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INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA
4
4
7
8
INMUNIDAD INNATA
10
11
13
13
14
15
16
17
17
ANTGENOS Y ANTICUERPOS
18
Antgenos
Inmunoglobulinas
18
20
24
24
26
1.5.
27
1.6.
30
31
32
RECEPTORES DE LINFOCITOS T Y B
35
35
36
36
37
CITOQUINAS Y QUIMIOQUINAS
39
39
40
42
42
43
43
43
1.2.
1.3.
1.4.
1.7.
1.8.
[1]
1.9.
MADURACIN DE LINFOCITOS
45
Maduracin de linfocitos B
Tolerancia central de linfocitos B
Subtipos de linfocitos B
Maduracin de linfocitos T
Seleccin de linfocitos T en el timo
Tolerancia central de linfocitos T
Migracin de linfocitos T
Supresin bystander por linfocitos T regulatorios
46
48
48
49
51
52
54
54
56
56
60
62
65
1.12. TOLERANCIA
65
66
68
69
70
71
72
73
74
74
75
78
78
79
80
82
82
83
83
84
86
88
[2]
1.1.
INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA
ADAPTATIVA
CARACTERSTICAS
Especificidad
Diversidad de respuesta
Memoria inmunolgica
No.
No reactividad a lo propio
COMPONENTES
Barreras celulares y qumicas
Protenas de la sangre
Clulas
S.
Piel, epitelios mucosas, qumicos
antimicrobianos.
Complemento, otros.
Fagocitos (macrfagos, neutrfilos),
clulas NK.
[3]
Pasiva: cuando se inyectan o traspasan anticuerpos o linfocitos T desde animales inmunes a infectados. Tiene
especificidad, pero no memoria.
Activa: cuando se adquiere una infeccin o se vacuna con microbios atenuados o fragmentos del microbio. Tiene
especificidad y memoria.
CARACTERSTICAS
ESPECIFICIDAD
DIVERSIDAD DE RESPUESTA
MEMORIA INMUNOLGICA
EXPANSIN CLONAL
ESPECIALIZACIN
CONTRACCIN &
HOMEOSTASIS
NO-REACTIVIDAD A LO
PROPIO
SIGNIFICADO FUNCIONAL
Asegura que distintos antgenos produzcan respuestas especficas.
Permite al sistema inmune responder a una gran variedad de antgenos.
Lleva a una respuesta aumentada frente a exposiciones repetidas de un mismo
antgeno.
Aumenta el nmero de linfocitos antgeno-especfico para mantener el control sobre
los microorganismos.
Genera respuestas que son ptimas para la defensa contra distintos tipos de
microorganismos.
Permite al sistema inmune responder al encuentro de nuevos microorganismos.
Previene el dao al hospedero durante la respuesta a antgenos forneos.
Tipos de linfocitos:
o Linfocito B: neutralizan microbios, promueven la fagocitosis, activan el complemento.
o Linfocitos T helper (TH): activan macrfagos, linfocitos T y B y generan inflamacin.
o Linfocitos T citotxicos (TC): matan clulas infectadas.
o Linfocitos T reguladores (TR): suprimen la respuesta inmune (cuando no hay, se producen enfermedades
autoinmunes).
[5]
[6]
HEMATOPOYESIS
Fig. 8: Hematopoyesis
[7]
RGANOS LINFOIDES
[8]
1.2.
INMUNIDAD INNATA
La inmunidad innata es la respuesta inicial a microorganismos que previene, controla o elimina la infeccin del
hospedero causada por muchos patgenos.
Los mecanismos de la inmunidad innata eliminan clulas daadas e inician el proceso de reparacin tisular.
La inmunidad innata estimula la respuesta inmune adaptativa y puede influir en la naturaleza de esta respuesta
hacindola ptimamente efectiva para la eliminacin de distintos tipos de microorganismos.
Los principales tipos de respuesta del sistema inmune innato que protegen contra los microorganismos son la
inflamacin y la defensa antiviral.
COMPONENTES
FUNCIONES PRINCIPALES
BARRERAS
Epitelios
Previene la entrada de microorganismos.
Defensinas/catelicidina
Muerte de microorganismos.
Linfocitos intraepiteliales
Muerte de microorganismos.
CLULAS EFECTORAS CIRCULANTES
Neutrfilos
Fagocitosis temprana y muerte de microorganismos.
Fagocitosis eficiente y muerte de microorganismos.
Macrfagos
Secrecin de citoquinas que estimulan la inflamacin.
Lisis de clulas infectadas.
Clulas NK (Natural Killer) y otras ILCs
Activacin de macrfagos.
PROTENAS EFECTORAS CIRCULANTES
Muerte y opsonizacin de microorganismos.
Complemento
Activacin de leucocitos.
Opsonizacin de microorganismos.
Lectina de unin a manosa (collectin)
Activacin de complemento (ruta de lectina).
Opsonizacin de microorganismos.
Protena C-reactiva (pentraxina)
Activacin de complemento.
CITOQUINAS
TNF, IL-1, quimioquinas
Inflamacin.
IFN-, IFN-
Resistencia a infeccin viral.
IFN-
Activacin de macrfagos.
IL-12
Produccin de IFN- por clulas NK y linfocitos T.
IL-15
Proliferacin de clulas NK.
IL-10, TGF-
Control de inflamacin.
[9]
En la respuesta inmune innata, un mismo receptor puede reconocer diferentes microbios, ya que reconocen PAMPs
(Pathogen Associated Molecular Patterns) o DAMPs (Damage Associated Molecular Patterns).
Hay receptores de manosa, receptores scavenger, receptores N-formilmetionil, etc.
Ejemplos de PAMPs:
o cidos nucleicos (ssRNA, dsRNA, CpG).
o Protenas (pilina, flagelina).
o Lpidos de pared celular:
LPS (bacterias Gram-negativa).
cido lipoteicoico (bacterias Gram-positiva).
o Carbohidratos (manano, glucanos tipo dectina).
