Manejo y Uso Del Fotocolorímetro de Merk SQ 118

UNIVERSIDAD NACIONAL
DEL CALLAO
Facultad de Ingeniera Pesquera y Alimentos
Escuela Profesional de Ingenieria de Alimentos
Tema:
Manejo y uso del Fotocolormetro de MERK SQ 118
Curso: Bioqumica General
Profesora: C. Alicia Decheco Egsquiza
Grupo Horario: 90 G
Mesa: C
Alumnos: Calla Escalante, Mirian
Camasi Congachi, Roxana
Espinoza Rodrguez, Kelly
Huillca Catcoparco, Jos Luis
Palomino Ortiz, Abel
Pineda Pineda, Jhonathan
Ciclo: III
Setiembre del 2012
NDICE
I.
INTRODUCCIN
Universidad Nacional del Callao

SQ 118
II.
OBJETIVO
III.
MARCO TERICO
Manejo y uso del Fotocolormetro de Merk
Espectrofotometra
Mtodos fotomtricos
IV.
CUESTIONARIO
V.
CONCLUSIONES
VI.
BIBLIOGRAFA
VII.
ANEXOS
INTRODUCCIN
Las tcnicas colorimtricas se basan en la medida de la absorcin de radiacin
en la zona visible por sustancias coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra
que deseamos determinar no posee color por s misma; en tal caso, es preciso
Bioqumica General
Blga. Mc. C. Alicia Decheco Egsquiza

SQ 118
llevar a cabo un desarrollo de color empleando reactivos que den lugar a

sustancias coloreadas con la muestra que interesa estudiar.
Un procedimiento colorimtrico se basa en la comparacin de una solucin
coloreada (representando una concentracin desconocida de la sustancia bajo
anlisis) con un color patrn (que representa la sustancia de concentracin
conocida). La sustancia debe ser coloreada o ser capaz de dar reacciones que
permitan la produccin de color. Adems, la intensidad del color debe depender
de su concentracin, de otra manera no tiene utilidad para propsitos
colorimtricos.
La colorimetra y fotocolorimetra no son en realidad tcnicas distintas y la
diferencia estriba en el tipo de instrumental empleado, de forma que se
denomina colormetro a aquellos aparatos en los que la longitud de onda con la
que vamos a trabajar se selecciona por medio de filtros pticos; en los
fotocolormetros o espectrofotmetros la longitud de onda se selecciona
mediante dispositivos mono-cromadores.
II. OBJETIVO
Aprender el manejo del fotocolormetro Merk SQ-118.
Bioqumica General

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Determinacin del espectro de absorcin y determinacin de la

concentracin de una muestra problema.
III. MARCO TERICO
ESPECTROFOTOMETRIA
Bioqumica General

SQ 118
La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las

investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que
permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que
contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una
cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que
parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que
pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del
infrarrojo.
La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende

de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia
qumica.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la

energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes

de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a
nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.
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SQ 118
Mtodos
Fotomtricos
Son tcnicas analticas basadas en la medicin de la radiacin
electromagntica absorbida, reflejada o emitida por una sustancia
presente en un fluido.
El mtodo fotomtrico especfico alude a la regin del espectro

electromagntico dentro del cual se realiza la medicin.
As por ejemplo se habla de espectroscopia de RM, infrarrojo, vis o uv,

para referirse a la regin de las ondas de radio, al infrarrojo, AL visible o
al ultravioleta. cada uno de estos mtodos tiene un campo especfico de
aplicaciones.
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A) ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN
Cuando se pretende determinar, espectrofotomtricamente la concentracin de
un soluto de una disolucin, es imprescindible conocer las longitudes de onda a
las que se produce la mxima absorcin. Lo ideal es hacer incidir sobre la
solucin un haz de luz con la longitud de onda que se produce la mxima
absorcin; para descubrir la capacidad de absorcin de una sustancia a
distintas longitudes de onda, se hace un barrido de longitudes de onda.
Cada sustancia tiene su espectro caracterstico, por lo que podemos
identificarla en una solucin cuya composicin desconocemos, y esto se suele
emplear en la determinacin de txicos en lquidos biolgicos.
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Existen dos formas de llevar a cabo los espectros de absorcin:

Manualmente: se lleva a cabo en un espectrofotmetro de haz simple,
se coloca en la cubeta la solucin y vamos midiendo las absorbancias a
distintas longitudes de onda.
Automticamente: se lleva a cabo en un espectrofotmetro de haz doble,

en el que se sita la cubeta con el blanco en una de sus celdas y en la
otra la solucin problema, se programa el aparato para q haga incidir
distintas longitudes de onda y este hace el barrido.
La sustancia debe cumplir la Ley de Lambert-Beer:
Dentro de un fotmetro de optek, se utiliza un haz de luz enfocado de manera
precisa para penetrar el elemento del procesado. Una clula fotoelctrica de
silicio mide la intensidad resultante de luz. La alteracin de la intensidad de la
luz, causada por la absorcin y/o difusin est explicada en la Ley LambertBeer.
La Ley Lambert Beer es un medio matemtico de expresar cmo la materia
absorbe la luz. Esta ley afirma que la cantidad de luz que sale de una muestra
es disminuida por tres fenmenos fsicos:
1. La cantidad de material de absorcin en su trayectoria (concentracin)
2. La distancia que la luz debe atravesar a travs de la muestra (distancia

de la trayectoria ptica)
3. La probabilidad de que el fotn de esa amplitud particular de onda sea

absorbido por el material (absorbencia o coeficiente de extincin)
Esta relacin puede ser expresada como:
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A = dc
Donde
A=
=
d=
c=
Absorbencia
Coeficiente molar de extincin
Distancia en cm
Concentracin molar
TRANSMITANCIA
A medida que un haz de luz atraviesa un medio absorbente, la cantidad de luz
absorbida en cualquier volumen es proporcional a la intensidad de luz incidente
multiplicado por el coeficiente de absorcin. Consecuentemente, la intensidad
de un haz incidente decae exponencialmente a medida que pasa a travs del
absorbente. Esta relacin cuando se expresa como Ley de Lambert es:
T = 10-cd o T = 10-A
Donde
T=
Transmitancia
=
Coeficiente molar de extincin
c=
Concentracin molar del absorbente
d=
Distancia en cm
En un enfoque simplificado, la transmitancia puede ser expresada como la
intensidad de la radiacin incidente, Io, que divide a la luz emergente de la
muestra, I. Se refiere a la relacin I/Io como transmitancia o sencillamente T.
ABSORCIN
La transmitancia puede ser trazada en relacin a la concentracin, pero la
relacin no es lineal. El logaritmo negativo en base 10 de la transmitancia s es,
sin embargo, lineal con la concentracin.
De esta manera, la absorcin es medida como:
A = -log10 (I/Io) o A = -log10 (T)
INSTRUMENTOS UTILIZADOS PARA LA ESPECTROFOTOMETRA:

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Se pueden clasificar en instrumentos manuales e instrumentos de

riesgo, con simple y doble haz respectivamente.
Los instrumentos de un solo haz se operan generalmente manualmente
y los de doble haz poseen un registro automtico de los espectros de
absorcin.
B) ESPECTROFOTOMETRO DE UN SOLO HAZ

