Biodegradación de Crudo de Petroleo Por Bacterias en Terrarios (Lista de Bacterias)

Biodegradacin de crudo
Guzmn, Roco Miluska.
de
petrleo
en
terrarios.
Escalante
4. RESULTADOS
4.1 AISLAMIENTO Y PURIFICACIN DE BACTERIAS DEGRADADORAS DE
HIDROCARBUROS.
Se aislaron ciento veintinueve cepas bacterianas a partir de seis muestras de suelo contaminado
con crudo de petrleo procedentes de Trompeteros, Iquitos. El 81.39% (105) de las cepas
bacterianas aisladas fueron gramnegativas, de las cuales 25.71% (27) fueron bastones
gramnegativos (BG-), 60% (63) fueron cocobacilos gramnegativos (CBG-) y 14.28% (15)
fueron bastones cortos gramnegativos (BCG-). Entre las 24 bacterias grampositivas 18.60% del
total, se encontr que 37.5% (9) fueron bastones grampositivos (BG+) y 62.5% (15) fueron
cocos grampositivos (CG+) Grfico N 01.
Porcentaje de cepas bacterianas.
70
60
50
40
30
20
10
Grfico N 01: Porcentaje y tipo de cepas bacterianas identificadas.

Bastones gramnegativos
Bastones grampositivos
Cocobacilos gramnegativos
Cocos grampositivos
Bastones cortos gramnegativos
4.2 ACTIVIDAD EMULSIFICANTE DE LAS BACTERIAS DEGRADADORAS DE