Ejemplos de DAMPs:
o Protenas inducidas por estrs (HSP [protenas de shock trmico]).
o Cristales (urato monosdico).
o Protenas nucleares (HMGB1).
[10]
Localizacin celular de receptores de reconocimiento de patrones moleculares del sistema inmune innato:
o Extracelular (TLR, lectina).
o Endosoma (TLR).
o Citosol (NLR, RLR).
Uno de los ms importantes son los Toll-like Receptors (TLR), que pueden localizarse:
o En la membrana (TLR-2, 4, 5).
o En endosomas (TLR 7, 8, 9).
[11]
[12]
BARRERAS EPITELIALES
[13]
RECLUTAMIENTO DE LEUCOCITOS
[14]
MACRFAGOS
[15]
[16]
INTERFERONES
1.3.
ANTGENOS Y ANTICUERPOS
ANTGENOS
Definicin: molcula de diversa naturaleza qumica, que el organismo no reconoce como sus constituyentes
normales y que son detectados y son capaces de activar linfocitos T o B.
o Pueden provenir del medio (microorganismos, plantas, alimentos, frmacos) o ser generados en el propio
organismo (metabolismo de drogas, transformacin neoplsica, enfermedades autoinmunes, etc.).
o Al sistema inmune no le importa el origen para mostrar una respuesta inmune. Solo importa si son
buenos o malos.
Los linfocitos T reconocen secuencias de aminocidos (8 10 aminocidos), mientras que los linfocitos B reconocen
conformaciones proteicas (grmenes enteros, por ejemplo).
denaturalizada).
Fig. 26: Determinante antignico (eptopo).
Conformacional (discontinuo): reconocido por
linfocitos B. Derivan del arreglo espacial de la cadena polipeptdica (estructura secundaria o
terciaria). Una protena denaturalizada, si es conformacional, puede dejar de ser reconocida por su
anticuerpo.
[18]
[19]
INMUNOGLOBULINAS
Caractersticas:
o 2 cadenas pesadas (H) y 2 cadenas livianas (L) idnticas.
o 2 sitios de unin a antgeno (FAB).
o Cada cadena tiene una regin variable (de unin a antgeno).
o Tienen una cola de la cadena pesada que le da su caracterstica biolgica (FC).
IgM, IgG, IgA en linfocitos B pueden reconocer al mismo antgeno, pero lo atacan de forma distinta
(aqu vara slo el FC).
o La regin bisagra permite que los 2 sitios de unin se acerquen o separen (punto de unin de cadenas
pesadas).
o La regin variable presenta 3 segmentos (regiones
hipervariables1) que son las que le dan la especificidad al
anticuerpo (3 en cadena pesada, 3 en cadena liviana).
Conceptos importantes:
o Afinidad: fuerza de interaccin entre ambas molculas,
donde la constante de disociacin (Kd) indica cunto tiempo
permanecen pegadas.
o Avidez: se refiere a la capacidad de interaccin, no
depende de la afinidad.
La alta y muy alta avidez es gracias a la regin
bisagra.
Sea dbil o alta la avidez, la afinidad puede ser la
misma.
[20]
Dnde estn?
o IgM
o IgA
o IgE
o IgG
o IgD
Circulando.
Principalmente en mucosas. Se traspasa por secrecin, puede dimerizar.
En niveles muy bajos, salvo en alergias. Induce degranulacin de clulas cebadas.
Altos niveles en suero, nica que traspasa la placenta.
Niveles ms bajos. No se sabe bien su funcin.
[21]
[22]
Receptores FC.
o Cada inmunoglobulina tiene un FC distinto que le
permite reconocerse por distintas clulas (como los
macrfagos y las clulas NK).
IgE est pegada al receptor, y en esta
condicin recibe interaccin y sealizacin
intracelular.
o Algunos estn asociados a activadores (ITAM, a
travs de quinasas) y otros a inhibidores (ITIM, a
travs de fosfatasas).
o Reconocen las distintas inmunoglobulinas.
o El receptor del linfocito T (TCR) se parece a un
fragmento FAB unido a la membrana.
No tiene mecanismo de sealizacin por s
mismo, slo puede unirse al antgeno-MHC.
Para sealizar, debe asociarse a distintos
elementos.
Presenta 2 cadenas, y , cada una de las
cuales presenta una regin variable y una
constante.
[23]
1.4.
Cada individuo es capaz de producir una gran cantidad de anticuerpos con distintas especificidades (1012 o ms).
Cmo se explica tanta diversidad?
o La diversidad est dada por la secuencia de aminocidos de la regin variable.
o Teora de la lnea germinal (Beadle y Tatum): un gen = una protena = un anticuerpo.
o Teora de la variacin somtica (Dreyer y Bennet): el nmero de genes de anticuerpos es pequeo; pero,
por mutaciones generan todos los anticuerpos del organismo.
Tonegawa en 1987 demostr que el genoma de los linfocitos B es diferente que el genoma original embrionario.
o Cada linfocito tiene receptores especficos para un antgeno, los que se definen antes del encuentro con el
antgeno (por lo tanto, al azar).
o El encuentro con el antgeno gatilla la proliferacin y diferenciacin (expansin clonal).
o As, el desarrollo del repertorio de receptores es antgeno-independiente.
Los genes para las cadenas livianas ( y ) y pesadas (9 tipos) estn localizados en distintos cromosomas, formando
en cada caso familias multignicas.
Cada una de estas familias multignicas contiene una serie de secuencias codificantes llamadas segmentos gnicos,
que son de distinto tipo.
o La familia de H posee segmentos de tipo V, D, J y C (recombinacin VDJ2).
o La familia de y tienen segmentos de tipo V, J y C (recombinacin VJ).
