TCNICAS INMUNOLGICAS

Principales motivos de utilizacin del diagnstico inmunolgico

Diagnstico clnico no es significativo
Diagnstico microbiolgico es lento, complicado.
Las lesiones histolgicas son indicativas, pero pocas veces son patognomnicas.
a) Los ttulos de IgG por s solos suelen indicar una infeccin pasada o crnica
b) Las IgM normalmente reflejan una infeccin reciente
TITULO: es la inversa de la mxima dilucin en la que se obtiene un resultado positivo
SEROCONVERSIN: Aumento del ttulo de anticuerpos x 4 o paso de negativo a positivo
TIPOS DE REACCIONES INMUNOLOGICAS
1. Reacciones primarias: La unin Ag Ac se detecta midiendo la formacin de
inmunocomplejos.
2. Reacciones secundarias: Valoran los cambios fsicos de la interaccin Ag-Ac tras la
formacin de inmunocomplejos.
Interacciones Secundarias entre Antgeno y Anticuerpo

Reacciones de Aglutinacin
Reacciones de Precipitacin
Inhibicin de la hemaglutinacin
Fijacin del complemento
Inmunodifusin

Caractersticas del Ag:

o
o

Particulado: aglutinacion
Soluble: precipitacion

REACCIONES DE AGLUTINACIN
Fundamento: un antgeno particulado al ser puesto en contacto con su anticuerpo especfico en
proporciones ptimas, se une por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unin reacciona,
produciendo una reaccin de aglutinacin.
o
o
o

Es un mtodo que algunas veces se utiliza para medir el nivel de un anticuerpo srico
especfico para un antgeno particulado.
Se realiza mezclando diluciones sricas con una concentracin fija de antgeno.
La dilucin ms alta de un suero que alcanza aglutinacin visible del antgeno se denomina
ttulo.

Factores que influyen sobre la reaccin de aglutinacin

Temperatura.
Carga
Ph.

FENMENO DE ZONA O PROZONA

Tipo de Anticuerpos
Proporcin.
Afinidad

o
o
o
o

Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con respecto a los

determinantes antignicos de la partcula, de tal manera que es poco probable que
los dos sitios de unin de la Ig puedan unirse a dos determinantes antignicos de
dos partculas distintas, inhibindose de este modo la aglutinacin. Generalmente
ocurre en las diluciones bajas de sueros muy positivos.

CLASIFICACION

Aglutinacin directa
Aglutinacin indirecta
Pruebas de antiglobulinas
Inhibicin de la aglutinacin

TIPOS DE AGLUTINACION

AGLUTINACION DIRECTA

En este caso se utilizan directamente los antgenos en una suspensin salina sin un soporte
como el ltex o carbn.
Se usan clulas muertas de los agentes infecciosos como en la prueba de widal para la
deteccin de salmonella.

INMUNOAGLUTINACION CON LATEX

AGLUTINACION EN CARBON

REACCION DE PRECIPITACIN

Fundamento: un antgeno soluble, al ser puesto en contacto con su anticuerpo especfico,

forma complejos inmunes que al encontrarse en proporciones ptimas se insolubilizan dando
una reaccin de precipitacin.

Tipos:

a. Inmunoprecipitacin en medio lquido.

b. Inmunoprecipitacin en medio slido: Utiliza un soporte slido gelificado en el que

difunden el Ag y Ac. Se agrupan dentro de dos categoras: inmunodifusin y tcnicas
inmunoelectroforticas.

b.1.) Inmunodifusin

En la prctica, las reacciones de precipitacin se preparan generalmente, como

reacciones de difusin en agar, para hacer ms visible el precipitado.

Se utilizan con antgenos solubles a los que se permite difundir en una matriz
semislida

La unin antgeno-anticuerpo precipita de forma visible y permite establecer la

presencia de anticuerpos especficos. Un ejemplo clsico de este tipo de pruebas es la
inmunodifusin en gel de agar.

Se trata de pruebas relativamente sensibles y especficas pero con un elevado

componente subjetivo y muy engorrosas

INMUNODIFUSIN EN GELES DE AGAR

Inmunodifusin simple en placa (radial):

o
o

El Ac es incorporado en el gel de agar. El Ag de los pocillos difunde formando

anillosde precipitacin:

PRUEBAS DE ANTIGLOBULINAS

Coombs directa :

Para detectar IgG y/o fracciones de C que se encuantran fijados in vivo a la Superficie del
GR.
Su positividad significa que la persona tiene Acs contra sus GR.

o
o

Se busca autoAcs contra GR presentes en suero.

