Las plaquetas

Las plaquetas son partculas celulares esenciales para el normal desarrollo de la

hemostasia y cumplen un rol protagnico en los desrdenes tanto trombticos como
hemorrgicos. Las plaquetas tienen su origen en la fragmentacin citoplasmtica del
megacariocito. Su estructura, sistema metablico y mecanismos de sealizacin regulan
su fisiologa. La participacin de las plaquetas en numerosas funciones fisiolgicas y la
sencilla manera de obtencin para su estudio, han fundamentado su uso como modelo
experimental de gran utilidad en Biologa Celular.

1.1.2. Descubrimiento de las plaquetas

De los tres elementos formes de la sangre, la plaqueta fue el ltimo en ser
descubierto. Varias circunstancias retrasaron su hallazgo, entre ellas, su tamao,
notablemente ms pequeo que el de los eritrocitos y leucocitos, as como las limitaciones
pticas de los primitivos microscopios empleados durante los siglos pasados,
particularmente el problema de la aberracin cromtica. (Izaguirre-vila, 1997). Tal vez, el
primer reporte se deba a Antonio van Leewenhoeck (1632-1723), quien al examinar gotas
de sangre, describi los glbulos rojos y mencion otras partculas ms pequeas, de un
tamao aproximado de 1/6 del tamao de los eritrocitos, que se adheran una a la otra,
aunque no les prest mayor atencin ni les asign algn nombre.
George Gulliver, mdico ingls, public en 1841 su observacin de la presencia en
la sangre de "esfrulas diminutas de aproximadamente 1/10,000 de pulgada", que
consider precursores de la fibrina. En este sentido, mencion en su trabajo que en la
sangre, adems de los glbulos rojos y blancos, existen los grmenes de la fibrina, y en

una ilustracin represent a las plaquetas.

En 1842, William Addison tambin mencion a las plaquetas como corpsculos
plidos, algo ms grandes que los corpsculos rojos, que miden de 1/2,800 a 1/3,200 de
pulgada de dimetro (seguramente referido a los leucocitos), y agreg: tambin observ
que el lquido hemtico contiene un gran nmero de molculas o grnulos
extremadamente diminutos, que varan en tamao; las ms grandes miden de 8 a 10
veces menos que los corpsculos plidos y existen en gran abundancia. Al examinarlas,
observ que se inicia la coagulacin de la fibrina; varios filamentos o fibras
extremadamente delicadas y perfectamente cilndricas cruzan el campo del microscopio;
gradualmente se incrementan en nmero, hacen interseccin una con otra en varios
puntos y forman una malla en la que quedan atrapadas tanto las molculas como los
corpsculos plidos. Numerosas molculas se encuentran situadas, a intervalos, a lo largo
del curso de los filamentos, formando ndulos sobre ellos.

Indudablemente, lo que

Addison describe es la formacin del conglomerado de fibrina y plaquetas, a las que llama
molculas, y tal vez fue uno de los primeros investigadores en haber observado
directamente al microscopio el proceso de formacin de un cogulo (Figura 1).

2b
2a

3
4e
4c

4d

Figura 1. Dibujo de William Addison hecho en 1842.

Las figuras 1, 2b, 3 y 4e muestran las plaquetas, a las que llama
molculas, y los leucocitos, a los que llama corpsculos
plidos, atrapados en la fibrina. La figura 4a ilustra los eritrocitos,
la 4b los corpsculos plidos y la 4d las molculas diminutas o
grnulos (plaquetas).

Varios de los trabajos pioneros sobre las plaquetas mencionan al francs Alfred
Donn, como el primer autor que report su presencia en la sangre. Durante una sesin
de la Academia de Ciencias de Pars en 1842, Donn report que en la sangre existen tres
tipos de glbulos: los rojos, los blancos y los pequeos glbulos (globulinas); ms tarde
ampli la descripcin en su libro Curso de Microscopa, publicado en 1844, y mencion a
las globulinas como un elemento morfolgicamente diferente; pens que eran
precursores de los glbulos blancos y compar su apariencia integral a la de la leche. En
su descripcin dice: estos glbulos (globulinas) muestran una gran diversidad en la

