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Nombre: Hctor Roblero Gonzlez

Materia: Microbiologa

Grado: 3 grupo: B

MICROBIOLOG
A
Profesor: Vicente Morales Carbajal

Tema: Todo los temas del semestre.

Fecha: 04/12/2012

Indice

Parcial 1

Bacterias
Levaduras
Hongos

Parcial 2
Microscopa
Pruebas bioqumicas
Tincin de Gram
Medio de cultivo
Parcial 3
Recuento en placa
Dosoluciones

Glosario

Parcial 1

Tema: BACTERIAS

Historia de la bacteriologa
La existencia de microorganismos fue conjeturada a finales de la Edad Media.
En el Canon de medicina (1020), Ab Al ibn Sn (Avicenna) planteaba que las
secreciones corporales estaban contaminadas por multitud de cuerpos
extraos infecciosos antes de que una persona cayera enferma, pero no lleg a
identificar a estos cuerpos como la primera causa de las enfermedades.
Cuando la peste negra (peste bubnica) alcanz al-ndalus en el siglo XIV, Ibn
Khatima e Ibn al-Jatib escribieron que las enfermedades infecciosas eran
causadas por entidades contagiosas que penetraban en el cuerpo humano.8 9
Estas ideas sobre el contagio como causa de algunas enfermedades se volvi
muy popular durante el Renacimiento, sobre todo a travs de los escritos de
Girolamo Fracastoro.10
Las primeras bacterias fueron observadas por Anton van Leeuwenhoek en 1683
usando un microscopio de lente simple diseado por l mismo.11 Inicialmente
las denomin animalculos y public sus observaciones en una serie de cartas
que envi a la Royal Society.12 13 14 El nombre de bacteria fue introducido
ms tarde, en 1828, por Ehrenberg. Deriva del griego -, bacterion
-a, que significa bastn pequeo. Louis Pasteur demostr en 1859 que los
procesos de fermentacin eran causados por el crecimiento de
microorganismos, y que dicho crecimiento no era debido a la generacin
espontnea, como se supona hasta entonces. (Ni las levaduras, ni los mohos,
ni los hongos, organismos normalmente asociados a estos procesos de
fermentacin, son bacterias). Pasteur, al igual que su contemporneo y colega
Robert Koch, fue uno de los primeros defensores de la teora germinal de las
enfermedades infecciosas.16 Robert Koch fue pionero en la microbiologa
mdica, trabajando con diferentes enfermedades infecciosas, como el clera, el
ntrax y la tuberculosis. Koch logr probar la teora germinal de las
enfermedades infecciosas tras sus investigaciones en tuberculosis, siendo por
ello galardonado con el premio Nobel en Medicina y Fisiologa, en el ao
1905.17 Estableci lo que se ha denominado desde entonces los postulados de
Koch, mediante los cuales se estandarizaban una serie de criterios
experimentales para demostrar si un organismo era o no el causante de una
determinada enfermedad. Estos postulados se siguen utilizando hoy en da.18

Aunque a finales del siglo XIX ya se saba que las bacterias eran causa de
multitud de enfermedades, no existan tratamientos antibacterianos para
combatirlas.19 Fue ya en 1910 cuando Paul Ehrlich desarroll el primer
antibitico, por medio de unos colorantes capaces de teir y matar
selectivamente a las espiroquetas de la especie Treponema pallidum, la
bacteria causante de la sfilis.
Un gran avance en el estudio de las bacterias fue el descubrimiento realizado
por Carl Woese en 1977, de que las arqueas presentan una lnea evolutiva
diferente a la de las bacterias.22 Esta nueva taxonoma filogentica se basaba
en la secuenciacin del ARN ribosmico 16S y divida a los procariotas en dos
grupos evolutivos diferentes, en un sistema de tres dominios: Arquea, Bacteria
y Eukarya. Se recomienda leer Cazadores de microbios para informacin ms
extensa.

Qu son las bacterias?


Las bacterias son organismos unicelulares de diversas formas. Pueden tener
diversas caractersticas segn sean de animales o vegetales. Tienen
estructuras poco complejas y son clulas procariotas, es decir, slo tienen un
cromosoma y no tienen membrana celular. Las bacterias son los organismos
ms abundantes de la Tierra, encontrndose en todas partes, y son de vital
importancia para la naturaleza y el hombre.

Cmo son las bacterias?


Pueden llevar flagelos, que son rganos de locomocin, y sus formas pueden
ser variadas. Las de formas esfricas se denominan cocos, las de bastoncillos
se denominan bacilos y las de forma espiral se llaman espirilos.
En el caso de las bacterias cocos, puede haber diplococos (en grupos de dos),
tetracocos (en grupos de cuatro), estreptococos (en cadenas) y estafilococos
(en agrupaciones irregulares o racimos). Las bacterias espirilos pueden
clasificarse en vibrios (un poco curvados y en forma de coma), espirilos (forma
helicoidal rgida o tirabuzn) y espiroquetas (tirabuzn o helicoidal flexible).
Otras bacterias pueden tener formas cbicas o tetradricas. Las formas pueden
determinar la capacidad de la bacteria de obtener nutrientes, unirse a otras
estructuras o moverse por estmulos.

En donde se encuentran estas bacterias?

Las bacterias son los organismos ms abundantes del planeta. Son ubicuas, se
encuentran en todos los hbitats terrestres y acuticos; crecen hasta en los
ms extremos como en los manantiales de aguas calientes y cidas, en
desechos radioactivos, en las profundidades tanto del mar como de la corteza
terrestre. Algunas bacterias pueden incluso sobrevivir en las condiciones
extremas del espacio exterior. Se estima que se pueden encontrar en torno a
40 millones de clulas bacterianas en un gramo de tierra y un milln de clulas
bacterianas en un mililitro de agua dulce. En total, se calcula que hay
aproximadamente 51030 bacterias en el mundo.
En el cuerpo humano hay aproximadamente diez veces tantas clulas
bacterianas como clulas humanas, con una gran cantidad de bacterias en la
piel y en el tracto digestivo.

Son buenas o malas?


Dependiendo el tipo de bacteria y el funcionamiento puede o no ser daino
para los seres vivos por ejemplo:
Beneficio
Como se dijo anteriormente las bacterias se pueden encontrar en la flora
intestinal de gran parte de los animales y del hombre, siendo esenciales para
un buen funcionamiento interno.
El papel de las bacterias no patgenas es fundamental. Intervienen en el ciclo
del nitrgeno y del carbono, as como en los metabolismos del azufre, del
fsforo y del hierro. Las bacterias de los suelos y del las aguas son
indispensables para el equilibrio biolgico. Por ltimo, las bacterias pueden ser
utilizadas en las industrias alimenticias y qumicas: intervienen en la sntesis de
vitaminas y de antibiticos. Las bacterias tienen, por lo tanto, un papel
fundamental en los fenmenos de la vida, y todas las reas de la biologa han
podido ser mejor comprendidas gracias a su estudio.
Maleficio (Daos)
Otras bacterias son parsitos que pueden ser patgenos o inofensivos. En el
caso de los patgenos, su peligrosidad depende del estado de la colonia
formada. En estado liso pueden ser ms virulentas que en estado rugoso.
Mientras ms virulentas sean, son menores los nmeros necesarios para
provocar enfermedades.

Hemos visto el inters de su estudio para la comprensin de la fisiolgica


celular, de la sntesis de protenas y de la gentica. Aunque las bacterias
patgenas parecen ser las ms preocupantes, su importancia en la naturaleza
es ciertamente menor.

Estructura de una bacteria.


Las bacterias son organismos relativamente sencillos. Sus dimensiones son
muy reducidas, unos 2 m de ancho por 7-8 m de longitud en la forma
cilndrica (bacilo) de tamao medio; aunque son muy frecuentes las especies
de 0,5-1,5 m.
Carecen de un ncleo delimitado por una membrana aunque presentan un
nucleoide, una estructura elemental que contiene una gran molcula circular
de ADN. El citoplasma carece de orgnulos delimitados por membranas y de
las formaciones protoplasmticas propias de las clulas eucariotas. En el
citoplasma se pueden apreciar plsmidos, pequeas molculas circulares de
ADN que coexisten con el nucleoide, contienen genes y son comnmente
usados por las bacterias en la conjugacin. El citoplasma tambin contiene
vacuolas (grnulos que contienen sustancias de reserva) y ribosomas
(utilizados en la sntesis de protenas).
Una membrana citoplasmtica compuesta de lpidos rodea el citoplasma y, al
igual que las clulas de las plantas, la mayora posee una pared celular, que en
este caso est compuesta por peptidoglicano (murena). Algunas bacterias,
adems, presentan una segunda membrana lipdica (membrana externa)
rodeando a la pared celular. El espacio comprendido entre la membrana
citoplasmtica y la pared celular (o la membrana externa si esta existe) se
denomina espacio periplsmico. Algunas bacterias presentan una cpsula y
otras son capaces de desarrollarse como endosporas, estados latentes capaces
de resistir condiciones extremas. Entre las formaciones exteriores propias de la
clula bacteriana destacan los flagelos y los pili.

Estructura de la clula bacteriana. A-Pili; B-Ribosomas; C-Cpsula; D-Pared


celular; E-Flagelo; F-Citoplasma; G-Vacuola; H-Plsmido; I-Nucleoide; JMembrana citoplasmtica.