Una prueba positiva indica que hay Acs contra Ags de Gr.

o
o
o

o
o
o
o

o
o

Procedimiento:

Se incuba suero del paciente con el antgeno. En presencia de anticuerpos en el suero se

forman complejos antgeno-anticuerpo.
Se aade una cantidad de complemento (todos los elementos).
Si inicialmente se haban formado inmunocomplejos se produce la activacin del
complemento, consumiendo todos los componentes del sistema. Si no hay inmunocomplejos
todo el sistema permanece.
Se agrega un sistema revelador constituido por hemates unidos a anticuerpos antihemates
(hemolisina)
Si hay complemento libre (ausencia de anticuerpos en la muestra) se fija a los complejos
hemate-hemolisina y los eritrocitos de lisan.

TIPOS DE EIA

Homogneo:

Son en medio lquido.

No se requiere separacin de reactivos

o
o

FIJACIN DEL COMPLEMENTO

El complemento posee la capacidad de unirse a los complejos antgeno anticuerpo fijacin).

La prueba incluye la adicin de eritrocitos sensibilizados con una hemolisina.
Si el suero posee anticuerpos especficos, se fija el complemento y no puede unirse a la
hemolisina para lisar los eritrocitos.

Coombs indirecta:

Heterogneos:

Separacin del reactivo libre y reactivo unido.

Ag o Ac inmovilizados

INMUNOFLUORESCENCIA

Se utilizan anticuerpos conjugados con sustancias fluorescentes (fluorocromos

como el isotiocianato de fluoresceina o el naranja de acridina.

Se observa la presencia o ausencia de fluorescencia observando con un microscopio

de fluorescencia.

El principio de la tcnica de inmunofluorescencia de Coons y Kaplan es:

1) Un producto fluoresente se une a un anticuerpo.

2) El reactivo se aplica a un corte histolgico.
3) Los lugares de fijacin de los anticuerpos marcados son revelados gracias a su fluorescencia
(emisin de luz visible cuando son excitados por la luz ultravioleta).
4) Se interpretan entonces los antgenos localizados; por ejemplo la presencia de
inmunoglobulinas sugiere la presencia de anticuerpos.
a) Fluorocromo: Marcador colorante fluorescente empleado en investigacin para crear
contraste en zonas determinadas de los especmenes. Por ejemplo (Fluoresceina,
Rodamina, naranja de acridina, yoduro de propidio)
b)

Fluorforo: Parte de una molcula (fluorocromo, protena) que le imparte la propiedad de

fluorescencia.

c) Fluorescencia.- propiedad de una sustancia de emitir luz cuando es expuesta a radiaciones

de baja longitud de onda y alta energia

TIPOS DE INMUNOFLUORESCENCIA

INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA.- (para deteccin de antgenos): se fija

la muestra en un portaobjetos con acetona, se agrega el anticuerpo marcado con el
florocromo (inmunofluerescencia directa IFD). Deteccin de Pneumocystis carinii
en esputo inducido

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA.- (para deteccin de anticuerpos): se

agrega primero el suero del paciente sobre antgeno improntado en portaobjetos; en
la segunda fase se incuba con anticuerpo anti humano marcada con fluorocromo
(inmunofluorescencia Indirecta IFI)

PROCEDIMIENTO

Unin de una molecula fluorescente a un Ac (isotiocianato de fluorescena)

El Ac marcado se hace reaccionar contra un preparado biolgico
Luego se expone la mx a una fuente de luz de onda corta (UV o Azul)
Cuantificamos la luz emitida por microscopia de fluorescencia en preparados histolgicos
REACCION POSITIVA: es cuando hay unin Ag-Ac produciendo una fluorescencia

Ventajas
Se pueden obtener resultados rpidos.
No es necesario realizar cultivos
Determina la identidad de un organismo muerto
Desventajas
Costos en reactivo y equipo
Debe ser realizado por personal muy especializado.
Los resultados no son 100% especficos.