sangre. Se unen en grupos de 3 4, envueltas por una cubierta albuminosa mientras

circulan y as constituyen las clulas blancas.
En Alemania, Friederich Arnold, en su libro "Handbuch der Anatomie des
Menschen", de 1845, ilustr plaquetas, a las que llam grnulos elementales. Gustav
Zimmermann, en 1846, las llam cuerpos elementales y Max Schultze en 1862, las
describi con el nombre de pequeos elementos.
En 1873, el investigador francs Edme Vulpian describi que estos cuerpos
incoloros de la sangre se adhieren al vidrio formando agregados y Louis A. Ranvier,
observ que durante la coagulacin aparece una materia fibrosa con granulaciones de
caractersticas morfolgicas y tintoriales diferentes a las de los eritrocitos y leucocitos.
En 1886, Karl Eberth y su asistente Curt Schimmelbusch observaron que la
alteracin y estasis del flujo sanguneo en los vasos van seguidas por el depsito de las
plaquetas en la pared formando un trombo rojo, fenmeno al que Ebert denomin
metamorfosis viscosa de las plaquetas. Sin embargo, quien logr entender mejor la
funcin de las plaquetas y reconocerlas como un elemento distinto en la sangre fue el
italiano Giulio Bizzozero, quien public en 1882 su monografa sobre las plaquetas.
Bizzozzero hizo sus observaciones en la circulacin mesentrica de animales vivos y
rebati las teoras de Schultze y Ranvier, al afirmar que las masas granulares no eran
residuos de la desintegracin de los leucocitos ni granulaciones de fibrina, sino que se
originaban de los elementos morfolgicos preexistentes en la sangre, a los que llam
petites plaques (pequeas placas o plaquitas) (Figura 2). Bizzozzero describi como se
agrupan en los vasos daados y forman el tapn hemosttico en forma diferente de la
coagulacin del plasma y sugiri que se trata de dos eventos independientes y paralelos.
Como otros investigadores de su tiempo, supona que las plaquitas liberaban una
4

sustancia no visible al microscopio que poda acelerar la coagulacin. Aisl plaquetas de

los trombos e identific a la hemostasia y a la trombosis como procesos anlogos.
Tambin not la naturaleza friable de los cogulos tempranos y la progresiva tensin que
se produce en los depsitos ms avanzados (Quick 1966; Bizzozero, 1882).

Figura 2. Ilustracin de Bizzozero hecha en 1882, donde

muestra los glbulos rojos, blancos y las pequeas placas
plidas (plaquetas).

En los aos siguientes, las plaquetas fueron reconocidas como un elemento

independiente en la sangre y recibieron diferentes nombres, aludiendo a sus
peculiaridades, como su tamao pequeo, el orden en que haban sido descubiertas, sus
caractersticas tintreas o lo difcil que era observarlas en forma aislada.

As se

conocieron como globulitos (globulinas), granulaciones, placas de la sangre,

pequeas placas (plaquitas), pequeos discos, tercer corpsculo, corpsculo

fugitivo, discos fugitivos,discos invisibles y discos incoloros (Tocantis, 1948).

Recin en 1906, el patlogo norteamericano James H. Wright fue quien perfeccion
la tincin que lleva su nombre y la aplic al estudio de la sangre y de la mdula sea.
Wright descubri, mediante preparaciones histolgicas, que los megacariocitos de este
tejido daban lugar a las plaquetas despus de la fragmentacin de su citoplasma (Figura
3).

Figura 3. Ilustracin de Wrigth hecha en 1906.

Muestra un Megacariocito con prolongaciones que
desprenden plaquetas en el interior de un sinusoide.

Hace ms de un siglo que las plaquetas fueron reconocidas como un elemento

independiente en la sangre y es innumerable la lista de investigadores que fueron dejando
las bases para los grandes descubrimientos que se han hecho y se continan haciendo
acerca de su estructura y funcin.

1.1.3. Formacin de plaquetas

Aunque se ha aceptado universalmente que las plaquetas derivan de los
megacariocitos, los mecanismos por los cuales se forman y se liberan siguen siendo
controvertidos.
La megacariocitopoyesis comienza con las clulas madre pluripotenciales o stem
6

cells, que son las clulas hematopoyticas ms indiferenciadas, con capacidad de autoreplicarse y diferenciarse hacia lneas celulares mixtas, como la lnea megacarioctica. Los
progenitores megacariocticos de lnea mixta son clulas hematopoyticas con capacidad
de originar elementos de varias lneas celulares, entre ellos, los megacariocitos.
El proceso comienza con la fase mittica, en la que las clulas progenitoras
megacariocticas se multiplican, y prosigue con una fase endomittica en la que se
producen mitosis nuclear y separacin de cromatinas, pero sin divisin celular. Las
sucesivas duplicaciones del ADN originan unas clulas poliploides de gran tamao, los
megacariocitos. Una vez alcanzada la ploida definitiva, en la fase final de la
megacariocitopoyesis, se produce la maduracin del citoplasma megacarioctico, que dar
lugar, mediante el proceso de la trombocitopoyesis, a la formacin y liberacin de
plaquetas (Italiano y col., 2007).