Funciones de las partes de una bacteria:


Pared Celular
Se pone de manifiesto con la tincin de Gram:
Tincin desarrollada por Hans Christian Gram (1853-1938).
Permite dividir a las bacterias en dos grandes grupos:
Grampositivos y Gramnegativos
Es una estructura compleja y fundamental para la bacteria formada
porpeptidoglicanos (murena o glucopeptido), cuyo componentes bsicos son:
-El N-acetilglucosamina (NAG)
-El N-acetilmurmico (NAM).
-Un tetrapeptido:
Compuesto por aminoacidos que se alternan en sus configuraciones L y D. De
estos aminoacidos, el D-glutamato, D-alanina y el acido mesodiaminopimelico
no se encuentran en otra proteina conocida.
El peptidoglicano representa el 5-20 % de la composicion de la pared de las
bacterias Gramnegativas y el 90 % en las Grampositivas.

Componentes del Peptidoglicano


Su espesor varia segun se trate de bacterias grampositivas o gramnegativas:
En las bacterias grampositivas es una capa slida de 50-100 moleculas de
peptidoglicanos
En las bacterias gramnegativas tiene un espesor de solo una o dos moleculas.
Por su rigidez le da su forma peculiar a la bacteria
La protege de los cambios de la presion osmtica del medio que la rodea.
Es el lugar donde se localizan numerosos determinantes antignicos que
permiten diferenciar a las bacterias entre si.
La endotoxina de algunos grupos tambien se encuentra aqu.
La pared celular se constituye (se "fabrica") mediante una serie de etapas
enzimaticas en las que participan al menos 30 enzimas.

Es el sustrato donde actuan antimicrobianos como los betalactmicos.


Participa en la division celular.

MEMBRANA CITOPLASMATICA
Esta formada por fosfolipidos y proteinas, y a
diferencia de las eucariotas, no contiene esteroles
(excepto el mycoplasma).

Las enzimas del transporte electronico se encuentran aqu (produce


energia).
Componentes de la capsula y la pared celular son sintetizados aqu.
Es una barrera osmtica, selectiva y activa:
o Acta como barrera osmtica para la clula.
o Contiene sistemas de transporte para los solutos y regula el
transporte de productos celulares hacia el exterior.
Las bacterias gramnegativas tienen dos membranas: una interna y otra
externa, mientras que las grampositivas, solo poseen una membrana
(interna).
Es sitio de accin de detergentes y antibiticos polipeptdicos como la
polimixina (Por ejemplo: colistin).
CITOPLASMA
Formado 85 % por agua. Contiene los ribosomas y el cromosoma bacteriano.
RIBOSOMAS
Compuestos por ARN ribosomico. Su importancia radica en ser el sitio de
accion de numerosos antibioticos: Aminoglucosidos, tetraciclinas, cloranfenicol,
macrolidos y lincosamidas.
NUCLEOIDE O CROMOSOMA BACTERIANO
Llamado tambien equivalente nuclear. No posee membrana nuclear (de alli el
termino nucleoide). Esta formado por un unico filamento de ADN apelotonado
(superenrollado). Confiere sus peculiaridades geneticas a la bacteria. Regula la
sintesis proteica.
CAPSULA
Estructura polisacarida de envoltura. Factor de virulencia de la bacteria.
Protege a la bacteria de la fagocitosis y facilita la invasion. Permite la
diferenciacion en tipos serologicos.
FLAGELOS
Estructuras proteicas, de mayor longitud que los pili. De
estructura helicoidal ylocomotores (responsables de la motilidad bacteriana).
Segn la posicion de los flagelos tenemos bacterias: Monotricas: un flagelo en
un extremo o ambos.Logotricas: varios flagelos en un extremo o
ambos. Peritricas: flagelos en toda la superficie.

Bacteria y sus flagelos


FIMBRIAS O PILI
Son estructuras cortas parecidas a pelos. Visibles solo al Microscopio
Electronico. Carentes de motilidad. Los poseen fundamentalmente
las Gramnegativas. Intervienen en la adherencia de las bacterias al huesped.
Facilitan el intercambio de ADN durante la conjucion bacteriana. Tiene
capacidad antigenica.

Cmo se reproducen?
En las bacterias, el aumento en el tamao de las clulas (crecimiento) y la
reproduccin por divisin celular estn ntimamente ligados, como en la mayor
parte de los organismos unicelulares. Las bacterias crecen hasta un tamao fijo
y despus se reproducen por fisin binaria, una forma de reproduccin
asexual.102 En condiciones apropiadas, una bacteria Gram-positiva puede
dividirse cada 2030 minutos y una Gram-negativa cada 1520 minutos, y en
alrededor de 16 horas su nmero puede ascender a unos 5.000 millones
(aproximadamente el nmero de personas que habitan la Tierra). Bajo
condiciones ptimas, algunas bacterias pueden crecer y dividirse muy rpido,
tanto como cada 9,8 minutos.103 En la divisin celular se producen dos clulas
hijas idnticas. Algunas bacterias, todava reproducindose asexualmente,
forman estructuras reproductivas ms complejas que facilitan la dispersin de
las clulas hijas recin formadas. Ejemplos incluyen la formacin de cuerpos
fructferos (esporangios) en las mixobacterias, la formacin de hifas en

Streptomyces y la gemacin. En la gemacin una clula forma una


protuberancia que a continuacin se separa y produce una nueva clula hija.
Por otro lado, cabe destacar un tipo de reproduccin sexual en bacterias,
denominada parasexualidad bacteriana. En este caso, las bacterias son
capaces de intercambiar material gentico en un proceso conocido como
conjugacin bacteriana. Durante el proceso una bacteria donante y una
bacteria receptora llevan a cabo un contacto mediante pelos sexuales huecos o
pili, a travs de los cuales se transfiere una pequea cantidad de ADN
independiente o plsmido conjugativo. El mejor conocido es el plsmido F de E.
coli, que adems puede integrarse en el cromosoma bacteriano. En este caso
recibe el nombre de episoma, y en la transferencia arrastra parte del
cromosoma bacteriano. Se requiere que exista sntesis de ADN para que se
produzca la conjugacin. La replicacin se realiza al mismo tiempo que la
transferencia.

Cmo es su crecimiento?
Las bacterias necesitan de un aporte energtico para desarollarse.
Se distinguen distintos tipos nutricionales segn la fuente de energa
utilizada: las bacterias que utilizan la luz son fottrofas y las que utilizan los
procesos de oxirreduccin son quimitrofas. Las bacterias pueden utilizar un
sustrato mineral (littrofas) u orgnico (organtrofas). Las bacterias patgenas
que viven a expensas de la materia orgnica son quimioorgantrofas.
La energa en un sustrato orgnico es liberada en la oxidacin del mismo
mediante sucesivas deshidrogenaciones. El aceptor final del hidrgeno puede
ser el oxgeno: se trata entonces de una respiracin. Cuando el aceptor de
hidrgeno es una sustancia orgnica (fermentacin) o una sustancia
inorgnica, estamos frente a una anaerobiosis.
Adems de los elementos indispensables para la sntesis de sus
constituyentes y de una fuente de energa, ciertas bacterias precisan de unas
sustancias especficas: los factores de crecimiento. Son stos unos elementos
indispensables para el crecimiento de un organismo incapaz de llevar a cabo su
sntesis. Las bacterias que precisan de factores de crecimiento se llaman
"auttrofas". Las que pueden sintetizar todos sus metabolitos se llaman
"prottrofas". Ciertos factores son especficos, tal como la nicotinamida
(vitamina B,) en Proteus. Existen unos niveles en la exigencia de las bacterias.
Segn Andr Lwoff, se pueden distinguir verdaderos factores de crecimiento,
absolutamente indispensables, factores de partida, necesarios al principio del
crecimiento y factores estimulantes. El crecimiento bacteriano es proporcional
a la concentracin de los factores de crecimiento. As, las vitaminas, que
constituyen factores de crecimiento para ciertas bacterias, pueden ser
dosificadas por mtodos microbiolgicos (B12 y Lactobacillus lactis Doraren).

Se puede medir el crecimiento de las bacterias siguiendo la evolucin a lo largo


del tiempo del nmero de bacterias por unidad de volumen. Se utilizan
mtodos directos como pueden ser el contaje de grmenes mediante el
microscopio o el contaje de colonias presentes despus de un cultivo
de una dilucin de una muestra dada en un intervalo de tiempo determinado.
Igualmente se utilizan mtodos indirectos (densidad ptica ms que tcnicas
bioqumicas).
Existen seis fases en las curvas de crecimiento. Las ms importantes son
la fase de latencia (que depende del estado fisiolgico de los grmenes
estudiados) y la fase exponencial, en la que la tasa de crecimiento es mxima.
El crecimiento se para como consecuencia del agotamiento de uno o varios
alimentos, de la acumulacin de sustancias nocivas, o de la evolucin hacia un
pH desfavorable: se puede obtener una sincronizacin en la divisin de todas
las clulas de la poblacin, lo que permite estudiar ciertas propiedades
fisiolgicas de Las bacterias.

Clasificacin e identificacin
La clasificacin taxonmica busca describir y diferenciar la amplia diversidad
de especies bacterianas poniendo nombres y agrupando organismos segn sus
similitudes. Las bacterias pueden clasificarse con base en diferentes criterios,
como estructura celular, metabolismo o con base en diferencias en
determinados componentes como ADN, cidos grasos, pigmentos, antgenos o
quinonas.
Un ejemplo de clasificacin:
La identificacin de las bacterias es tanto ms precisa cuanto mayor es el
nmero de criterios utilizados. Esta identificacin se realiza a base de modelos,
agrupados en familias y especies en la clasificacin bacteriolgica. Las
bacterias se renen en 11 rdenes:
- Las eubacteriales, esfricas o bacilares, que comprenden casi todas las
bacterias patgenas y las formas fottrofas.
- Las pseudomonadales, orden dividido en 10 familias entre las que cabe citar
las Pseudomonae y las Spirillacae.
- Las espiroquetales (treponemas, leptospiras).
- Las actinomicetales (micobacterias, actinomicetes).
- Las rickettsiales.
- Las micoplasmales.
- Las clamidobacteriales.
- Las hifomicrobiales.

