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24/08/2015

CINTICA PROCESSO FERMENTATIVO


1. INTRODUO
Cintica das fermentaes descreve o crescimento do
MO e a formao do produto pelo MO
Nutriente (S) + MO (X)

Produto (P) + MO (X)

Quais substncias (consumidas e produzidas) devemos

escolher para estudo cintico?


S limitante
P de interesse

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CINTICA PROCESSO FERMENTATIVO


Para

realizar

estudo

cintico

proceder

fermentao e de tempos em tempos coletar alquotas do


caldo fermentado para determinar [S], [P] e [X]
Objetivos do estudo cintico
Representao grfica do processo fermentativo com o
tempo

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CINTICA PROCESSO FERMENTATIVO


2. Cintica do Crescimento Microbiano
Crescimento do MO Caracterizado por um acrscimo
em massa celular
Ocorre somente quando certas condies so satisfeitas
Condies fsicas e qumicas
pH, T (C) e [nutrientes]
Crescimento populacional definido como o aumento do
n cellas ou da massa microbiana
Taxa de crescimento a variao do n de clulas ou
massa de MO por unidade de tempo

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CURVA CRESCIMENTO MICROBIANO

A B = fase de latncia ou fase lag


B C = fase de transio
C D = fase logartmica ou fase log
D E = fase linear de crescimento

E F = fase de desacelerao
F G = fase estacionria
G H = fase de morte ou declnio
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CURVA CRESCIMENTO MICROBIANO

A = fase lag
B = fase log
C = fase estacionria
D = fase declnio
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CRESCIMENTO MICROBIANO
1) Fase de latncia ou fase lag

Fase de adaptao = fase de ajuste


Perodo varivel
Ainda no h um aumento significativo da populao
tx. de crescimento ~ zero
Inicia logo aps a inoculao
Clula sintetiza enzimas necessrias ao seu metabolismo
reorganizao celular no novo meio
Durao depende de: Valor de X0; composio do meio;
idade e viabilidade celular

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2) Fase de Transio
3) Fase Log
Clulas j esto totalmente adaptadas, absorvendo os

nutrientes, sintetizando seus constituintes, crescendo e se


duplicando
Perodo

de

crescimento

balanceado

velocidade

especfica de crescimento, constante


A taxa de crescimento exponencial varivel, de acordo
com o tempo de gerao do organismo em questo.

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O tempo de gerao (Tg) o intervalo de tempo


necessrio para que uma clula se duplique.
O tempo de gerao varivel para os diferentes
organismos, podendo ser de 10 a 20 minutos at dias,
sendo que em muitos dos organismos conhecidos, este
varia de 1 a 3 horas
Nesta fase so realizadas as medidas de Tg
Fase log representada por uma reta no grfico semi-

log de lnX versus tempo

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4) Fase Linear de Crescimento


5) Fase de Desacelerao
Em algum momento do cultivo rX comea a diminuir
desaparecimento de algum nutriente ou acmulo de um P
inibidor
velocidade de crescimento
Clula passa por transio at que rX = zero (fase
estacionria)

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6) Fase Estacionria
X atinge valor mximo e constante = Xm

Nesta

etapa

no

um

crescimento

lquido

da

populao, ou seja, o nmero de clulas que se divide


equivalente ao nmero de clulas que morrem
Tx. de crescimento = zero
Equilbrio entre velocidade de crescimento e velocidade
de morte crescimento lquido da populao = zero
na fase estacionria que so sintetizados vrios
metablitos secundrios
5) Fase de Morte
Rompimento do MO (lise celular)
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2.1 Velocidade Especfica de Crescimento Celular
Devido ao fato de que a concentrao microbiana X
aumenta

durante

consequentemente

um

cultivo,

aumentando

concentrao

do

complexo

enzimtico responsvel pela transformao do S em P


Mais

correto

instantneas

analisar

com

os

relao

valores

das

referida

velocidades
concentrao

microbiana especificar o valor de X em um dado


instante analisado = Velocidade Especfica de Crescimento

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VELOCIDADE ESPECFICA DE CRESCIMENTO CELULAR


Em cintica de fermentaes no usado a varivel r

(veloc. instantnea de crescimento) e sim usado o valor


de
X = [celular] (g/L)
t = tempo
rX = veloc. Instantnea (g/L.h)

velocidade

crescimento celular

especfica

de

(h-1)

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VELOCIDADE ESPECFICA DE CRESCIMENTO CELULAR


Integrando dX/dt = X, quando constante, temos:

Quando t = Tg, isto , tempo requerido para X2 = 2X1,


chamado tempo de gerao, temos:
assim,

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VELOCIDADE ESPECFICA DE CRESCIMENTO CELULAR


Podemos representar o crescimento exponencial (fase

log) pela seguinte reta:


a inclinao da reta
lnX

tempo

Eq. Usada para calcular na fase log

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VELOCIDADE ESPECFICA DE CRESCIMENTO CELULAR


e Tg so parmetros importantes em microbiologia
permitem prever a evoluo da [X] ao longo da fase log
Usados para avaliar a resposta do MO s diversas
condies do ambiente

fase exponencial

mx

fase lag

fase estacionria
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CINTICA PROCESSO FERMENTATIVO