PETRLEO.
Segn la prueba de actividad emulsificante, del total de cepas bacterianas, el 99.22% (128) de
las cepas aisladas, presentaron actividad emulsificante y 0.77% (1) no la present. La actividad
emulsificante fluctu entre 0.75 UAE/mL y 3.66 UAE/mL
En el cuadro N 02, se observan las cepas bacterianas de mayor A.E , las cuales fueron tres:
Pseudomonas aeruginosa 4k-1, Serratia rubidae 6B9, Bacillus sp. 6Bh-1.
Elaboracin y diseo en formato PDF, por la Oficina General del Sistema de Bibliotecas y
Biblioteca Central UNMSM
de
petrleo
en
terrarios.
Escalante
CUADRO N 02
ACTIVIDAD EMULSIFICANTE DE LAS CEPAS BACTERIANAS OLEOFLICAS
IDENTIFICADAS
ACTIVIDAD
N
ESPECIE
EMULSIFICANTE
UAE/mL
Acinetobacter calcoaceticus lwoffi 1Bh-2
1.07
Pseudomonas aeruginosa 1B-3
1.12
Acinetobacter calcoaceticus anitratus 1B-5
1.10
Aeromonas salmonicida salmonicida 2B-1
1.18
Pseudomonas aeruginosa. 4Bh2
1.13
Acinetobacter calcoaceticus anitratus 4Bh3
1.01
Hafnia alvei 4Bh4
1.03
Hafnia alvei 4Bh7
1.59
Pseudomonas aeruginosa 4Bh12
1.15
10
Hafnia alvei 4Bh14
0.92
11
Pseudomonas aeruginosa 4K-1
3.66
12
Enterobacter agglomerans 4K-3
1.072
13
0.75
14
Pseudomonas aeruginosa 5Bh-1
0.78
15
Pseudomonas acidovorans 5Bh-6
1.16
16
Enterobacter agglomerans 5K2
1.11
17
Bacillus Sp. 6Bh-1
1.676
18
1.40
19
Enterobacter agglomerans 6Bh-3
1.11
20
Hafnia alvei 6Bh-4
1.00
21
1.05
22
Pseudomonas cepacia 6K1
1.10
23
Pseudomonas aeruginosa 6K3
1.46
24
1.04
25
1.41
26
1.28
27
1.02
28
Pseudomonas pseudomallei 6B4
1.5
29
Pseudomonas aeruginosa 6B6
1.01
30
Serratia rubidae 6B9
2.72
de
petrleo
en
terrarios.
Escalante
4.3 ACTIVIDAD DEGRADATIVA DE LAS CEPAS BACTERIANAS.
El 97.67 % (126) de las cepas bacterianas evaluadas, presentaron A.D, mientras que 2.32% (3)
no la presentaron. La actividad degradativa de las treinta cepas bacterianas identificadas fue de
regular (2+) a buena (3+). Cuadro N 03.
CUADRO N 03
ACTIVIDAD DEGRADATIVA DE LAS CEPAS BACTERIANAS OLEOFLICAS IDENTIFICADAS
N
ESPECIE
ACTIVIDAD
DEGRADATIVA
2+
Pseudomonas aeruginosa 1B-3
2+
Acinetobacter calcoaceticus anitratus 1 B-5
2+
Aeromonas salmonicida salmonicida 2B-1
2+
2+
Acinetobacter calcoaceticus anitratus 4Bh3
2+
Hafnia alvei 4Bh4
2+
Hafnia alvei 4Bh7
2+
2+
10
Hafnia alvei 4Bh14
3+
11
Pseudomonas aeruginosa 4K-1
3+
12
2+
13
3+
14
3+
15
Pseudomonas acidovorans 5Bh-6
2+
16
Enterobacter agglomerans 5K2
3+
17
Bacillus Sp. 6Bh-1
3+
18
2+
19
Enterobacter agglomerans 6Bh-3
2+
20
Hafnia alvei 6Bh-4
3+
21
2+
22
3+
23
2+
24
2+
25
2+
26
2+
27
2+
28
Pseudomonas pseudomallei 6B4
3+
29
Pseudomonas aeruginosa 6B6
3+
30
3+
de
petrleo
en
terrarios.
actividad
emulsificante
Escalante
4.4 IDENTIFICACIN TAXONMICA
Las
treinta
cepas
bacterianas
de
mayor
fueron
identificadas
taxonmicamente. Del total de cepas bacterianas identificadas 13.3% (4) pertenecan al gnero
Acinetobacter , 50% (15) al gnero Pseudomonas, 13.3% (4) al gnero Hafnia, 3.3% (1) fue
Aeromonas , 3.3% (1) fue Bacillus,3.3% (1) fue Serratia y
Cuadros
13.3% (4) al gnero Enterobacter.
N 02 y 03. Las especies del gnero Pseudomonas, fueron: Pseudomonas aeruginosa
(36.67%), Pseudomonas acidovorans (3.33%),
Pseudomonas cepacia (6.67%), Pseudomonas
pseudomallei (3.33%).
4.5 SELECCIN DEL CONSORCIO BACTERIANO EXGENO.
Las cepas bacterianas seleccionadas para formar el consorcio bacteriano exgeno fueron:
Pseudomonas aeruginosa 4k-1, Bacillus sp.6Bh-1
Serratia rubidae 6B9, las que presentaron
una A.E de 3.66 UAE/mL, 1.676 UAE/mL y 2.72 UAE/mL respectivamente y una actividad de tres
(3+) equivalente a una
A.D. buena. La poblacin del consorcio bacteriano exgeno se observa en
el cuadro N 04.
CUADRO N 04
POBLACIN DEL CONSORCIO BACTERIANO EXGENO
ESPECIE
POBLACIN (Bact/mL)
1.92 x 10 7
Pseudomonas aeruginosa 4k-1
2.69 x 10 7
Bacillus Sp. 6Bh-1
4.93 x 10 7
4.6 BIODEGRADACIN DE HIDROCARBUROS
En el cuadro N 05, se observa la temperatura, humedad y pH del suelo en los diferentes terrarios:
control abitico (C.A), consorcio bacteriano nativo (C.N) y consorcio bacteriano exgeno (C.E).
de
petrleo
en
terrarios.
Escalante
La temperatura no tuvo mucha variacin y fue similar en los tres terrarios, la mayor temperatura se
present en el suelo del C.N, la cual alcanz 19.3 C a los sesenta das, temperatura similar a la del
C.E (19 C) y a la del C.A (18.4C).
En cambio la humedad tuvo variaciones durante los noventa das, la humedad ms alta se observ a
los treinta das en el terrario C.E, la cual fue 84 mL/kg, que fue mayor a la del C.N (64mL/kg) y
similar a la del C.A (80mL/kg).
El pH, generalmente se mantuvo cercano a la neutralidad, sin embargo, present una ligera
disminucin al cabo de tres meses de 7.5 a 6.0 en los terrarios: C.N y C.E, pero en el C.A
permaneci en siete.
CUADRO N 05
TEMPERATURA, HUMEDAD Y pH DEL SUELO CONTENIDO EN LOS TERRARIOS.
DAS
0
30
60
90
TEMPERATURA
C
C.A1
16.8
17.1
18.4
15.7
C.N 2
17.7
18.2
19.3
16.3
C.E 3
17.6
19.2
19.0
16.1
HUMEDAD
mL/kg
C.A
0.005
80.0
28.0
52.0
C.N
0.0053
64.0
28.0
16.0
pH
C.E
0.0045
84.0
48.0
8.0
C.A
7.45
8.0
7.58
7.0
C.N
7.5
7.54
7.88
6.0
C.E
7.55
7.64
7.9
6.0
1. C.A: Control abitico.