Los componentes esenciales de un espectrofotmetro son los siguientes:
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1. FUENTE DE LUZ: proporciona energa radiante en forma de luz visible o

no visible.
Tipos de lmparas:
Lmparas de filamento de tungsteno: se utilizan para longitudes de onda del
espectro visible y el ultravioleta prximo. Son fuentes de un espectro continuo
de energa radiante entre 360-950 nm.
Lmparas de filamentos de haluros de tungsteno: son de mayor duracin y
emiten energa radiante de mayor intensidad.
Lmpara de Hidrogeno: Es til entre un rango de longitud de onda de 175
-400nm.Es una fuente de luz compuesta por una cpsula de cristal ultravioleta,
o de cuarzo, que contiene deuterio a baja presin en su interior. Suelen
emplearse en espectrometra como espectro continuo de referencia de la
regin ultravioleta, as como para generar la seal de anlisis en cromatografa.
Lmpara Incandescente de Nernst: Es una varilla pequea que tiene apariencia

de cermica fabricada con una mezcla especial de xidos metlicos y sellados
con platino en los extremos. Es la fuente de radiacin de los
espectrofotmetros de infrarrojo, estos operan en un rango de onda de 2-15nm.
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A temperatura ambiental no es conductora, pero cuando calienta entra en un

estado d conduccin lo cual mantiene un flujo de corriente incandescente que
es rica en radiacin infrarrojo.
Lmparas de vapores de Mercurio: Emiten un espectro discontinuo o espectro

de lneas que se utilizan para calibracin de longitudes de onda, se emplean
solo para espectrofotmetros y cromatografa HPLC.
Precauciones:
Las subidas y bajadas bruscas de tensin producen sufrimiento de la lmpara y
cambios en las lecturas de la Absorbancia.
La lmpara tiene una vitalidad limitada y se debe vigilar para que funcione bien
el aparato.
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2. MONOCROMADOR: es un dispositivo ptico que permite, por medio de

un mecanismo, seleccionar y transmitir una estrecha banda
de longitudes de onda ya sean electromagnticas o no a partir de una
fuente emisora que produzca una amplia gama de longitudes de onda.
Un monocromador puede utilizar cualquiera de los fenmenos de refraccin,

por ejemplo utilizando un prisma; o de difraccin, utilizando una red de
difraccin; para separar espacialmente los diferentes colores de la luz.
Usualmente el monocromador cuenta con un mecanismo que permite dirigir el

color seleccionado hacia una ranura de salida, por donde el rayo de luz
monocromtico puede abandonar el dispositivo.
Por lo comn la red o el prisma son utilizados en modo reflectivo. Un prisma

reflectivo se construye tallando en cristal un prisma de base triangular
rectngular (tpicamente la base tiene la forma de medio tringulo equiltero).
La luz entra en el prisma a travs de la cara que forma la hipotenusa del
tringulo y es reflejada dos veces en las otras dos caras por un fenmeno
de reflexin total interna, saliendo finalmente por la misma cara por la que
entr. En el pasaje del aire hacia el interior del cristal y del interior del cristal
hacia el aire la luz es separada en sus colores componentes debido a que cada
color presenta un ndice de refraccin ligeramente diferente. Las redes de
difraccin aprovechan el efecto de difraccin, un efecto de interferencia
constructiva-destructiva entre diferentes longitudes de onda, para separarlas
segn un patrn regular. Como las redes de difraccin necesitan que la
separacin entre ranuras se encuentre dentro del mismo rango de las
longitudes de onda a separar es posible aprovechar diferente cristales para
separar rayos X y, debido a la dualidad onda-partcula, hasta para
separar electrones, neutrones y ncleos de helio segn sus diferentes
energas.
Esto es posible porque la distancia entre los tomos del cristal se encuentra en
el mismo orden de magnitud que las longitudes de onda asociadas a estas
radiaciones.
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3. RECIPIENTE PARA LA MUESTRA: En todas las tcnicas

espectrofotometricas, con excepcion de la espectroscopia de emision, se
requiere recipientes para colocar las muestras.
La celda debe transmitir la energia radiante en la region visible; para la region

ultravioleta y las de sal de piedra en la region infrarroja.
Debemos recordar que la celda, que en cierto modo es solo un recipiente para
la muestra, en realidad es ms que eso, puesto que, cuando se coloca en su
lugar, forma parte de la trayectoria optica del espectrofotometro y sus
propiedades son importantes.
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4. DETECTOR: un dispositivo electrnico llamado transductor que

convierten la energa radiante en una seal elctrica.
Requisitos:
Responder a la E.R. en un amplio intervalo de .
Respuesta lineal.
Poseer elevada sensibilidad.
Tiempo de respuesta rpido.
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Detectores de fotones
Celdas fotovoltaicas: A diferencia de los tubos fotoemisores (que
requieren altos voltajes y producen, al se iluminados, bajas corrientes), las
celdas fotovolticas (tambin conocidas como fotogalvnicas o fotoceldas)
producen un voltaje a un substancial nivel de corriente.
Fototubos: El tubo fotoemisor es un bulbo al vaco (o lleno de alguna

mezcla de gases) con 2 electrodos, el ctodo es una superficie metlica
cubierta de un material (compuestos de cesio, antimonio, plata y bismuto)
que libera electrones cuando se le ilumina, el nodo es un tubo delgado o
un alambre.
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5. AMPLIFICADOR Y UN ASOCIADO: traduce la seal elctrica a la

lectura apropiada.
6. SISTEMA DE LECTURA DE LA MEDICIN: pone de manifiesto la
magnitud de la seal elctrica.
Caractersticas:
-B
os
arat
y
Robustos
-Haz Simple
-Fcil Mantenimiento
-Largo de banda de 340 625 nm
-Ancho de Banda: 20 nm
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C) FOTOCOLORMETRO
El fotocolorimetro es una variedad de colormetro (medidor de color).
Es un instrumento usado en las Qumica para determinar la
concentracin de sustancias disueltas en lquidos o slidos siempre que
sean transparentes a la luz visible, ultravioleta o infrarroja, midiendo y
comparando sus colores(mide la cantidad de luz absorbida por la
solucin).
El fotocolorimetro es un instrumento que tiene la particularidad de tener
celdas fotoelctricas y un circuito potenciometrico, adems consta de un
foco de 110 volts, dicho foco se encuentra dentro de una caja metlica
enviando los rayos luminosos que llegan a la solucin problema se
coloca en un tubo o celda de vidrio, en un soporte apropiado.
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PARTE INTERNA DEL FOTOCOLORMETRO
Consta de las siguientes partes:

1) Lmpara halogenada
2) Rendija 1
3) Colimador 1
4) Monocromador
5) Rendija 2
6) Cubeta(para la muestra)
7) Rendija 3
8) Colimador 2
9) Fototubo
10)Fotodiodo de silicio
CALIBRACIN:
Antes de utilizar el fotocolormetro es indispensable realizar rutinas bsicas de
calibracin para asegurarnos que el aparato proporcione datos y lecturas
confiables.
Antes de usar sus equipos debe hacer lo siguiente:
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Limpieza de la superficie del instrumento.