Inmunohistoqumica enzimtica

Se usa el tejido del paciente, al que se le agrega anticuerpos marcados con enzimas.
Se revela el marcador y se observa la presencia o ausencia de color.
Usado para detectar antgeno, en ocasiones post mortem, por ejemplo pacientes infectados
con Rabia.

Inmunotransferencias

Inmunobloting o Western Blot

PROCEDIMIENTO

Separacin de antgeno proteico por electroforesis en gel de poliacrilamida

Transferencia del antgeno separado a una membrana de nitrocelulosa
Se incuba la membrana con el suero del paciente y se detectan los anticuerpos mediante una
anti-inmunoglobulina humana conjugada con una enzima.
Se forman bandas coloreadas donde se ha producido la reaccin antgeno anticuerpo.
Se puede usar tanto para detectar antgenos como anticuerpos.
Se emplea para confirmar resultados positivos de pruebas de tamizaje por EIA de anticuerpos
frente al virus del SIDA.

RESPUESTA INMUNE FRENTE A BACTERIAS Y HONGOS

De que va depender la inmunidad frente a bacterias?

Depende de:

1. La estructura de la superficie bacteriana

2. De su estilo de vida: extracelular e intracelular
3. De los mecanismos por los que inducen su patogenicidad.

Activacin del complemento

Fagocitosis
Respuesta inflamatoria

Inmunidad innata frente a bacterias extracelulares

Los mecanismos efectores utilizados por los anticuerpos para combatir las
infecciones por bacterias son 3:

La neutralizacin: mediada por istopos de IgG e IgA de alta afinidad.

La opsonizacion: por subclases de IgG.
La activacin del complemento: por IgM y subclase de IgG.

Defensas humanas frente a hongos

Primarias: piel, mucosas

Secundarias: Globulos blancos (macrfagos, monocitos y PMN)
Terciarias: linfocitos T y B

Existen receptores del Sistema Inmune Innato capaces de reconocer estructuras de

hongos, como los Receptores de tipo C lectinas, que inducen a activacion de
macrofagos y neutrofilos fundamentalmente.

Respuesta Inmune contra hongos

Para los hongos que colonizan el interior de las celulas, la Respuesta inmune
celular mediada por Linfocitos T CD4 y T CD8, son efectivas para controlar la
infeccion, al igual que para las bacterias intracelulares.

Factores de virulencia de candida albicans

La morfologa celular
La actividad enzimtica extracelular
El cambio de fenotipo
Los factores de adhesin

CITOMETRIA DE FLUJO

El citmetro de flujo es el aparato que es capaz de medir componentes y propiedades de

clulas y organelas celulares que fluyen en una suspensin celular.
Con la capacidad adicional de separar partculas selectivamente de la suspensin lquida.

Que es la citometria de flujo?

Es un mtodo analtico por el que se mide la emisin de fluorescencia y la

dispersin de luz de clulas o partculas micoscopicas.

FUNDAMENTO

Esta tecnologa se basa en hacer pasar clulas u otras partculas en suspensin

alineadas y de una en una por delante de un haz luminoso

Que informacion obtenemos por citometria de flujo

Tamao de la clula
Complejidad de la membrana celular
Con el uso de fluorocromos se puede detectar hasta 3 colores con un mismo laser

Principales sistemas y componentes de un citmetro de flujo.

Fluidos.- Transportar la muestra hacia el haz de luz del lser y mantener sus
propiedades fisicoqumicas.

ptico.- Iluminar las partculas de la muestra y obtener las seales de luz

resultantes en los filtros y detectores apropiados.

Electrnica.- Convertir las seales de luz en seales electrnicas que un

computador y programa de cmputo puedan interpretar.

PARMETROS QUE SE PUEDEN ANALIZAR POR CITOMETRA DE

FLUJO

Parmetros nucleares
Parmetros citoplsmicos
Parmetros de superficie
Parmetros extracelulares

Procedimiento

Se hace en 3 etapas independientes:

Fase pre-citometra: preparacin de los reactivos, preparacin de las clulas, diseo

del protocolo y coloracin de las clulas con los reactivos fluorescentes.

Fase de citometra de flujo : involucra el procesamiento de las clulas marcadas y la

recoleccin de los datos para cada una de las medidas (parmetros) realizados en cada
clula individual.

