cantarero
al., 2011)
(Villar
2007)
al.,
et
al.,
(Bengoechea
0.81d
and Cantarero,
1.32.8e
2009)
0.619.1b
44
NP/NPE
HPLCMS/
0.63.5
MS
Sewage slud- MAE: MeOH, 5

ge, Raw sludge mL, 10 min, >65 SPE (C18)
(blanks)
C, 300 W
or HPLCMS/
0.51.5
MS
189421
HPLCMS/
523 d.w
UVVis
PLE: Ace:MeOH
(1:1), 5 min, 2 SPE (LiChrolut
cycles, 75 C, 10 C18)
Mpa
Sewage sludge
GC/MS
GC/MS
PLE - Ace:MeOH
(1:1), 5 min, 2
Digested sludge
SPE (LiChrolut C18)
cycles, 50 C, 72
kPa
USE:
Activated
copper,
DCM:H2O (5 :1) pH:
SPE (Florisil)
1012, 36 mL, 10
min + mechanical
shaking, 2 h
Seven
sludge
Primary, secondary, concentraSoxhlet: MeOH,

ted primary and
SPE (Oasis HLB)
100 mL, 18 h
concentrated
secondary
sewage sludge
Mechanical shaking: Hex, 5 mL,

b
20 min USE, 15
min
72103
4776
6081
66 and 88
6189
211f
611f
914f
RSD
10%
et
al.,
(Vega-Morales
et al., 2011)
(Cspedes et al.,
2008)
(Petrovic et al.,
2003)
(Abad
2005)
(Fountoulakis et
al., 2005)
< (Aparicio et al.,

2007)
45
PAH
Soxhlet: Activated copper, DC- Silicaalumina

M:MeOH (2:1), lumn
150 mL, 48 h
Dried sludge
sewage sludge
PLE:
Hex:Ace
(1:1), 5 min, 100 SPE (Silica)
HPLC-FLD
427
75-106
H P L C - U V; 80-650 (UV)
50-99
HPLC-FL
1-150 (FL)
Stirring: MeOH,
50 mL USE 20 SPE (Oasis HLB)
min
Raw sludge
GC/MS
30
USE:
Activated
copper,
DCM:H2O (5:1) pH:
SPE (Florisil)
1012, 36 mL, 10
min + mechanical
shaking, 2 h
Sewage sludge
(Mige et al.,
2003)
0.6-4.7f
0.6-17.0b
35
et
al.,
(Flotron et al.,
2003)
(la Farre et al.,

2001)
(Abad
2005)
(Stevens et al.,
2002)
(Moreda et al.,
1998)
0.1103 to
4.3103g
(GCEI-SIS)
6592
(Sox- 1 . 7
0.06103
(Helaleh et al.,
hlet), 6291 1 7 . 6 6 d
to
1.43
2005)
(Soxtec)
(Soxtec)
103g
(GCEI-MS/
MS)
61-90 (Soxlet),
b
9-24 (USE)
Seven
sludge
Soxhlet: Activa- Silicaalumina coGCMS

280 mL, 18 h
Beads SX3)
co- GC-FID
GC/MS
Soxhlet: Activated copper, DCM:Hex (1:1), 150

Silica-alumina
co- GCEI-MS/
mL, 18 h
lumn, GPC (Bio- MS, GCEIvs
Beads)
SIS
Soxtec: Activated
copper, DCM:Hex
(1:1), 50 mL, 3 h
HPLC-FLD,
b
HPLC-UV
Soxhlet: Tol, 80
mL, 8 h vs USE
1
- Tol, 80 mL, 30
min
Sewage sludge dehydrated

to 52% of dry
matter
46
PAH
Sewage sludge
HPLC-FLD;
a
HPLC-UV
SFE: Pure or moSewage slud- dified

ge dehydrated CO2 (5% tol),
b
to 52% of dry
10/30 min, 1 mL
matter
min1, tol
SPD: Florisil (1 g),
Na2SO4 (0.5 g),
Florisil (1 g), Sili- Together with MSPD HPLC-FLD
ca (2 g), DCM:MeOH (9:1), 6 mL
HPLC-FLD
Primary and se- MAE - Hex:Ace

condary sludge, (1:1), 20 mL, 2 SPE (Silica)
Digested sludge min, 150 W
0.15c
412
76104
3595
69110
0.56e
826
8.115f
3.413
Sewage sludge
8449
HPLC-FLD
MAE:
Hex:Ace
(1:1), 30 mL, 10 SPE (Silica)
min, 60 W
Dried sludge
427 d.m.
318f
0.14.3f
PLE:
DCM:Hex
Silicaalumina co- GCEI-MS/ (GCEI-SIS)
(1:1), 3 min, 3 cylumn GPC (Bio- MS
0.061.43f 6093
Beads SX-3)
GC-SIS
(GCEI-MS/
Mpa
MS)
et
al.,
(Pena
2008)
et
al.,
(Mige et al.,
2003)
(Villar
2004)
(Flotron et al.,
2003)
(Helaleh et al.,
2005)
47
USE:
Activated
copper,
DCM:H2O (5:1) pH:
SPE (Florisil)
1012, 36 mL, 10
min + mechanical
shaking, 2 h
GC/MS
sin limpieza;
c
lmites de cuantificacin (LC);
Clases de compuestos definidos en Comisin Europea, 2000

d
76105
65112
2.95f
2.54.7e
4.5
lmites de deteccin del mtodo (LDM);
LV- N A C E 91176c
DAD
SPD: Florisil (1 g),