Limpieza de los filtros y fuente de luz (lmpara y condensador).
Verificar instalaciones elctricas.
Los pasos para probar la operatividad del equipo son los siguientes:
a) Se enciende el equipo y se deja que caliente por lo menos 15 minutos
(s el aparato es automtico, dar una seal cuando est listo para
funcionar).
b) Se selecciona la longitud de onda deseada (esto depende de la muestra
a ser leda y del reactivo utilizado).
c) Se selecciona la funcin absorbancia o transmitancia.
d) Se ajusta el aparato a cero con agua destilada. Si el aparato que se va a
utilizar tiene las dos escalas (absorbancia y transmitancia) se ajustan las
lecturas a cero de absorbancia y 100% de transmitancia
utilizando los controles grueso y fino en vaco.
e) Se lee un estndar de concentracin conocida y se ajusta el aparato a
esa concentracin. Si el aparato que se va a utilizar no tiene control
estndar,
este se utiliza para obtener el factor de calibracin, dividiendo la
concentracin del estndar entre su lectura.
FUNCIONES DEL FOTOCOLORIMETRO MERK SQ 118
1.
2.
3.
4.
5.
Impresin del resultado.

Indicacin del resultado.
Resultado al ordenador.
Numero de orden.
Lista de mtodos.
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6. Lista de parmetros.
7. Lista de funciones.
8. Adelantar pginas.
9. Tiempo de lectura
10. Fecha.
11. Hora.
12. Idioma.
13. Medicin automtica.
14. Medicin automtica conectar.
15. Conexin ordenador Bandrate
9600SI.
16. Conexin ordenador Bito datos 8SI.
17. Conexin ordenador Bito stop 1SI.
18. Conexin ordenador parit SBDDSI.
19. Conexin ordenador retardo 0.040 ms.
20. Test ordenador
21. Test teclado.
22. Test lectura.
23. Test impresin.
24. Test rotor de filtro.
25. Test filtros.
26. Test fotmetro 1.
27. Test fotmetro 2 umbral 1
28. Test aparato.
METALES PESADOS
Desde hace mucho tiempo fueron notados diversos problemas de
contaminacin, toxicidad y ecotoxicidad atribuidos a ciertos metales y a algunos
de sus compuestos.
Adems, algunos de los denominados MP (metales pesados) ingresan
habitualmente a nuestro organismo en porciones menores, vehiculizados por
los alimentos, el agua o el aire que respiramos. Varios persisten o se
bioacumulan durante largo tiempo en los organismos vivos.
Metales Pesados
Propiedades principales de algunos elementos (y sus
compuestos)
que
suelen
agruparse
bajo
esta
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denominacin
Cadmio
Cd
Cromo
Cr
Mercurio
Hg
Es un micronutriente esencial para los

humanos, animales y plantas. Sus propiedades
txicas son similares a las del zinc. En
humanos, la exposicin prolongada se
relaciona con la disfuncin renal. Tambin
puede llevar a enfermedades pulmonares, se
la ha relacionado con el cncer de pulmn y
puede provocar osteoporosis en humanos y
animales.
Se usa en aleaciones y pigmentos para
cemento, papel, pinturas, caucho y otras
aplicaciones. Frecuentemente se acumula en
ambientes acuticos, por lo que existe cierto
riesgo de ingerir pescado contaminado. Los
bajos niveles de exposicin pueden provocar
irritacin de la piel y lceras, mientras que la
exposicin prolongada puede causar daos
hepticos y renales, al tejido nervioso y al
sistema circulatorio.
Es un contaminante global. Las principales
fuentes de emisin de mercurio son la
fabricacin de cloro en celdas de mercurio,
produccin
de
metales
no
ferrosos,
combustin de carbn mineral y crematorio.
Es txico y no se lo encuentra naturalmente en
organismos vivos. Las intoxicaciones con
mercurio
pueden
provocar
temblores,
gingivitis, alteraciones psicolgicas y aborto
espontneo. Algunos procesos biolgicos
naturales
pueden
generar
compuestos
metilados de mercurio que se bioacumulan en
los organismos vivos, especialmente en peces.
El mono y el dimetilmercurio son muy txicos
y provocan enfermedades neurolgicas. La
Bioqumica General

SQ 118
principal ruta de ingreso a los seres humanos

es por la cadena alimentaria y no por
inhalacin.
Nquel
Ni
Plomo
Pb
El nquel es necesario para la formacin de

glbulos
rojos,
pero
en
exceso
es
medianamente txico. No se conocen efectos
de la sobreexposicin de corto plazo, pero en
el largo plazo puede provocar disminucin del
peso corporal, irritacin de la piel y problemas
cardacos y hepticos. Puede acumularse en
ambientes acuticos, pero no experimenta
biomagnificacin en la cadena alimentaria.
Proviene
de
fuentes
naturales
y
antropognicas. Puede ingresar al organismo
por el agua, alimentos, tierra y polvillo
desprendido de viejas pinturas conteniendo
plomo. La exposicin puede tener diversos
efectos en humanos. Los niveles altos de
exposicin pueden afectar la sntesis de
hemoglobina, la funcin renal, el tracto
gastrointestinal, las articulaciones y el sistema
nervioso.
Procesos de adsorcin de metales pesados
Bioqumica General

SQ 118
En este diagrama usted puede

observar el camino que siguen los
metales pesados desde su fuente
primaria de contaminacin hasta que
los ingerimos.
IV. PARTE EXPERIMENTAL

1. EQUIPOS Y MATERIALES
A. EQUIPOS
Fotocolormetro Merk SQ 118
B. MATERIALES
Piseta
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Probeta graduada

SQ 118
Tubos de ensayo
Vaso de
precipitado
C. REACTIVOS
Muestras:
Inca kola en lata
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Concordia de fresa

SQ 118
Seven up
Concordia de pia
Cerveza Brahma en lata
2. PROCEDIMIENTO
A) CARACTERSTICAS DEL EQUIPO
Bioqumica General

SQ 118
Tiene una lmpara de luz halogenada

Monocromador
Detector tipo fotdico de silicio
Lecturas desde 340nm hasta 820nm
Mide concentraciones, absorbancia y tramitancia.
Realiza 253 mtodos diferentes, de los cuales 234 mtodos para medir
concentraciones de sustancias especificas, 12 mtodos par medir
tramitancia a diferentes longitudes de onda.
Los porta muestra son cubetas de 10, 20 y 50 nm para medir 1, 2 y 5 ml
de muestra respectivamente.
Rango de temperatura de lectura ptima es de 10 a 50C.
Capacidad de trabajar con mtodos estndar.
Calendario reloj incorporado.
Sus medidas son 20cm de largo, 23cm de alto y pesa 35kg.
Bioqumica General

SQ 118
B) FORMA DE OPERAR
Se enciende y se escoge el mtodo de acuerdo a la sustancia que se
desea cuantificar, absorbancia, tramitancia, etc.
Par tarar a cero se coloca una cubeta de 10nm para el blanco con agua
destilada (5ml) dando una concentracin o absorbancia de 0.000.
Se realiza las mediciones de las muestras: gaseosa,
punto G, etc., en el mtodo seleccionado.
vino, cerveza,
Luego de realizar la lectura de las muestras escogida se enjuaga la

cubeta con agua destilada y se realiza la siguiente lectura
Bioqumica General

SQ 118
Botn mediante el cual se realiza la lectura de

la concentracin
Lector de los parmetros del mtodo escogido
Mediante l se podr escoger el mtodo para

analizar la sustancia
Bioqumica General

SQ 118
Sirve para realizar algunos cambios as como

el mtodo a escoger
Ejecutar/enter sirve para ejecutar cualquier

cambio o la lectura de la concentracin
Te dar las funciones que el equipo puede

hacer
V. RESULTADOS
Realice un cuadro indicando los diferentes mtodos del fotocolormetro de
Merk SQ-118.
Bioqumica General