- Las beggiatoales.
- Las cariofanales.
- Las mixobacteriales.
La tcnica de tincin de membranas de bacterias de Gram, desarrollada
por Hans Christian Gram en 1884,137 ha supuesto un antes y un despus en el
campo de la medicina, y consiste en teir con tintes especficos diversas
muestras de bacterias en un portaobjetos para saber si se han teido o no con
dicho tinte.

http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria#Historia_de_la_bacteriolog.C3.ADa
http://www.misrespuestas.com/que-son-las-bacterias.html
http://www.monografias.com/trabajos/bacterias/bacterias.shtml
http://www.losmicrobios.com.ar/microbios/estructura%20bacteriana.html
http://es.answers.yahoo.com/question/index?qid=20080511104326AAxYZWr

Tema: LEVADURAS
Qu es una levadura?
Se denomina levadura a cualquiera de los diversos hongos
microscpicos unicelulares que son importantes por su
capacidad para realizar la descomposicin mediante
fermentacin de diversos cuerpos orgnicos, principalmente
los azcares o hidratos de carbono, produciendo distintas
sustancias.
Aunque en algunos textos de botnica se considera que las
levaduras "verdaderas" pertenecen slo a la clase
Ascomycota, desde una perspectiva microbiolgica se ha
denominado levadura a todos los hongos con predominio de
una fase unicelular en su ciclo de vida, incluyendo a los
hongos basidiomicetes.
Las levaduras son organismos aerobios y aunque muchas
especies son fermentadoras, otras no lo son, como los
gneros
Cryptococcus y Rhodotorula. Las levaduras suelen fermentar
unos pocos glcidos, principalmente hexosas y disacridos

Para que se utiliza?


Las levaduras se han utilizado desde la prehistoria en la
elaboracin del pan y del vino, pero los fundamentos
cientficos de su cultivo y uso en grandes cantidades fueron
descubiertos por el microbilogo francs Louis Pasteur en el
siglo XIX. Hoy se utilizan en distintos tipos de fermentacin.
Los diferentes usos de las levaduras son: como fuente de
vitaminas del complejo B y de tiamina, en algunas fases de la
produccin de antibiticos y hormonas esteroides, y como
alimento para animales y seres humanos.

Reproduccin de las levaduras.


Las levaduras se reproducen asexualmente por gemacin o
brotacin y sexualmente mediante ascosporas o
basidioesporas. Durante la reproduccin asexual, una nueva
yema surge de la levadura madre cuando se dan las
condiciones adecuadas, tras lo cual la yema se separa de la
madre al alcanzar
un tamao adulto. En condiciones de escasez de nutrientes
las levaduras que son capaces de reproducirse sexualmente
formarn ascosporas. Las levaduras que no son capaces de
recorrer el ciclo sexual completo se clasifican dentro del
gnero Candida.

Tiempo de reproduccin
La levadura es la primera clula eucariota en la que se ha
intentado expresar protenas recombinantes debido a que es
de fcil uso industrial: es barata, cultivarla es sencillo y se
duplica cada 90 minutos en condiciones nutritivas favorables.
Adems, es un organismo fcil de modificar genticamente lo
que permite realizar experimentos en varios das o semanas.
Sin embargo, las levaduras poseen un mecanismo de
glicosilacin diferente al que se encuentra en clulas
humanas, por lo que los productos son inmunognicos.

Qu forman pueden tener?


Las levaduras son hongos que forman sobre los medios de
cultivo colonias pastosas, constitudas en su mayor parte por
clulas aisladas que suelen ser esfricas, ovoideas,
elipsoideas
o alargadas.

Partes de una levadura

CARACTERSTICAS MORFOLGICAS
Los caracteres morfolgicos de las levaduras se determinan
mediante su observacin microscpica. Adems, los criterios
morfolgicos se basan en el modo de reproduccin vegetativa
de la morfologa celular, de la formacin de pseudomicelio y
de micelio. La forma de la levadura puede ser desde esfrica a
ovoide, en forma de limn, piriforme, cilndrica, triangular, e
incluso alargada formando un verdadero micelio o un falso
micelio. Tambin se diferencan en cuanto a su tamao, miden
de 1-10 um ancho por 2-3 um de longitud. Son partes
observables de su estructura, la pared celular, el citoplasma,
las vacuolas, los glbulos de grasa, y los grnulos, los cuales
pueden ser metacromticos, de albmina o de almidn. Para
poder observar el ncleo es preciso utilizar tinciones
especiales. La estructura celular es de tipo eucaritico, pero
sin sistema fotosinttico. La pared rgida, se caracteriza por la
presencia, en su composicin, de dos polisacridos: manano y
glucano. Algunas levaduras producen una cpsula constituida
por fosfomanos. El ncleo est rodeado de una membrana
que persiste durante la divisin celular. El nmero de

cromosomas es variable de unas a otras. Las levaduras en


ningn caso son mviles.

Las levaduras se dividen en grupos?


S. Las levaduras pertenecen a dos clases de hongos:
*ascomicetos o *basidiomicetos, aunque muchas de ellas
se
presentan comnmente en la forma imperfecta. Las levaduras
*ascomicticas forman ascas libres, con 1 a 8 ascosporas,
y en
las especies hifales las ascas estn desnudas. Las ascoporas
de
las levaduras son algo ms resistentes al calor y la desecacin
que las clulas vegetativas, si bien tienen mucha menor
resistencia trmica que las esporas bacterianas, por lo que
mantienen la viabilidad de la especie durante los cambios
adversos del medio ambiente.
El modo de diploidizacin en las levaduras ascomicticas
se efecta entre una clula y su brote, como es el caso de
Schwanniomyces, Debaryomyces y otras, o puede efectuarse
entre dos clulas independientes, por fusin directa
(Schizosaccharomyces) o por medio de un tubo de
conjugacin Ancasi EG
41
(Zygosaccharomyces). En el caso de levaduras estabilizadas
en
el estado diploide, ste se restaura por conjugacin de las
ascosporas dentro del asca (Saccharomycodes). En ciertos
casos, si el cigoto se reprodce por mitosis, existen en el
mismo
ciclo las fases vegetativas haploide y diploide
(Saccharomyces).
La figura siguiente muestra un esquema de varios gneros
de levaduras .
Entre las levaduras *basidiomicticas se encuentran
Filobasidium (teleomorfo de Cryptococcus) que forma hifas
con
fbulas, Sporobolomyces que produce esporas exgenas en la

punta de una protuberancia de la clula y las descarga con


fuerza, y Rhodotorula que, como la anterior, forma un
pigmento carotenoide rojo.

Todas las levaduras producen fermentacin?


Las levaduras son organismos aerobios y aunque muchas
especies son fermentadoras, otras no lo son, como los
gneros
Cryptococcus y Rhodotorula. Las levaduras suelen fermentar
unos pocos glcidos, principalmente hexosas y disacridos.
El gnero Saccharomyces y unos pocos ms, son
fermentadores
enrgicos de los azcares bajo condiciones anaerbiocas.
Dekkera, su anamorfo Brettanomyces y algunas otras,
fermentan glucosa ms rpido en aerobiosis .
Las levaduras oxidativas, como Pichia membranaefaciens,
producen niveles inaceptables de acetaldehdo, steres y
cido
actico en vinos. Las especies fermentativas Z. bailii, Dekkera
intermedia y Saccharomycodes ludwigii causan una
carbonatacin excesiva, sedimento, turbiedad, cidos y
steres
desagradables. Slo Schwanniomyces, Lipomyces y
Saccharomyces diastaticus pueden hidrolizar almidn. Otras
poseen actividad pectinoltica. Muchas especies sintetizan
todas las vitaminas necesarias, pero algunas requieren biotina
y otros compuestos .
Las levaduras asesinas secretan polipptidos txicos para
otras especies de levaduras, an del mismo gnero, y adems
suelen inhibir a otros organismos. Pueden ser contaminantes
en la fermentacin de mostos, dominando a la cepa industrial
para dar un producto espreo, aunque por otra parte una
cepa
asesina seleccionada puede suprimir a las levaduras salvajes
indeseables.

Ambiente en el que se puede encontrar una levadura


Las levaduras se encuentran con frecuencia en las hojas y
las flores, aunque en nmero muy pequeo, siendo los
insectos
un importante vector de diseminacin de las mismas. Estn
sobre la epidermis de frutas y pueden penetrar a los tejidos
subyacentes como resultado de un dao mecnico. El suelo es
un importante reservorio, desde el cual pueden llegar a los
alimentos, pero tambin suelen hallarse en el agua de lagos y
ros. Su presencia depende de la temperatura, el pH, la
humedad y la disponibilidad de azcares simples .
Las levaduras constituyen la causa ms comn de
alteracin de frutas y jugos, pues tienen azcares
fermentables
y elevada acidez. Comnmente asociadas con el deterioro de
las frutas secas estn Zygosaccharomyces rouxii y especies
de
Hanseniaspora, Candida, Debaryomyces y Pichia. Tambin
forman parte de la microbiota de productos lcteos y crnicos.
Las levaduras de las pasturas y suelo de los corrales
pueden ser transportadas a los mataderos y de all a las
carcasas. Cryptococcus laurentii, Cryptococcus luteolus,
Rhodotorula mucilaginosa y Debaryomyces hansenii suelen
hallarse en carcasas de cordero y cerdo. Por otra parte,
Schwanniomyces y Lipomyces son gneros tpicos del suelo.
Las principales especies presentes en los productos lcteos
son Kluyveromyces marxianus y D. hansenii, aunque tambin
se encuentran R. mucilaginosa, Yarrowia lipolytica y Candida
parapsilosis .