Primary sludge
Na2SO4 (0.5 g), b
material
ACN, 2.5 mL
Seven
sludge
treatment (therAutomated SPE (siSoxhlet: Tol, 400
mal drying) and
lica, alumina and GC/MS
mL, 24 h
three composPX-21)
ting sludge
UPLCAP0.219.00
CI-MS/MS
0.5
PLE:
DCM:Hex
Secondary and (1:1), 3 min, 3 cyb
digested sludge cles, 100 C, 10.1
Mpa
Sewage sludge
GPC (divinylbenzeSoxhlet: Ace:Hex
and landfill leane), Silica gel co- HPLC/MS
(1:1)
chates
lumn
a no se ha reportado;
repetibilida
PCDD/F
PCB
Seven
sludge
Soxhlet - Activa- Silicaalumina coGCMS

280 mL, 18 h
Beads SX3)
et
al.,
et
al.,
reproducibilidad;
(Abad
2005)
(Blanco et al.,
2006)
(Mascolo et al.,
2010)
(Morris et al.,
2004)
(Abad
2005)
(Stevens et al.,
2002)
48
49
REFERENCIAS
Aryal, N., Reinhold, D.M., 2011. Phytoaccumulation of antimicrobials
from biosolids: Impacts on environmental fate and relevance to human exposure. Water Research 45, 5545-5552.
Abad, E., Martnez, K., Planas, C., Palacios, O., Caixach, J., Rivera, J.,
2005. Priority organic pollutant assessment of sludges for agricultural
purposes. Chemosphere 61, 1358-1369.
Anastassiades, M., Matovsk, K., Lehotay, S.J., 2003, Evaluation of analyte protectants to improve gas chromatographic analysis of pesticides, Journal of Chromatography A, 1015(12), 163-184.
Aparicio, I., Santos, J.L., Alonso, E., 2007. Simultaneous sonication-assisted extraction, and determination by gas chromatographymass
spectrometry, of di-(2-ethylhexyl)phthalate, nonylphenol, nonylphenol ethoxylates and polychlorinated biphenyls in sludge from wastewater treatment plants. Analytica Chimica Acta 584, 455-461.
Bengoechea, C., Cantarero, A.S., 2009. Analysis of Linear Alkylbenzene
Sulfonate in Waste Water and Sludge by High Performance Liquid
Chromatography: An Exercise of Validation. J Surfact Deterg 12, 2129.
Blanco, E., Casais, M.C., Mejuto, M.C., Cela, R., 2006. Approaches for
the Simultaneous Extraction of Tetrabromobisphenol A, Tetrachlorobisphenol A, and Related Phenolic Compounds from Sewage Sludge
and Sediment Samples Based on Matrix Solid-Phase Dispersion. Analytical Chemistry 78, 2772-2778.
Boleda, M.R., Galceran, M.T., Ventura, F., 2009. Monitoring of opiates,
cannabinoids and their metabolites in wastewater, surface water and
finished water in Catalonia, Spain. Water Research 43, 1126-1136.
Cantarero, S., Zafra-Gmez, A., Ballesteros, O., Navaln, A., Vlchez, J.L.,
Verge, C., De Ferrer, J.A., 2011. Matrix effect study in the determination of linear alkylbenzene sulfonates in sewage sludge samples.
Environmental Toxicology and Chemistry 30, 813-818.
50
Cspedes, R., Lacorte, S., Ginebreda, A., Barcel, D., 2008. Occurrence
and fate of alkylphenols and alkylphenol ethoxylates in sewage treatment plants and impact on receiving waters along the Ter River (Catalonia, NE Spain). Environmental Pollution 153, 384-392.
Clarke, B.O., Smith, S.R., 2011. Review of emerging organic contaminants in biosolids and assessment of international research priorities
for the agricultural use of biosolids. Environment International 37,
226-247.
European Commission, 27 April 2000. Working document on sludge. 3rd
draft, Brussels.
EN15662, 2009, Foods of Plant Origin - Determination of Pesticide Residues
Using GC-MS and/or LC-MS/MS Following Acetonitrile Extraction/Partitioning and Clean-up by Dispersive SPE, Available from: https://shop.
austrian-standards.at/Preview.action;jsessionid=0591FE94A94C9C6E7117064F9A22C0CE?preview=&dokkey=321612&selectedLocale=en, accessed August 2014
Fifield, F. W., Kealey, D., 2000. Principles and Practice of Analytical Chemistry. 5th Edition, Blackwell Science Ltd. 4,73-80.
Fytili, D., Zabaniotou, A., 2008. Utilization of sewage sludge in EU application of old and new methodsA review. Renewable and Sustainable Energy Reviews 12, 116-140.
Flotron, V., Houessou, J., Bosio, A., Delteil, C., Bermond, A., Camel, V.,
2003. Rapid determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in
sewage sludges using microwave-assisted solvent extraction: Comparison with other extraction methods. Journal of Chromatography
A 999, 175-184.
Fountoulakis, M., Drillia, P., Pakou, C., Kampioti, A., Stamatelatou, K.,
Lyberatos, G., 2005. Analysis of nonylphenol and nonylphenol ethoxylates in sewage sludge by high performance liquid chromatography
following microwave-assisted extraction. Journal of Chromatography
A 1089, 45-51.
51
Gbel, A., Thomsen, A., McArdell, C.S., Alder, A.C., Giger, W., Thei, N.,
Lffler, D., Ternes, T.A., 2005. Extraction and determination of sulfonamides, macrolides, and trimethoprim in sewage sludge. Journal of
Chromatography A 1085, 179-189.
Golet, E.M., Strehler, A., Alder, A.C., Giger, W., 2002. Determination
of Fluoroquinolone Antibacterial Agents in Sewage Sludge and
Sludge-Treated Soil Using Accelerated Solvent Extraction Followed by
Solid-Phase Extraction. Analytical Chemistry 74, 5455-5462.
Golet, E.M., Xifra, I., Siegrist, H., Alder, A.C., Giger, W., 2003. Environmental Exposure Assessment of Fluoroquinolone Antibacterial Agents
from Sewage to Soil. Environmental Science & Technology 37, 32433249.
Helaleh, M.I.H., Al-Omair, A., Nisar, A., Gevao, B., 2005. Validation of
various extraction techniques for the quantitative analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons in sewage sludges using gas chromatography-ion trap mass spectrometry. Journal of Chromatography A 1083,
153-160.
Knoth, W., Mann, W., Meyer, R., Nebhuth, J., 2007. Polybrominated diphenyl ether in sewage sludge in Germany. Chemosphere 67, 18311837.
Kupper, T., de Alencastro, L.F., Gatsigazi, R., Furrer, R., Grandjean, D.,
Tarradellas, J., 2008. Concentrations and specific loads of brominated
flame retardants in sewage sludge. Chemosphere 71, 1173-1180.
Kuster, M., Lpez de Alda, M.J., Barcel, D., 2005. The Handbook of Environmental Chemistry, in: Barcel, D. (Ed.). Springer, Berlin, Germany,
pp. 124.
la Farre, M., Garcia, M.-J., Castillo, M., Riu, J., Barcelo, D., 2001. Identification of surfactant degradation products as toxic organic compounds present in sewage sludge. Journal of Environmental Monitoring 3, 232-237.
52
Lapworth, D.J., Baran, N., Stuart, M.E., Ward, R.S., 2012. Emerging organic contaminants in groundwater: A review of sources, fate and
occurrence. Environmental Pollution 163, 287-303.
Madureira, T.V., Barreiro, J.C., Rocha, M.J., Rocha, E., Cass, Q.B., Tiritan,
M.E., 2010. Spatiotemporal distribution of pharmaceuticals in the
Douro River estuary (Portugal). Science of The Total Environment 408,
5513-5520.
Mascolo, G., Locaputo, V., Mininni, G., 2010. New perspective on the determination of flame retardants in sewage sludge by using ultrahigh
pressure liquid chromatographytandem mass spectrometry with different ion sources. Journal of Chromatography A 1217, 4601-4611.
Meesters, R.J.W., Schrder, H.F., 2002. Simultaneous determination of
4-nonylphenol and bisphenol A in sewage sludge. Analytical Chemistry 74, 3566-3574.
Method AOAC 2007, Official Methods of Analysis 2007.01, Pesticide
Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partitioning with
Magnesium Sulfate. 2007, 18 th: Available from: http://www.weber.
hu/PDFs/QuEChERS/AOAC_2007_01.pdf, accessed August 2014
Mige, C., Dugay, J., Hennion, M.C., 2003. Optimization, validation and
comparison of various extraction techniques for the trace determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in sewage sludges by liquid
chromatography coupled to diode-array and fluorescence detection.
Journal of Chromatography A 995, 87-97.
Moreda, J.M., Arranz, A., Fdez De Betoo, S., Cid, A., Arranz, J.F., 1998.
Chromatographic determination of aliphatic hydrocarbons and polyaromatic hydrocarbons (PAHs) in a sewage sludge. Science of The
Total Environment 220, 33-43.
Morris, S., Allchin, C.R., Zegers, B.N., Haftka, J.J.H., Boon, J.P., Belpaire,
C., Leonards, P.E.G., van Leeuwen, S.P.J., de Boer, J., 2004. Distribution and Fate of HBCD and TBBPA Brominated Flame Retardants in
North Sea Estuaries and Aquatic Food Webs. Environmental Science &
Technology 38, 5497-5504.
53
North, K.D., 2004. Tracking Polybrominated Diphenyl Ether Releases in a