[24]
Recombinacin (V(D)J): se toma un segmento de cada tipo mediante recombinaciones somticas al azar, que crea
un DNA diferente del original.
o Para que ocurra la recombinacin despus de cada segmento V y antes de cada J, existen secuencias
seales, las que son reconocidas por enzimas de restriccin (RAG-1 y RAG-2).
o Estas seales consisten en heptmeros y nonmeros, por lo que al ser cortadas, los fragmentos que quedan
no encajan exactamente entre s para ser ligados.
o Es por esto que existe una enzima, TdT3, que agrega nucletidos al azar (punto de mayor recombinacin)
para completar lo que falta.
Es un proceso muy ineficiente porque se pueden insertar codones de trmino y no se genera el
anticuerpo (pocos llegan a trmino).
No obstante, este es el precio de la recombinacin.
o Es este mecanismo el que genera hipervariabilidad en la 3 seccin de hipervariabilidad (las otras dos
secciones hipervariables vienen codificadas en el DNA).
[25]
Fases de la respuesta inmune humoral: hay 3 mecanismos del linfocito B para variar luego de la mdula sea.
o Inmunoglobulina de membrana o secretada:
Cuando el linfocito B est maduro, produce inmunoglobulinas de membrana (IgM, IgD).
Cuando se activa, ocurre un cambio en el isotipo de la inmunoglobulina hacia el tipo secretor (como
IgG).
Que una inmunoglobulina de un mismo tipo sea de membrana o secretada depende de un splicing
alternativo del mRNA, que a su vez depende del estado de actividad del linfocito B.
Cambio de isotipo:
o Se produce por unin de linfocito TH con linfocito B mediante CD40s.
o El linfocito T le entrega citoquinas que activan enzimas (AID). De esta manera, vuelve a cortarse el
DNA slo en la regin constante (no es splicing, ya que el corte es a nivel de DNA, no RNA).
o El isotipo al que se cambie depender de las citoquinas del ambiente.
Maduracin por afinidad: mutaciones somticas.
o El linfocito activado migra a un ndulo linftico donde sufre de mutaciones somticas que buscarn
aumentar la afinidad por el antgeno (mutaciones somticas en la regin variable).
o Algunos lo lograrn y otros no. Estos ltimos morirn cuando sean seleccionados por las clulas
foliculares
dendrticas (ocurre
despus
de
la
expansin clonal).
Es muy similar y ms simple que la generacin de diversidad de BCR, ocurre en el timo y actan las mismas enzimas,
produciendo los mismos cortes.
No obstante, TCR slo puede sufrir modificaciones y mutaciones (al azar) en el proceso de corte y unin del DNA. El
linfocito B puede sufrir modificaciones y mutaciones posteriormente (cambio de isotipo, maduracin por afinidad,
cambio de forma de membrana a secretada).
En resumen, la variabilidad de los BCR depende de:
1) Recombinacin VDJ.
2) Cambio de isotipo.
3) Inmunoglobulina de membrana o secretada.
4) Mutaciones somticas.
La variabilidad en los TCR se produce solo por:
1) Recombinacin VDJ, que ocurre al azar y permite generar aproximadamente 1015 TCRs distintos.
[26]
1.5.
Los genes que codifican para las molculas del MHC se encuentran en el cromosoma 6.
1) Un segmento de este cromosoma tiene una regin para el MHC-II.
2) Otra regin para el MHC-I.
3) Entre medio de ellas, una regin que codifica protenas que participan en la sntesis de MHC-I y MHC-II
(MHC-III).
Fig. 42: Organizacin gentica de los genes que codifican para el complejo mayor de
histocompatibilidad
Estos genes que codifican para molculas de MHC tienen 3 caractersticas bsicas:
1) Son polignicos: en un individuo, existen distintos genes que codifican para distintas molculas del MHC.
2) El MHC se hereda del padre y la madre (a diferencia de BCR y TCR).
3) Son polimrficos: en la poblacin existen distintas variantes de un mismo gen (haplotipo).
4) Son codominantes: todos los genes son expresados al mismo tiempo, por lo que un individuo puede tener
hasta 14 distintas molculas de MHC.
[27]
[28]
Dentro del pptido antgeno hay aminocidos que slo sirven para
anclarse al MHC, los cuales son muy conservados dados distintos
antgenos.
Unin de pptidos:
o Cada molcula de MHC tiene regiones de anclaje y regiones
que lo deja libre (lo dejan expuesto).
Ejemplo: pptidos que se asocian a 1/3 del sitio del
antgeno, quedando el resto libre para ser identificado
por el linfocito T.
o Pptidos presentados en el MHC presentan aminocidos
conservados necesarios para su presentacin (varias MHC
iguales pueden presentar antgenos distintos).
o El antgeno es el que entrega la variabilidad, no el MHC.
Desequilibrio de unin (linkage desequilibrium): hay algunos alelos de MHC que tienden a heredarse juntos.
o Asociacin no aleatoria de alelos en dos o ms loci.
o Por ejemplo, la frecuencia observada de HLA-A1 es de 13,8% y la de HLA-B8 es de 9%, por lo que la
frecuencia esperada para ambos juntos HLA-A1-B8 es de 1,24%, sin embargo, la frecuencia observada es 6%.
o Esto se genera porque los genes del MHC se encuentran muy cerca en el cromosoma 6, haciendo ms
probable su expresin.
Para determinar la compatibilidad en trasplantes, se comparan los loci de los 3 tipos de MHC que ms influyen: HLADR, B y A. Dado el gran polimorfismo del sistema HLA, es muy poco probable encontrar una compatibilidad 6 de 6.
[29]
1.6.
4
5
[30]
Macrfagos6:
o Captan los antgenos por fagocitosis.
o Son clulas vida larga (meses e incluso
aos).
o Activan linfocitos T efectores.
o Abundante RER y muchas mitocondrias.
Los monocitos se encuentran circulando, mientras que los macrfagos estn en los tejidos.
