Kit para Pruebas de Alergias

Inserto
REF I031-1011
Espaol
Un ensayo de inmunotransferencia para la determinacin cualitativa de la circulacin de
alrgeno especfico de inmunoglobulina E (IgE) en el suero humano. Slo para uso
profesional de diagnstico in vitro.
USO PREVISTO
El kit de alrgeno prueba es un ensayo de inmunotransferencia para la determinacin cualitativa de
alrgeno especfico inmunoglobulina E circulante en suero humano.
RESUMEN
Una encuesta nacional en los Estados Unidos encontr que el 56,4% de todos los ciudadanos de
Estados Unidos dan positivo a uno o ms alrgenos. Un aumento progresivo de la prevalencia de las
enfermedades alrgicas a nivel mundial se ha producido con un 30-40% de la poblacin mundial ahora
se vean afectados por una o ms condiciones alrgicas. La Inmunoglobulina E es especialmente
importante para las alergias alimentarias que es parte de la hipersensibilidad tipo I. Ordinariamente Se
produce al combatir las infecciones causadas por parsitos. Esta molcula tambin se produce frente a
los seres inofensivos como el polen, el polvo y los alimentos que pueden causar enfermedades
alrgicas como asma, rinitis alrgica y alergia a los alimentos.
PRINCIPIO
El kit de prueba de alrgenos NIC un ensayo de inmunotransferencia para la deteccin cualitativa de
anticuerpos IgE al alrgeno en el suero humano. La superficie de viaje de la membrana de
nitrocelulosa de la prueba se recubre con alrgenos especficos. Durante las pruebas, se aade la
muestra a la tira de ensayo y se incuban. Si la muestra contiene anticuerpos IgE especficos de
alrgeno, puede reaccionar con los alrgenos y se unen a la membrana de nitrocelulosa de la tira. El
material no unido se elimina mediante lavado. Los anticuerpos detectores (anticuerpo anti-IgE humana
junto con biotina) se aaden a la tira y se incuban. Los anticuerpos del detector se unirn a la
respectiva IgE especfica que se une a la banda en la primera incubacin. Anticuerpos detectores no
unidos se eliminan por lavado. A continuacin, la estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina se
aade a la tira de prueba y se incuba. Esto se unir a la biotina, que se une a la tira en la segunda
incubacin. El conjugado de estreptavidina no unido se elimina mediante lavado. Entonces se aade el
sustrato y se incuba, lo que provocar una reaccin de color enzimtica especfica de la fosfatasa
alcalina.
La intensidad del color que corresponde a la cantidad de alrgeno anticuerpo especfico se interpreta
mediante comparacin con una carta de color. Para servir como control de productos, una lnea
coloreada aparecer siempre en la zona de control que indica el procedimiento correcto.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Slo para uso profesional de diagnstico in vitro. No utilizar despus de la fecha de caducidad.
No mezcle reactivos de otros kits con diferentes nmeros de lote.
Evite la contaminacin cruzada entre los reactivos para asegurar resultados vlidos.
Muestras de seres humanos deben considerarse potencialmente peligrosas y manipularse usando
prcticas de trabajo bien establecidos en el laboratorio.
Algunos componentes de este kit contienen ProClin 300. Evitar cualquier contacto con la piel o los
ojos.
Conjugado contiene Metilisotiazolinona y bromonitrobenceno en concentraciones subtxicas como
conservantes.
Use guantes desechables y ropa de proteccin, tales como batas de laboratorio y proteccin para
los ojos durante la manipulacin de los reactivos del kit y muestras. Lvese bien las manos cuando
termine.
No comer, beber o fumar en el rea donde las muestras o kits son manejados. No pipetear con la
boca.
Aparatos que no sean desechables deben ser esterilizados despus de su uso. El mtodo preferido
es el autoclave durante una hora a 121 C. Los materiales desechables debe ser tratados en
autoclave o incinerados. No esterilice en autoclave materiales que contengan hipoclorito de sodio.
Maneje y disponga de todos los Especmenes y materiales utilizados para realizar la prueba como
si contuvieran agentes infecciosos. Observar las precauciones habituales contra riesgos
microbiolgicos durante todos los procedimientos y seguir los procedimientos estndar para la
eliminacin adecuada de los especmenes.