SQ 118
NOMBRE DEL MTODO
NMERO
CROMO
01
Cromo
Nombre
del mtodo
2525
(Cr)
02
Nmero del artculo
14758
03
MargenDQO
de medicin
0,1028
3,00
04
05
06
07
08
Unidad
Tiempo
de reaccin
Nitrato
Cubeta
Longitud de onda
Silicio
Calibracin con factor
09
Evaluacin lineal
10
mg/l
5 +54
0 min
10 nm Rectang.
550 nm
92
Si factor
Si
FactorNiquel
50
1,299
Plomo
114
Cadmio
115
Aluminio
rea
125
Mercurio
162
Arsnico
164
Anote los parmetros de cada uno de ellos.
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SQ 118
NITRATO
01
Nombre del mtodo
54 (NO3)
02
Nmero del artculo
14773
03
Margen de medicin
5,0 90,0
04
05
06
07
08
Unidad
Tiempo de reaccin
Cubeta
Longitud de onda
09 Evaluacin lineal
DQO
10 Factor
mg/l NO3
10 + 0 min
10 mm Rectang.
525 nm
Si factor
Si
45,42
01
Nombre del mtodo
28
02
Nmero del artculo
14540
03
Margen de medicin
10 180
04
05
06
07
Unidad
Tiempo de reaccin
Cubeta
Longitud de onda
mg/l
0 + 0 min
16 nm Redonda
446 nm
08
09
10
Evaluacin lineal
Factor
Bioqumica General
Si factor
Si
- 213

SQ 118
NIQUEL
01
Nombre del mtodo
50 (Ni)
02
Nmero del artculo
14785
03
Margen de medicin
0,20 5,00
04 Unidad
05 Tiempo de reaccin
06 Cubeta
07 Longitud de onda
08 Calibracin con factor
SILICIO
09 Evaluacin lineal
mg/l Ni
1 5 min
20 mm Rectang.
446 nm
Si factor
Si
10
Factor
01
Nombre del mtodo
92 (Si)
02
Nmero del artculo
14794
03
Margen de medicin
010 - 5
04
05
06
07
Unidad
Tiempo de reaccin
Cubeta
Longitud de onda
mg/l Si
3 + 5 min
20 mm Rectang.
660 nm
08
09
10
Evaluacin lineal
Factor
Bioqumica General
2,49
Si factor
Si
1,898

SQ 118
CADMIO
01
Nombre del mtodo
115 (Cd)
02
Nmero del artculo
14834
03
Margen de medicin
0,025 1,000
04 Unidad
05 Tiempo de reaccin
06 Cubeta
07 Longitud de onda
08 Calibracin con factor
PLOMO
09 Evaluacin lineal
mg/l Cd
5 + 0 min
16 mm Redonda
525 nm
Si factor
Si
10
Factor
01
Nombre del mtodo
114 (Pb)
02
Nmero del artculo
14833
03
Margen de medicin
0,10 5
04
05
06
07
Unidad
Tiempo de reaccin
Cubeta
Longitud de onda
mg/l Pb
0 + 0 min
16 mm Redonda
525nm
08
09
10
Evaluacin lineal
Factor
Bioqumica General
0,54
Si factor
Si
4,55

SQ 118
REA
01
Nombre del mtodo
125
02
Nmero del artculo
14544
03
Margen de medicin
0,5 25,0
04
05
06
07
08
Unidad
Tiempo de reaccin
Cubeta
Longitud de onda
09
Evaluacin lineal
10
Factor
01
Nombre del mtodo
2 (Al)
02
Nmero del artculo
14825
03
Margen de medicin
0,20 1,50
04
05
06
07
Unidad
Tiempo de reaccin
Cubeta
Longitud de onda
mg/l Al
4 + 0 min
10 mm
550 nm
08
Si factor
09
10
Evaluacin lineal
Factor
Bioqumica General
mg/l REA
5 + 5 min
16 min Redonda
690 nm
Si factor
ALUMINIO
Si
18
Si
0,54

SQ 118
ARSNICO
01
Nombre del mtodo
164 (As)
02
Nmero del artculo
No tiene
03
Margen de medicin
0,05 0,600
04
05
06
07
08
Unidad
Tiempo de reaccin
Cubeta
Longitud de onda
09
Evaluacin lineal
10
Factor
01
Nombre del mtodo
162 (Hg)
02
Nmero del artculo
No tiene
03
Margen de medicin
0,025 1,00
04
05
06
07
Unidad
Tiempo de reaccin
Cubeta
Longitud de onda
mg/l Hg
5 + 0 min
50 nm Rectang.
565 nm
08
09
10
Evaluacin lineal
Factor
Bioqumica General
mg/l As
15 + 60 min
20 nm Rectang.
95 nm
Si factor
MERCURIO
Si
0,96
Si factor
Si
0,563

SQ 118
Realice un cuadro indicando las lecturas de las concentraciones de las

muestras analizadas.
CROMO
DQO
NITRATO
SILICIO
NIQUEL
BEBIDA
x
CONCORDIA DE
FRESA
>0,10
0,5
>0,10
>0,20
INCA KOLA EN LATA
0,02
0,03
>0,20
SEVEN UP
>0,10
>0,10
>5
0,08
Bioqumica General

SQ 118
CONCORDIA DE
PIA
0,03
>0,10
0,03
0,06
CERVEZA BRAHMA
0,01
>0,10
0,6
0,02
0,05
PL
OM
O
CA
DMI
O
AL
UMI
NIO
R
EA
ME
RC
URI
O
0,10
0,006
0,15
0,009
>0,10
>0,02
5
0,04
0,09
ARSNICO
>0,5
>0,025
0,042
0,3
0,008
0,02
>0,025
>0,05
0,014
0,2
0,012
0,024
0,002
>0,5
0,006
0,017
0,01
xplique si hubo diferencias entre las muestras de dudosa procedencia y los

de lugares certificados.
Efectivamente hubo diferencias en la medicin de concentraciones de metales
realizados en los diferentes productos.
Comprobamos que los de mala calidad a diferencia de los de procedencia
confiable, contienen altas cantidades de metales que sobrepasan el lmite
permitido lo cual conlleva a mltiples daos en el organismo del consumidor,
ya que los ambulantes venden productos de dudosa procedencia (artculos
robados o piratas), los cuales han sido adulterados para ingresar al mercado
con un menor precio, cosa que no sucede con los supermercados, donde solo
logran ingresar los productos que cumplen con todos los requisitos.
Bioqumica General