2. C.N: Consorcio bacteriano nativo
3. C.E: Consorcio bacteriano exgeno.
El mayor porcentaje de biodegradacin fue 92.5% a los noventa das y se obtuvo en el terrario que
contena el consorcio bacteriano exgeno, en el cual hubo una reduccin de la concentracin de
hidrocarburos de 1.2 g de hidrocarburos /25 g de suelo a 0.09 g /25 g a los noventa das. Cuadro
N 06. Los parmetros de este terrario fueron: temperatura de 16.1 C, pH igual a 6.0, humedad de
8 mL/kg, (Cuadro N 05), un promedio de 1.85 x
10
UFC/mL de microorganismos aerobios
mesfilos y un promedio de bacterias oleoflicas de 2.12 x 10 UFC/mL
de
petrleo
en
terrarios.
Escalante
CUADRO N 06
PORCENTAJE DE REDUCCIN DE HIDROCARBUROS EN TERRARIOS.
TIEMPO
Das
CONTROL ABITICO CONSORCIO
CONSORCIO
BACTERIANO NATIVO
BACTERIANO EXGENO
Hidrocarburos % parcial de
g/25 g
G/25 g
g/25 g
reduccin de
reduccin de
hidrocarburos
reduccin de
hidrocarburos
hidrocarburos
0.4
0.15
1.2
30
0.18
55
0.27
-80
0.44
63.4
60
0.18
0.25
13.4
0.21
19.1
90
0.18
0.06
126.6
0.09
10.0
TOTAL
55
60
92.5
Segn el primer recuento de bacterias oleoflicas, no se observ crecimiento bacteriano en el suelo

del terrario del consorcio nativo, sin embargo al cabo de treinta das, la poblacin bacteriana
aument a 3.30 x 10
UFC/mL Ver grfico N 02, en cambio la poblacin de bacterias oleoflicas
del consorcio exgeno fue mayor en el tiempo inicial ( 8.08 x 10

de treinta das la poblacin bacteriana disminuy a 9.63 x 10
UFC/mL), sin embargo al cabo
UFC/mL Ver grfico N 03. A partir
de los treinta das, tanto en el consorcio nativo como en el exgeno, la cantidad de bacterias
oleoflicas, disminuy progresivamente, en forma directamente proporcional a la disminucin en la
concentracin de hidrocarburos. Ver grficos N 02 y 03. En el control abitico en el tiempo
inicial, el crecimiento bacteriano fue bajo (2.5 x 10
UFC/mL), sin embargo a los noventa das no
se observ crecimiento.
de
petrleo
en
terrarios.
Escalante
3.50E+05
Bacterias oleoflicas en UFC/ml
3.00E+05
2.50E+05
2.00E+05
1.50E+05
1.00E+05
5.00E+04
0.00E+00
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
-5.00E+04
Das
Grfico N 02: Poblacin bacteriana del consorcio nativo respecto al tiempo