3. Cintica de Consumo de Nutrientes

Dispondo dos dados de concentrao de nutrientes no tempo


de fermentao, como mostrado, em destaque, na curva da
figura abaixo, possvel obter a velocidade de consumo de
nutrientes em cada ponto
[]

s
X

A velocidade de consumo de S a
derivada em cada ponto (rS = dS/dt)

X
P

s
tempo
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CINTICA DE CONSUMO DE NUTRIENTES


No estudo das cinticas fermentativas no usado a varivel
velocidade de consumo de nutrientes (rS) e sim a Velocidade
Especfica de Consumo de Nutrientes (s) que definido da
seguinte maneira:

dS
X dt

Onde:
S = Concentrao de nutrientes (g/L)
X = Concentrao celular (g/L)
T = Tempo (h)
s = Velocidade especfica de consumo de nutrientes (h-1)
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CINTICA PROCESSO FERMENTATIVO


4. Cintica de Formao de Produto
Formao de produto metablito pode ser relacionada a
consumo de nutriente.
Alm do mais, formao de produto no pode ocorrer sem a
presena de clulas.
Assim, esperado que o crescimento de X e a formao de P
estejam intimamente relacionados utilizao de nutrientes.
Dependendo

dos

formao

produto

de

controles
ser

metablitos
ligada

regulatrios,

crescimento

e/ou

concentrao celular.

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CINTICA DE FORMAO DE PRODUTO


A relao cintica entre crescimento e formao de produto
depende do papel do produto no metabolismo celular.
As duas cinticas mais comuns so aquelas que descrevem a

sntese do produto durante o crescimento e aps o crescimento


ter cessado.
Um exemplo menos comum aplica ao caso onde o crescimento
inicialmente ocorre sem formao de produto, mas aps algum
perodo de tempo o produto comea a aparecer enquanto o
crescimento continua.

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CINTICA DE FORMAO DE PRODUTO


[ ]

[ ]

(a) Formao de P associado ao crescimento

[ ]

t
(b) Formao de P parcialmente associado
ao crescimento

X
P

t
(c) Formao de P no associado ao crescimento

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No grfico (a) a formao de produto associado ao


crescimento celular.
No grfico (b) temos formao de produto associado ao
crescimento, de uma forma mais ou menos confusa, chamada de
formao de produto parcialmente associada ao crescimento.
No grfico (c) temos formao de produto no associada ao
crescimento.
A velocidade de formao de produto a derivada de P em
cada ponto dP/dt. Da mesma forma dP/dt no usado
(velocidade de formao de produto) e pode ser transformada
em Velocidade Especfica de Formao de Produto (P) que
definido da seguinte maneira:

dP
X dt

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CINTICA PROCESSO FERMENTATIVO


5. Fatores de Converso
O crescimento de X e a formao de P por X so processos de
bioconverso

convertido

em

metablitos,

principalmente P
Cada uma destas converses pode ser quantificada por um
coeficiente de rendimento = massa de clulas ou produto
formado por unidade de massa de S consumido
YX/S fator de converso de S em X
YP/S fator de converso de S em P

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CINTICA PROCESSO FERMENTATIVO

Processos onde o P principal so clulas, ou seja, o objetivo


a produo de X maximizar o crescimento celular e
minimizar a formao de P YX/S > YP/S
Processos onde o P principal so metablitos maximizar
formao de P e minimizar o crescimento de X YP/S > YX/S
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CINTICA PROCESSO FERMENTATIVO


6. Influncia da [S] sobre a velocidade especfica de
crescimento
A velocidade de crescimento, como uma velocidade de reao
qumica, uma funo da concentrao de compostos qumicos.
Os

compostos

qumicos

nesse

caso

so

os

nutrientes

essenciais para o crescimento.


A forma da relao entre velocidade de crescimento e
concentrao de nutriente foi observada em 1949 por Monod,
sendo similar cintica de saturao exibida por adsoro

monomolecular de Langmuir.

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6.1 Equao de Monod
A eq. de Monod(1949) usada para explicar a relao entre
[S] e X

m = Velocidade especfica mxima de crescimento celular


KS = Constante de saturao

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6.2 Significado de KS

Se considerarmos KS = S, na equao de Monod temos:

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No inicio do cultivo, [S] alto o MO apresenta prximo


m
Quanto menor o valor de KS mais amplo ser o patamar,
quase horizontal da curva X S

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Na teoria nunca atingido o valor de m, por mais alta que
seja a [S] inicial
Na prtica, os valores experimentais podem ser considerados
como tal isso devido aos erros que afetam os valores
calculados de X
A idia sempre trabalhar com S que apresente menor valor
de KS maior rendimento do processo fermentativo
6.3 Determinao das Constantes Cinticas
A forma grfica de determinar as constantes cinticas da eq.
de Monod chamada de linearizao de Lineweaver-Burk =
inverso da eq. de Monod

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Os valores de KS so muito pequenos em relao a [S] nas


fermentaes industriais
~ m quando [S] = 10KS
Para [S] < 10 KS uma forte funo da [S]
Durante a fase exponencial constante
Quanto menor valor de KS, maior rendimento da fermentao
Para determinar valores de KS e m fazer linearizao e pela
equao da reta determinar estas constantes cinticas

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