Identificacin de una levadura


La forma no es un indicio para la identificacin de las
especies, ni la variedad morfolgica en un mismo cultivo es
una prueba de la contaminacin del mismo. El
comportamiento
fisiolgico es muy importante para la identificacin. Mientras
que las caractersiticas morfolgicas y sexuales permiten
generalmente identificar el gnero, las caractersticas

bioqumicas definen la especie de la levadura, por ejemplo la


utilizacin de compuestos carbonados (almidn, L-arabinosa,
cadaverina, celobiosa, 2-cetogluconato, citrato, eritritol,
galactosa, inositol, lactosa, lisina, maltosa, manitol, melibiosa,
-metilglucsido, rafinosa, ramnosa, sacarosa, trehalosa,
xilosa) y nitrogenados (nitratos), el crecimiento a 37 C, la
fermentacin de glucosa y sacarosa, la necesidad de
vitaminas,
la resistencia a la cicloheximida, la hidrlisis de urea o el
desarrollo en presencia de algunos inhibidores (acetato de
sodio 1%, cloruro de sodio 16%, glucosa 60%) .
La identificacin slo puede llevarse a cabo sobre una cepa
en cultivo puro, previamente aislada en una placa de medio
gelificado. Se comienza examinando el aspecto de los cultivos
tras incubacin a 28C durante 3 das o ms. Se observa el
Manual de Microbiologa de los Alimentos .
aspecto del cultivo en medio lquido, la formacin de
sedimento
y su aspecto (fino, grueso), la pelcula superficial y la
produccin de gas. Se examina el cultivo en el mismo medio
con 2% de agar para definir el tamao de las colonias, la
forma
(contornos ntidos o irregulares, convexas o cncavas), la
superficie (mate o brillante) y la pigmentacin .
Las caractersticas micromorfolgicas se estudian sobre
preparaciones microscpicas efectuadas en estado fresco. La
aptitud para la filamentacin se manifiesta en un microcultivo
(ver captulo 3) sobre agar harina de maz (harina de maz 30
g,
agar 20 g, agua 1 litro (4)) tras una incubacin de 3-5 das. Se
observa si se trata de pseudomicelio o micelio verdadero,
adems la abundancia y ramificacin. La formacin de
clamidoconidios (= clamidosporas) es caracterstica de
Candida
albicans, Metschnikowia y ocasionalmente se puede ver en
cultivos viejos de Trichosporon o Cryptococcus. Las
balistosporas de Sporobolomyces u otros, al ser proyectadas
al
aire se acumulan sobre la tapa de la caja de Petri.

Para la identificacin de las levaduras ascomicticas es


necesario poner en evidencia las ascas y las ascosporas. Al no
tener todas las especies las mismas exigencias, se deben
utilizar simultneamente varios medios de esporulacin y
sembrarlos a partir de un cultivo en fase exponencial (5).
El mtodo de identificacin simplificado dado por Dak &
Beuchat (4) permite la rpida y correcta identificacin del 91%
de las levaduras, e incluye todas las comunes en los
alimentos.
Las pruebas de asimilacin se llevan a cabo agregando los
azcares al medio base nitrogenado estril (sulfato de amonio
5 g, fosfato monopotsico 5 g, sulfato de magnesio
heptahidratado 0,5 g, agar 20 g, agua 1 litro) y los
compuestos con
nitrgeno al medio base carbonado (glucosa 10 g, fosfato
monopotsico 1 g, sulfato de magnesio heptahidratado 0,5 g,
agar 20 g, agua 1 litro).
La necesidad de vitaminas se demuestra volcando una gota
de una suspensin de clulas en agua estril sobre un caldo
libre de vitaminas (glucosa 10 g, sulfato de amonio 5 g,
fosfato
monopotsico 1 g, sulfato de magnesio heptahidratado 0,5 g,
agar 20 g, agua 1 litro) y como testigo se emplea el mismo
medio adicionado de 10 mL de extracto de levadura al 2% .
La fermentacin se demuestra por el cambio de pH y la
retencin de gas en el pequeo tubo invertido colocado
dentro
del medio base (triptona 5 g, extracto de levadura 5 g, agua 1
litro) al que se aadi 2,5 ml de solucin etanlica de azul de
bromotimol y 20 g de glucosa o sacarosa.
Para demostrar el crecimiento a baja actividad agua, alta
acidez o la resistencia a la cicloheximida, se agrega al medio
base estril (triptona 5 g, extracto de levadura 5 g, glucosa 5
g,
agua 1 litro), 160 g de cloruro de sodio o 600 g de glucosa o
10
mL de cido actico glacial o 10 mL de una solucin de
cicloheximida al 1%. La hidrlisis de urea se observa por la
alcalinizacin del medio de cultivo (extracto de levadura 0,1 g,

fosfato monopotsico 1 g, fosfato disdico 1 g, urea 20 g,


solucin de rojo de fenol al 1% 1 mL, agua 100 mL).

http://es.wikipedia.org/wiki/Levadura
http://www.unsa.edu.ar/biblio/repositorio/malim2007/4%20lev
aduras.pdf
http://alezamora.galeon.com/aficiones1893538.html
http://www.google.com.mx/imgres?
q=partes+de+una+levadura&num=10&hl=es419&tbo=d&biw=1024&bih=499&tbm=isch&tbnid=sIapPh9X
evR9GM:&imgrefurl=http://edgardopedullarodriguez.wordpres
s.com/2012/07/03/industria-alimentaria-laslevaduras/&docid=dp12XqF8GSJ0M&imgurl=http://edgardopedullarodriguez.files.
wordpress.com/2012/07/levaduras8.gif&w=500&h=362&ei=sv8UIq1G_Gk2gXGn4Bg&zoom=1&iact=hc&vpx=4&vpy=126&d
ur=3004&hovh=191&hovw=264&tx=130&ty=112&sig=1171
62176057680004923&page=1&tbnh=135&tbnw=187&start=
0&ndsp=15&ved=1t:429,r:0,s:0,i:81

Tema: HONGOS
Qu es un hongo?
En biologa, el trmino Fungi (latn, literalmente "hongos")
designa a un grupo de organismos eucariotas entre los que se
encuentran los mohos, las levaduras y las setas. Se clasifican
en un reino distinto al de las plantas, animales y bacterias.
Esta diferenciacin se debe, entre otras cosas, a que poseen
paredes celulares compuestas por quitina, a diferencia de las
plantas, que contienen celulosa y debido a que algunos
crecen y/o actan como parsitos de otras especies.
Actualmente se consideran como un grupo heterogneo,

polifiltico, formado por organismos pertenecientes por lo


menos a tres lneas evolutivas independientes.

Dnde se puede encontrar estos hongos?


Los hongos se encuentran en hbitats muy diversos: pueden
ser pirfilos (Pholiota carbonaria) o coprfilos (Psilocybe
coprophila).
Cmo y cual es la clasificacin de estos hongos?
u ecologa es muy diversa. Aunque hay representantes
acuticos, principalmente son terrestres. En funcin de cmo
consiguen la materia orgnica que necesitan, encontramos:
hongos parsitos, tanto de plantas como de animales
causando enfermedades conocidas como micosis. Ejemplo son
las tias, royas, el cornezuelo, pie de atleta, candidiasis, etc...
hongos saprofitos, ocupan en los ecosistemas el nivel trfico
de los descomponedores siendo responsables de la
mineralizacin de los bioelementos.
hongos simbiticos, con los algas formando los lquenes, o
con races de plantas en las microrrizas.

Partes que conforman a un hongo.

Partes de un hongo penicillum:


(1) Hifa, (2) Conidiforo, (3) Filide, (4) Conidia, y (5) Septos
La mayora de los hongos crecen como hifas, estructuras
cilndricas y filiformes de 2 a 10 micrmetros de dimetro y
hasta varios centmetros de longitud. Las hifas crecen en sus
pices; las hifas nuevas se forman tpicamente por la
aparicin de nuevos pices a lo largo de hifas preexistentes
por un proceso llamado de ramificacin, o en ocasiones el
extremo apical de las hifas se bifurca, dando lugar a dos hifas
con crecimiento paralelo.

Qu forma o como pueden ser estos hongos?


os hongos se presentan bajo dos formas principales: hongos
filamentosos (antiguamente llamados "mohos") y hongos
levaduriformes. El cuerpo de un hongo filamentoso tiene dos
porciones, una reproductiva y otra vegetativa.1 La parte
vegetativa, que es haploide y generalmente no presenta
coloracin, est compuesta por filamentos llamados hifas
(usualmente microscpicas); un conjunto de hifas conforma el
micelio2 (usualmente visible). A menudo las hifas estn
divididas por tabiques llamados septos.
Los hongos levaduriformes o simplemente levaduras son
siempre unicelulares, de forma casi esfrica. No existen en
ellos una distincin entre cuerpo vegetativo y reproductivo.

Cmo se reproducen?