Wastewater Treatment Plant Effluent, Palo Alto, California. Environmental Science & Technology 38, 4484-4488.
Pena, M.T., Casais, M.C., Mejuto, M.C., Cela, R., 2008. Development
of a matrix solid-phase dispersion method for the determination of
polycyclic aromatic hydrocarbons in sewage sludge samples. Analytica
Chimica Acta 626, 155-165.
Petrovic, M., Barcel, D., Diaz, A., Ventura, F., 2003. Low nanogram per
liter determination of halogenated nonylphenols, nonylphenol carboxylates, and their non-halogenated precursors in water and sludge
by liquid chromatography electrospray tandem mass spectrometry.
Journal of the American Society for Mass Spectrometry 14, 516-527.
Pinto, C.G., Laespada, M.E.F., Martn, S.H., Ferreira, A.M.C., Pavn,
J.L.P., Cordero, B.M., 2010, Simplified QuEChERS approach for the
extraction of chlorinated compounds from soil samples. Talanta, 81,
385-391.
Snchez-Brunete, C., Miguel, E., Tadeo, J.L., 2009. Analysis of polybrominated diphenyl ethers in sewage sludge by matrix solid-phase dispersion and isotope dilution GCMS. Journal of Separation Science
32, 109-117.
Shin, M., Svoboda, M.L., Falletta, P., 2007. Microwave-assisted extraction
(MAE) for the determination of polybrominated diphenylethers (PBDEs) in sewage sludge. Analytical and Bioanalytical Chemistry 387,
2923-2929.
Stevens, J.L., Northcott, G.L., Stern, G.A., Tomy, G.T., Jones, K.C., 2002.
PAHs, PCBs, PCNs, Organochlorine Pesticides, Synthetic Musks, and
Polychlorinated n-Alkanes in U.K. Sewage Sludge: Survey Results and
Implications. Environmental Science & Technology 37, 462-467.
Vega-Morales, T., Sosa-Ferrera, Z., Santana-Rodrguez, J.J., 2011. Determination of various estradiol mimicking-compounds in sewage sludge
by the combination of microwave-assisted extraction and LCMS/MS.
Talanta 85, 1825-1834.
54
Vera, J., Correia-S, L., Paga, P., Bragana, I., Fernandes, V.C., Domingues, V.F., Delerue-Matos, C., 2013, QuEChERS and soil analysis.,An
Overview. Sample Preparation, 1, 1-77. Retrieved 7 August 2014,
from doi:10.2478/sampre-2013-0006.
Villar, M., Callejn, M., Jimnez, J.C., Alonso, E., Guirum, A., 2007. Optimization and validation of a new method for analysis of linear alkylbenzene sulfonates in sewage sludge by liquid chromatography after
microwave-assisted extraction. Analytica Chimica Acta 599, 92-97.
Villar, P., Callejn, M., Alonso, E., Jimnez, J.C., Guiram, A., 2004. Optimization and validation of a new method of analysis for polycyclic
aromatic hydrocarbons in sewage sludge by liquid chromatography
after microwave assisted extraction. Analytica Chimica Acta 524, 295304.
Wang, Y.H., Du, L.W., Zhou, X.M., Tan, H.H., Bai, L.Y., Zeng, D.Q., Tian,
H., 2012, QuEChERS extraction for high performance liquid chromatographic determination of pyrazosulfuron-ethyl in soils. J. Chem.
Soc. Pak., 2012, 34, 28-32
Wu, C., Spongberg, A.L., Witter, J.D., Sridhar, B.B.M., 2012. Transfer of
wastewater associated pharmaceuticals and personal care products
to crop plants from biosolids treated soil. Ecotoxicology and Environmental Safety 85, 104-109.
Zohair, A., Salim, A.-B., Soyibo, A.A., Beck, A.J., 2006. Residues of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs)
and organochlorine pesticides in organically-farmed vegetables. Chemosphere 63, 541-553.
NRC, 2002, Biosolids applied to land: advancing standards and practices,
National Research Council (Eds.), National Academy Press, Washington, DC, 368
55
Mtodos de anlise cromatogrfica para