[31]
Por MHC-I:
o Cuando se presenta un antgeno en el citosol (protena cualquiera,
viral en caso de infeccin o incluso tumorales), es ubiquitinado por
una ubiquitin-ligasa y destinado a proteosomas, en donde es
fragmentado y degradado.
o Estos pptidos generados son enviados al retculo endoplasmtico
donde son translocados gracias a TAP y luego son ensamblados
junto al MHC-I, que ser destinado a la superficie.
Transportador TAP: son codificados por la regin MHC-II
de los genes MHC.
Hay dos tipos (TAP-1 y TAP-2) y tienen dominios
con actividad ATPasa.
Reconocen pptidos de entre 7 y 11 aminocidos y
los translocan hacia el RER.
o En la membrana del RER, la cadena del MHC-I se encuentra
estabilizada y unida a calnexina hasta que llega la cadena 2
microglobulina. Cuando sucede esto, la calnexina suelta el MHC y
ste se une a un complejo de chaperonas que lo estabilizan y lo
unen a TAP (va tapasina).
o Finalmente, cuando TAP transloca un pptido, ste se une al MHC-I
y as termina de plegarse, siendo as llevada hacia la membrana
plasmtica.
[32]
Por MHC-II:
o Cuando una APC endocita un patgeno (es decir, el antgeno
viene del exterior), es transportado mediante vesculas
endocticas a endosomas (lisosomas) donde son degradados por
catepsinas.
o Mientras tanto, en el RER se sintetiza el MHC-II, el cual es
estabilizado por protenas chaperonas7 (cadena invariante, li).
As sale del RER hacia el Golgi y de ah hacia el endosoma en
donde se fragment el antgeno.
o Una vez en el endosoma, debido al pH ms cido y a la catepsina
S, las protenas chaperonas (cadena invariante) son degradadas,
quedando slo un fragmento (CLIP8) en el sitio de unin al
antgeno.
El propsito de CLIP es prevenir la unin de fragmentos
de pptidos propios previo a la unin con el MHC-II en el
Fig. 50: Va de procesamiento y
endosoma (regulacin de unin de pptidos a MHC-II).
9
presentacin de antgeno por MHC-II.
o Luego, otra molcula, HLA-DM , remueve el CLIP de su lugar y
permite as la unin del antgeno al MHC-II.
o Finalmente, el MHC-II con antgeno es exportado a la superficie celular.
Todas las MHC son inestables sin un pptido asociado (tanto en la membrana como dentro de la clula). Por lo que nunca habr un
MHC sin pptido en la membrana celular. Cuando se les asocia un pptido, se estabilizan y pueden permanecer varias semanas en la
membrana.
8
CLIP: Class II-associated invariant chain (li) Peptide.
9
HLA-DM = MHC-DM.
[33]
[34]
1.7.
RECEPTORES DE LINFOCITOS T Y B
[35]
Todos los linfocitos T maduros expresan junto con su receptor (restringido por el MHC) otra molcula que puede ser
CD4 o CD8. Estos son los co-receptores del linfocito T y se unen a una porcin invariable del MCH. Determinan si la
activacin del linfocito ser de ayuda (CD4) o citotxica (CD8).
10
11
[36]
SINAPSIS INMUNOLGICA
La sinapsis inmunolgica:
o Consiste en:
Co-receptores.
Co-estimuladores.
Molculas de adhesin.
Receptores de antgeno.
o No es pasajera, debe ser estable (duradera).
o La afinidad de TCR por su antgeno es muy baja. Pero:
La sinapsis inmunolgica ayuda a aumentar
la avidez (muchas molculas interactuando
simultneamente).
Presencia de receptores co-estimuladores.
o Otorga seales:
Seal 1: reconocimiento del antgeno.
Seal 212: receptor co-estimulador (ejemplo:
CD28, que reconoce a sus ligandos B7-1 y B72 (= CD80/CD86).
Ambas seales juntas generan la activacin
de factores de transcripcin especficos
(NFAT, NF-B, AP-1).
Puede darse una seal 3 de carcter
moduladora. sta es dada por las citoquinas.
o CD80/86 CD28
o CD80/86 CTLA-4
modulan la
La seal 2 aparece frente a seal de peligro. Adems, el linfocito B tambin requiere de esta seal (co-estimuladores), pero son
otros y menos claros.
[37]
Ipilimumab:
o Anticuerpo que bloquea la seal de CTLA-4 (anticuerpo anti-CTLA-4), por lo que no hay freno del linfocito T
efector.
o Puede usarse como tratamiento de melanomas: activa la respuesta inmune contra el tumor.
o Tiene un riesgo: puede causar exacerbacin de la respuesta inmune (toxicidad).
Abatacept (Orencia):
o Protena
recombinante
humana
(quimrica) que incluye un dominio
extracelular de CTLA-4 humana y un
fragmento de dominio Fc modificado
de IgG humano.
o Se une a CD80/86 (evita que se una a
CD28) e inhibe la activacin completa
de clulas T.
o Permite evitar el rechazo contra
trasplantes, al disminuir la respuesta
inmune.
o Adems, al recibir el linfocito T la seal
1, pero no la seal 2, se aumenta la
tolerancia al trasplante.
Fig. 61: Abatacept.
[38]
1.8.
CITOQUINAS Y QUIMIOQUINAS
13
Hemopoiesis o hematopoyesis (del griego , --, 'sangre' y , 'creacin'): generacin de clulas sanguneas.
[40]
Los macrfagos tambin secretan distintas citoquinas en respuesta a productos bacterianos (IL-1, TNF-, IL-6, IL-8,
IL-12).
[41]
REGULACIN DE CITOQUINAS
RECEPTORES DE CITOQUINAS
Todos los receptores son protenas de transmembrana. La mayora son heterodmeros, donde una cadena
(extracelular) reconoce la citoquina y la otra (intracelular) transduce la seal.
o La sealizacin se activa por el agrupamiento de la regin intracitoplasmtica, inducida por el ligando.
Clases de receptores:
o Superfamilia inmunoglobulina.
Ligandos: IL-1, M-CSF, c-kit.
o Clase 1 (hematopoytica).