Consorcio bacteriano nativo
9.00E+08
8.00E+08
Bacterias oleoflicas en UFC/ml
7.00E+08
6.00E+08
5.00E+08
4.00E+08
3.00E+08
2.00E+08
1.00E+08
0.00E+00
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
-1.00E+08
Das
Grfico N 03: Poblacin bacteriana del consorcio exgeno
Consorcio bacteriano exgeno
de
petrleo
en
terrarios.
Escalante
4.6.1 REGRESIN MLTIPLE POR PASOS
De acuerdo a la regresin mltiple por pasos o Stepwise se encontr un modelo para el anlisis de
datos, el cual, selecciona a la variable microorganismos como variable independiente de influencia
significativa en el proceso de biodegradacin de hidrocarburos y excluye a las otras variables
independientes. Cuadro N 07.
CUADRO N 07
VARIABLES INTRODUCIDAS Y ELIMINADAS POR EL MTODO DE REGRESIN
MLTIPLE POR PASOS O STEPWISEa
Modelo
1
Variables introducidas
MICROORGANISMOS
Variables eliminadas
Mtodo
Das, humedad, pH, suelo 1, Por pasos (criterio: Probabilidad

suelo 2, suelo 3 y temperatura. de F para entrar <= 0.050,
probabilidad de F para salir >=
0.100)
a. Variable dependiente: HIDROCARBUROS

El modelo fue elegido por el programa SPSS, por no tener intercepto y tener un coeficiente de
determinacin o R cuadrado del 78% aproximadamente, es decir que el modelo se ajusta bien a los
datos por que el R cuadrado es alto. Cuadro N 08.
CUADRO N 08
RESUMEN DEL MODELO
Modelo
0.883 b
R Cuadrado R Cuadrado Error tpico de

Cambiar los estadsticos
corregida la estimacin Cambio en R Cambio en gl1 gl2 Sig del
cuadrado
F
cambio
en F
0.780
0.760
8071.7585
0.780
39.016 1
11 0.000
a. Para la regresin a travs del origen (el modelo sin interseccin), R cuadrado mide la
proporcin de la variabilidad en la variable dependiente acerca del origen explicado por la
regresin. No es posible comparar esto con R cuadrado para los modelos que incluyen una
interseccin.
b.
Variable predictora: MICROORGANISMOS.
de
petrleo
en
terrarios.
Escalante
Segn el cuadro N 09, el modelo es vlido porque se rechaza la hiptesis nula debido a que el
coeficiente de regresin es diferente de cero en forma significativa y el valor de F es elevado
(F = 39.016), adems la significancia es menor que 0.01, por tanto se afirma que la variable
microorganismos es importante en el proceso de biodegradacin de crudo en suelos.
CUADRO N 09
ANOVA
Modelo
1 Regresin
Residual
Total
Suma de
cuadrados
2.54E+09
7.17E+0.8
3.26E+09b
gl
1
11
12
Media
cuadrtica
2.54E+09
65153286
Sig
39.016
0.000 a
a. Variable predictora: MICROORGANISMOS

b. Esta suma total de cuadrados no se ha corregido para la constante porque la constante es
cero para la regresin a travs del origen.
En el cuadro N 10, la variable microorganismos participa en la explicacin de la variable