contaminantes ambientais
Eduardo Mateus*, Paula Guedes
CENSE, Departamento de Cincias e Engenharia do Ambiente, Faculdade de Cincias e Tecnologia, Universidade Nova de Lisboa, Caparica, Portugal
*epm@fct.unl.pt
Mtodos de anlise cromatogrfica para contaminantes ambientais
57
Introduo
O desenvolvimento e a utilizao de mtodos analticos para a determinao qualitativa e quantitativa de contaminantes orgnicos no
ambiente um tpico importante.
A presena e a necessidade de monitorizao de um nmero crescente de contaminantes orgnicos (ex. agrotxicos, poluentes persistentes, contaminantes emergentes, frmacos e produtos de cuidado
pessoal), com uma vasta gama de diferentes propriedades fsico-qumicas, nos diferentes compartimentos ambientais, exige a utilizao
de tcnicas analticas adequadas ao seu rastreamento. O desenvolvimento destes mtodos analticos constitui um desafio e a realidade
operacional tem como consequencia que a maioria dos mtodos disponveis e descritos incidam sobre classes especficas de compostos,
encontrando-se muito poucos mtodos analticos que sejam aplicveis a vrias classes de contaminantes em simultneo. A seleo da
metodologia analtica a ser aplicada um factor da maior relevncia
para a obteno de resultados realistas e precisos.
Tcnicas cromatogrficas
Cromatografia gasosa
e cromatografia lquida
As tcnicas de cromatografia em fase gasosa (GC gas chromatography) e de cromatografia em fase lquida (LC liquid chromatography) so ferramentas fundamentais para a anlise qualitativa (determinao da identidade) e quantitativa (determinao da quantidade)
58
Eduardo Mateus, Paula Guedes
dos contaminantes orgnicos, persistentes e emergentes, presentes

nas matrizes ambientais. A cromatografia lquida de alta eficincia
(HPLC High performance liquid chromatography) a forma mais
comum de LC.
O princpio de funcionamento da GC e da LC consiste na partio
de compostos entre duas fases diferentes (mvel e estacionria), enquanto so transportados por intermdio da fase mvel, atravs da
fase estacionria. Os compostos transportados movem-se a velocidades diferentes, devido a diferentes afinidades com a fase estacionria,
o que resulta na sua separao. A GC utiliza um gs de arraste inerte
para transportar os analitos atravs de uma coluna capilar e a LC
utiliza um eluente liquido para transportar os analitos atravs de uma
coluna empacotada (John R. Dean, 2003).
Cromatografia em fase gasosa - GC