Ligandos: IL-2 7, IL-9, IL-11 13, IL-14, etc.
o Clase 2 (interfern).
Ligandos: IFN-//, IL-10.
o TNF.
Ligandos: TNF-, TNF-, CD40, NGF, Fas.
Acciones biolgicas del TNF:
En bajas concentraciones: induce inflamacin aguda (acta sobre leucocitos y endotelio).
En concentraciones moderadas: media efectos sistmicos de la inflamacin.
En altas concentraciones: causa efectos patolgicos como shock sptico.
o Receptores de quimioquinas.
Ligandos: IL-8, RANTES, MIP-1, PF4, MCAF, NAP-2.
o Superfamilia de receptores de IL-2 (subunidad comn).
Linfocitos TH1:
o IFN-:
o IL-2:
Linfocitos TH2:
o IL-4 e IL-5:
Inducen produccin de IgE.
Inducen diferenciacin y activacin de eosinfilos.
Estimulan la sntesis de IgG que no activan el complemento.
o IL-4:
Suprimen la expansin de TH1.
QUIMIOQUINAS
Importantes en migracin. Sus receptores funcionan de forma distinta a la de las dems citoquinas.
No necesitan llegar al ncleo, actan mediante protenas G modificando el esqueleto de actina para la migracin
celular hacia sitios donde haya ms citoquinas.
Son cruciales en la salida de linfocitos hacia un foco inflamatorio determinado (extravasacin).
Se pueden crear inhibidores de citoquinas mediante la produccin de anticuerpos monoclonales contra una
determinada citoquina. De esta manera, se pueden neutralizar respuestas inflamatorias.
Interleuquina 2 (IL-2).
o Factor de crecimiento de los linfocitos T ms importante (responsable de la expansin clonal).
o Proliferacin de clulas especficas para el antgeno.
o Accin sobre otras clulas (linfocitos B y clulas NK).
o Apoptosis de linfocitos T activados por antgeno, aparentemente en estimulacin crnica.
Interleuquina 4 (IL-4).
o Sobre los linfocitos B: cambio de isotipo de la IgE y algunas IgG (la cual no activa el complemento).
o Principal estmulo para la generacin de linfocitos TH2 (desarrollo y expansin).
o Inhibe activacin de macrfagos.
Otras interleuquinas:
o IL-21: potenciales acciones en linfocitos T, NK y B.
o IL-7: desarrollo en linfocito T, desarrollo de linfocito B.
o IL-9: produccin de mucus, proliferacin de clulas cebadas.
o IL-15: desarrollo de clulas NK, homeostasis de linfocitos T, CD8+ y de memoria.
[43]
[44]
1.9.
MADURACIN DE LINFOCITOS
Stem cell.
Common lymphoid progenitor (CLP).
o Pro-B.
Linfocitos B foliculares (90%).
Linfocitos B-1.
Linfocitos B de la zona marginal14 (poseen
receptor incompleto).
o Precursor de clula T e ILC.
ILC (clulas NK, por ejemplo).
Pro-T.
Linfocito T (95%).
o T CD4+ (helper).
o T CD8+ (citotxicos).
Linfocito T (5%).
Tanto linfocitos B-1 como los de la zona marginal responden a antgenos timo-independientes (no proteicos).
[45]
MADURACIN DE LINFOCITOS B
La fase de maduracin antgeno-independiente (Stem cell Linfocito B inmaduro) ocurre en la mdula sea.
o Stem cell Pro-B: slo hay proliferacin.
o Pro-B Pre-B: ocurre recombinacin15 (VDJ) de la cadena pesada (mRNA IgM) de las inmunoglobulinas
(VDJ). Aparece as el pre-receptor16 del linfocito B (cadena pesada + cadena constante pre-B).
o Pre-B Linfocito B inmaduro: se recombinan las cadenas livianas (VJ).
Aparece entonces el BCR (IgM).
Ocurre seleccin negativa: en este caso, la clula tiene dos vas.
Delecin (muerte) celular.
Edicin de receptor: acta como va de escape de la muerte.
Tambin hay proliferacin.
En las distintas etapas de maduracin se expresan diferencialmente distintas molculas en la superficie del linfocito.
15
En las etapas donde hay recombinacin (rearreglo gnico: donde se elimina todo lo que no se ocupa) se expresan los genes RAG.
Pre-receptor: forma previa del receptor final en donde hay un sustituto de la cadena liviana (cadena liviana subrogante). sta est
unida transitoriamente a la cadena pesada a travs de enlaces covalentes (disulfuro). La mayor diferencia con las verdaderas
cadenas livianas es que no son variables, sino que para todos los pre-receptores son idnticas.
17
El proceso de maduracin de linfocitos B finaliza en el bazo (aunque no se ha encontrado un homlogo de AIRE all). Mientras que
la activacin de linfocitos B (primer contacto con antgeno externo) ocurre en un rgano linftico secundario.
16
[46]
18
[47]
SUBTIPOS DE LINFOCITOS B
21
22
[48]
MADURACIN DE LINFOCITOS T
1) Stem cell Pro-T: ocurre proliferacin y migracin desde la mdula sea hacia el timo.
2) Pro-T Pre-T: se recombina la cadena (VDJ). Aparece el pre-TCR con una cadena y una pre-T23.
3) Pre-T (Doble Negativo) Doble Positivo: se recombina la cadena (VJ). Aparece el TCR en la membrana. Se
expresan simultneamente los co-receptores CD4 y CD8.
4) Doble Positivo Simple Positivo (Linfocito T inmaduro): el linfocito se compromete a CD4 o CD8 debido a
seleccin positiva y negativa (hay respuesta a antgeno).
5) Simple Positivo Linfocito T virgen (maduro): el linfocito sale del timo listo para ser activado.
Acta como la cadena subrogante (como la cadena liviana subrogante del pre-receptor en los linfocitos B). Es idntica a la cadena
, pero es constante.