Los hongos se reproducen sobre todo por medio de esporas,


las cuales se dispersan en un estado latente, que se
interrumpe slo cuando se hallan condiciones favorables para
su germinacin. Cuando estas condiciones se dan, la espora
germina, surgiendo de ella una primera hifa, por cuya
extensin y ramificacin se va constituyendo un micelio. Las
esporas de los hongos se producen en esporangios, ya sea
asexualmente o como resultado de un proceso de
reproduccin sexual. En este ltimo caso la produccin de
esporas es precedida por la meiosis de las clulas, de la cual
se originan las esporas mismas. Las esporas producidas a
continuacin de la meiosis se denominan meiosporas. Como
la misma especie del hongo es capaz de reproducirse tanto
asexual como sexualmente, las meiosporas tienen una
capacidad de resistencia que les permite sobrevivir en las
condiciones ms adversas, mientras que las esporas
producidas asexualmente cumplen sobre todo con el objetivo
de propagar el hongo con la mxima rapidez y extensin
posible.

Tiempo en el que se reproducen?


La velocidad de crecimiento de las hifas de un hongo es
verdaderamente espectacular: en un hongo tropical llega
hasta los 5 mm por minuto.

CLASIFICACION SEGUN LA FORMA DE


CRECIMIENTO
Hongos filamentosos
Microsporum
Trichophyton
Epidermophyton
Aspergillus
Varios gneros (que causan micetomas)
Hongos en levadura
Malassezia

Esporotrix
Histoplasma
Blastomyces
Paracoccidiodes
Cryptococcus

CLASIFICACION SEGN EL TIPO DE INFECCION


QUE PRODUCE
Micosis superficiales
Cutneas
Dermatofitosis
Microsporum
Trichophyton
Epidermophyton
Tia versicolor
Malassezia
Subcutneas
Esporotricosis
Esporotrix
Micosis profundas
Sistmica
Blastomicosis
Blastomyces
Paracoccidiodemicosis
Paracoccidiodes
Coccidiomicosis
Coccidioides
Histoplasmosis
Histoplasma
Oportunista
Criptococosis
Cryptococcus
Candidiasis
Cndida
Aspergilosis
Aspergillus

Diferencias entre Hongos y Bacterias

Me parece muy importante empezar a organizar un poco los


conceptos bsicos de microbiologa, por ejemplo, las
diferencias que existen entre hongos y bacterias, pues nos
puede ayudar a entender como actuan, como pueden
transformar la materia orgnica, porque pueden resisitir la
accin de antibiticos o soportar condiciones extremas.
En la actualidad, la clasificacin de todos los seres vivos se
realiza desde el punto de vista celular, lo que lleva a la
primera y primordial diferencia entre las bacterias y los
hongos:
Las bacterias son organismos procaroticos, cuya principal
caracterstica es carecer de membrana nuclear, lo que lleva a
que su material gentico este disperso libremente en el
citoplasma. Este hecho favorece que su reproduccin, por
fisin binaria, sea muy efectiva. As, por ejemplo, en el
momento de producir una infeccin, lo nico que requiere es
duplicar su material gentico y dividirse en dos, por lo que
rpidamente puede afectar un organismo.
En el caso de los Hongos, son organismos eucaroticos, que se
caracterizan por presentar una membrana nuclear. Este hecho
favorece que su material gentico se encuentre separado de
los dems orgnelos y pueda realizar divisiones de su ncleo,
necesarias para la esporulacin, que es la principal forma de
reproduccin de este organismo.
Las bacterias son todos organismos unicelulares mientras que
los hongos, pueden encontrarse, en la naturaleza, en forma
pluricelular (hongos filamentosos o mohos) o en forma
unicelular (levaduras).
En cuanto a su estructura, las bacterias presentan una pared
celular fuerte y rgida que las protege y sirve de sostn para
las partes ms dbiles y bioqumicamente activas de la
bacteria. Esta pared se encuentra formada bsicamente por
peptidoglicano (molcula formada por protenas y
carbohidratos o azcares). La coloracin de Gram, permite
diferenciar dos grandes grupos de bacterias: las Gram
positivas y Gram negativas. Las primeras tienen una pared
celular ms gruesa que las segundas, lo que permite
diferenciarlas en el momento de la coloracin.

Las clulas de los hongos pluricelulares o mohos poseen


paredes rgidas que rodean el citoplasma. En este caso, las
paredes celulares estn compuestas de quitina, sustancia que
tambin se encuentra en el caparazn de cangrejos y
langostas.
Algunas bacterias presentan organelos como las fimbrias y
flagelos que les dan movilidad. Todos los hongos son
inmviles.
Las bacterias pueden ser aerobias o anaerobias, estrictas o
facultativas (es decir que alternan la aerobiosis y la
anaerobiosis). La mayora de los hongos son aerobios.
Otra diferencia importante de resaltar entre estos dos
microorganismos, es su aspecto macroscpico y que se
evidencia cuando son cultivados en el laboratorio. En este
caso, las bacterias forman colonias (se refiere a la forma en
que crecen las bacterias) con caractersticas definidas como:
Formas punteadas o circulares
Colonias elevadas, convexas e incluso planas.
Bordes lisos, ondulados o lobulados.
Colores, que pueden ser brillantes o mate.
En el caso de los hongos, las colonias presentan
caractersticas muy diferentes:
Formas filamentosas, rizoides e irregulares.
Elevaciones umbilicadas (prominencia en el centro de la
colonia) y algodonosas.
Bordes filamentosos o estriados.
Colores fuertes y muy variados. Normalmente son mate.
A continuacin encontraran ejemplos de este tipo de colonias:

Ejemplo 1

Se observan colonias tpicas de hongos filamentosos, con


bordes irregulares, elevaciones umbilicadas, bordes estriados
y su crecimiento invasivo.

Ejemplo 2

En este caso se observa mucho mejor la elevacin umbilicada


y el carcter invasivo y algodonoso de algunos hongos. Es
comn observar, en un medio de cultivo, el crecimiento
simultneo de diferentes tipos de hongos.

Ejemplo 3

En este caso se observa crecimiento bacteriano con colonias


puntiformes o circulares, bordes lisos y en algunos casos
ondulados y lobulados. Igualmente se observan diferentes
coloraciones.
Ejemplo 4

En este caso se observa el crecimiento simultneo de hongos


y bacterias, con las diferencias en sus colonias ya antes
mencionadas.
Espero que con las imagenes y esta breve explicacin, sea
ms clara la diferencia entre hongos bacterias. Como vemos,
su forma de crecer es una evidente diferencia, as como
cuando pensamos en los mamferos: la ballena es un
mamifero, pero tambin lo es el gatohongos y bacterias son
microorganismos, pero con organizaciones diferentes y
estilos de vida, tamben, diferentes.
http://www.cicy.mx/Documentos/CICY/Sitios/Biodiversidad/pdfs/Cap4/04%20Bac
terias%20y%20hongos.pdf
http://conocimientos-micologia.blogspot.mx/2010_12_01_archive.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Fungi#Clasificaci.C3.B3n_cl.C3.A1sica_de_los_hong
os
http://recursos.cnice.mec.es/biologia/bachillerato/segundo/biologia/ud07/02_07
_04_02_043.html
http://intimicro.blogspot.mx/p/clasificacion-de-hongos.html

http://claudiazambrano.wordpress.com/2010/08/26/diferencias-entre-hongos-ybacterias/

Parcial 2
Tema: MICROSCOPA
Qu es microscopa?
Microscopa (o tambin sin tilde microscopia)1 es el
conjunto de tcnicas y mtodos destinados a hacer visible los
objetos de estudio que por su pequeez estn fuera del rango
de resolucin del ojo normal.
Si bien el microscopio es el elemento central de la
microscopa, el uso del mismo se requiere para producir las
imgenes adecuadas, de todo un conjunto de mtodos y
tcnicas afines pero extrnsecas al aparato. Algunas de ellas
son, tcnicas de preparacin y manejo de los objetos de
estudio, tcnicas de salida, procesamiento, interpretacin y
registro de imgenes, etc.
Exceptuando tcnicas especiales como las utilizadas en
microscopio de fuerza atmica, microscopio de iones en
campo y microscopio de efecto tnel, la microscopa
generalmente implica la difraccin, reflexin o refraccin de
algn tipo de radiacin incidente en el sujeto de estudio.

Partes y uso del microscopio


Con frecuencia la Ciencia y la Tcnica van de la mano, casi
todos los avances cientficos han sido el resultado de nuevos
avances tcnicos, esto es particularmente ilustrativo en lo
referente al uso del microscopio. Al descubrimiento de la
clula se lleg gracias a una serie de descubrimientos
cientficos que estuvieron ligados a la mejora de la calidad de
los microscopios. Uno de los pioneros en la construccin de
estos aparatos fue Anton van Leeuwenhoek.
-Cmo es un microscopio?