SQ 118
VI. CONCLUSIONES
Se logr aprender el manejo del fotocolormetro de Merk SQ 118, se
debe ser minucioso y tomar en cuenta la manera correcta de operarlo
para la obtencin de los resultados q se requieren en esta prctica.
Se pudo determinar con xito las concentraciones de metales en las
diferentes muestras, tomando como patrn a la muestra de calidad, para
as poder obtener con ms exactitud las concetraciones de los metales
que se exceden de lo permitido. Esto nos demuestra la calidad y cuanto
dao puede ocasionar a nuestro organismo el consumo de productos
adulterados que sin un anlisis minucioso se consume sin saber la
Bioqumica General

SQ 118
cantidad que puedan contener de metales metales y organismos

dainos para nuestra salud.
VII. CUESTIONARIO
1. Qu ventajas operativas ofrece la colorimetra frente a otros
mtodos de determinacin de concentracin?
Las ventajas de la colorimetra son su sencillez, sus bajos costos y el
equipamiento porttil. Adems la realizacin de la colorimetra no exige
profesionales de alta experiencia.
La mayor ventaja de este mtodo consiste en que no es necesario el
aislamiento del compuesto y as se pueden determinar los constituyentes de
una mezcla compleja tal como la sangre.
Bioqumica General

SQ 118
2. Cmo procedera si la solucin es muy concentrada, para hacer

esta medicin?
Para conocer la concentracin de una sustancia coloreada en solucin se
podra comparar visualmente la intensidad de color de dicha solucin frente
a una o varias soluciones de concentracin conocida. Sin embargo resulta
ms preciso utilizar un aparato, el espectrofotmetro, que mide la cantidad
de luz que atraviesa una solucin.
3. Indique si siempre se utiliza agua destilada como blanco para la

determinacin de la concentracin de una sustancia por medio de
la fotocolorimetra. Justifique.
El uso del agua destilada como medio para determinar o cuantificar la

concentracin de sustancias a travs de la fotocolorimetria.
Las tcnicas espectrofotomtricas nos permiten realizar diversos tipos de
anlisis cuantitativos, bien sea la determinacin de la concentracin de un
metal o la cuantificacin simultnea de dos componentes de una muestra.
El fotocolormetro es un instrumento usado en las Qumica para determinar
la concentracin de sustancias disueltas en lquidos o slidos , mientras
sean transparentes a la luz visible, ultravioleta o infrarroja. El agua
destilada proporciona estas caractersticas.
Bioqumica General

SQ 118
A continuacin se presentan diversos mtodos espectrofotomtricas, en la

cual el agua destilada cumple intervenciones importantes.
Determinacin de cromo en acero.
Se pesa 1,000 g. de la muestra de acero (contenido de Cr <0,1% p/p) en
un vaso de precipitado de 100 mL, se disuelve mediante su digestin con
agua regia en caliente (el menor volumen) y lleva a un baln de 100 ml.
Determinacion de cobre en agua con el mtodo de hidroxido de
amonio.
Se prepara una solucin madre de cobre de 1000 ppm partiendo de un
estndar primario. Se toma una alcuota de la solucin madre de 10 mL y se
coloca un baln de 25 mL, se agrega 8 mL de hidrxido de amonio
concentrado, se enraza y se toma parte de esta solucin para realizar un
barrido de absorbancia en funcin de longitud de onda en un
espectrofotmetro usando como referencia agua.
Determinacin de hierro
Disolucin patrn de hierro de 100 mg de Fe/mL. Se disuelven 0.1400 g de
FeSO4.(NH4)2.SO4. 6H2O, calidad reactiva para anlisis en 50 mL de agua
que contenga 1 mL de H2SO4 concentrado. Se pasa un matraz aforado y
se diluye 200 mL exactamente.
Determinacin de fosfato por el mtodo amarillo de molibdovanadato

(fertilizantes, Abonos y Suelos).
Una solucin patrn que contenga 200 ppm de fsforo (se disuelven
0.2200 g de dihidrogenofosfato de potasio KH2PO4, de peso frmula 136.1,
en agua y se completa hasta 250 mL).
Determinacin de fsforo por el mtodo del azul de heteropolicido.
Solucin de molibdato de amonio, 10 g (NH4)6Mo7O24.4H2O, en 100 mL
de agua caliente, se enfra, se adicionan lentamente y agitando 75 mL de
cido clorhdrico concentrado y se diluye a 250 mL.
4. Explique los tipos de espectrofotmetros y sus aplicaciones.
Espectrofotmetro UV-Vis
Aplicacin: Caracterizacin, identificacin y cuantificacin de una gran
variedad de especies orgnicas e inorgnicas.
Bioqumica General

SQ 118
Descripcin: Se basa en la absorcin, por parte de la muestra, de radiacin

de una longitud de onda comprendida en el intervalo entre 160 y 780 nm.
Espectroscopa de Infrarrojo
Usos Generales:
Identificacin de todos los tipos de tipos orgnicos y muchos de los
compuestos inorgnicos
Determinacin de los grupos funcionales en los materiales orgnicos
Determinacin de la composicin molecular de las superficies
Identificacin de los efluentes cromatogrficos
Determinacin cuantitativa de los compuestos en mezclas
Mtodo no destructivo
Determinacin de la conformacin molecular (ismeros estructurales)
y estereoqumica (geomtricamente cal ismeros)

Determinacin de la orientacin molecular (polmeros y soluciones)
Aplicaciones comunes
Bioqumica General

SQ 118
La identificacin de los compuestos, haciendo coincidir espectro del

compuesto desconocido con referencia espectro (fingerprinting)
Identificacin de los grupos funcionales en las sustancias
desconocidas
Identificacin de los componentes de la reaccin y los estudios
cinticos de reacciones
Identificacin de la orientacin molecular en las pelculas de polmero
La deteccin de impurezas o aditivos moleculares presentes en
cantidades de 1% y en algunos casos como baja como 0,01%
Identificacin de polmeros, plsticos y resinas
Anlisis de formulaciones tales como insecticidas y copolmeros
Precisin
En el anlisis de las mezclas bajo condiciones favorables, la precisin es
mayor que 1%. En los anlisis de rutina, es de 5%.
La sensibilidad y lmites de deteccin.
La rutina es 2%; bajo la mayora de condiciones favorables y tcnicas
especiales, es 0,01%.
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El espectrmetro infrarrojo por transformada de Fourier.