Fase de anlisis: anlisis de los datos recolectados

APLICACIONES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

Hematologa: tipificacion y conteo de clulas , reticulocitos y anlisis de medula sea .

Farmacologa :estudios de cintica celular
Inmunologa :subpoblaciones de linfocitos ,tipaje tisular
Microbiologa :diagnostico bacteriano y virico ,estudios de sensibilidad a los antibiticos

ECLIA ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA

ECLIA se basa principalmente en la utilizacin dos componentes principales:

Tris-bipiridil-rutenio, Tripropilamina

REACCIONES ANTIGENO ANTICUERPO

CARACTERISTICAS PRINCIPALES DE LOS ANTICUERPOS

1. AFINIDAD.- Es la fuerza de unin entre el Ac con su Ag y determina la atraccin entre

ellos.
2. AVIDEZ.- Es una medida de la fuerza de unin y estabilidad del complejo:
Ag multivalente Ac multivalente.
3. ESPECIFICIDAD.- Determinada por la secuencia de aminocidos de sus dominios
variables.

REACTIVIDAD CRUZADA

Es cuando un anticuerpo reacciona con otro antgeno, cuando este y el antgeno que
estimulo la produccin del anticuerpo especifico comparten un epitopo idntico o
muy similar

SIGNIFICADO FISIOLGICO DE LOS ANTICUERPOS DE ALTA

AFINIDAD Y BAJA AFINIDAD.

Hemaglutinacin y hemolisis.
Fijacin del complemento.
Anafilaxia cutnea pasiva.
Eliminacin inmunolgica del Ag.
Lesin de la membrana.
Neutralizacin del virus.
Capacidad protectora contra bacterias.
Inactivacin enzimtica.


TCNICAS
INMUNOLGICAS
Principales
motivos
de
utilizacin del diagnstico
inmunolgico
Diagnstico clnico no es significativo
Diagnstico microbiolgico es lento, complicado.
Las lesiones histolgicas son indicativas, pero pocas
veces son patognomnicas.

Los ttulos de IgG por s solos suelen indicar una infeccin

pasada o crnica
Las IgM normalmente reflejan una infeccin reciente

TITULO: es la inversa de la
mxima dilucin en la que se
obtiene un resultado positivo

SEROCONVERSIN:
Aumento
del
ttulo
de

c)
d)

Temperatura.
Carga

o
o
o
o

a)
b)

o
o
o
o
o
o
o

o
o
o

FENMENO DE ZONA O
PROZONA
Se produce cuando existe un
marcado exceso de Ac con
respecto a los determinantes
antignicos de la partcula, de
tal manera que es poco
probable que los dos sitios de
unin de la Ig puedan unirse a
dos determinantes antignicos
de dos partculas distintas,
inhibindose de este modo la
aglutinacin.
Generalmente
ocurre en las diluciones bajas
de sueros muy positivos.
CLASIFICACION

Aglutinacin directa
Aglutinacin indirecta
Pruebas de antiglobulinas
Inhibicin de la aglutinacin

TIPOS
DE
AGLUTINACION

AGLUTINACION DIRECTA
En este caso se utilizan directamente los antgenos en
una suspensin salina sin un soporte como el ltex o
carbn.
Se usan clulas muertas de los agentes infecciosos
como en la prueba de widal para la deteccin de
salmonella.
INMUNOAGLUTINACION CON LATEX
AGLUTINACION EN CARBON

REACCION
DE
PRECIPITACIN
Fundamento: un antgeno soluble, al ser puesto en
contacto con su anticuerpo especfico, forma
complejos inmunes que al encontrarse en proporciones
ptimas se insolubilizan dando una reaccin de
precipitacin.