El microscopio es un aparato que aumenta la imagen de los


objetos y nos permite observar aquello que, en un principio,
es invisible para el ojo humano. Fue utilizado por primera vez,
como tal, por el holands Anton van Leeuwenhoek el ao
1675. Tiene dos partes: una ptica, para observar, y otra
mecnica, que sostiene a la primera.
La parte ptica consta de :
Ocular, lente situada cerca del ojo del
observador.
Objetivo, lente situada cerca del objeto
que se quiere observar.
Diafragma, dispositivo para graduar la
entrada de luz.
Condensador, dispositivo para concentrar
la luz sobre el objeto.
Foco de luz o espejo, para iluminar el objeto.
La parte mecnica del microscopio consta de:
Columna , parte que sostiene el tubo ptico.
Tubo ptico , donde se encuentra ubicado el ocular.
Revlver , parte mvil que sostiene los objetivos.
Platina , que soporta el portaobjectes.
Pi , sostiene todo el microscopio.
Tornillo macromtrico, que permite desplazamientos
rpidos de las lentes.
Tornillo micromtrico, que permite desplazamientos
suaves de las lentes.
-Cmo se utiliza el microscopio?
El objeto que queremos observar se coloca en un vidrio
transparente que llamamos portaobjetos, y lo cubrimos con
otro vidrio ms fino que llamamos cubreobjetos.
Una vez conocido el funcionamiento de les partes del
microscopio debes saber que el aumento que nos ofrece un
microscopio se obtiene con la combinacin del objetivo y del
ocular. Por ejemplo, si tenemos un ocular de 15x i un objetivo
de 40, el aumento obtenido es de:
40 x 15 = 600 aumentos.

El enfoque del objeto se realiza con el tornillo macromtrico, y


despus se afina con el tornillo micromtrico, hasta conseguir
una visin perfecta. Una vez enfocado el objeto, se pasa al
objetivo inmediatamente superior, hasta obtener el aumento
deseado.Cada vez que cambies de objetivo cuida de no tocar
la preparacin, el vidrio se puede romper.
La luminosidad para observar la muestra la puedes regular
moviendo el diafragma hasta conseguir la ms adecuada para
cada caso.
Como unidad de medida , en microscopia se utiliza
la micra (). Su equivalencia es:
1 = 1/1000 mm ; por tanto, 1 mm = 1000
Cmo se prepara una observacin microscpica?
Para observar perfectamente un objeto es necesario
someterla a un proceso de preparacin que destaque aquellas
partes que nos interesen. Tambin, que conserve la muestra
para observaciones posteriores. Dos fases de este proceso
son: la fijacin y latincin.
Con la fijacin se consigue que la muestra que queremos
observar no se mueva. Se suele utilizar diferentes lquidos:
alcohol etlico 70%, cido actico...; tambin se utilizan altas
temperaturas que ayudan a deshidratar la muestra. El objeto,
una vez fijado, debe lavarse en un medio apropiado como
alcohol o agua.
La tincin consiste en colorar la muestra que queremos
observar para, as, destacar aquellas partes que nos interesen
observar. La gama de colorantes es muy variada, y cada uno
resalta una parte diferente del objeto. Los colorantes
siguientes suelen utilizarse para resaltar las partes de la
clula:
- La estructura celular: azul de metileno, orcena actica.
- El citoplasma celular: eosina, fucsina cida, verde luz.
- El ncleo celular: fucsina bsica, verde metilo.
http://es.wikipedia.org/wiki/Microscop
%C3%ADa#Microscop.C3.ADa_.C3.B3ptica
http://iesmh.edu.gva.es/ptebar/USO%20DEL
%20MICROSCOPIO.htm

Tema: PRUEBAS BIOQUMICAS


Qu es una prueba bioqumica?
Las pruebas bioqumicas son una serie de anlisis clnicos que
sirven a la Medicina como apoyo a la hora de diagnosticar
infecciones por bacterias.

Algunas de estas pruebas:


IMVIC
El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo,
Voges-Proskauer y Citrato. Su finalidad es identificar un
organismo del grupo de los coliformes. La presencia de estos
indica contaminacion fecal.

Indol
La prueba del indol estudia la capacidad de degradar el
triptfano con produccin de Indol y metabolitos indlicos.
Rojo de Metilo
Estudia la fermentacin cido mixta con produccin de cidos
estables en el tiempo.

Voges Proskauer
Estudia la fermentacin butanodilica con formacin de un
metabolito intermediario neutro.
Tcnica: Sembrar el medio e incubar de 24 a 48h a 37 C.
Segn el volumen del medio aadir volumen de los reactivos,
agitar para exponer el medio al O2. VP POSITIVO: Color rojorojizo en menos de 1h. VP NEGATIVO: Amarillo en superficie.

Citrato
Estudia la capacidad de utilizar el citrato como nica fuente
de carbono.
Enzimaticas
Oxidasa
La oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c
oxidasa que acta en la cadena respiratoria del organismo.
Catalasa
Estudia si el microorganismo posee el enzima catalasa que
acta descomponiendo el perxido de hidrgeno.
Coagulasa
Cogulos formados por la reaccin de la coagulasa en un tubo
de ensayo.
Estudia la produccin del enzima coagulasa, capaz de
coagular el plasma. Diferencia Staphylococcus aureus de otras
especies.
Ureasa

Estudia si el microorganismo posee el enzima ureasa que


cataliza la hidrlisis de la urea.
Reduccin Nitratos
Estudia la capacidad de los microorganismos para reducir los
nitratos por la presencia de un conjunto de enzima
denominado nitrato reductasa
- D - Galactosidasa
Estudia la capacidad de producir - D - galactosidasa, enzima
necesario para metabolizar la lactosa.
Descarboxilasas: Estudia si el microorganismo produce los
enzimas que descarboxilan los aminocidos presentes en el
medio.

-Tema: TINCIN DE GRAM


Introduccin
Qu es una tincin?
Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en
microscopa para mejorar el contraste en la imagen vista al
microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en biologa y medicina para resaltar
estructuras en tejidos biolgicos que van a ser observados
con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los
diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la
definicin y examinar grandes cortes de tejido (resaltando por
ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones
celulares (por ejemplo clasificando diferentes clulas
sanguneas) o incluso para resaltar organelas dentro de
clulas individuales.
En bioqumica, esto implica agregar un colorante especfico
(esto significa que se una de manera selectiva ya sea a ADN,

protenas, lpidos, carbohidratos, etc.) a un sustrato para


cualificar o cuantificar la presencia de un determinado
compuesto. Tanto la tincin como el marcado fluorescente
pueden servir para los mismos propsitos.

Qu es y para que sirven los colorantes?


La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen
alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos
colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas
positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los
constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos
nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos
son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes
son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los
constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas
protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo
Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los
colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la
clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o
depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro
Sudn. Si se desea simplemente incrementar el contraste de las clulas
para la microscopa, son suficientes los procedimientos simples de
tincin. El azul de metileno es un buen colorante simple que acta sobre
todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un color tan
intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente til para
detectar la presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la
mayor parte del material no celular no se tie.

Qu colorantes se puede utilizar en una


tincin? Da una explicacin de que consite cada
uno.
Colorantes histolgicos ms comunes
Los diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes
partes de las clulas o tejidos, y estas propiedades son utilizadas como
una ventaja para revelar partes o reas especficas. Algunos de los
colorantes biolgicos ms comunes se listan ms abajo. A menos que se
indique lo contrario la mayora de estos colorantes se utilizan con clulas
y tejidos fijados. Las tinciones vitales (que pueden ser utilizadas con
organismos vivos) se encuentran destacadas.

Azul brillante de Coomassie


Coomassie blue (tambin conocido como azul brillante) es un colorante
que tie en forma no especfica a todas las protenas con un fuerte color
azul. Se utiliza frecuentemente para teir las corridas de protenas en las
electroforesis en gel.
Azul de metileno
Azul de metileno se utiliza para teir clulas animales, para hacer ms
visibles sus ncleos. Es tambin utilizado para teir los extendidos de
sangre para ser utilizados en citologa y como colorante vital en el
recuento de reticulocitos.

Azul Nilo
El Nile blue (o Nile blue A), es decir azul Nilo, tie a los ncleos de color
azul. Tambin puede ser utilizado para teir clulas vivas.
Bismarck brown
Bismarck brown, Marrn Bismarck, (tambin conocido como Bismarck
brown Y o Manchester brown) le imparte un color amarillo a las mucinas
cidas. Se puede utilizar con clulas vivas.

Bromuro de etidio
El bromuro de etidio (BE) se intercala en el ADN y le otorga un color rojo
naranja fluorescente. A pesar de que no es capaz de teir clulas vivas
ya que no atraviesa las membranas intactas, puede ser utilizado para
identificar clulas que se encuentran en las etapas finales de la
apoptosis, ya que tales clulas poseen unas membranas mucho ms
permeables. Por el mismo motivo, el bromuro de etidio es utilizado como
un marcador de apoptosis en poblaciones celulares y para localizar las
bandas de ADN en una corrida en electroforesis en gel. Este colorante
puede ser utilizado en combinacin con naranja de acridina (NA) en el
conteo de clulas viables. Esta tincin combinada BE/NA le otorga a las
clulas vivas un color verde fluorescente mientras que las clulas
apoptticas aparecen con la distintiva fluorescencia rojo-naranja.
Carmn
El carmn es un colorante de un intenso color rojo que puede ser
utilizado como sal de litio para teir glicgeno, mientras que las sales de
alumbre-carmn son colorantes que se adhieren al ncleo. Las tinciones
con carmn requieren del uso de un mordiente, que usualmente es
aluminio o alumbre.
Cristal violeta
El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente adecuado, tie las
paredes celulares de color prpura. El cristal violeta es un componente
importante en la coloracin de Gram.
DAPI
El DAPI es un colorante nuclear (tie el ncleo) fluorescente, se excita
con luz ultravioleta para producir una fuerte fluorescencia azul cuando
se encuentra unido al ADN. El DAPI se une a las regiones de alta
repeticin A=T en los cromosomas. Adems no es visible cuando se
utiliza con un microscopio de transmisin corriente. Puede ser utilizado
en clulas vivas o fijadas. La tcnica de tincin con DAPI es
especialmente adecuada para el recuento celular.6
Eosina
La eosina se utiliza ms frecuentemente como contracoloracin de la
hematoxilina, impartiendo un color que va del rosado al rojo al material

citoplasmtico, membrana celular, y algunas estructuras extracelulares.