Existen dos tipos de espectrmetros infrarrojos, los dispersivos y los de
transformada de Fourier. A continuacin se har la descripcin de estos
ltimos, ya que ste es el tipo de aparato del que dispone el Laboratorio.
Un espectrmetro por transformada de Fourier consta de tres elementos
bsicos: una fuente luminosa, un interfermetro de Michelson y un detector.
Su funcionamiento es el siguiente: un haz colimado, proveniente de una fuente
que emite en toda la regin infrarroja, incide sobre un divisor de haz. El haz
incidente se divide en dos haces perpendiculares de igual energa, uno de los
cuales incide sobre el espejo mvil y el otro sobre el espejo fijo. Los haces son
reflejados por ambos espejos y se recombinan al llegar al divisor de haz. Esto
da lugar a una interferencia, la cual puede ser constructiva o destructiva
dependiendo de la posicin relativa del espejo mvil con respecto del espejo
fijo. El haz resultante pasa a travs de la muestra, en donde sucede una
absorcin selectiva de longitudes de onda y, finalmente, llega al detector.
Espectrometra Raman
La espectrometra Raman es una tcnica espectroscpica utilizada en fsica de
la materia condensada y tambin en qumica para el estudio de los modos
vibracionales, rotacionales y otros de baja frecuencia en un sistema. Se basa
en la dispersin inelstica, o dispersin Raman, de la luz monocromtica, que
por lo general procede de un lser en el rango visible, infrarrojo cercano, o
ultravioleta cercano. La luz lser interacta con fonones u otras excitaciones en
el sistema, por lo que la energa de los fotones lser se desplaza hacia arriba o
hacia abajo.
Normalmente, la muestra se ilumina con un rayo lser. La luz del punto
iluminado se recoge con una lente y se enva a travs de un monocromador.
Las longitudes de onda cercanas a la lnea lser, debidas a la dispersin
elstica de Rayleigh, son filtradas, mientras que el resto de la luz recogida se
dispersa en un detector.
La dispersin Raman espontnea es generalmente muy dbil, y como resultado
la principal dificultad de la espectrometra Raman es separar la luz dbil
dispersada inelsticamente de la luz intensa lser por dispersin de Rayleigh.
Histricamente, los espectrmetros Raman utilizaban rejillas de difraccin
hologrfica y mltiples etapas de dispersin para lograr un alto grado de
rechazo lser. En el pasado, los detectores de eleccin para las
configuraciones de dispersin Raman eran los fotomultiplicadores, lo que daba
lugar a largos tiempos de adquisicin. Sin embargo, la instrumentacin
moderna en casi todo el mundo emplea filtros de muesca o borde para
rechazar el lser, as como espectrgrafos y detectores CCD.
Hay diferentes tipos avanzados de espectrometra Raman, como la de
superficie potenciada, la polarizada, la estimulada, la de transmisin, la
compensada espacialmente y la hper-Raman.
Bioqumica General

SQ 118
TEORA BSICA
El efecto Raman se produce cuando la luz incide sobre una molcula e
interacta con la nube de electrones de los tomos de esa molcula. El fotn
incidente excita uno de los electrones a un estado virtual. La molcula se excita
desde el estado basal a un estado de energa virtual, y se relaja a un estado
vibracional excitado, lo que genera la dispersin de Raman Stokes. Si la
molcula ya se encontraba en un estado elevado de energa vibracional, la
dispersin Raman se llama entonces dispersin Raman anti-Stokes.
Para que la molcula exhiba el efecto Raman es necesario un desplazamiento
en la polarizabilidad molecular, o cantidad de deformacin de la nube de
electrones con respecto a la coordenada vibracional. La cantidad del
desplazamiento de polarizabilidad determinar la intensidad de la dispersin
Raman, siempre que el desplazamiento Raman sea igual al nivel vibracional
que est involucrado.
5. Defina: ondas transversales, celdas fotovoltaicas, lmpara UV, sensor
de tubos fotomultiplicadores, fenmeno de emisin.
ONDAS TRANSVERSALES:
Son aquellas para las cuales; la perturbacin que se propaga es perpendicular
a la direccin de propagacin, como las ondas electromagnticas, o las olas del
mar.
Las variaciones en el desplazamiento de los puntos de una cuerda tensa
constituyen una onda tpicamente transversal.
El desplazamiento de sus puntos es perpendicular a la direccin de
propagacin en cualquier instante.
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CELDAS FOTOVOLTAICAS:
Las Celdas Fotovoltaicas, son sistemas fotovoltaicos que convierten
directamente parte de la luz solar en electricidad. Algunos materiales presentan
una propiedad conocida como efecto fotoelctrico en su forma ms simple,
estos materiales se compone de un nodo y un ctodo recubierto de un
material fotosensible. La luz que incide sobre el ctodo libera electrones que
son atrados hacia el nodo, de carga positiva, originando un flujo de corriente
proporcional a la intensidad de la radiacin, que hace que absorban fotones de
luz y emitan electrones. Cuando estos electrones libres son capturados, el
resultado es una corriente elctrica que puede ser utilizada como electricidad.
Las celdas fotovoltaicas se fabrican principalmente de silicio (el segundo
elemento ms abundante en la corteza terrestre). Actualmente, existen celdas
fotovoltaicas, por ejemplo, en nuestras calculadoras solares as como en los
cohetes espaciales.
Principio de Funcionamiento
La conversin directa de luz en electricidad a nivel atmico se llama generacin
fotovoltaica.
Algunos
materiales
presentan una propiedad conocida como
efecto fotoelctrico, que hace que
absorban fotones de luz y emitan
electrones. Cuando se captura a estos
electrones libres emitidos, el resultado es
una corriente elctrica que puede ser
utilizada como energa para alimentar
circuitos. Las celdas fotovoltaicas,
llamadas tambin celdas solares, estn
compuestas de la misma clase de materiales semiconductores que se usan en
la industria microelectrnica, como por ejemplo el silicio.
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LAMPARA ULTRAVIOLETA:
La luz ultravioleta UV es la parte de radiacin electromagntica situada por
debajo de la luz visible, con longitud de onda desde 100 nm a 400 nanmetros.
Los cientficos han clasificado la radiacin UV en apartados segn los efectos

que produce:
UV-A: Su emisin va desde los 320 nm hasta 400 nm.
Esta radiacin es capaz de penetrar nuestra piel o cualquier sustrato y se usa
frecuentemente en la industria en procesos de "curado en profundidad".
UV-B: Es la radiacin comprendida entre los 280 y 320 nm.
Tiene una mayor energa que los UVA pero no penetra tan profundamente,
produciendo un curado ms rpido. La radiacin UVB 'quema'.
UV-C: Es el tramo comprendido entre los 200 y 280 nm.
Esta radiacin tiene una alta energa que cae tan pronto incide contra cualquier
superficie. En la industria se usa para el "curado superficial". Tambin se utiliza
ampliamente en aplicaciones germicidas eliminando eficazmente virus y
bacterias.
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Una lmpara UV consiste en un bulbo o tubo de cristal de cuarzo relleno de

gas, con dos electrodos en los extremos, que al suministrarle electricidad
forman un arco elctrico entre ellos, calentando y subiendo la presin de dicho
gas y produciendo la emisin de luz.
En funcin de los gases y aditivos que contenga la lmpara se obtendr un
espectro u otro.
Las lmparas ultravioleta destacan por su versatilidad y funcionalidad en
cualquier campo de aplicacin, ya que este sistema no implica el uso de
disolventes. Su principal uso es el curado o secado de materiales por
polimerizacin y oxidacin.
El curado UV consiste en la solidificacin de tintas, barnices... mediante uso de
radiacin ultravioleta sobre materiales en proceso de acabado.
SENSOR DE TUBOS FOTOMULTIPLICADORES
Se llama fotomultiplicador a un tipo de detector ptico de vaco que aprovecha

el efecto de emisin secundaria de electrones para responder a niveles muy
bajos de iluminacin, manteniendo un nivel de ruido aceptable. Con la llegada
de los dispositivos CCD y su gran eficiencia cuntica, los fotomultiplicadores
han visto reducirse grandemente sus aplicaciones, quedando prcticamente
reducidas a los detectores de partculas, basados en la radiacin de
Cherenkov.
Un fotomultiplicador est compuesto de un fotoctodo, que emite electrones
cuando sobre l inciden fotones de energa adecuada. Un campo elctrico
acelera estos electrones y los dirige hacia un nodo, que en estos tubos recibe
el nombre de dnodo. La energa de los electrones incidentes provoca la
emisin un nmero mayor de electrones secundarios que son dirigidos hacia un
segundo dnodo. El nmero de dnodos y su disposicin vara con el modelo de
fotomultiplicador.
Bioqumica General