Figura 4. Microscopia electrnica (Cramer y col., 2006),

muestra la formacin de proplaquetas (pr) y de plaquetas (P).
M: megacariocito; N:ncleo. Magnificacin 35650

1.2. ESTRUCTURA DE LA PLAQUETA EN REPOSO

Las plaquetas circulan en forma de lente biconvexa (lenticular), se encuentran en
una concentracin que oscila entre 150 a 400 x 109/L y tienen un tamao de 0,5 a 2,5 m.
El histograma de volumen plaquetario (7 a 9 fL) es representado por una distribucin
normal logartmica an en poblaciones con un nmero incrementado de plaquetas recin
formadas. Esta observacin ha sido considerada una evidencia de que la heterogeneidad
plaquetaria es determinada por su formacin y no es consecuencia del envejecimiento. El
estudio de la ultraestructura de las zonas centrales y de constriccin a lo largo de las
proplaquetas confirma la dispersin de tamaos; sern pequeas cuanto ms dstales del
cuerpo celular y ms grandes las que provengan del centro citoplasmtico.
La ultraestructura plaquetaria est subdividida en tres partes topogrficas

relacionadas con su funcin (Figuras 5 y 6): A- Membrana plaquetaria / intra y extra

celular; B- Grnulos y organelas intracitoplasmticas/ secrecin plaquetaria y CCitoesqueleto / protenas motoras.

Figura 5.Esquema representativo de un corte transversal de una plaqueta. DTS: sistema

tubular denso, GP: glicoprotenas de membrana, : grnulo alfa, : grnulo denso, L:
grnulos lisosomales, SCCS: sistema canalicular conectado a la superficie.

Figura 6. Microscopa electrnica de una seccin plaquetaria mostrando los compartimientos

intracelulares (Cramer y col, 2006). mt: anillo de microtbulos, pm: membrana plasmtica,
SCCS: sistema canalicular conectado a superficie, dts: sistema tubular denso, A: grnulos ,
db: cuerpos densos (grnulos ), m: mitocondria y glucgeno. Magnificacin, 40.000

GRNULO
LISOSOMAL

GRNULO

SISTEMA CANALICULAR
CONECTADO A SUPERFICIE

GRNULO

10

1.2.1. Membrana plaquetaria / intra y extra celular

La principal funcin plaquetaria es mantener la integridad vascular y frenar el
sangrado. Para el desarrollo de esta funcin, la superficie plaquetaria juega un rol crucial
de contacto, primero asegurando la adhesin a los componentes del subendotelio
expuesto y luego favoreciendo la agregacin y formacin del trombo plaquetario. La
plaqueta est rodeada por una membrana plasmtica que se extiende a travs de
mltiples ramificaciones del sistema canalicular conectado a la superficie (SCCS) (Figura
7).

Figura 7. Replica de una microscopa de fractura por congelamiento.

( White y col., 2006) Muesta la coneccin entre el SCCS y la
membrana plaquetaria. Magnificacin 26.000x

A nivel de microscopa electrnica, la membrana plaquetaria tiene un espesor de 20

nm y aparece como una unidad trilaminar de membrana formada por dos hojas densas
separadas por un espacio constante. Al igual que otras membranas biolgicas est

11

compuesta por protenas y lpidos, principalmente fosfolpidos y colesterol (Cramer y col.,

2006).
El glicoclix o cubierta plaquetaria est formado por cadenas de oligosacridos
provenientes de glicolpidos, glicoprotenas de membrana (GPs) y cadenas de
polisacridos provenientes de proteoglicanos de membrana. Adems, proteoglicanos
plasmticos y protenas tales como la albmina y el fibringeno forman parte del glicoclix
y son incorporados por adsorcin (Handagama y col.,1993).
La asociacin entre la membrana plaquetaria y los depsitos de protenas
plasmticas constituye la primera lnea de interaccin de la plaqueta con su entorno y
participa activamente en el proceso de endocitosis y almacenamiento de protenas
plasmticas en los grnulos de secrecin. El glicoclix es responsable de la carga
negativa en la superficie plaquetaria, que provoca la repulsin de interacciones no
deseadas con otros elementos de la pared vascular o de la circulacin sangunea.
Las invaginaciones de la membrana plaquetaria dan origen a un sistema de canales
y canalculos que forma una extensa malla dentro del volumen citoplasmtico. En esa
superficie invaginada, el glicoclix est menos desarrollado; un ejemplo de ello es la
mnima presencia de la glicoprotena Ib (GP Ib) comparada con la existente sobre la
superficie celular. Adems, las cadenas glicosiladas de las molculas descriptas
constituyen un bloqueo del SCCS, formando un filtro que controla la entrada de protenas
plasmticas (White y col., 2006).
Mediante microscopa electrnica se ha analizado la distribucin y la funcionalidad
de las GPs en la superficie y a nivel intracelular, de las cuales las ms relevantes son:
a- El receptor de adhesin formado por un complejo de tres GPs (GP Ib, GP IX y GP V) es
el receptor de unin de la superficie plaquetaria al subendotelio, mediante el factor von
12