[49]
Recombinacin
o Cadena Cadena pesada (H)
VDJ (cromosoma 7)
o Cadena Cadena liviana (L)
VJ (cromosoma 14)
Fig. 80: Dominios en las
protenas Ig y TCR.
Fig. 82: Expresin de CD4 y CD8 en timocitos (linfocitos en proceso de maduracin a linfocitos T). A la izquierda se
ve un grfico de citometra de flujo. De este grfico y esquema podemos decir dos cosas importantes:
1. Se produce ms CD4+ que CD8+ porque los linfocitos T de ayuda son ms necesarios.
2. El paso de Doble (+) a Simple (+) no es directo, hay un estado intermedio (linfocito CD4+/CD8lo).
[50]
Es mucho ms crucial seleccionar bien a los linfocitos T que a los B. Si sale un linfocito B autorreactivo y no est su
contraparte T helper, la respuesta que se monte ser muy dbil. En cambio, si ocurre lo opuesto, un linfocito T
helper autorreactivo podr activar a muchas otras clulas inmunes que podrn atacar al cuerpo.
Seleccin Positiva: las clulas epiteliales de la corteza del timo (cTEC) se encargan de presentar antgenos a los
linfocitos T doble (+) por MHC-I y MHC-II. Juzgan su afinidad:
o Si el linfocito T reconoce un MHC con muy baja afinidad o no reconoce, ste es enviado a apoptosis.
o Si el linfocito T reconoce con baja/media (moderada) afinidad a un MHC-I o MHC-II, ste pasa la seleccin
positiva y entonces se compromete a CD4 o CD8 (pasa a ser un Simple Positivo).
Seleccin Negativa: es muy estricta. Las mTEC (clulas epitelio-reticulares medulares) presentan antgenos propios a
los linfocitos T mediante MHC-I y MHC-II.
o Si el linfocito T reconoce un antgeno propio con alta afinidad, ste muere por apoptosis.
o Si el linfocito T reconoce el antgeno propio con baja afinidad, ste se transforma en un linfocito T maduro.
o Si el linfocito T tiene una afinidad subumbral (intermedia) por un antgeno propio, ste linfocito se
transforma en un linfocito T regulatorio.
[51]
24
CD25 es lo mismo que cadena del receptor de IL-2. La mayora de los linfocitos T regulatorios son CD4 , pero se ha descubierto
+
recientemente una poblacin que son CD8 .
[52]
Las cTEC (clulas epitelio-reticulares corticales) generan los complejos [Antgeno25-MHC] a travs de rutas nicas.
Presentan los mismo antgenos a travs de dos vas:
o Va clsica de presentacin: por MHC-I.
La protena endgena es destruida por proteosoma.
Los pptidos endgenos generados son introducidos al retculo endoplasmtico (a travs del
complejo TAP26, compuesto por TAP1 y TAP2).
En el retculo endoplasmtico los pptidos son asociados a la molcula de MHC-I27.
o Por MHC-II.
Generalmente asociamos MHC-II con antgenos externos28, no obstante, las cTEC tienen poca
actividad endoctica (a diferencia de los macrfagos o las clulas dendrticas), lo cual significa un
problema para poder mostrar antgenos a travs de MHC-II.
Es por ello que desarrolla una estructura llamada macroautofagosoma, el cual envuelve a la
protena endgena.
Lleva la protena a un endosoma donde habrn enzimas (catepsina) que la convertirn en pptidos
que podrn ser asociados a MHC-II y de esa manera, presentados.
Fig. 87: Las clulas epiteliales corticales del timo generan complejos pptidoMHC a travs de rutas nicas.
25
La variabilidad antignica presentada es muy baja, son solo algunos antgenos tmicos.
TAP: Transporter associated with antigen processing (tipo de transportador ABC).
27
En este proceso de presentar antgenos, lo fundamental es el reconocimiento de MHC por parte de los linfocitos. El pptido sirve
principalmente para estabilizar la molcula de MHC (ms que para el reconocimiento).
28
Vase captulo sobre Complejo Mayor de Histocompatibilidad (1.5)
26
[53]
Fig. 88: Expresin gnica promiscua (distintos tejidos son representados en las mTECs).
29
Clulas que mueren por apoptosis, que realizan mecanismo dominante (mTEC) son fagocitadas por clulas dendrticas que luego
podrn expresar los antgenos propios (mecanismo recesivo).
[54]
MIGRACIN DE LINFOCITOS T
30
31
[55]
Reconocimiento de antgeno: las clulas dendrticas (DCs) presentan antgenos a linfocitos T vrgenes.
Activacin de linfocitos: los linfocitos T vrgenes se activan y expresan IL-2 e IL-2R (receptor de IL-2).
Expansin clonal: gracias a la IL-2, los linfocitos T activados se multiplican.
Diferenciacin: los linfocitos se diferencian a clulas efectoras y de memoria.
Funciones efectoras.
[56]
32
[57]
Un linfocito T efector mediante CD40L puede activar una APC sin que ella haya sido activada previamente por
PAMPs, inducindola as a expresar coestimuladores (B7) y citoquinas que ahora podrn activar otros linfocitos
vrgenes.
o Esto es importante para reclutar APCs y as amplificar la respuesta.
La cadena del receptor de IL-2 (CD25) aumenta su afinidad por IL-2, por lo que genera una mayor proliferacin de linfocitos.
[58]
La interaccin entre TCR y MHC-I es dbil, por lo que se necesitan molculas estabilizadoras y de adhesin (sinapsis
inmunolgica).
o Juega un papel importante LFA-134 en el linfocito T (integrina L2) para la adhesin celular.
o Muchas clulas tumorales presentan PD-L1 y PD-L235 para disminuir la respuesta inmune contra ellas.
34
35
[59]
Secuencias de activacin:
o La PLC activada genera IP3 que aumenta
la [Ca2+] citoslico. El Ca2+ se une a la
calmodulina y ste luego se une y activa
a la calcineurina (una fosfatasa), la cual
activa finalmente el factor de
transcripcin NFAT39.