Adems imparte un fuerte color rojo a los eritrocitos. La eosina puede
ser utilizada tambin en algunas variantes de la coloracin de Gram, y
en muchos otros protocolos de tincin. De hecho existen dos
compuestos muy estrechamente relacionados (aunque no iguales)
conocidos como eosina. El ms frecuentemente utilizado es la eosina Y
(tambin conocida como eosina amarillenta) ya que posee una tonalidad
amarillenta muy suave. El otro compuesto conocido como eosina es la
eosina B, tambin conocida como eosina azulada o rojo imperial, la cual
posee una suave tonalidad azul. Los dos colorantes son intercambiables,
y el la utilizacin de uno u otro es ms una cuestin de preferencia y
tradicin.

Tinciones ms utilizadas para microbiologa


Tinciones para Microbiologa

Tincin de
Gram

Tincin de
ZiehlNeelsen

Tincin de
SchaefferFulton

Tie endosporas
de verde y
bacterias en rojo

Sirve para diferenciar


endosporas y bacterias

Tincin de
Conklin

Tie endosporas
de verde, similar a
Schaeffer-Fulton

Tincin de
Grocott

Deteccin de
microorganismos, en especial
fngicos.

Tincin de
Dieterle

Bsqueda de
microorganismos,
ej., Treponema pallidum

Tincin
negativa

Es muy utilizada en
Tie el exterior,
microscopa electrnica. En
pero no el interior
microscopa ptica para
de clulas y
identificar microorganismos
estructuras
encapsulados.

Tincin con
mucicarmin
a

Tie las paredes


celulares de
polisacridos de
un intenso color
rojo

Sirve para diferenciar


bacterias con pared de
polisacridos de otras que no.
(Ej Cryptococcusson
mucicarmina +)

Tincin de Gram
Qu es la tincin de gram?
La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin
diferencial empleado en microbiologa para la visualizacin de
bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su nombre al
bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica
en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa
celular bacteriana como para poder realizar una primera
aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose

Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de


color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se
visualizan de color rosa o rojo o grosella.

Explicacin de como funciona la tincin de Gram


El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las
clulas bacterianas (tanto Gram positivas como Gram
negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un
compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro
de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales estn presente para
solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el
cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la
clula bacteriana. El I2 entra en las clulas y forma un
complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para
realizar la decoloracin, ya que en la misma es soluble el
complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no
se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza
una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante
de color rojo, como la safranina o la fucsina. Despus de la
coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas,
mientras que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la
tcnica. Sirve para hacer una tincin de contraste que pone
de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al trmino del
protocolo, las Gram positivas se vern azul-violceas y las
Gram negativas, se vern rosas (si no se hizo la tincin de
contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina).
Esta importante coloracin diferencial fue descubierta por
Hans Christian Gram en 1884. En este mtodo de tincin, la
extensin bacteriana se cubre con solucin de uno de los

colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un


lapso determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de
metilo y se aade luego una solucin de yodo, que se deja
durante el mismo tiempo que la anterior; despus se lava el
portaobjetos con alcohol hasta que ste no arrastre ms
colorante. Sigue a tal tratamiento una coloracin de contraste,
como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck,
pironin B o hasta inclusive verde de malaquita.

Cmo se si mi prueba sali negativa o positiva?


Explica porque?
La tincin de Gram es usada para clasificar bacterias sobre la
base de sus formas, tamaos, morfologas celulares y reaccin
Gram (color). A nivel del laboratorio es til como test para un
rpido diagnstico presuntivo de agentes infecciosos, tanto en
muestras como en cultivos en crecimiento, y adicionalmente
sirve para valorar la calidad de la muestra clnica. Las
bacterias se tien gram positivas (+), gram negativas () o no
se tien debido a sus diferencias en la composicin de su
pared y arquitectura celular.
Las bacterias gram (+) tienen una gruesa capa de
pptidoglucano y gran cantidad de cidos teicicos que no
son afectados por la decoloracin con alcohol y/o acetona,
reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y
visualizndose en distintos grados de tonos desde el violeta al
azul claro, dependiendo de si la naturaleza de su pared celular
est intacta o daada (por tratamientos antibiticos, edad
celular).
Las bacterias gram () tienen en su pared celular una
delgada capa de peptidoglucano ligada a una membrana
externa por molculas de lipopolisacridos. Esta membrana
externa es daada por el alcohol y/o acetona de la
decoloracin, permitiendo que el primer colorante

acomplejado con iodo escape y sea reemplazado por el


contracolorante.

Procedimiento de como se realiza esta tincin(Gram)


Tcnica de la coloracin gram

Fijar un frotis
Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriolgica y
esperar que enfre un poco.
Tomar el asa (previamente flameada) y con sta tomar un
poco de muestra.
Una vez obtenida una pequea cantidad de la muestra (con el
asa), hacer que sta tenga contacto con una lmina
portaobjetos, la cual servir para depositar la muestra
contenida en el asa.
Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lmina
portaobjetos, proceder a realizar la extensin de la muestra
en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar
vueltas con el asa) sobre la lmina, de tal forma que al
terminar la extensin, tengamos como producto una espiral
en la parte media de la lmina.
Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un
mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor
no debe ser directo (slo se pasa por la llama), puesto que el
calor excesivo puede cambiar la morfologa celular de las
bacterias a observar. El calor deseable es aqul en el que el
portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser
colocado sobre el dorso de la mano.

Tincin
Con violeta cristal, violeta de genciana, azul de metileno o en
todo caso tinta china utilizando una cantidad suficiente de
dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla
por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta
tincin de 1 minuto est dada para trabajar a una
temperatura ambiente de 25 C.

Enjuague
Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lmina
conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el
lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO
debe caer directamente sobre la muestra, sta debe caer
sobre la parte superior de la lmina que no contiene muestra.
El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de
medio a un milmetro de espesor. Tambin el enjuague se
debe realizar poniendo la lmina portaobjetos en posicin
inclinada hacia abajo... La solucin de cristal violeta, se
recomienda sea al 1% .

Mordiente
Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente
yodo o lugol durante 3 minuto ms. El mordiente es cualquier
sustancia que forma compuestos insolubles con colorantes y
determina su fijacin en las bacterias..
Decoloracin (paso critico)
Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se
decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o

alcohol-acetona, hasta que ya no escurra ms lquido azul.


Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se
van aadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta
lograr que ste salga totalmente transparente, es decir, hasta
que ya no escurra ms lquido azul.
Lavado y secado
Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y
esperar que seque la lmina al aire libre o con la ayuda de la
llama de un mechero de la forma anteriormente descrita.
Tincin de contraste
Una vez que la lmina ya sec, procedemos a teir
nuevamente, pero esta vez se va a utilizar un colorante de
contraste como por ejemplo la safranina, dejar actuar durante
1 minuto.
Nuevo enjuague
Pasado el minuto correspondiente, se procede a enjuagar la
lmina con agua, se escurre el agua sobrante y se seca en la
forma anteriormente descrita.
De esta manera, ya tendremos listo el frotis para su
respectiva observacin microscpica.

Metodologa que se utiliza en la tincin de Gram

Recoger muestras.

Hacer el extendido en espiral.

Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando


un mechero.

Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor


(flameado 3 veces aprox.)

Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana)


y esperar 1 min. Todas las clulas gram positivas y gram
negativas se tien de color azul-purpura.

Enjuagar con agua.

Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.

Enjuagar con agua.

Agregar acetona y/o alcohol y esperar hasta 8 a 15


segundos aproximadamente(parte critica de la coloracion)
Enjuagar con agua.
Tincin de contraste
agregando safranina o fucsina bsica y esperar 45
segundos. Este tinte dejar de color rosado-rojizo las
bacterias Gram negativas.

Utilidades de la tincin de Gram


En el anlisis de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental por
cumplir varias funciones:
Identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin.
Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos
bacterianos identificados en la tincin de Gram se deben de corresponder con
aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor
nmero de formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los
medios de cultivos empleados as como la atmsfera de incubacin.
A partir de la tincin de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos:
Los cocos son de forma esfrica. Pueden aparecer aislados despus de la
divisin celular (Micrococos), aparecer por pares (Diplococos), formar cadenas
(Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos).
Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de
cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.

Tambin pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son


de forma rgida o espiroquetas si son blandas y onduladas. Si por el contrario,
poseen forma de "coma", o curvados, entonces se los designa vibrios.

Fundamentos de diferenciacin de Gram positivo y


Gram negativo
Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias
entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y
Gram negativas
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una
gruesa capa de peptidoglicano, adems de dos clases de
cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular
y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido
lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est
anclado solamente en el peptidoglicano (tambin conocido
como murena)
Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram
negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda
membrana plasmtica exterior (de composicin distinta a la
interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada
de peptidoglicano unida a una membrana exterior por
lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena,
fosfolpido y lipopolisacrido.
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien
diferencialmente debido a estas direrencias constitutivas de
su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material
que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las
Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporcin que las
Gram negativas.

La diferencia que se observa en la resistencia a la


decoloracin, se debe a que la membrana externa de las
Gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por
ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de
peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para
poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form
previamente, y por lo tanto este complejo se escapa,
perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario,
las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente
y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son
susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este
acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que
pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y
manteniendo la coloracin azul-violcea.