Willebrand (VWF) y la trombina (TR) (Hourdille y col., 1990). El complejo GP Ib/IX/V es

considerado el ms importante de los receptores implicados en la adhesin. (Ruggeri y
col., 1997; Lopez y col., 1997). La inmunomarcacin de los tres componentes de este
complejo indica su presencia sobre toda la superficie de las plaquetas en reposo,
ocasionalmente en el sistema canalicular y existe entre un 5 a 10% del total de marcacin
inmunocolocalizado con el VWF en las membranas granulares (Berger, 1996). La
conexin del complejo con la malla de actina se produce a travs de una protena de unin
a actina (ABP) (Fox y col., 1993) y es particularmente importante en la modulacin del
mecanismo de adhesin (Figura 8).

TR

TR

Figura 8. Estructura cristalogrfica del complejo GP Ib IX V y sus ligandos (Munday y col., 2003)
Panel A: GP Ib IX V; Panel B: Sitio de unin al VWF; Panel C y D: Sitios de unin a TR.

b- La GP VI, es el receptor para colgeno ms importante (Col), est comprometido

en los eventos tempranos de la funcin plaquetaria y participa en la activacin y la
agregacin inducida por Col (Clemetson y col., 1999) (Figura 9).

13

Figura 9. Esquema representativo de GP VI.

: unin no covalente de FcR- a 3.
CRP: Peptido Relacionados

c- El complejo GP IIbIIIa (IIb 3) es el principal receptor en la agregacin

plaquetaria, su principal funcin es la de unir fibringeno y, en condiciones de alto shear
rate, al VWF. Este complejo se encuentra homogneamente distribuido sobre la superficie
y en la membrana del SCCS. Estudios realizados por inmunomarcacin han demostrado la
presencia de depsitos internos ubicados en la membrana externa de los grnulos
(Cramer y col.,1997) que representan una cantidad mayor al 30% de GP IIbIIIa. La funcin
ms importante de este pool interno es la incorporacin y almacenamiento del fibringeno
plasmtico en los grnulos (Cramer y col.,1994; Handagama y col.,1993; Plow y col.,
2006). (Figura 10)

14

Figure 10. Esquema representativo que muestra los distintos

dominios de las sub unidades IIb (verde) y 3 (azul) en su forma
extendida. (Plow y col., 2006)

d- La GPIV (CD36) est involucrada en las propiedades de adhesin y agregacin

plaquetaria. Funciona como receptor de Col II y de trombospondina y participa en la
transduccin de seales (Greenwalt y col., 1992). Por microscopa electrnica se ha
detectado GPIV sobre la superficie plaquetaria, en el sistema canalicular y en la
membrana de los grnulos (Berger y col., 1993).

e- El complejo GP Ia/IIa (21) une Col (Figura 13), mientras que GP Ic/IIa y GP Ic *
/IIa (51, 61) unen laminina y fibronectina, respectivamente. Otra forma del complejo

15

53, est presente sobre la superficie en muy baja concentracin (aproximadamente 100
copias por plaqueta) y une protenas adhesivas tales como fibringeno, fibronectina y VWF
(Coller y col., 1991). (Figura 11)

Figura 11. Esquema representativo de la GP Ia IIa.

: Unin no covalente entre las subunidades 21

f- La molcula de adhesin endotelio-plaqueta (PECAM-1) y el CD9 son

componentes del plasma, de las membranas del sistema canalicular y en menor
proporcin de la superficie de los grnulos . El CD9 est formado por una protena
relacionada con el complejo GP IIbIIIa en los procesos de activacin, acta como receptor
para fibronectina y podra estar comprometida en la funcionalidad del receptor para
factores de crecimiento (Lagaudrire-Gesbert y col.,1997). El PECAM-1 es una molcula
16

de adhesin asociada con el citoesqueleto de las plaquetas activadas y tambin se

expresa en las clulas endoteliales (Newman y col., 1992).

1.2.2. Grnulos y organelas intra citoplasmticas /secrecin

1.2.2.1. Sistema tubular denso
Este sistema se origina a partir del retculo endoplasmtico del megacariocito y est
compuesto por canales ubicados cerca de las cisternas del SCCS (Figura 12). Contiene
varias enzimas activas, tales como Ca2+ -ATPasas y ciclooxigena 2 (COX2).