Observar buenas prcticas de laboratorio al manipular productos qumicos y material

potencialmente infeccioso. Deseche todos los materiales contaminados, las muestras y los
reactivos de origen humano despus de la descontaminacin adecuada y siguiendo los
reglamentos locales, estatales y federales.
Los cidos neutralizados y otros lquidos deben descontaminarse mediante la adicin de un
volumen suficiente de hipoclorito de sodio para obtener una concentracin final de al menos 1%.
A 30 minutos de exposicin a un hipoclorito de sodio al 1%, puede ser necesario para asegurar
una descontaminacin eficaz.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Kits de prueba sin abrir deben almacenarse a 2-8 C. Todos los reactivos no abiertos son estables
hasta la fecha de caducidad impresa a travs de la casilla si se conserva entre 2-8 C. Una vez
abiertos, los reactivos deben mantenerse de 2-8 C inmediatamente despus de su uso.
Permita que la bolsa sellada que alcance la temperatura ambiente antes de abrir la bolsa.
Buffer de Lavado Concentrado puede almacenarse a temperatura ambiente para evitar la
cristalizacin. Si los cristales estn presentes, calentar la solucin en un bao de agua a 37 C. La
Solucin de Trabajo de lavado es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente.
No exponga los reactivos, especialmente el sustrato, a la luz fuerte o vapores de hipoclorito
durante las incubaciones. Si el sustrato adquiere color, ya no ser adecuado para su uso.
RECOGIDA PREPARACIN
Este kit se puede realizar utilizando slo muestras de suero humano. Las muestras de sangre
deben ser adquiridos usando venopuncin y separar el suero despus de la coagulacin (30-40
min.) por centrifugacin durante 10 minutos a 4000g.
Separar el suero de la sangre lo antes posible para evitar la hemlisis. Hemoltica
Macroscpicamente, las muestras lipdicas o turbias no debe utilizarse. Las muestras con extensas
partculas debern aclararse por centrifugacin antes de su uso. No utilizar muestras con
partculas de fibrina o contaminados con el crecimiento microbiano.
No deje las muestras a temperatura ambiente durante perodos prolongados. Las muestras de
suero se pueden almacenar a 2-8 C por hasta 7 das antes de ensayo. Para el almacenamiento a
largo plazo, las muestras deben mantenerse congeladas a temperaturas por debajo de -20 C.
Traiga las muestras a temperatura ambiente antes de la prueba. Las muestras congeladas deben
descongelarse completamente y se mezclaron bien antes de la prueba. Las muestras no deben ser
congeladas y descongeladas repetidamente.
Si las muestras deben ser enviadas, deben ser empacados en el cumplimiento de las normas
locales que cubren el transporte de agentes etiolgicos.
REACTIVOS Y COMPONENTES
Materiales suministrados
No.
Reactivo
Descripcin del Componente
Cantidad
Tiras de prueba de reaccin de plstico,
Tiras de prueba
membranas de nitrocelulosa revestidos con 10
material de alrgeno
Tris/NaCl, contiene o.1% Proclin 300, los
Buffer de Lavado
1
rendimientos de 1 x tampn de lavado 500 ml,
1x20 ml
Concentrado (25x)
pH = 7,5
Botella con tapn blanco, listo para su uso.
2
Detector de anticuerpos
Con biotina cabra conjugado Anti-anticuerpos 1x4 ml
IgE Humanos
Botella con tapa de color rojo, listo para su
uso.
3
Conjugado
Estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina 1x4 ml
contiene 0,02% y 0,02% metilisotiazolinona
Bromonitriidodxane
Botella con tapn negro, listo para su uso.
4
Sustrato
BCIP/NBT (Bromocloroindolyl fosfato/Nitro 1x4 ml
Azul Tetrazolium)
Carta de Colores.
1
Inserto
1
Gua de inicio rpido
1
NOTA: Use solo los componentes con el mismo nmero de lote.

Ubi.
1
2
3
4
5
5

I6
M1/M2/M3/M6

W22

T7/T8/T11/T12/T14

Cucaracha
Penicillium chrysogenum,
Cladosporidium herbarum,
Aspergillus fumigatos, Alternaria
alternata.
Hop Japons
Roble Blanco, Ulmus, Ficus, Sauce,
lamo.

