輔仁大學食品科學研究所食品營養與生物醫學當代研究機能性保健食品/健康食品之安全性與功效性評估

輔仁大學食品科學研究所
食品營養與生物醫學當代研究
機能性保健食品/健康食品
之安全性與功效性評估
工業技術研究院
生技與醫藥研究所
曾湘文
tsenghw@itri.org.tw
Dec. 30, 2009
Copyright 2008 ITRI 工業技術研究院 1
Outlines
各國機能性保健食品管理制度概況
健康食品管理簡介
安全性評估之重要性
實驗動物使用與健康食品評估
健康食品安全性與功效性評估試驗

日本機能性食品(Functional food)分類
1984 年日本文部省的「食品機能系統的解析與拓展」專案
研究衍生「機能性食品 (functional foods)」的名詞
1991年正式把「機能性食品」正名為「特定保健用食品」
(Foods for Specified Health Use, FOSHU) ，1995 年日本核可
第一件產品。
2001 年頒定「食品之保健宣稱 (Foods with Health Claims,
FHC)」規定，將具有生理功能的「營養機能性食品 (Foods
with Nutrient Function Claims, FNFC): 維生素與礦物質」納
入保健機能食品的管理範圍。許朝凱，食品生技 2007年

美國膳食補充品(dietary supplements)分類
1994 年通過「膳食補充品的健康資訊及教育法案 (Dietary
Supplement Health and Education Act, DSHEA)」，將「食品」、
「膳食補充品」與「藥品」三大類產品的管理範疇做清楚界定，
並且明文規定美國聯邦藥物食品管理局 (Food and Drug
Administration, FDA) 為主管單位。
根據膳食補充品所含有的膳食成分(dietary ingredient)種類包括：
1. 維他命（vitamins）。
2. 礦物質（minerals）。
3. 草藥、及其他植物類（herbs or other botanicals）。
4. 胺基酸（amino acids）。
5. 可作為補充日常膳食攝取總量不足之用的他類可供膳食之用的物質
（other dietary substances for use by man to supplement the diet by increasing the
total dietary intake）。
6. 任何前述的濃縮品、代謝物、組成物、萃取物、或是組合均可稱為膳食補充
品 Concentrates, metabolites, constituents, extracts, or any combination of the
dietary ingredients set forth above are also included in this definition）。
7. 煙草絕不屬於膳食補充品的定義之內（Tobacco specially was excluded from the
definition）。
DSHEA 規定膳食補充品以 (1) 健康訴求 (Health claim) 及 (2) 影響
人體生理結構和機能訴求 (Structure/Function claim) 來宣傳，但不
得使用療效 (Drug claim) 的字樣。目前准許的健康訴求 (Health
claim) 項目計有14 類。
許朝凱，食品生技 2007年
中國大陸「保健食品」分類
中國衛生部於1996年頒布「保健食品管理辦法」，
並自同年6 月1 日起實施。
2003年10 月保健食品的審批由衛生部改為國家食
品藥品監督管理局 (State Food and Drug
Administration; SFDA) 辦理。
2004 年3 月SFDA組織制定「保健食品註冊管理辦
法(試行)」，並於2005 年4 月30 日公布，7 月1 日
開始實施。
2003 年發布的「保健食品檢驗與評價技術規範」，
目前受理的保健功能項目共有27 項。
健康食品管理法
我國健康食品管理法於1999 年2 月3 日公布，8 月3 日正式
施行。 2006 年4 月立法院修正通過，並於5 月17 日發布。
健康食品管理法第二條，對健康食品的定義為「指具有保
健功效，並標示或廣告其具該功效之食品」，
而所稱的保健功效定義為「增進民眾健康、減少疾病危害
風險，且具有實質科學證據之功效，非屬治療、矯正人類
疾病之醫療效能，並經中央主管機關公告者」。
凡食品符合下列條件者，屬健康食品：
一、提供特殊營養素或具有特定之保健功效。
二、特別標示或廣告「提供特殊營養素」或「具有特定之
保健功效」。以上一為本質、二是行為，兩項條件都必須
符合，纔是本法所稱之健康食品。
通過雙軌查驗登記制度，即保留現行的個案審查制度( 第一
軌)，同時也開放產品符合衛生署所訂規格標準的查驗登記
方式 ( 第二軌)，只要產品的成分符合規格標準，並經申請
核定後，即可成為健康食品。
健康食品管理法
依本法之規定申請查驗登記之健康食品，符合下
列條件之一者，應發給健康食品許可證：
 (第一軌)以個案審查為主，經科學化之安全及保健功效評估試
驗，證明無害人體健康，且成分具有明確保健功效；其保健
功效成分依現有技術無法確定者，得依申請人所列舉具該保
健功效之各項原料及佐證文獻，由中央主管機關評估認定之。
衛署健食字第Axxxxxx號。
 (第二軌)是以食品成分符合中央主管機關所定之健康食品規格
標準。衛署健食字第規xxxxxx號。
第一項健康食品安全評估方法、保健功效評估方
法及規格標準，由中央主管機關定之。中央主管
機關未定之保健功效評估方法，得由學術研究單
位提出，並經中央主管機關審查認可。