Figura 12. Microscopa electrnica (Cramer y col., 2006). Las flechas

sealan el sistema tubular denso, detectado por marcacin cito-qumica
(peroxidasa). Magnificacin: 26730..

1.2.2.2. Grnulos de Secrecin

Las plaquetas contienen cuatro tipos de grnulos citoplasmticos clasificados de
acuerdo a su ultraestructura, densidad y contenido: los grnulos , los grnulos densos,
los lisosomas y los peroxisomas.
17

1.2.2.3. Grnulos
Los grnulos son los ms prominentes y los que se encuentran en mayor nmero,
entre 50 a 80 por plaqueta, aproximadamente. Se forman durante la maduracin temprana
de los megacariocitos y aparecen en la malla trans-Golgi en forma de pequeas vesculas
y de grnulos inmaduros que transitan a travs de cuerpos multivesiculares hasta alcanzar
su tamao y densidad definitiva (Heijnen y col., 1998).
Morfologa: Los grnulos maduros son generalmente redondos u ovoides, su
dimetro es de 200 a 500 nm y estn rodeados por una unidad de membrana. La
ultraestructura es muy caracterstica, la matriz puede dividirse en tres zonas con diferentes
densidades (Harrison y col.,1993). En la zona nucleoide oscura, se observa co-localizacin
de proteoglicanos con protenas plaquetarias especficas tales como la -trombomodulina
y el factor plaquetario cuatro (PF4). En la zona clara, localizada en la periferia y en forma
opuesta a la anterior, contiene una a cinco estructuras tubulares de 20 a 25 nm,
regularmente espaciadas y alineadas (Cramer,1985). En estas estructuras se observa
colocalizado el VWF (Cramer y col.,1986) en su forma multimrica de alto peso molecular
(Wilbourn y col.,1993). Finalmente, una tercera zona intermedia est asociada con la
marcacin para fibringeno, trombospondina, albmina y factores de crecimiento. (Figura
13)

18

L
I
N

Figura 13. En la foto se observan tres zonas caractersticas, N: nucleoide oscura,

I: intermedia y L: zona clara. Las flechas indican la presencia del GP IIb IIIa en la
membrana del grnulo (marcacin por inmuno-gold). (Cramer y col., 2006)

Contenido: Los grnulos contienen protenas adhesivas, factores de crecimiento,

inhibidores de proteasas, proteoglicanos e inmunoglobulinas. Las protenas pueden
agruparse segn su funcin en: 1-protenas adhesivas: VWF, Fibringeno (Fg),
Fibronectina (Fn), Vitronectina (Vn), trombospondina-1 (TSP-1), laminina-8; 2-protenas de
coagulacin: FV/ FVa, Factor XI, PS: protena S,

kalicrenas de alto peso molecular

(HMWK), antitrombina; 3-otras protenas: plasmingeno, PAI-I, 2-antiplasmina, TAFI y

protenas relacionadas con la angiognesis.
La membrana de los grnulos contiene diferentes receptores moleculares, cuyos
sitios de reconocimiento a ligandos estn orientados haca su lado interno. Algunos como
la P-selectina (Stenberg y col.,1985), la osteonectina y el GMP33 son receptores
especficos y estn ausentes en la membrana plasmtica de la plaqueta en reposo. En
particular, la P-selectina es indicadora de activacin plaquetaria cuando se la encuentra
expresada en la superficie celular. (Furier y col., 2001)
Varios receptores estn presente en ambas membranas; el ejemplo ms relevante
corresponde al complejo GPIIbIIIa (Cramer y col.,1990), otros (CD9, PECAM-1, y GPIV)

19

estn presentes en porcentajes menores (Cramer,1994; Berger,1993) y el complejo GP

Ib/IX/V slo en trazas.
El estudio de una enfermedad congnita poco frecuente, el sndrome de plaqueta
gris (Smith y col., 1997; Nurden y col., 2008;), ha contribuido a la comprensin del rol de
los grnulos en la fisiologa plaquetaria. En estos pacientes, las plaquetas contienen
grnulos anormalmente vacos, constituidos por membranas, pero sin contenido soluble
(Rosa y col., 1987). El origen de esta anomala se observa en los megacariocitos en los
que las protenas de la matriz granular de origen endgeno se liberan en grandes
cantidades hacia el espacio extracelular contenido en el lumen del sistema de
demarcacin de membrana. Las plaquetas de estos pacientes adquieren un aspecto
grisceo luego de la tincin de Romanowsky y tienen una agregacin disminuida en
presencia de Col y TR in vitro. Por ello, estas plaquetas constituyen un modelo til para el
estudio de la participacin de los grnulos en la hemostasia. (Figura 14)
Fotos de microscopa electrnica. Detalles del contenido del grnulo alfa
(Magnificacin 120.000 )

A
A: En zona lumnica las
flechas marcan grupos
de estructuras tubulares
(corte transversal), de
multmeros de alto peso
molecular del FVW.