La calcineurina remueve un
fosfato de NFAT, lo que permite
su activacin y migracin hacia el
ncleo.
o La
PLC
activada
genera
DAG
(diacilglicerol), el cual activa la PKC
(fosfokinasa C). La PKC activa la IB
kinasa, que fosforila la IB (protena
inhibitoria unida a NF-B) haciendo que
se libere. De esta manera se activa el
factor de transcripcin NF-B40.
o A la protena LAT se le unen otras
protenas mediante adaptadores, las
cuales activan la va de RAS:
RAS-GDP RAS-GTP (mediante
SOS).
MEK-1 ERK-1.
Finalmente activar el factor de
transcripcin AP-141.
o Estos 3 factores de transcripcin (NFAT,
NF-B, AP-1) se unirn a distintas
regiones reguladoras en el DNA y
activarn la transcripcin de IL-2.
36
Lck: lymphocyte-specific protein tyrosine kinase. Miembro de la familia de las Src kinasas (poseen un dominio SH2).
ZAP-70: Zeta-chain-associated protein kinase 70. Miembro de la familia de las Syk kinasas (poseen dos dominios SH2).
38
LAT: Linker for activacin of T cells.
39
NFAT: Nuclear factor of activated T-cells.
40
NF-B: Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells.
41
AP-1: Activator protein 1. Formado por dos protenas: fos y jun.
37
[60]
En la finalizacin de la respuesta participa tambin la ubiquitn-ligasa Cbl-b, que monoubiquitina la protena ZAP-70
y regiones del CD3 del TCR, envindolas a degradacin.
42
[61]
Diferenciacin de linfocito de acuerdo a las citoquinas secretadas por la clula dendrtica activadora:
o IL-12
Linfocito TH1.
o IL-4
Linfocito TH2.
o TGF- e IL-6
Linfocito TH1745.
45
Los linfocitos TH17 son de reciente descubrimiento y se asocian a patologas. Sintetizan IL-17, la cual es pro-inflamatoria.
[62]
[64]
46
Cambio de isotipo, maduracin por afinidad y creacin de clulas de memoria son realizados solo si hay linfocito T de ayuda
(antgeno proteico).
[65]
[66]
[67]
Gracias a la expresin de CCR7, el linfocito B pudo migrar e interactuar ms fcilmente con linfocitos T helper (TH).
o Este linfocito T helper fue activado a clula efectora previamente por su interaccin con clulas dendrticas.
o La interaccin de linfocito T helper con linfocito B se puede generar en dos sitios:
Foco extrafolicular: genera clulas plasmticas de vida corta.
Reaccin del centro germinal: interaccin entre linfocitos B, linfocito T de ayuda folicular (que migr
al folculo) y clula dendrtica folicular. Esta reaccin genera clulas plasmticas de vida larga y
clulas de memoria.
Fig. 128: Secuencia de eventos de la respuesta humoral a antgenos proteicos (dependientes de linfocitos T).
[69]
Por qu migran?
o Los linfocitos B aumentan la expresin de CCR7 para quimioquinas CCL19 y CCL21.
o Los linfocitos T disminuye su expresin de CCR7 y aumentan la expresin de CXCR5.
o As, ocurre un encuentro en zona cercana al folculo: el linfocito B presenta el antgeno al linfocito T para
interactuar.
[70]
CAMBIO DE ISOTIPO
El cambio de isotipo consiste en una recombinacin de DNA. Se reordena la regin constante, no la variable.
o Regiones cercanas de VDJ: C y C.
o Definicin de isotipos distintos.
Se elimina por rearreglo un segmento del DNA, dejando ms cerca de VDJ el segmento de un isotipo
distinto. Es un proceso irreversible.
La interaccin del linfocito T helper con el linfocito B produce la secrecin de citoquinas que, dependiendo del
subtipo de TH, generar determinado cambio de isotipos:
o TH1 IFN-. Produce IgG (opsonizacin y activacin del complemento e inmunidad neonatal).
o TH2 IL-4: Produce IgE (inmunidad contra parsitos y alergias).
o Cuando el linfocito B es activado por un antgeno timo-independiente, secreta IgM (activacin del
complemento).
foliculares.
Estas clulas le muestran al linfocito B el mismo
antgeno que lo activ.
Si reconoce con alta afinidad: seales de
sobrevida.
Si reconoce con baja afinidad: no recibe
seales de sobrevida y por lo tanto muere.
Las clulas dendrticas foliculares pueden mantener
el antgeno unido largo tiempo en sus prolongaciones
o en icosomas (inmunocomplejos presentes en forma
de pequeos cuerpos de inclusin en las clulas
foliculares dendrticas).
Fig. 136: Mutaciones somticas en las regiones
variables de los genes de Ig.
[72]
El linfocito B tiene receptores para fragmentos FC de inmunoglobulinas, los cuales tienen fosfatasas asociadas en su
porcin intracelular.
As, cuando se secretan muchos anticuerpos, se promueve la inhibicin de la respuesta.
[73]
1.12. TOLERANCIA
CARACTERSTICAS GENERALES DE LA TOLERANCIA INMUNOLGICA
Los individuos normales son tolerantes a los antgenos propios porque los linfocitos autorreactivos son eliminados,
silenciados o su especificidad es cambiada.
o No obstante, es importante destacar que cualquier persona sana tiene linfocitos autorreactivos en
circulacin, es algo normal.
o Pero este individuo no tiene una enfermedad autoinmune porque funciona la tolerancia perifrica.
La tolerancia es el resultado del reconocimiento de antgenos por linfocitos especficos.
La tolerancia a lo propio puede ser inducida en linfocitos autorreactivos inmaduros en los rganos generativos
(tolerancia central) o en linfocitos maduros en la periferia (tolerancia perifrica).
o La tolerancia central se produce durante la
maduracin de los linfocitos en los rganos
linfoides generativos, donde todos los
linfocitos en desarrollo pasan a travs de
una etapa en la que en el encuentro con
antgeno puede llevar a:
La muerte celular.