F1
F2
F3/F24/F23
F27/F88

Clara de Huevo
Leche de Vaca
Pescado, Camarn, Cangrejo
Carne de res, Carne de cordero

Lnea de separacin (rojo oscuro)

F202/F13/F14
F91
F4
IgE Total

Nueces, Man, Soja

Mango
Trigo
IgE Total

INSTRUCCIONES DE USO
Deje que los reactivos y muestras alcancen la temperatura ambiente (18-25 C) antes de la prueba.
Los reactivos se deben mezclar bien antes de usar. La reproducibilidad de los resultados depende en
gran medida de la exactitud de pipeteo, el mantenimiento de los tiempos de incubacin y la
temperatura, as como la uniformidad de lavado de las tiras de prueba. El procedimiento se debe
seguir estrictamente. Ensayo deber concluirse dentro de los plazos.
NOTA:
1. Asegrese de que la cubeta de reaccin est completamente cubierta por soluciones durante cada
uno de los pasos de amortiguacin, de incubacin y lavado.
2. La incubacin del sustrato debe ser llevada a cabo en la oscuridad para evitar la auto-coloracin
del sustrato. Se recomienda encarecidamente a incubar las tiras de prueba en una caja de
incubacin durante cada proceso de incubacin.

5
6
7
8

Lnea de separacin (rojo oscuro)

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS

Agua Recin destilada o agua desionizada
Vortex mezclador
Cilindros graduados para la dilucin tampn de lavado
Cronmetro
Botella de 500 ml para lavado
Secador De Pelo
Depsitos de reactivos desechables
Agitador
Caja de incubacin (para la incubacin en la oscuridad)
Guantes desechables

Paso

Lnea de separacin (rojo claro)

10
11
12
13
14
15
16
17
18
19

Configuracin de la Tira de Prueba

Abreviatura
Productos de prueba
Para comprobar si el ensayo se ha
Lnea Control
llevado a cabo correctamente.
D1/D2
Der. pteronyssinus, Der. farinae
W1/W6
Ambrosia, Artemisa
E1/E5
Caspa de gato, caspa de perro

Procedimiento detallado
Preparar trabajo tampn de lavado diluyendo el tampn de lavado concentrado 1:25. Diluir 1
volumen de Buffer de Lavado Concentrado (25x) con 24 volmenes de agua recin destilada
en una botella de lavado. Mezclar bien antes de usar.
Aadir 250 l de la solucin de lavado de trabajo en la pila de reaccin; mojar la cubeta de
reaccin; mojar la cubeta de reaccin sacudindolo (en un agitador) a temperatura ambiente
(18-25 C) durante 5 minutos. Retire el tampn de lavado de trabajo y limpie el exceso de
agua en la superficie de plstico usando un papel absorbente.
Primera Incubacin: Aadir 250 l de las muestras de suero en las cubetas de reaccin
entonces se incuba en el agitador a temperatura ambiente (18-25 C) durante 45 minutos.
Retire las muestras de suero despus de la incubacin.

10
11

12

NOTA: Deseche la muestra de suero con cuidado y evitar la contaminacin cruzada de la

cubeta de incubacin.
Lave las tiras reactivas 6 veces con tampn de lavado de trabajo mientras se mantienen el
canal de reaccin en diagonal. Agitar la solucin en la cubeta manualmente durante unos 10
segundos y luego retire el tampn de lavado de trabajo. Limpiar el exceso de solucin en la
superficie de plstico utilizando tejido absorbente.
NOTA: lavado completo es importante. Agite la solucin de lavado de trabajo en el canal
durante varios segundos antes de verterla a cabo para asegurar el lavado eficaz.
Segunda Incubacin: Aadir 5 gotas (250 l) del anticuerpo detector luego incubar en el
agitador a temperatura ambiente (18-25 C) durante 45 minutos. Retire el exceso de
anticuerpo detector despus de la incubacin.
Repetir el Paso 4.
Tercera Incubacin: Aadir 5 gotas (250 l) de Conjugado luego incubar en el agitador a
temperatura ambiente (18-25 C) durante 20 minutos. Retire el exceso de conjugado
despus de la incubacin.
Repetir el Paso 4.
Cuarta Incubacin: Aadir 5 gotas (250 l) de sustrato luego incubar (en la oscuridad) en
el agitador a temperatura ambiente (18-25 C) durante 20 minutos en oscuridad. Retire el
exceso de sustrato despus de la incubacin.
NOTA: La incubacin del sustrato debe ser llevada a cabo en la oscuridad para evitar la
auto-coloracin del sustrato.
Enjuague la tira bajo el agua que fluye para detener la reaccin del substrato. Limpiar el
exceso de agua sobre la superficie de plstico utilizando tejido absorbente.
Seque la tira en el aire o mediante el uso de un secador de Hait convencional que acelerar
el proceso de secado. El color azul-prpura del fondo desaparece a medida que la tira
reactiva seca.
NOTA: La tira de prueba se debe secar completamente antes de leer los resultados
Comparar la tira de la muestra con la tira con la carta de colores. Una evaluacin cualitativa
de esas lneas es posible por comparacin visual de la intensidad de color de cada lnea de la
tira con la carta de colores.
NOTA: La lnea de control debera aparecer ahora, que se utiliza para comprobar si el
ensayo se ha llevado a cabo correctamente.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