SQ 118
FENOMENO DE EMISION
Un material puede emitir fotones como partculas de energa E o como una
onda, con longitud de onda de frecuencia caractersticas. Dependiendo del
origen de los fotones, se pueden producir radiaciones en una gran gama de
longitudes de onda.
Rayos Gamma: Interacciones nucleares. Son fotones de energa muy elevada,
emitidos durante la descomposicin radiactiva de ncleos inestables de ciertos
tomos. La energa de los rayos gamma depende de la estructura del ncleo
que los origina.
Rayos X: Interacciones en las capas internas de los electrones.
El electrn excitado no es estable y, a fin de restaurar el equilibrio, el nivel
inferior no ocupado se llena con electrones provenientes de un nivel superior.
Este proceso que emite un espectro caracterstico de rayos x, es diferente para
cada tipo de tomo.
Luminiscencia: Interacciones de las capas exteriores de electrones. Es la
conversin de radiaciones y otras formas de energa en luz visible. Si la
longitud de onda de estos fotones esta dentro de la parte del espectro que es
visible al ojo humano, aparecer la luminiscencia.
La luz visible es emitida por incandescencia, pero tambin por efectos de
luminiscencia.
Fotoluminiscencia: emisin de luz por slidos debido a excitacin de fotones.
(Tubos fluorescentes)
Catodoluminiscencia: Bombardeo de electrones que produce emisin de luz
(tubo de rayos catdicos).
Electroluminiscencia: Emisin de luz generada por corrientes elctricas.
Materiales luminiscentes son divididos en fluorescentes y fosforescentes en
funcin del tiempo de diferencia entre la absorcin de la energa de excitacin y
la emisin.
Diodos emisores de luz (LED): Electroluminiscencia. Los diodos emisores de
luz se basan en la aplicacin de un voltaje externo, que causa transiciones
elctricas y electroluminiscencia. Estos dispositivos de unin estn diseados
de forma que este dentro de nuestro espectro de luz visible. Un voltaje aplicado
al diodo en direccin de polarizacin directa hace que en la unin se
recombinen huecos y electrones, lo que obliga a estos a emitir fotones.
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Laser: Amplificacin de la luminiscencia. Se trata de un sistema que permite

tener un as de luz coherente, monocromtica y amplificada. Light Amplification
by Stimulated Emision of Radiation, o amplificacin de la luz mediante emisin
estimulada de radiacin, es una aplicacin especial de la luminiscencia. La
salida del laser es un haz de fotones paralelos y coherentes, de una misma
longitud de onda. Son tiles en tratamiento trmico y fusin de metales, en
soldadura, ciruga, cartografa, en la transmisin y procesamiento de
informacin y otras aplicaciones.
Comunicaciones pticas
Un sistema con un sistema laser en el extremo emisor, un detector de fotones
en el extremo receptor, unidos una fibra de vidrio especial, tenemos un sistema
elemental de comunicacin ptica.
Emision termica: Al calentarse un material, los electrones se excitan

termicamente hasta llegar a niveles energeticos superiores. De inmediato estos
regresan a sus niveles normales, liberando fotones. Conforme se incrementa la
temperatura, la agitacion termica aumenta y tambien la maxima energia de los
fotones emitidos. Algunos de los fotones pueden tener longitudes de onda
dentro de nuestro espectro visible, por lo que el color del material cambiara con
la temperatura. A temperaturas bajas, la longitud de onda de la radiacion es
demasiado larga para ser vista. Conforme la temperatura asciende, los fotones
emitidos son de longitudes mas cortas. A los 700C comienza a verse un tinte
rojizo y de esta temperatura en adelante, se producen todas las longitudes de
onda visibles, hasta que es espectro emitido es una luz blanca.
Bioqumica General

SQ 118
VIII. BIBLIOGRAFA
Obtenido en:
http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/lhh345a/le
ccion2.pdf
Obtenido en:
www.ehu.es/acustica/bachillerato/onloes/onloes.html 16k
Obtenido en:
http://www.unirioja.es/cu/fede/color_de_vino/capitulo
05.pdf
Obtenido en:
http://rsa.aga.com/International/Web/LG/CO/likelgsp
gco.nsf/DocByAlias/anal_abs
Obtenido en:
http://es.wikipedia.org/wiki/Espectroscopia_de_absorci
%C3%B3n_at%C3%B3mica
Obtenido en:
www.tesisenred.net/bitstream/handle/10803/.../tesis_sma
cho.pdf?...1
Obtenido en:
http://www2.uah.es/mapa/Professor%20Sample
%20Site/activos/practicas/Fotometria.doc
Obtenido en:
http://www.usc.es/labcaf/en/system/files/Det5_Centelleo.
pdf
Bioqumica General

SQ 118
IV. ANEXOS
MTODOS FOTOMTRICOS DE ANLISIS

1.
NATURALEZA DE LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA
La Radiacin Electromagntica es una forma de Energa radiante que

se propaga en forma de ondas. En este fenmeno ondulatorio se
define:
a) Longitud de onda (l): es la distancia entre dos mximos de un
ciclo completo del movimiento ondulatorio. Se expresa, segn el S.I.
en nanmetros (nm) y sus equivalencias son: 1nm = 1mm =10 A0 =
10-9 m.
b) Frecuencia (n): es el nmero de ciclos por segundo. Es inversa a
la longitud de onda. Su frmula es:
n = c/l, y se mide en ciclos por segundo o hertzios.
c) Fotones: la luz est formada por fotones, y estos son paquetes
discontinuos de E. La E de un fotn depende de la frecuencia y de la
longitud de onda, segn la siguiente expresin:
E = h x n = h x c/n (h = Cte. de Planck = 6,62.10-27erg/seg.).
La Energa Electromagntica se mide el Ergios. La relacin entre la
longitud de onda y la Energa es inversa, por lo tanto a menor
longitud de onda mayor Energa y viceversa.
d) Espectro Electromagntico: cubre un amplio intervalo de E
radiante, desde los rayos g de longitud de onda corta hasta las ondas
de radio, de longitud de onda larga. Se divide en varias regiones, las
ms interesantes para nosotros son:
Regin Ultravioleta: l = 10-380 nm

Regin Visible: l = 380-780 nm
Regin Infrarroja: l = 780-30.000 nm
En la Regin Visible, la luz se descompone en colores. La luz blanca

contiene todo el espectro de longitudes de onda. Si interacciona con
una molcula puede ser dispersada o absorbida.
Bioqumica General