Tema: Recuentto en placa


Introduccin

Otros mtodos para contar mciroorganismos


Medida del crecimiento microbiano
Podemos medir el crecimiento microbiano siguiendo
diferentes parmetros algunos de los cuales presentar a
continuacin. No debemos olvidar que en condiciones de
crecimiento equilibrado todos los parmetros del cultivo
evolucionan de forma proporcional y, por consiguiente,
midiendo uno de ellos (el de medida ms fcil) podemos
medir el resto.

En este apartado revisaremos los principales mtodos de


recuento de microorganismos. Una informacin ms
completa puede encontrarse en la conexin
Mtodos de
recuento.
Los mtodos para el seguimiento de la evolucipon de un
cultivo microbiano pueden clasificarse en directos e indirectos.
Los mtodos directos se basan en la medida de la evolucin
del nmero de clulas vivas (tcnicas de plaqueo) o del
nmero de partculas (tcnicas microscpicas y de contadores
de partcuas). Ls mtodos indirectos se basan en la medida de
algn parmetro del cultivo que nos permite deducir
informacin sobre la evolucin del nmero de
microorganismos. La eleccin de un mtodo de seguimiento
del cultivo en concreto depende de las caractersticas del
cultivo y del proceso.
Entre los mtodos principales de recuento de
microrganismos podemos destacar:
1.- Las tcnicas de recuento microscpico de clulas sin fijar
usando microscopa de contraste de fae. Para ello se cuenta el
nmero de partculas en un volumen determinado usando una
clula de Petroff-Hauser o de Neubauer (portaobjetos
modificado en e que una rejilla nos permite conocer el
volumen que estamos observando). El procedimiento es
rpido y sencillo; pero no permite distinguir clulas vivas
inmviles de clulas muertas.
2.- Contaje de partculas utilizando sistemas automticos del
tipo Coulter Counter. La operacin de estos sistemas es
sencilla (mtodo de empleo) y permite rpidamente
determinar el nmero de patculas presentes en una
suspesin y la distribucin de sus tamaos. El problema es
que no distingue entree clulas vivas y muertas ni entre
clulas y agregados de material insoluble presente en la
suspensin del cultivo.

3.- Tcnicas de recuento en placa, basadas en colocar en un


medio de cultuivo adecuado un volumen determinado de
muestra. Cada una de las clulas aisladas dar lugar, despus
de la incubacin correspondiente, a una colonia de forma que
el nmero de estas nos permitir estimar el nmero de clulas
presentes en la muestra plaqueada (sembrada). El sistema es
fcil de utilizar en el caso de clulas aisladas (no sirve en el
caso de hongos filamentosos, por ejemplo). Puede realizarse
sembrando en superficie (extendiendo un volumen dado de
muestra sobre el medio de cultivo slido) o en profundidad
(mezclando un volumen dado de muestra con el medio de
cultivo antes que solidifique). Esta ltima opcin permite
realizar el recuendto de microorganismos microaerfilos que
no crecen bien en la superficie de las placas de cultivo. Para
que el sistema de recuento en placa tenga validez estadstica,
es necesario contar entre 30 y 300 colonias con objeto de
disminuir el error de la medida.
4. Tcnicas turbidomtricas basadas en la medida de la
turbidez de los medios de cultivo en los que crecen
microorganismos unicelulares. La turbidez es proporcional a la
masa de las partculas en suspensin (clulas) y su medida
nos permite estimarla. Para ello se utiliza un equipo similar al
que se emplea en la medida de la absorbancia de luz por
disoluciones coloreadas (colormetro, por ejemplo). Las
medidas se hacen a una longitud de onda adecuada
(normalmente en el entorno de 550 nm) y los valores se
suelen denominar valores de densidad ptica. La limitacin de
este sistema, por otra parte muy sencillo, es que no distingue
clulas vivas de muerta y que normalmente no es capaz de
detectar densidades celulares menores a 10.000 clulas por
mililitro.
5.- Medida de peso seco. El sistema consiste en la filtracin
del cultivo a travs de una membrana que retenga las clulas
y su posterior desecacin hasta peso constant. El sistema,
obviamente, no disferencia clulas vivas de muertas y su
sensibilidad es limitada.

6.- Medida del ATP. Es una medida relativamente sencilla


basada en la emisiin de luz por la luciferasa de lucirnaga
(Photimus pyralis) en presencia de O2 y de ATP. De esta forma
se puede medir la concentracin de ATP en un volumen dado
de cultivo. Esta medida es interesante porque la
concentracin de ATP decae rpidamente en las clulas
muertas, de forma que esa medida indirecta detecta
nicamenta las clulas vivas.
Los sistemas de medida del crecimiento celular se han
adaptado tcnicamente para poder ser utilizados como
sistemas online. En una opracin on line no es necesario
extraer la muestra del cultivo para realizar la medida. Esto es
muy importante en el caso de fermetaciones en gran volumen
porque permite realizar medidas en tiempo real y disminuye
los riesgos de contaminacin.
Antes de cerrar este apartado hay que sealar que en la
naturaleza hay muchsimos ms microorganismos de los que
podemos detectar por la mayora de los sistemas de recuento.
De hecho, se estima que en el suelo o en el agua podemos
cultivar nicamete proporciones menores al 1% de los
microorganismos vivos. Esto es debido a varias causas entre
las que se cuenta la falta de medios de cultivo adecuado, la
dependencia de otros microorganismos para el cultivo debido
a procesos de sintrofa y la oligotrofa (inhibicin por altas
concentraciones de nutrientes) que muestran algunos
microorganismos.

Disoluciones
3.4.1.1 Fundamento
En general los recuentos bacterianos bajos estn asociados
con alimentos seguros. La mayora de los alimentos
industrializados (excepto, por ejemplo, los productos
fermentados) deben ser considerados como inadecuados para
el consumo cuando contienen un gran nmero de
microorganismos aun cuando estos microorganismos no sean

conocidos como patgenos y no hayan alterado de forma


apreciable los caracteres organolpticos del alimento. Algunos
microbilogos han estimado el recuento bacteriano como uno
de los mejores indicadores del grado de alteracin de los
alimentos.

3.4.1.2 Material
El necesario para hacer disoluciones de la muestra (ver
protocolo de disoluciones).
Placas de Petri y pipetas de 10 mL y 1 mL, estriles.
Agar triptosa-glucosa-extracto de levadura (Plate count agar)
fundido, en el bao termosttico a 45C, estril.

3.4.1.3 Preparacin del medio, incubacin y expresin de


resultados
Hacer disoluciones de la muestra al 1/10. 1/100.etc, segn
estime el grado de contaminacin.
Poner 1mL de cada disolucin decimal en placas de Petri (por
duplicado).
Aadir 15 mL de medio de cultivo (fundido, a 45C en un bao
termosttico) y dar movimientos circulares y de vaivn para
que se distribuya la muestra uniformemente.
Incubar: una serie de placas a 20C/ 3 das (psicrfilos) y otra
serie de placas a 35C/ 2 das (mesfilos). Para incubar las
placas introducirlas invesrtidas en la estufa.
Pasado el perodo de incubacin contar las placas que tengan
entre 30 y 300 colonias.

Expresar el resultado en ufc/g de alimento. Para ello se cuenta


el duplicado y se halla la media, multiplicndose por la inversa
del factor de dilucin en el que se realiz el recuento.
Tambin es adecuado expresar el resultado calculando el
logaritmo del valor anterior log ufc/g.

Glosario
Metablosimo
El metabolismo es el conjunto de reacciones bioqumicas y procesos fsicoqumicos que ocurren en una clula y en el organismo.1 Estos complejos
procesos interrelacionados son la base de la vida a escala molecular, y
permiten las diversas actividades de las clulas: crecer, reproducirse, mantener
sus estructuras, responder a estmulos, etc
Glucosa
La glucosa es un monosacrido con frmula molecular C6H12O6. Es una
hexosa, es decir, que contiene 6 tomos de carbono, y es una aldosa, esto es,
el grupo carbonilo est en el extremo de la molcula. Es una forma de azcar
que se encuentra libre en las frutas y en la miel. Su rendimiento energtico es
de 3,75 kilocaloras por cada gramo en condiciones estndar. Es un ismero
que la fructosa, con diferente posicin relativa de los grupos -OH y =O

Ciclo de krebs
El ciclo de Krebs (tambin llamado ciclo del cido ctrico o ciclo de los cidos
tricarboxlicos) es una ruta metablica, es decir, una sucesin de reacciones
qumicas, que forma parte de la respiracin celular en todas las clulas
aerbicas. En clulas eucariotas se realiza en la mitocondria. En las procariotas,
el ciclo de Krebs se realiza en el citoplasma, especficamente en el citosol.
Enizmas
Las enzimas1 son molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones
qumicas, siempre que sean termodinmicamente posibles: una enzima hace
que una reaccin qumica que es energticamente posible (ver Energa libre de
Gibbs), pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente
favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la
enzima.2 3 En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas
denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas diferentes

denominadas productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan


enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones
mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimticas.

http://www.a14.san.gva.es/laboratorio/Web/gram.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_bioqu%C3%ADmica
http://www.monografias.com/trabajos911/pruebas-bioquimicas/pruebasbioquimicas.pdf

http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n#Tinci.C3.B3n_directa
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci
%C3%B3n_de_Gram#T.C3.A9cnica_de_la_coloraci.C3.B3n_gram

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