B: En zona nucleoide
las flechas sealan
inmunomarcacin de
-trombomodulina

C: En zona
intermedia, las
flechas sealan
inmunomarcin
para fibringeno.

D
D: En membrana
las flechas indican
inmunomarcacin
de gliprotenas
(GPIIbIIIa).

Figura 14. Fotos de microscopa electrnica (Cramer y col., 2006).

Detalles del contenido del grnulo . Magnificacin 120000.

20

1.2.2.4. Grnulos densos (cuerpos densos)

Morfologa: Los grnulos densos reciben este nombre por su natural opacidad en
las tinciones con tetrxido de osmio y por su capacidad de ser visibles al microscopio
electrnico en preparaciones no teidas. Se visualizan entre dos y siete grnulos densos
por plaqueta, con un dimetro aproximado de 200 a 300 nm y presentan un cuerpo central
denso rodeada por un halo claro. Se han desarrollado dos tcnicas citomtricas de
observacin al microscopio electrnico, una basada en la opacidad producida por el
contenido de serotonina (White y col.,1969) y la otra usando acetato de uranilo para
marcar el contenido de ADP y ATP y visualizar las membranas de los grnulos (Richards y
col., 1977). Los grnulos densos tambin pueden observarse por microscopa ptica de
fluorescencia o por citometra de flujo utilizando la incorporacin de cristales fluorescentes
derivados de la quinidina, como la mepacrina (Wall y col., 1995).
Contenido:

Son

organelas

de

almacenaje

de

serotonina,

(un

potente

vasoconstrictor, que en un 90% de su concentracin circulante se encuentra unido a

plaquetas), de cationes divalentes como Ca2+ y Mg+2 y de un pool no metablico de ADP y
ATP. La membrana posee varios receptores, algunos como la GP53 (granulofisina-CD63)
y otros comunes al resto de las membranas tales como GPIIbIIIa y P selectina (Berger y
col., 1993; Israels y col., 1992). Despus de la activacin, el contenido de los grnulos
densos es directamente secretado por fusin con la membrana plasmtica y las protenas
de membrana son translocadas a la superficie. (Figura 15)

21

Figura 15. Muestra grnulos densos en una microscopia electrnica

Realizada con la tcnica de White. (Cramer y col., 2006). A: grnulo,
dg: grnulo denso.

22

1.2.2.5. Lisosomas
Morfologa: Son grnulos pequeos con un dimetro inferior a 300 nm, poseen una
estructura homognea y se encuentran en nmero reducido. La funcin de las enzimas
lisosomales durante la activacin plaquetaria est dada por sus interacciones con la pared
vascular y por la digestin de los componentes de la matriz subendotelial. Dentro de la
plaqueta cumplen una funcin autofgica eliminando fragmentos citoplasmticos. Distintas
GPs, como las protenas lisosomales-asociadas a la membrana (LAMP-1, LAMP-2) y
CD63, estn presentes en la membrana lisosomal y son redistribuidas a la superficie
despus de la activacin plaquetaria producida por estmulos fuertes como la TR.

1.2.2.6. Peroxisomas
Adems de los tres tipos de grnulos descriptos, mediante tcnicas citoqumicas se
han observado actividades de peroxidasa y catalasa, lo que posiblemente indica la
existencia de pequeos grnulos similares a los peroxisomas descriptos en otros tipos
celulares.
1.2.2.7. Citoesqueleto / protenas motoras
El citoplasma est organizado espacialmente por una malla de protenas
estructurales llamada en su conjunto citoesqueleto, que est compuesta principalmente
por tubulina y polmeros de actina (Fox y col., 1993). Cumple una funcin dual, tanto
esttica como dinmica. Las plaquetas no estimuladas circulan en forma discoidea y
cambian a esfricas cuando son activadas, lo que permite asegurar una funcin
hemosttica correcta. El citoesqueleto est formado por dos estructuras: un conjunto de
microtbulos cercano a la membrana y una malla densa de filamentos de actina (White,
1984).