IgE Alrgeno-especfica
Clase
Intensidad del color
Interpretacin
No aparece lnea de color.
Negativo
+
Lnea de color tenue.
Baja concentracin de IgE especfica de Anticuerpos
++
Lnea de color media.
Concentracin media del alrgeno especfico IgE
Anticuerpos
+++
Lnea de color fuerte.
Alta concentracin de IgE especfica de anticuerpos
1. Un resultado negativo indica que el paciente es no atpica.
2. Un resultado positivo indica que el paciente puede ser atpica a este alrgeno.
3. La mayor concentracin de alrgenos especficos anticuerpo IgE es decir, el grado ms alto es el
paciente est sufriendo la atpica.
IgE Total
Clase
Intensidad del color
Interpretacin
No aparece lnea de
La concentracin de IgE total es menor que el lmite de
color.
deteccin.
+
Lnea de color tenue.
Baja concentracin de anticuerpos IgE total
++
Lnea de color media.
+++
Lnea de color fuerte.
Alta concentracin de anticuerpos IgE total
1. Resultado es positivo, que indica que el paciente puede ser atpica.
2. La prueba IgE total de este kit no puede reemplazar el sistema nico, cuantitativa ELISA prueba.
NOTA: Los resultados de las pruebas no se consideran vlidas si no se cumplen los requisitos de
validacin de abajo.
REQUISITOS DE VALIDACIN Y CONTROL DE CALIDAD

Una lnea roja que aparece en la lnea de control que aparece en la zona de control se considera como
un procedimiento de control interno. Confirma realizado correctamente la tcnica. La prueba debe ser
considerada como vlida si la intensidad del color de la lnea de control es inferior en comparacin con
la carta de colores. Compruebe la fecha de caducidad del kit de prueba y asegurarse de que todos los
reactivos no se han abierto durante ms de 1 mes. Revise el procedimiento para asegurarse de que el
procedimiento de prueba se ha seguido correctamente y repita la prueba con una nueva prueba con
una nueva tira reactiva. Si el problema persiste, deje de utilizar ese lote y contacte con su distribuidor
local.
LIMITACIONES
1. El equipo de pruebas de alrgenos se utiliza para la determinacin de hacer circular alrgeno
especfico de inmunoglobulina E (IgE) en el suero humano: El diagnstico no debera establecerse
sobre la base de un nico ensayo. Adems las pruebas deben realizarse en la evaluacin de la
situacin clnica.
2. Al igual que con todas las pruebas de diagnstico, los resultados deben ser interpretados junto
con otra informacin clnica disponible al mdico.
3. Los pacientes ingresados con resultados positivos de Alrgenos Test Kit pueden no tener sntomas
clnicos relacionados si slo son durante un perodo de sensibilizacin y sin relevancia clnica.
CARACTERSTICAS DE RENDIMIENTO
1. Sensibilidad: 0.35 UI/mL
2. Especificidad: la tasa de la reactividad cruzada de la IgA, IgG y IgM humana, etc. <0.21%.
3. Precisin: Intra para repetitivos >99.9%
BIBLIOGRAFIA
1. Arbes SJ y colaboradores. Las prevalencias de pruebas cutneas positivas a 10 alrgenos comunes
en la poblacin de Estados Unidos: Los resultados de la Encuesta de Nutricin Salud Tercer
Examen Nacional; J Allergia Clin Immuniol. 2005; 116: 377-383
2. Wao (Organizacin Mundial de Alergia) Libro blanco de 2011.
ndice de smbolos