A GC, em combinao com a espectrometria de massa (GC/MS)
ou utilizando o detector de ionizao de chama (FID Flame ionization detector) e detectores selectivos, como o detector de captura
electrnica (ECD - electron capture detector), para anlise de poluentes halogenados e o detector de azoto-fsforo (NPD - nitrogenphosphorous detector), para determinao pesticidas com fsforo e azoto
foi durante muito tempo a principal ferramenta utilizada na determinao de poluentes orgnicos no ambiente.
59
Figura 1: Anlise por cromatografia em fase gasosa de compostos orgnicos volteis com
diferentes detectores - FID vs NPD vs ECD (imagem cortesia de Thermo Scientific Inc.)
Para serem passiveis de anlise por GC os analitos devem ser volteis ou semi-volteis (ponto de ebulio <300C, devido a condies
operacionais), serem termicamente estveis e no sofrerem decomposio no sistema cromatogrfico. Adicionalmente alguns compostos
com grupos funcionais polares so difceis de analisar por CG, quer
porque no so suficientemente volteis ou porque sofrem de arrastamento (tailing) devido aos seus coeficientes de partilha no lineares (actividade) com a fase estacionria (Harold M. McNair and James
M. Miller, 2009). A derivatizao qumica dos analitos problemticos pode ser utilizada para superar alguns destes problemas. Assim,
os compostos volteis polares e os compostos no volteis devem ser
passveis de derivatizao qumica antes da anlise, com objectivo de
serem convertidos nos seus derivados volteis adequados para GC
(Harold M. McNair and James M. Miller, 2009). Os mtodos mais comuns derivatizao qumicos so a sililao e a alquilao.
60
Cromatografia Liquida
de alta eficincia - HPLC
Muitos dos contaminantes ambientais so termicamente instveis
s temperaturas tpicas de cromatografia gasosa ou no so volteis. A
HPLC permite analisar compostos que no so analisveis por GC (John
R. Dean, 2003), sendo uma tcnica analtica importante utilizada para
separar, identificar e quantificar uma ampla gama de contaminantes
ambientais, incluindo Hidrocarbonetos Aromticos Policclicos (PAHs Polyaromatic Hydrocarbons), pesticidas e contaminantes emergentes.
Os detectores utilizados em cromatografia lquida incluem detectores
de ndice de refrao, electroqumicos, de fluorescncia (FLD) e os de
ultravioleta-visvel (UV-VIS) que incluem os detetores de dodos (DAD
diode array detector) (Lloyd R. Snyder, 1997). Os detectores mais utilizados em anlise ambiental so os de fluorescncia e ultravioleta-visvel.
Figura 2: cromatograma obtido por HPLC-DAD em fase reversa
61
Existem trs tipos principais de separao por cromatografia lquida: cromatografia lquida de fase reversa (RPLC), cromatografia lquida de interaco hidrfilica (HILIC) e cromatografia lquida de fase
normal (NPLC) (Lloyd R. Snyder, 1997; Fernando M. Lanas, 2010; Eric
S. Grumbach and Kenneth J. Fountain, 2010).
A RPLC o tipo mais utilizado de HPLC e envolve a separao das
molculas com base na sua hidrofobicidade (Lloyd R. Snyder, 1997).
As fases estacionrias, que so utilizados so hidrofbicas ou de baixa
polaridade. As fases de Octadecil (C18) slica so as fases estacionrias
mais comuns. Outras fases estacionrias RPLC podem ser utilizadas,
tais como octil (C8), NH2 ou ciano. As fases ciano e NH2, com uma
polaridade baixa, pode ser usadas simultaneamente em NPLC e RPLC
(Lloyd R. Snyder, 1997). A sua aplicao na anlise ambiental vasta
tendo sido utilizada para separar e analisar pesticidas, PAHs explosivos, toxinas de algas, resduos farmacuticos, drogas, produtos de
cuidado pessoal, desreguladores endcrinos, etc.
Cromatografia em fase normal usada para separar os compostos
com base na sua polaridade (3). A NPLC usa uma fase estacionria polar, em combinao com um solvente no-polar (ex.: Hexano) (Lloyd
R. Snyder, 1997). A sua principal aplicao na anlise ambiental consiste na determinao de alquilfenis (AP), alquilfenis polietoxilatos
(APnEO) e surfactantes.
A Cromatografia com Interao Hidroflica (Hydrophilic-Interaction Chromatography HILIC) surgiu recentemente como uma opo
para analisar contaminantes polares e hidroflicos (pesticidas, medicamentos, drogas de abuso, estrgenios livres e seus conjugados, produtos de cuidados pessoais, aminas aromticas, surfactantes, complexos metlicos como o tributilteno e o trifenilestanho), etc em matrizes
ambientais (Fernando M. Lanas, 2010; Eric S. Grumbach and Kenneth J. Fountain, 2010).
62
A HILIC uma forma de HPLC similar Cromatografia Lquida em

fase normal. Utiliza uma coluna com fase estacionria hidroflica (polar), porm ao contrrio da fase nlmal utiliza uma fase mvel (eluente)
que contm gua, tampo e uma concentrao elevada de um solvente orgnico miscvel com gua, como o acetonitrilo ou o metanol
que so tpicos da fase reversa (Fernando M. Lanas, 2010; Eric S.
Grumbach and Kenneth J. Fountain, 2010 ). Os analitos tipicamente
eluem numa ordem oposta do RPLC e so melhore separados.
Fases estacionrias normalmente utilizadas em HILIC so fases de
slica no modificada ou modificadas com grupos funcionais amino,
amida, poliis e Fases zwiterinicas (Fernando M. Lanas, 2010; Eric
S. Grumbach and Kenneth J. Fountain, 2010).
As fases estacionrias das colunas de HPLC so constitudas por
partculas de slica cujos dimetros mais utilizados variam entre 5,0 e
3,0 m.
Cromatografia lquida de ultra eficincia