23

Microtbulos: estn compuestos por molculas de tubulina, que son heterodmeros

relacionados a dos polipptidos globulares; la y tubulina y estn asociados con
protenas motoras, tales como quinesina y dinena. La funcin de los microtbulos est
comprometida con el mantenimiento de la forma discoidea de las plaquetas en reposo
(White y col., 1998). Durante el cambio de forma, los microtbulos se contraen y
centralizan las organelas de secrecin en la cercana del sistema canalicular. En paralelo,
fragmentos de microtbulos aparecen en la periferia celular formando seudpodos (Steiner
y col.,1979; 1980).
La malla de actina puede ser subdividida en dos componentes: el esqueleto
submembranoso y los filamentos citoplasmticos. Se encuentran debajo de la membrana
plaquetaria o rodeando la banda de microtbulos. Su funcin est relacionada con los
cambios de forma de la plaqueta, el reordenamiento de complejos de GPs (Ib IX V) y la
formacin de seudpodos.
La actina es el mayor componente del citoesqueleto y representa el 20% del
contenido proteico plaquetario. Se distribuye en dos formas, la primera son monmeros
globulares de actina (G-actina) y la segunda est formada por filamentos de actina (Factina). Varias protenas, GPs y GPs de trans-membranas (filamina A (ABP-280), talina, Kactina, miosina I y II) estn asociadas a la malla citoplasmtica de actina (Fox, 1988;
1993). Estas protenas tienen como funcin la estabilizacin del esqueleto cuando las
plaquetas estn en reposo y favorecen el entrecruzamiento de las protenas de membrana
con la malla de actina.

24

1.3. ACTIVACIN PLAQUETARIA

1.3.1Activacinde la membrana plaquetaria
Una vez ocurrida la activacin de las plaquetas, los constituyentes de la membrana
plasmtica comienzan a reorganizarse y a exponerse como superficies catalticas para las
protenas plasmticas: los fosfolpidos aninicos cambian su posicin asimtrica y son
reorientados desde el interior a la capa externa para facilitar la formacin del cogulo. El
citoesqueleto se contrae en forma simultnea y la membrana plaquetaria cambia su forma,
contribuyendo a la formacin de seudpodos.

1.3.2. Cambio de forma y agregacin

Morfologa: Luego de la activacin ocurrida frente a una injuria de la pared vascular
o por la adhesin a un sustrato, las plaquetas sufren una serie secuencial de cambios
morfolgicos: forma esfrica, adhesin por filopodios cortos y largos, adhesin por
lamelopodios y finalmente, la consolidacin completa de la adhesin (Stenberg y col.,
1988) (Figura 16).
La prolongacin de lamelopodios es posible por el reordenamiento del citoesqueleto
y por un ensamble masivo de actina con fragmentacin de la malla perifrica de actina por
plecstrina. Los fragmentos resultantes de actina estn unidos a la membrana por las
conexiones ABP-GP Ib/IX/V. Adems de la formacin de lamelopodios, las plaquetas
activadas forman filopodios superficiales, que permiten la unin entre plaquetas y la
formacin de agregados slidos. Estas proyecciones estn contenidas por ramilletes de
filamentos de actina largos y difieren de los que forman lamelopodios por no depender de
la fragmentacin.
Las diferentes estructuras participan en distintas funciones dentro de los procesos

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adhesivos: la formacin de lamelopodios detiene el drenaje vascular adhirindose a la

superficie injuriada, y la formacin de filopodios permite la unin a fibrina y a otras
plaquetas para formar el cogulo plaquetario tridimensional. Finalmente, los cambios de
forma son reconocidos por cuatro etapas claramente identificables:
1- Se despolimerizan los microtbulos, se incrementa la cantidad de F-actina, se
deforma la membrana plaquetaria, se originan los lamelopodios y finalmente stos facilitan
la adhesin entre ambos bordes de la injuria vascular.
2- Otras plaquetas son reclutadas, lo que permite consolidar la formacin de la
monocapa. stas son activadas a travs de receptores G-heterotrimricos, lo que resulta
en la activacin de la integrina IIb3 (sealizacin del interior al exterior), permitiendo la
unin al fibringeno (sealizacin del exterior al interior) y la polimerizacin la red de
filamentos de actina. Finalmente, con la formacin de numerosos filopodios, las plaquetas
se agregan y se consolidan entre s formando un espeso trombo plaquetario.
3- Las plaquetas se contraen a travs de cordones de actina tambin llamados
fibras de tensin, ancladas en las zonas de adhesin. Estas cuerdas de actina se
expanden y contraen, dando como resultado la secrecin de molculas pro-coagulantes y
factores de crecimiento que contribuyen a la reparacin de la injuria vascular.
4- Luego de la secrecin, las plaquetas exhaustas incrementan pasivamente los
agregados formados. La protena P-selectina del grnulo que se expresa durante la
activacin es blanco de las clulas polimorfonucleares y de los monocitos/ macrfagos.
Finalmente, estas clulas fagocticas limpian la zona de los restos plaquetarios y de
fibrina (de Gaetano y col.,1999).