Tipos:
Inmunoprecipitacin en medio lquido.
Inmunoprecipitacin en medio slido: Utiliza un
soporte slido gelificado en el que difunden el Ag y
Ac. Se agrupan dentro de dos categoras:
inmunodifusin y tcnicas inmunoelectroforticas.

b.1.) Inmunodifusin
En la prctica, las reacciones de precipitacin se
preparan generalmente, como reacciones de difusin
en agar, para hacer ms visible el precipitado.
Se utilizan con antgenos solubles a los que se permite
difundir en una matriz semislida
La unin antgeno-anticuerpo precipita de forma
visible y permite establecer la presencia de anticuerpos
especficos. Un ejemplo clsico de este tipo de pruebas
es la inmunodifusin en gel de agar.
Se trata de pruebas relativamente sensibles y
especficas pero con un elevado componente subjetivo
y muy engorrosas

INMUNODIFUSIN
EN
GELES DE AGAR

Inmunodifusin simple en
placa (radial):

El Ac es incorporado en el gel
de agar. El Ag de los pocillos
difunde formando anillosde
precipitacin:

PRUEBAS
DE
ANTIGLOBULINAS

Coombs directa :
Para detectar IgG y/o fracciones de C que se encuantran
fijados in vivo a la Superficie del GR.
Su positividad significa que la persona tiene Acs contra
sus GR.

Coombs indirecta:
Se busca autoAcs contra GR presentes en suero.
Una prueba positiva indica que hay Acs contra Ags de Gr.

FIJACIN
DEL
COMPLEMENTO
El complemento posee la capacidad de unirse a los
complejos antgeno anticuerpo - fijacin).
La prueba incluye la adicin de eritrocitos sensibilizados
con una hemolisina.
Si el suero posee anticuerpos especficos, se fija el
complemento y no puede unirse a la hemolisina para
lisar los eritrocitos.

Procedimiento:
Se incuba suero del paciente con el antgeno. En presencia
de anticuerpos en el suero se forman complejos
antgeno-anticuerpo.
Se aade una cantidad de complemento (todos los
elementos).
Si inicialmente se haban formado inmunocomplejos se
produce la activacin del complemento, consumiendo
todos los componentes del sistema. Si no hay
inmunocomplejos todo el sistema permanece.
Se agrega un sistema revelador constituido por hemates
unidos a anticuerpos antihemates (hemolisina)

anticuerpos x 4 o paso de
negativo a positivo
TIPOS DE REACCIONES
INMUNOLOGICAS
3.
Reacciones primarias: La unin Ag Ac se
detecta
midiendo
la
formacin
de
inmunocomplejos.
4.
Reacciones secundarias: Valoran los cambios
fsicos de la interaccin Ag-Ac tras la formacin de
inmunocomplejos.

Interacciones
Secundarias
entre Antgeno y Anticuerpo

Reacciones de Aglutinacin

Reacciones de Precipitacin

Inhibicin de la hemaglutinacin

Fijacin del complemento

Inmunodifusin

Caractersticas del Ag:

o Particulado: aglutinacion
o Soluble: precipitacion

Ph.

Tipo de Anticuerpos
Si hay complemento libre (ausencia de anticuerpos en la
muestra) se fija a los complejos hemate-hemolisina y
los eritrocitos de lisan.

TIPOS DE EIA

Homogneo:
Son en medio lquido.
No se requiere separacin de reactivos

Heterogneos:
Separacin del reactivo libre y reactivo unido.
Ag o Ac inmovilizados

o
o
o
o

REACCIONES
DE
AGLUTINACIN
Fundamento: un antgeno
particulado al ser puesto en
contacto con su anticuerpo
especfico en proporciones
ptimas, se une por medio de
enlaces
cruzados.
Este
complejo de unin reacciona,
produciendo una reaccin de
aglutinacin.
o Es un mtodo que algunas veces se utiliza para medir el
nivel de un anticuerpo srico especfico para un
antgeno particulado.
o Se realiza mezclando diluciones sricas con una
concentracin fija de antgeno.
o La dilucin ms alta de un suero que alcanza aglutinacin
visible del antgeno se denomina ttulo.

Factores que influyen sobre la

reaccin de aglutinacin

Proporcin.

Afinidad

INMUNOFLUORESCENCI

Se
utilizan
anticuerpos
conjugados con sustancias
fluorescentes
(fluorocromos
como el isotiocianato de
fluoresceina o el naranja de
acridina.

Se observa la presencia o
ausencia
de
fluorescencia
observando con un microscopio
de fluorescencia.