dependiente concentracin de hidrocarburos (HIDROCARBUROS) con un coeficiente estndar del
0.883 y una confiabilidad prxima al 100%. Segn el estadstico t se rechaza la hiptesis nula, es
decir existe una alta relacin entre la variable HIDROCARBUROS y la variable independiente
MICROORGANISMOS.
CUADRO N 10
COEFICIENTES DE REGRESIN
Modelo
1 MICROORGANISMOS
Coeficientes no
estandarizados
B
Error tpico
6.158E-04
0.000
Coeficientes
estandarizados
Beta
0.883
Sig
6.246 0.000
de
petrleo
en
terrarios.
Escalante
En el cuadro N 11 se observan las variables que han sido excluidas por no tener significancia
estadstica en el modelo.
CUADRO N 11
VARIABLES EXCLUIDAS
Modelo
1 DIAS
HUMEDAD
pH
SUELO 1
SUELO 2
SUELO 3
TEMPERATURA
Beta dentro
0.279
0.323 a
0.441 a
0.301 a
0.211 a
0.211 a
0.437 a
t
2.336
2.971
5.726
2.642
1.597
1.597
5.572
Sig
0.042
0.014
0.000
0.025
0.141
0.141
0.000
Correlacin parcial
0.594
0.685
0.875
0.641
0.451
0.451
0.870
a. Variable predictora en el modelo: MICROORGANISMOS

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Biodegradacin de crudo

Guzmn, Roco Miluska.

Porcentaje de cepas bacterianas.

Grfico N 01: Porcentaje y tipo de cepas bacterianas identificadas.

Bastones cortos gramnegativos

4.2 ACTIVIDAD EMULSIFICANTE DE LAS BACTERIAS DEGRADADORAS DE

Acinetobacter calcoaceticus lwoffi 1Bh-2

Pseudomonas aeruginosa 1B-3

Acinetobacter calcoaceticus anitratus 1B-5

Aeromonas salmonicida salmonicida 2B-1

Pseudomonas aeruginosa. 4Bh2

Acinetobacter calcoaceticus anitratus 4Bh3

Hafnia alvei 4Bh4

Hafnia alvei 4Bh7

Pseudomonas aeruginosa 4Bh12

Hafnia alvei 4Bh14

Pseudomonas aeruginosa 4K-1

Enterobacter agglomerans 4K-3

Enterobacter agglomerans 4K-4

Pseudomonas aeruginosa 5Bh-1

Pseudomonas acidovorans 5Bh-6

Enterobacter agglomerans 5K2

Bacillus Sp. 6Bh-1

Acinetobacter calcoaceticus lwoffi 6Bh-2

Enterobacter agglomerans 6Bh-3

Hafnia alvei 6Bh-4

Pseudomonas aeruginosa 6Bh-6

Pseudomonas cepacia 6K1

Pseudomonas aeruginosa 6K3

Pseudomonas aeruginosa 6K5

Pseudomonas aeruginosa 6K7

Pseudomonas aeruginosa 6K8

Pseudomonas cepacia 6K9

Pseudomonas pseudomallei 6B4

Pseudomonas aeruginosa 6B6

Serratia rubidae 6B9

4.3 ACTIVIDAD DEGRADATIVA DE LAS CEPAS BACTERIANAS.

Acinetobacter calcoaceticus lwoffi 1Bh-2

Pseudomonas aeruginosa 1B-3

Acinetobacter calcoaceticus anitratus 1 B-5

Aeromonas salmonicida salmonicida 2B-1

Pseudomonas aeruginosa 4Bh2

Acinetobacter calcoaceticus anitratus 4Bh3

Hafnia alvei 4Bh4

Hafnia alvei 4Bh7

Pseudomonas aeruginosa 4Bh12

Hafnia alvei 4Bh14

Pseudomonas aeruginosa 4K-1

Enterobacter agglomerans 4K-3

Enterobacter agglomerans 4K-4

Pseudomonas aeruginosa 5Bh-1

Pseudomonas acidovorans 5Bh-6

Enterobacter agglomerans 5K2

Bacillus Sp. 6Bh-1

Acinetobacter calcoaceticus lwoffi 6Bh-2

Enterobacter agglomerans 6Bh-3

Hafnia alvei 6Bh-4

Pseudomonas aeruginosa 6Bh-6

Pseudomonas cepacia 6K1

Pseudomonas aeruginosa 6K3

Pseudomonas aeruginosa 6K5

Pseudomonas aeruginosa 6K7

Pseudomonas aeruginosa 6K8

Pseudomonas cepacia 6K9