SQ 118
2.
FENMENOS DE INTERACCIN ENTRE LUZ Y MATERIA
A. FENMENO DE ABSORCIN
Cuando una partcula que se encuentra en estado de reposo o estado
fundamental interacciona con un haz de luz, absorbe E y se
transforma en una partcula en estado excitado. La molcula absorbe
la E de la onda y aumenta su energa, y ese aumento de energa es
igual a la E de la Radiacin Electromagntica absorbida (E = h.n). La
partcula en estado excitado tiende a volver de forma espontnea a
su estado de reposo desprendiendo la E absorbida en forma de calor.
Espectro de Absorcin. Cada especie absorbente, que recibe el
nombre de cromgeno, tiene un determinado espectro de absorcin.
El espectro de absorcin es un grfico donde se representa en
ordenadas la Absorbancia y en abscisas la longitud de onda. La
medida de la cantidad de luz absorbida por una solucin es el
fundamento de la espectrofotometra de absorcin.
Por eso es importante trabajar a la longitud de onda a la que la
sustancia estudiada absorbe la mayor cantidad de luz (a mayor
cantidad de luz, mayor cantidad de sustancia)
B. FENMENO DE EMISIN
Algunos compuestos, tras ser excitados por la luz, vuelven al estado
fundamental produciendo la emisin de energa radiante. En este
caso, lo que se mide es la energa emitida y, en este fenmeno se
basa la fotometra de llama o la fluorescencia.
3. LEYES DE ABSORCIN
Cuando un haz de luz pasa a travs de un medio, se registra una
cierta prdida de intensidad, debido a la absorcin por parte de la
sustancia.
Se llama TRANSMITANCIA (T) a la relacin entre la luz incidente y
la luz transmitida:
T = Is / I0 ;
%T = (Is / I0 ) x 100.
Bioqumica General

SQ 118
Se puede perder intensidad por la interaccin con la cubeta o el

solvente. Para evitar este error se hace una primera medida con una
solucin de referencia o BLANCO, que contiene todos los posibles
compuestos que intervienen en la lectura menos el que vamos a
medir. Todas las medidas que se hagan con posterioridad sern
referidas a esta medida inicial y se harn en la misma cubeta que se
utiliz en la medida del blanco.
La Transmitancia se usa poco, se emplea ms la Absorbancia (A)
porque la relacin entre A y la concentracin de una solucin es
directamente proporcional y la de la T es inversamente proporcional.
La relacin entre la absorbancia y la transmitancia es la siguiente:
Si el %T = 100
Si el %T = 0
A = 2-log T = 2-log 100 = 0

A = 2-log 0 =
En los aparatos que se usan actualmente se presentan absorbancias,

pero el aparato lo que mide realmente es %T que luego transforma a
absorbancia.
3.1. LEY DE BEER
La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la
concentracin y a la longitud del paso de la luz.
A = e. b. c
Siendo:
A: absorbancia. No tiene unidades.
e: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente de
absorcin. Es constante para un compuesto dado siempre que se fijen
condiciones de longitud de onda, de pH, de temperatura, de
solventes, etc. Sus unidades son 1/ (mol/cm).
b: es la longitud de paso de la luz, en cm.
c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L.
La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que conociendo la
absorbancia de una sustancia podemos averiguar su concentracin y
esto lo podemos hacer de dos formas:
Bioqumica General

SQ 118
1. Por comparacin con una solucin conocida: si tenemos 2

soluciones, una problema (P) y una estndar (S), podemos establecer
la siguiente relacin matemtica entre ellas:
2. A travs de una curva de calibracin: la curva de calibracin es la
representacin grfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia
(eje de ordenadas) frente a la Concentracin (eje de abcisas). Se
ensayan varias soluciones de concentracin conocida y se determinan
sus A, construyndose la curva de calibrado, que es una recta. Una
vez ensayadas las soluciones problemas, su concentracin se
averigua por interpolacin de las A de las soluciones problema en la
curva de calibracin.
Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de

concentraciones del cromgeno entre las cuales existe una relacin
lineal entre Absorbancia y Concentracin.
Cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de
linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer, convirtindose la recta
en una curva. La lectura de la Absorbancia fuera de los lmites de
linealidad se traduce en una concentracin falsamente baja de
cromgeno. En esta situacin, hay que diluir la muestra para que su
concentracin entre en los lmites de la linealidad.
Empleo de los Factores de Calibracin: Para reactivos estables y
sistemas fotomtricos estables, este factor se puede mantener
constante, siendo slo necesario ensayar las muestras
problema multiplicando la A resultante por el factor F.
4. ESPECTROFOTMETRO
Se distinguen dos tipos de aparatos:
Fotmetro o Colormetro: se caracterizan porque utilizan filtros

que solo permiten el paso de una determinada longitud de
onda.
Espectrofotmetros: El espectrofotmetro es capaz de trabajar,
no solo con la luz visible sino que en otras regiones del espectro
electromagntico (ultravioleta e infrarrojo). Adems posee un
monocromador para seleccionar la longitud de onda deseada.
Nos da informacin sobre la naturaleza de la sustancia, y puede
indicar la cantidad de la sustancia en la muestra
Bioqumica General

SQ 118
Los monocromador pueden ser de dos tipos: prismas y redes de

difraccin.
Monocromador de Prisma
Bioqumica General

Manejo y Uso Del Fotocolorímetro de Merk SQ 118

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UNIVERSIDAD NACIONAL

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Manejo y uso del Fotocolormetro de Merk

Blga. Mc. C. Alicia Decheco Egsquiza

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Manejo y uso del Fotocolormetro de Merk

llevar a cabo un desarrollo de color empleando reactivos que den lugar a

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Manejo y uso del Fotocolormetro de Merk

Determinacin del espectro de absorcin y determinacin de la

III. MARCO TERICO

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Manejo y uso del Fotocolormetro de Merk

La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las

La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende

Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la

El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes

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Manejo y uso del Fotocolormetro de Merk

El mtodo fotomtrico especfico alude a la regin del espectro

As por ejemplo se habla de espectroscopia de RM, infrarrojo, vis o uv,

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Manejo y uso del Fotocolormetro de Merk

Existen dos formas de llevar a cabo los espectros de absorcin:

Automticamente: se lleva a cabo en un espectrofotmetro de haz doble,

2. La distancia que la luz debe atravesar a travs de la muestra (distancia

3. La probabilidad de que el fotn de esa amplitud particular de onda sea

Esta relacin puede ser expresada como:

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Manejo y uso del Fotocolormetro de Merk

A = -log10 (I/Io) o A = -log10 (T)

INSTRUMENTOS UTILIZADOS PARA LA ESPECTROFOTOMETRA:

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Manejo y uso del Fotocolormetro de Merk

Se pueden clasificar en instrumentos manuales e instrumentos de

B) ESPECTROFOTOMETRO DE UN SOLO HAZ

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1. FUENTE DE LUZ: proporciona energa radiante en forma de luz visible o

Lmpara Incandescente de Nernst: Es una varilla pequea que tiene apariencia

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A temperatura ambiental no es conductora, pero cuando calienta entra en un

Lmparas de vapores de Mercurio: Emiten un espectro discontinuo o espectro

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2. MONOCROMADOR: es un dispositivo ptico que permite, por medio de

Un monocromador puede utilizar cualquiera de los fenmenos de refraccin,

Usualmente el monocromador cuenta con un mecanismo que permite dirigir el

Por lo comn la red o el prisma son utilizados en modo reflectivo. Un prisma

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