El principio de la tcnica de
inmunofluorescencia
de
Coons y Kaplan es:
5)
Un producto fluoresente se une a un anticuerpo.
6)
El reactivo se aplica a un corte histolgico.
7)
Los lugares de fijacin de los anticuerpos marcados
son revelados gracias a su fluorescencia (emisin
de luz visible cuando son excitados por la luz
ultravioleta).
8)
Se interpretan entonces los antgenos localizados;
por ejemplo la presencia de inmunoglobulinas
sugiere la presencia de anticuerpos.
d)
Fluorocromo: Marcador colorante fluorescente
empleado en investigacin para crear contraste
en zonas determinadas de los especmenes. Por
ejemplo (Fluoresceina, Rodamina, naranja de
acridina, yoduro de propidio)
e)
Fluorforo: Parte de una molcula
(fluorocromo, protena) que le imparte la
propiedad de fluorescencia.
f)
Fluorescencia.- propiedad de una sustancia de
emitir luz cuando es expuesta a radiaciones de
baja longitud de onda y alta energia

TIPOS
DE
INMUNOFLUORESCENCI
A

INMUNOFLUORESCENCI
A DIRECTA.- (para deteccin
de antgenos): se fija la muestra
en un portaobjetos con acetona,
se agrega el anticuerpo
marcado con el florocromo
(inmunofluerescencia directa
IFD).
Deteccin
de
Pneumocystis carinii en esputo
inducido

INMUNOFLUORESCENCI
A
INDIRECTA.(para
deteccin de anticuerpos): se
agrega primero el suero del
paciente
sobre
antgeno
improntado en portaobjetos; en
la segunda fase se incuba con
anticuerpo
anti
humano
marcada con fluorocromo
(inmunofluorescencia Indirecta
IFI)

PROCEDIMIENTO
- Unin de una molecula fluorescente a un Ac (isotiocianato
de fluorescena)
- El Ac marcado se hace reaccionar contra un preparado
biolgico
- Luego se expone la mx a una fuente de luz de onda corta
(UV o Azul)
- Cuantificamos la luz emitida por microscopia de
fluorescencia en preparados histolgicos
- REACCION POSITIVA: es cuando hay unin Ag-Ac
produciendo una fluorescencia

Ventajas
Se pueden obtener resultados
rpidos.
No es necesario realizar
cultivos
Determina la identidad de un
organismo muerto

Desventajas
Costos en reactivo y equipo
Debe ser realizado por personal
muy especializado.
Los resultados no son 100%
especficos.

Inmunohistoqumica
enzimtica
Se usa el tejido del paciente, al que se le agrega
anticuerpos marcados con enzimas.
Se revela el marcador y se observa la presencia o ausencia
de color.
Usado para detectar antgeno, en ocasiones post mortem,
por ejemplo pacientes infectados con Rabia.

Inmunotransferencias

Inmunobloting o Western Blot

PROCEDIMIENTO
Separacin de antgeno proteico por electroforesis en gel
de poliacrilamida
Transferencia del antgeno separado a una membrana de
nitrocelulosa
Se incuba la membrana con el suero del paciente y se
detectan los anticuerpos mediante una antiinmunoglobulina humana conjugada con una
enzima.
Se forman bandas coloreadas donde se ha producido la
reaccin antgeno anticuerpo.
Se puede usar tanto para detectar antgenos como
anticuerpos.
Se emplea para confirmar resultados positivos de pruebas
de tamizaje por EIA de anticuerpos frente al virus
del SIDA.

RESPUESTA
INMUNE
FRENTE A BACTERIAS Y
HONGOS

De que va depender la
inmunidad
frente
a
bacterias?

Depende de:
4.
La estructura de la superficie bacteriana
5.
De su estilo de vida: extracelular e
intracelular
6.
De los mecanismos por los que inducen
su patogenicidad.

Inmunidad innata frente a

bacterias extracelulares
Activacin del complemento
Fagocitosis
Respuesta inflamatoria

Los mecanismos efectores

utilizados por los anticuerpos
para combatir las infecciones
por bacterias son 3:
La neutralizacin: mediada por istopos
de IgG e IgA de alta afinidad.
La opsonizacion: por subclases de IgG.
La activacin del complemento: por IgM
y subclase de IgG.

Defensas humanas frente a

hongos

Primarias: piel, mucosas

Secundarias: Globulos blancos

(macrfagos, monocitos y
PMN)

Terciarias: linfocitos T y B

Respuesta
Inmune contra
hongos

Existen receptores del Sistema

Inmune Innato capaces de
reconocer
estructuras
de
hongos, como los Receptores
de tipo C lectinas, que
inducen a activacion de
macrofagos
y
neutrofilos
fundamentalmente.