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Fotos de microscopa electrnica. Detalles de cambio de forma

A:Plaquetas en reposo. Se observa la forma discoide en cortes transversales.

B: Plaquetas activadas. Se observa el cambio de forma y la formacin de
pseudpodos.
C: Centralizacin, fusin de los grnulos con la membrana y liberacin de su
contenido al sistema canalicular abierto.

Figura 16. Fotos de microscopa electrnica

Detalles del cambio de forma. (Cramer y col., 2006).

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1.3.3. Receptores plaquetarios

La activacin de los sitios de unin a ligandos en la GP IIb3 es producida por
distintos mecanismos de sealizacin que se inician por la unin de agonistas a las
protenas G constituidas por siete segmentos transmembrana (STRs).
Muchos de estos agonistas provienen del contenido plaquetario: la serotonina, que
estimula la plaqueta a travs de un receptor de tipo 5-HT-2 (Julius y col. 1990); el
tromboxano A2 (TxA2), producto de la metabolizacin del cido araquidnico (AA) que se
une a un receptor especfico de tromboxano (TP-1,-2) (Hirata y col., 1991) y el ADP
liberado de los grnulos densos que se une principalmente a dos receptores de tipos P2Y1
y P2Y12 (Jin y col., 2002).
Otros agonistas posibles son hormonas liberadas por otros tejidos, incluyendo la
epinefrina, que se une a receptores plaquetarios adrenrgicos de tipo 2 (Regan, 1986), y
la vasopresina proveniente de la hipfisis.
Finalmente, la trombina cliva a su receptor STR (Receptor Activador de Proteasas,
PAR 1,4) formando un nuevo pptido N-terminal que se unir a la porcin C-terminal del
receptor (Coughlin, 2000; Vu y col., 1991).

1.3.4. Mecanismos intracelulares

Una de las respuestas tempranas dependientes de protenas G es la activacin de
la fosfolipasa C-beta (PLC-) (Cockcroft y col., 1992). Esta enzima es responsable de la
hidrlisis del fosfatidil-inositol produciendo diacilglicerol, que activa una protena quinasa C
(PKC) que cataliza la fosforilacin de protenas, la secrecin de grnulos y la expresin del
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receptor para fibringeno (Shattil y col.,1987). Otro producto de la hidrlisis catalizada por
la PLC es el inositol-fosfato, que se une al sistema tubular denso y estimula la liberacin
de Ca2+ (Brass y col., 1985). Adems, la fosforilacin del fosfatidil-inositol en la porcin D-3
del anillo de inositol producida por otra quinasa, la fosfatidil inositol 3 quinasa (PI3K) es
importante en la regulacin de la activacin de la integrina IIb 3 (Kucera y col.,1992). El
segundo mecanismo involucra la va de los eicosanoides. Se inicia por la fosfolipasa A2
(PLA2), que libera AA de los fosfolpidos de la membrana plaquetaria (Leslie, 1997), lo que
constituye el paso limitante para la sntesis de prostanoides y leucotrienos.
El incremento intracelular de los niveles de Ca2+ mediado por IP3, est
directamente relacionado con la activacin plaquetaria, dado que muchas de las enzimas
comprometidas en los mecanismos de transduccin de seales, tales como PLA2, PLC y
la quinasa de la cadena liviana de la miosina son dependientes de Ca2+.
En resumen, la funcin plaquetaria involucra un conjunto de etapas, cambio de
forma, secrecin y activacin de sitios de unin a ligandos en la integrina IIb3, todas
relacionadas al proceso de adhesin. El resultado final ser la interaccin plaquetaplaqueta y la formacin del tapn hemosttico formado por los agregados plaquetarios. La
consolidacin del trombo requiere de la accin conjunta de dos receptores plaquetarios
centrales, el GPIIb/IIIa y el GPIb/IX/V y de sus principales ligandos, el fibringeno y el
VWF (Ruggeri y col., 1999; Nurden, 2008). Figura 17.

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MICRO PARTICULAS
PLAQUETARIA

CELULAS
ENDOTELIALES
CONSOLIDACION
DEL TROMBO

CELULAS
ENDOTELIALES

LEUCOCITOS
PLAQUETA

PLAQUETAS
ADHESION
ACTIVACION
AGREGACION
Contraccin
Miosina IIA+Rho kinasa

FLUJO

EMPAQUETAMIENTO
NURDEN AT, 2008

Figura 17. Esquema representativo de

la formacin del trombo plaquetario

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