Microbiologia prtica

Coliformes a 45C e E. coli

Resultados para Coliformes a 35C

Calcular o NMP de coliformes a 35C (tubos com VBB);

Pesquisa de Coliformes a 45C

A presena de coliformes a 45C em alimentos j processados
indica:
- Processamento inadequado, tratamento trmico ineficiente;
- Recontaminao ps-processamento (equipamento,
manipulao sem cuidados de higiene);
- Provvel presena de outros microrganismos patognicos e
toxignicos
Riscos sade do consumidor

Segurana pblica
Legislao

Pesquisa de Coliformes a 45C

Coliformes a 45C (coliformes termotolerantes):
possuem as mesmas caractersticas dos coliformes totais (ou a
35C), porm possuem a particularidade de serem capazes de
fermentar a lactose com produo de gs, quando incubadas
temperatura de 45C.
Fazem parte deste grupo os gneros Enterobacter, Klebsiella e
Escherichia coli.

J foram denominados como coliformes fecais, mas

atualmente sabe-se que somente o gnero Escherichia tem
como habitat o trato intestinal de homens e animais, sendo
que os outros podem ter origem no solo e/ou vegetais.
A presena de coliformes a 45C, no indica necessariamente
contaminao fecal.

Coliformes a 45C
(se coliformes 35C feito em tubos)
- A partir dos tubos positivos em VBB (turvao e formao de
gs), inocular um cap em caldo Escherichia coli (caldo EC ou
ECmug), contendo em cada tubo, 10 mL do caldo e um tubo
de Durhan, previamente esterilizados;
- Homogeneizar e incubar em banho-maria a 45C por 24h;
- aps incubao, examinar os tubos positivos, ou seja, que
apresentaram turvao e formao de gs;
- Em caso de positividade, para confirmar a presena de E. coli
deve-se verificar crescimento de colnias tpicas em gar Mc
conkey ou EMB.

Coliformes a 45C
(se coliformes totais feito em placas)
- Aps contar as colnias tpicas crescidas em gar VRB, passar 5 colnias
para caldo Escherichia coli(caldo EC ou ECmug), contendo em cada tubo,
10 mL do caldo e um tubo de Durhan, previamente esterilizados;
- Homogeneizar e incubar em banho-maria a 45C por 24h;
- aps incubao, examinar os tubos positivos, ou seja, que apresentaram
turvao e formao de gs;
- Calcular o numero de UFC/mL atravs da frmula abaixo
UFC/mL = col. Contadas (VRB) x col. Confirmadas (EC) x inverso diluio usada (VRB)
Col. Isoladas (EC 5 colnias)

- Em caso de positividade, para confirmar a presena de E. coli deve-se

verificar crescimento de colnias tpicas em gar Mc conkey ou EMB e a
partir delas, faz-se provas bioqumicas (indol, vermelho de metila, Voges
Proskauer e citrato).

Incubar a 35C/24-48h
Teste positivo: turvao e produo de gs

Tubos positivos com VBB: passar para caldo EC

Incubar em banho-maria a 45,5C/24h

Teste positivo: turvao e produo de gs

Tubos positivos no EC:

passar para meio EMB
Incubar em banho-maria a 35C/24h
Colnias tpicas: negras com brilho metlico

Provas confirmativas: Testes bioqumicos

Coliformes em gar ChromoCult

O gar ChromoCult:
possui caractersticas seletivas e diferenciais, podendo ser
utilizado para alimentos e guas.
Permite a deteco e a enumerao de coliformes a 30-35C e,
ao mesmo tempo, de E. coli,
mtodo mais rpido, simples e mais barato.

As colnias de coliformes totais se desenvolvem na cor rosa,

enquanto as colnias de E. coli, na cor azul, permitindo assim
diferenci-las.

Coliformes em gar ChromoCult

Transferir 1mL das diluies escolhidas para placas de petri esterilizadas;
Adicionar aproximadamente, 15 mL de meio previamente fundido e resfriado a
45C;
Homogeneizar cuidadosamente com movimentos em forma de 8;
Aps a solidificao, adicionar cerca de 4mL de meio, segunda camada e
aguardar solidificar;
Incubar as placas invertidas a 35C/24h;
Selecionar para contagem placas entre 25 e 250 colnias;

- Para expressar o resultado:

Contar separadamente as colnias azuis e rosas:
Coliformes totais (UFC/mL) = colnias contadas (azuis e rosas) x inverso da diluio
E. coli (UFC/mL) = colnias contadas (azuis) x inverso da diluio

Incubar a 35C/24-48h
Teste positivo: turvao e produo de gs

Tubos positivos com VBB: passar para caldo

EC

Incubar em banho-maria a 45,5C/24h

Teste positivo: turvao e produo de gs

Tubos positivos no EC:

passar para meio EMB

Incubar:
- Tubos de EC: 45C/ 24h
- Placas ChromoCult: 35C/ 24h

Incubar em banho-maria a 35C/24h

Colnias tpicas: negras com brilho metlico

Provas confirmativas: Testes bioqumicos