Para los hongos que colonizan

el interior de las celulas, la
Respuesta
inmune
celular
mediada por Linfocitos T CD4
y T CD8, son efectivas para
controlar la infeccion, al igual
que
para
las
bacterias
intracelulares.

Factores de virulencia de
candida albicans
La morfologa celular
La actividad enzimtica extracelular
El cambio de fenotipo
Los factores de adhesin

CITOMETRIA DE FLUJO

El citmetro de flujo es el aparato que es capaz de

medir componentes y propiedades de clulas y
organelas celulares que fluyen en una suspensin
celular.

Con la capacidad adicional de separar partculas

selectivamente de la suspensin lquida.

Que es la citometria de
flujo?

Es un mtodo analtico por el

que se mide la emisin de
fluorescencia y la dispersin de
luz de clulas o partculas
micoscopicas.

FUNDAMENTO

Esta tecnologa se basa en

hacer pasar clulas u otras
partculas
en
suspensin

alineadas y de una en una por

delante de un haz luminoso
Que informacion obtenemos
por citometria de flujo
Tamao de la clula
Complejidad de la membrana celular
Con el uso de fluorocromos se puede
detectar hasta 3 colores con un mismo
laser

Principales
sistemas
y
componentes de un citmetro
de flujo.

Fluidos.Transportar
la
muestra hacia el haz de luz del
lser
y
mantener
sus
propiedades fisicoqumicas.

ptico.- Iluminar las partculas

de la muestra y obtener las
seales de luz resultantes en los
filtros y detectores apropiados.

Electrnica.- Convertir las

seales de luz en seales
electrnicas que un computador
y programa de cmputo puedan
interpretar.

PARMETROS QUE SE
PUEDEN ANALIZAR POR
CITOMETRA DE FLUJO

Parmetros nucleares

Parmetros citoplsmicos

Parmetros de superficie

Parmetros extracelulares

Procedimiento

Se
hace
en 3
etapas
independientes:

Fase pre-citometra: preparacin de los

reactivos, preparacin de las clulas,
diseo del protocolo y coloracin de las
clulas con los reactivos fluorescentes.

Fase de citometra de flujo : involucra

el procesamiento de las clulas marcadas
y la recoleccin de los datos para cada
una de las medidas (parmetros)
realizados en cada clula individual.

Fase de anlisis: anlisis de los datos

recolectados

APLICACIONES DE LA
CITOMETRIA DE FLUJO

Hematologa: tipificacion y conteo de clulas ,

reticulocitos y anlisis de medula sea .

Farmacologa :estudios de cintica celular

Inmunologa :subpoblaciones de linfocitos ,tipaje

tisular

Microbiologa :diagnostico bacteriano y virico

,estudios de sensibilidad a los antibiticos

ECLIA

ELECTROQUIMIOLUMINI
SCENCIA

ECLIA se basa principalmente

en
la
utilizacin
dos
componentes principales:

Tris-bipiridil-rutenio, Tripropilamina

REACCIONES ANTIGENO
ANTICUERPO

CARACTERISTICAS
PRINCIPALES DE LOS
ANTICUERPOS
4.
AFINIDAD.- Es la fuerza de unin entre el Ac con
su Ag y determina la atraccin entre ellos.
5.
AVIDEZ.- Es una medida de la fuerza de unin y
estabilidad del complejo:

Ag multivalente Ac multivalente.
6.
ESPECIFICIDAD.- Determinada por la secuencia
de aminocidos de sus dominios variables.

REACTIVIDAD CRUZADA

Es cuando un anticuerpo
reacciona con otro antgeno,
cuando este y el antgeno que
estimulo la produccin del
anticuerpo
especifico
comparten un epitopo idntico
o muy similar

SIGNIFICADO
FISIOLGICO DE LOS
ANTICUERPOS DE ALTA
AFINIDAD
Y
BAJA
AFINIDAD.
- Hemaglutinacin y hemolisis.
Fijacin del complemento.
Anafilaxia cutnea pasiva.
Eliminacin inmunolgica del Ag.
Lesin de la membrana.
Neutralizacin del virus.
Capacidad protectora contra bacterias.
Inactivacin enzimtica.