Al
reemplazo
del
receptor
autorreactivo por uno nuevo
(edicin del receptor, exclusivo de
linfocitos B).
Desarrollo
de
linfocitos
T
o
TOLERANCIA DE LINFOCITOS T
Fig. 142: Tolerancia central de linfocitos T y funcin de AIRE en la delecin de linfocitos T en el timo.
[76]
47
Fas-L = CD95L.
[77]
TOLERANCIA DE LINFOCITO B
FACTOR
Persistencia
Portal de entrada, localizacin
Presencia de adjuvantes
Propiedades de las clulas
presentadoras de antgenos (APC)
[78]
Sitios inmunoprivilegiados:
o Son sitios en los cuales pueden
entrar
linfocitos,
pero
hay
mecanismos que inducen tolerancia.
o En estos rganos, los procesos
inflamatorios seran deletreos.
o Son:
Cerebro.
Ojo.
Testculo.
tero (feto).
48
IDO: indoleamine-2,3-dioxygenase.
[79]
Inmunidad: respuesta fisiolgica antgeno-especfica, mediada por receptores, que confiere proteccin contra
patgenos, sustancias txicas o tumores.
Tolerancia:
o Distinto a inmunosupresin, ya que es antgeno-especfica.
o Ausencia de respuesta inmune contra un antgeno en particular, debido ya sea a la falta de receptores que
reconocen ese antgeno, o bien a la falta de inmunogenicidad del antgeno.
o La tolerancia a antgenos es ventajosa en ciertos casos:
Autoantgenos.
Flora normal: no genera respuesta inmune gracias a su localizacin especfica. Las bacterias generan
un ligando para el PPR (retiene a NF-B en citoplasma, por lo que no permite su actividad nuclear),
que es expresado en las clulas dendrticas, volvindolas tolerantes de forma especfica en un sitio
determinado.
Alrgenos.
[80]
ENFERMEDAD AUTOINMUNE
Diabetes mellitus
Lupus eritematoso
Miastenia gravis
Esclerosis mltiple
Tiroiditis de Hashimoto
Artritis reumatoide
DESCRIPCIN
Destruccin de clulas del islote de Langerhans.
Inflamacin sistmica.
Anticuerpos anti-DNA.
Blanco: receptores de acetilcolina (son internalizados) Destruccin.
Anticuerpos actan sobre receptores (actan como antagonistas).
Tratamiento: anti-acetilcolina-esterasa.
Blanco: vaina de mielina.
Conduccin interrumpida del impulso nervioso.
No hay tratamiento.
Paciente con permeabilidad en la barrera hemato-enceflica, pudiendo ingresar
anticuerpos.
Blanco: coloide (hay destruccin de la glndula).
Tratamiento: eutirox (reemplazo hormonal).
Blanco: articulaciones, cartlago.
Existe tratamiento exitoso, pero inespecfico.
[81]
[82]
INTERACCIN LEUCOCITO-ENDOTELIO
[83]
Ligando
Sialyl Lewis X.
Selectina-E
Sialyl Lewis X.
PNAd49 Ganglios
linfticos.
MadCAM-150 MALT.
Ligando
Distribucin
Familia de las
integrinas
LFA-1
(L2)
VLA-4
(41)
ICAM-1 (CD54).
ICAM-2 (CD102).
ICAM-1 (CD54).
ICAM-2 (CD102).
VCAM-1 (CD106).
Fibronectina.
LPAM-1
(47)
VCAM-1 (CD106).
MadCAM-1.
Mac-1
50
Neutrfilos, monocitos y
clulas T (efectoras y
memoria).
Neutrfilos, monocitos y
clulas T (efectoras y
memoria).
Selectina-P
49
Selectina-L
Distribucin
[84]
Quimioquinas:
o Secretadas en el tejido y transportadas a travs
de l.
o Tambin pueden ser secretadas por el
endotelio.
o No se liberan libremente, sino que estn
ancladas al glicoclix del endotelio (esto es
para evitar que la seal se diluya).
[85]
Si el linfocito no se activa en el ganglio, disminuye la expresin de CD69, evitando que el linfocito permanezca en el
ganglio.
o Aumenta la expresin del receptor de esfingosina-1-fosfato (SP1R) cuando no se activan o cuando se
activan y deben migrar.
o La SP1 tiene alta expresin en la sangre y en la circulacin linftica.
[88]
Si tengo dos infecciones simultneas en dos sitios distintos, quin entrega especificidad a la migracin?
o Al intestino delgado:
Integrina 47 en clula plasmtica (IgA) y linfocito T de ayuda Reconoce MadCAM en endotelio.
Citoquina CCL25 (es secretada por el intestino delgado) es capaz de interactuar con receptor CCR9
en clulas plasmticas o linfocitos T.
o A la piel:
Integrina 41 en linfocito T efector Reconoce VCAM-1.
Linfocito T efector expresa dos receptores de quimioquinas: CCR4 y CCR10, as como un ligando para
la E-selectina.
Fig. 164: El trfico de clulas linfoides es mediado por molculas de adhesin y receptores de quimioquinas
especficos.
o
Cmo adquiere el linfocito estas caractersticas que le permiten reconocer el conjunto que define la especificidad?
o Las clulas dendrticas inducen la expresin selectiva de receptores de homing tejido-especficos
(imprinting) en los linfocitos T en los ganglios linfticos.
o Los linfocitos T adquieren molculas necesarias para migrar al sitio desde donde proviene la clula
dendrtica: esto porque la clula dendrtica recibi en el tejido donde estaba, seales de ese tejido que le
entregan un patrn de molculas propias del tejido.
o Adems, al llegar el linfocito al sitio de infeccin, recibir ms seales propias del tejido en el que se
encuentran, induciendo una mayor o menor expresin de ciertas molculas (mayor expresin de CD69, por
ejemplo).
[89]