(UPLC Ultra Performance Liquid
Chromatography)
A HPLC no permite atingir a resoluo cromatografica que se obtm por GC. Contudo, a anlise em alta resoluo chromatogrfica usando LC tornou-se tecnologicamente possvel nos ltimos anos
devido aos avanos na produo de micro-partculas de silica e de
nova instrumentao (Supplement to LC-GC North America, 2005;
Waters Corporation, 2014). A Cromatografia lquida de ultra eficincia (UPLC) uma nova variante de HPLC, introduzida em 2004, que
veio permitir um aumento significativo na resoluo cromatogrfica,
da velocidade de anlise e da sensibilidade analtica (Supplement to
63
LC-GC North America, 2005; Waters Corporation, 2014). A UPLC utiliza colunas mais pequenas contendo partculas menores do que 2,0
mm (frequentemente 1,7 micron).
Todas as aplicaes analticas ambientais realizadas com HPLC so
transferveis para UPLC resultando em uma maior sensibilidade (resultante de maior razo sinal-rudo, S/N), resoluo (aumentando a
informao para matrizes complexas) e velocidade (reduzindo tempos
de anlise) (Supplement to LC-GC North America, 2005; Waters Corporation, 2014).
Figura 3: HPLC vs UPLC comparao da sensibilidade, resoluo cromatogrfica e do tempo

de anlise (imagem cortesia da Waters Corporation)
64
Espectrometria de massas - ms
Cromatografia em fase gasosa/ espectrometria
de massas - GC/MS
A grande vantagem dos mtodos cromatogrficos reside na sua
capacidade de separar os componentes das amostras. Porm, na
ausncia de informao complementar os mtodos cromatogrficos
s permitem analisar qualitativamente e quantitativamente, componentes cuja existncia na amostra j conhecida ou seja detectada
com recurso a padres. Esta desvantagem relativa pode ser resolvida
se for possvel a acoplagem dao mtodo cromatogrfico a um sistema
de deteco que origine para cada analito uma informao caracterstica e susceptivel de o distinguir de todos os outros presentes na
amostra em estudo.
Na espectrometria de massas os analitos so fragmentados, gerando fragmentos inicos que podem ser separados pelos analisadores
de massa de acordo com a sua relao massa/carga (m/z), dando origem a um espectro de massa O espectro de massa resultante corresponde a um grfico que apresenta a abundncia relativa de cada um
dos ies formados em funo da sua relao m/z e cujo padro de
distribuio constitui uma informao nica e caracterstica de cada
analito (John R. Dean , 2003; Fulton G. Kitson, 1996).
65
Figura 4: Exemplo de espectros de massas: triclosan e bisfenol A (Modo EI)
O poder de resoluo de cromatografia (separao de analitos)

combinada com a sensibilidade e selectividade de espectrometria de
massa e resulta em uma tcnica analtica poderosa para a anlise de
contaminantes presentes em matrizes ambientais.
A GC/MS tem sido a tcnica de escolha para a identificao e quantificao de analitos no-polares volteis e semi-volteis, em misturas
complexas ambientais, incluindo os PAHs, os bifenilos policlorados,
(PCBs - Polychlorinated biphenyls), pesticidas, inseticidas organoclorados, dioxinas, e outros poluentes prioritrios volteis.
A Ionizao Electrnica (EI - Electron Ionization), devido sua robustez e reprodutibilidade, o mtodo de ionizao mais usado. Os
Espectros EI podem ser adquirido em modo de aquisio de de massas
numa gama contnua (full scan), para determinao de compostos
desconhecidos em uma amostra ou confirmao de compostos alvo
ou no modo de monitorizao selectiva de ies (SIM - selected-ion
monitoring), em que s ies especficos pr-seleccionados dos analitos so monitorizados para fins de quantificao (Fulton G. Kitson,
1996). No modo SIM uma prtica comum monitorizar trs es por
analito. Um io usado para anlise quantitativa, e os outros dois so
66
usados para obter informaes qualitativas. Os espectros obtidos por

EI no sofrem de supresso de io, devido a compostos que co-eluam
com o analito.
A EI origina padres de fragmentao do espectro de massa caractersticos, o que permite a utilizao de bibliotecas espectrais, como a
biblioteca NIST, para fins de identificao dos componentes da amostra sob anlise.
Figura 5: Cromatograma de GC/MS em em modo de aquisio de de massas numa gama

contnua (Topo; full scan) e em modo de monitorizao selectiva de io 71 (Base; SIM)
67
O modo de Ionizao qumica (CI Chemical ionization), tambm por vezes utilizado. A CI produz espectros mais simples devido
a uma menor fragmentao e permite uma maior abundncia do io
molecular no espectro de massa. A CI pode ser utilizada em dois modos: CI Positiva e IC Negativa (Fulton G. Kitson, 1996). A ionizao
qumica negativa (NCI), a mais utilizada na anlise de contaminantes ambientais, quando os contaminantes so passiveis de captura de
electres (por exemplo, compostos halogenados). Para certos compostos electronegativos, como os PCBs a NCI resulta em um aumento
significativo da sensibilidade (100 a 1000) em relao a EI (Michael P.
Balogh, 2014).
Cromatografia em fase lquida/

espectrometria de massas - LC/MS
Nas ltimas dcadas, o desenvolvimento da LC/MS e o aumento
da sua utilizao, conduziu a uma revoluo na anlise ambiental. A
LC/MS proporciona uma nova ferramenta analtica que permite a monitorizao de poluentes orgnicos altamente polares, no volteis e
termicamente instveis em amostras complexas, sem necessidade de
derivatizao, at nveis de nanograma por litro. O desenvolvimento
contnuo da tecnologia, com ganhos na sua sensibilidade, seletividade e robustez, permitiu que a tcnica ganhasse uma importncia crescente nos laboratrios e que o nmero de analitos alvo monitorizados
em anlise ambiental se expandisse (Basics of LC/MS, 2001).
A LC/MS foi, no seu incio, considerada principalmente como uma
ferramenta complementar para GC, que permitia analisar os contaminantes problemticos ou no analisveis por GC. No entanto,
hoje em dia, quando comparando a sua aplicabilidade a uma classe
de contaminantes, tais como pesticidas, torna-se claro que o nmero
68
de pesticidas s passveis de anlise por LC/MS maior do que aqueles que so passiveis por GC, sendo que para maioria dos pesticidas
cobertos por ambas as tcnicas, a LC/MS apresenta uma sensibilidade
maior (Damia Barcelo, 1996 ; Basics of LC/MS, 2001).
A sensibilidade da resposta obtida recorrendo a espectrometria
de massa depende do tipo de interface de ionizao utilizado cuja
escolha dependente dos analitos que se pretendem monitorizar e
est relacionada com a polaridade e peso molecular destes (figura X).
As interfaces de ionizao mais utilizadas correspondem a fontes de
ionizao a presso atmosfrica (API Atmospheric pressure ionization) por electrospray (ESI electrospray ionization) e por ionizao
qumica (APCI atmospheric pressure chemical ionization) seguidas
da fotoionizao presso atmosfrica (APPI - atmospheric pressure
photoionization) (Basics of LC/MS, 2001).
Figura 6: Relao entre a polaridade dos analitos e o seu peso molecular com as diferentes
tcnicas de ionizao presso atmosfrica (adaptado de Vanessa Gaffney, 2011).
A ESI particularmente adequada para a anlise de compostos polares enquanto a APCI, utilizada principalmente com a cromatografia
69
de fase normal, altamente eficaz na anlise de substncias de mdia

e baixa polaridade (Basics of LC/MS, 2001).
A APPI particularmente adequado para a anlise de compostos
altamente apolares e aplicvel a muitos dos compostos que so adequados para anlise por APCI (Basics of LC/MS, 2001 ).
Ao contrrio da EI em GC/MS, a supresso de ies pode ocorrer
tanto com ESI como em APCI. Estes efeitos de matriz devem-se a
compostos presentes na amostra que podem suprimir ou amplificar
o sinal dos analitos, devido sua participao no processo e nos mecanismos de ionizao. Consequentemente, os analitos que co-eluam
com interferentes podem ser subestimados ou no ser detectados de
todo, sendo necessria uma maior separao ou um tratamento eficaz da amostra antes da anlise de modo a obterem-se resultados
confiveis. A ESI tem demonstrado ser uma tcnica muito sensvel, no
entanto, susceptvel a efeitos de matriz do que a APCI o constitui
uma desvantagem (Damia Barcelo, 1996 ; Basics of LC/MS, 2001).
No h bibliotecas espectrais para identificao LC/MS, no entanto
esta apresenta quase sempre um io molecular no espectro de massa do analito. Esta presena do io molecular no espectro pode ser
utilizado para fins estruturais e de identificao de um determinado
analito. Alm disso, o desenvolvimento de espectrmetros de massa
exacta com analisadores de tempo de voo (time-of-flight mass spectrometres TOF/MS) possibilitou o clculo de uma frmula emprica do
io molecular (Michael P. Balogh, 2014; Norberto Peporine Lopes et
al, 2011).
70
Espectrometria de massas sequencial

(Tandem mass spectrometry) - GC/MS/
MS e LC/MS/MS
Espectrometria de massa sequencial (tandem), tambm conhecida
como o MS/MS ou MS2, uma tcnica analtica que emprega duas
fases de anlise de massa para a aquisio e o estudo de espectros
de ies produto ou precursores originados a partir de ies selecionados em um primeiro estgio de anlise de massas (Edmond de Hoffmann, 1996; Basics of LC/MS, 2001).
Na abordagem tradicional, com duas etapas, os analitos so injetadas no espectrmetro de massa, ionizados e analisados por espectrometria de massa clssico na primeira fase (MS1). Em seguida, os
ies de interesse (ies percursores) so seleccionados com base na
sua razo m/z obtida na primeira fase de MS. Os ies percursores so
depois fragmentados selectivamente, atravs da coliso com um gs
inerte, num processo conhecido por dissociao por coliso induzida
(CID - collision-induced dissociation). Os fragmentos produzidos (ies
produto) a partir dos ies percursores so analisados e filtrados e
produzido um novo espectro de massa (MS2) a partir apenas dos ies
produto seleccionados (Edmond de Hoffmann, 1996; Basics of LC/
MS, 2001).
A utilizao da MS/MS permite a anlise quantitativa de contaminantes em concentraes vestigiais em matrizes ambientais complexas que originam um elevado rudo de fundo (Basics of LC/MS, 2001).
A monitorizao de reaes mltiplas (MRM - multiple reaction
monitoring) em que se selecciona desde a primeira fase os ies a
monitorizar um modo de operao do MS/MS altamente especfico.
Neste modo de operao o sistema funciona em modo de massas se-
71
leccionadas (SIM). Os ies percursores e produto s so detectados se

produzirem fragmentos m/z especficos. A utilizao do MRM praticamente elimina o rudo de fundo da matriz, resultando em uma anlise
muito seletiva e com maior sensibilidade, proporcionando menores
lmites de quantificao, devido ao aumento da relao de sinal- rudo
(S/N) (Damia Barcelo, 1996).
Figura 7: Aumento da relao sinal-rudo obtida pela diminuio significativa do rudo de

fundo analtico. Comparao entre anlises com detector de fotodiodos (PDA) e mediante
espectrometria de massas em modo SIM e modo MRM (imagem cortesia da Shimadzu
Scientific Instruments)
REFERENCIAS
Agilent Technologies, Basics of LC/MS: A Primer, 2001, Agilent Technologies
Michael P. Balogh, MS - Mass Spectrometry primer, 2014, waters corporation
Beginners Guide to UPLC: Ultra-Performance Liquid Chromatography,
2014, Waters Corporation
Damia Barcelo, Applications of LC-MS in Environmental Chemistry (Journal of Chromatography Library), 1996, Elsevier Science
John R. Dean, Methods for Environmental Trace Analysis, 2003, Wiley
Eric S. Grumbach and Kenneth J. Fountain, Comprehensive Guide to HILIC, 2010, Waters Corporation
72
Edmond de Hoffmann, Tandem Mass Spectrometry: a Primer, Journal of

mass spectrometry, vol. 31, 129-137 (1996)
Fulton G. Kitson, Gas Chromatography and Mass Spectrometry: A Practical Guide, 1996, Academic Press
Fernando M. Lanas, Cromatografia Lquida com Interao Hidroflica
(HILIC), Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 49-57, 2010
Harold M. McNair and James M. Miller, Basic Gas Chromatography,
2009, Wiley-Interscience
Norberto Peporine Lopes et al, Nomenclaturas de espectrometria de massas em lngua portuguesa, Quim. Nova, 2011, Vol. 34, No. 10, 18751887
Lloyd R. Snyder, Practical HPLC Method Development, 1997, Wiley-Interscience
Ultra performance LC - Separation Science redefined, Supplement to LCGC North America, May 2005
Bibliografia recomendada:
Albert T. Lebedev, Environmental Mass Spectrometry, Annu.
Rev. Anal. Chem. 2013. 6:16389; Doi: 10.1146/annurev-anchem-062012-092604
Vicki J. Barwick, Sources of uncertainty in gas chromatography and
high-performance liquid chromatography, Journal of Chromatography A, 849 (1999) 1333; DOI: 10.1016/S0021-9673(99)00537-3
The Basics of Gas Chromatography, Sigma Aldrich Analytical Basic Techniques
Webinar series, 2009; https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Aldrich/Bulletin/1/the-basics-of-gc.pdf
S. Mitra and B.B. Kebbekus, Environmental Chemical Analysis, 1997,
CRC Press. (parcialmente acessivel atravs do google books)
Agradecimentos: Thermo Scientific Inc, Waters Corporation e
Shimadzu Scientific Instruments pela disponibilidade das figuras. Vanessa Gaffney pela adaptao da sua figura.

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Mtodos de anlisis de contaminantes

Mtodos de anlisis de contaminantes

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

1.- Bajas concentraciones: ppm (10-6), ppb (109

Excepto para algunos parmetros convencionales, la mayora de

Tabla 1. LDI: lmite de deteccin instrumental. LD: lmite de deteccin.

En el caso de una funcin curvilnea como la respuesta de un ELISA

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

2.- Matrices complejas: aire, aguas, suelos,

3.- Costos (C) elevados para el muestreo y los

proporciona inevitablemente un resultado sesgado (J. C. Miller, J. N.

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

4.- Monitoreos in situ y automatizacin.

5.- Sujeta a Leyes y Regulaciones.

6.- Responsabilidad social.

Anlisis de contaminantes ambientales

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

respiracin de la biomasa y descomposicin de la materia orgnica

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

productos farmacuticos, refrigerantes, etc. Por su parte 1150 MTn C/

O3 + h (Sol) O + O2 ( < 310 nm)

( < 400 nm)

HO2 + NO NO2* + HO*

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

H2CO + HO* H2O + HCO

H4C + HO* H3C + H2O

HO2 + NO NO2 + HO*

H3COO + NO H3CO + NO2*

H3CO + O2 H2CO + HO2

La concentracin nocturna del radical NO3* fue estimada (Swein

cuantitativos de O3 son espectrofotomtricos, como la reaccin con

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

Alda, 2012): a) Retardantes de llama bromados. b) Cloroalcanos. c)

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

I luz vs. [AT]

3.- Contaminacin de suelos y sedimentos

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

macuticos, tintas, fertilizantes, retardadores de combustin y otros).

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

Los niveles de benceno al aire libre oscilan entre 0,02 y 34 partes de

carbaril), dioxinas, y bisfenol A (BPA). Para el anlisis de metales, la

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

los plaguicidas clorados como analitos, no obstante los PCB deben

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

Recientemente (P. R. Perrotta et al, 2011) OTA fue determinada en

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

Por eso, los Qumicos Analticos Ambientales deben fundirse con

Mtodos de anlisis de contaminantes ambientales

P. R. Perrotta. N. R. Vettorazzi, F. J. Arvalo, M. A. Zn, H. Fernndez.

Procedimientos de preparacin de muestras

Paula Guedes, Eduardo Mateus

Procedimientos de preparacin de muestras

Tabla 1. Los valores lmite propuestos para la concentracin de los

Valores lmite (mg/kg DM)

Paula Guedes, Eduardo Mateus

Procedimientos de preparacin de muestras

considerados. Que, incluyendo: la capacidad de cubrir el espectro

Paula Guedes, Eduardo Mateus

Procedimientos de preparacin de muestras

corporacin qumicamente diferentes ligandos en el mismo sorbente.

Paula Guedes, Eduardo Mateus

Fase inversa Fase normal

Condiciones de Limpieza / pre-conAnlisis