健康食品安全及功效評估方法
(第一軌) 個案審查
牙齒保健功能評估方法(88.08.02)
免疫調節功能評估方法(88.08.02)
胃腸功能改善評估方法 (92.08.29)
改善骨質疏鬆評估方法(92.08.29)
護肝功能評估方法(針對化學性肝損傷) (92.08.29)
抗疲勞功能評估方法(92.08.29)
延緩衰老功能評估方法 (92.08.29)
促進鐵吸收功能評估方法(95.09.25)
輔助調節血壓功能評估方法 (95.09.25)
不易形成體脂肪功能評估方法 (96.07.12 )
輔助調整過敏體質功能評估方法(96.07.12 )
調節血糖功能評估方法(96.07.12 )
調節血脂功能評估方法(96.07.12 )
目前已有173件健康食品許可證字號 (2009/12止) 。

「衛生署健康食品保健功效評估方法修訂」
2009/11/3
免疫調節功能評估方法之修訂
輔助調整過敏體質功能評估方法之修訂
抗疲勞功能評估方法之修訂
延緩衰老功能評估方法之修訂
調節血糖功能評估方法之修訂
護肝功能評估方法之修訂
 針對四氯化碳誘導化學性肝損傷
 針對常用止痛藥物乙醯胺基苯酚誘導化學性肝炎損傷
 針對應用硫代乙醯胺(thioacetamide)誘導肝纖維化之慢性肝損
傷
 針對應用酒精液態飼糧誘導酒精性脂肪肝

健康食品安全及功效評估方法
(第二軌) 衛生署公告的規格標準
目前已公布魚油、紅麴健康食品規格標準，與
難消化糊精尚未公布。
以紅麴為例，只要提出檢驗報告，證實含有足
夠量的功效成分即可，但僅能在產品上敘述保
健功效為：「本產品可能有助於降低血中總膽
固醇」，並須加註「本產品功效由學理得知，
非由實驗確認」的字樣。
目前已有魚油三件、紅麴三件健康食品許可證
字號。 (2009/12止)

生物安全性試驗評估對人體的保護
 以細胞或實驗動物為模式，以評估測試物質的毒理性質及其
與劑量的相關性；並預知其毒性程度、毒性標的器官、毒性
復原性及毒性遲發性。
 用以建立臨床人體試驗的安全劑量及各項毒性反應指標及檢
測參數。

生物安全性評估系統應用領域
健康食品
包裝材料新藥開發
安全性評估
工業環境醫療器材
化學製品

藥物開發臨床前試驗
當開發或設計的分子，証實具有醫療潛力，即步入臨床前評估階段。
為一系列體內、體外之測試，以決定安全性及藥物活性。
藥物療效與活性:
藥物動力學(pharmacokinetics)、療效(efficacy)
吸收、分佈、代謝、排除(absorption, distribution, metabolism,
excretion)
安全性: 生物安全性評估(bio-safety assessment)
動物試驗:非臨床/臨床前(Preclinical Trial)
人體試驗:即為臨床試驗(Clinical Trial)

實驗動物使用與安全性評估
動物實驗管理小組 (IACUC)
3R 原則
---Replacement, Refinement, Reduction
 取代化 (Replacement)、
 精緻化 (Refinement)及
 減量化 (Reduction)，

健康食品之申請
1. 申請廠商基本資料表及健康食品查驗登記表
2. 產品原料成分規格含量表。
3. 產品之安全評估報告。
4. 產品之保健功效評估報告。
5. 保健功效成分鑑定報告及其檢驗方法。
6. 保健功效安定性試驗報告。
7. 產品製程概要。
8. 良好作業規範之證明資料。
9. 產品衛生檢驗規格及其檢驗報告。
10. 一般營養成分分析報告。
11. 相關研究報告文獻資料。
12. 產品包裝標籤及說明書。
13. 申請者營利事業登記證影本。
14. 完整樣品及審查費。
15. 磁碟片乙片。

健康食品安全性評估方法
880802 衛署食字第88037803號公告
為評估健康食品之安全性，依健康食品管理法第
三條第二項規定訂定本方法。本方法規定健康食
品安全性評估資料及毒性試驗項目及方法。
毒性試驗之操作規範
 研發所需進行之非臨床試驗請參考衛生署87年6月29日公告之
「藥品非臨床試驗優良操作規範」進行，並妥善保存所有觀
察結果、原始數據及文書紀錄，以確保各項試驗數據之品質
及試驗之完整性與可信度。

健康食品安全性評估之分類
第一類 :傳統食用 /通常加工 /文獻完整
 安全評估 : 不需
第二類 :傳統食用 /非通常加工
 安全評估 : A+B
第三類 :非傳統食用
 安全評估 : A+C+D
第四類 :非傳統食用 /含致癌類似物
 安全評估 : A+C+D+E
A. 基因毒性試驗 D. 致畸試驗
B. 28 天餵食毒性試驗 E. 致癌性試驗 / 繁殖試驗
C. 90 天餵食毒性試驗
劑量決定與總量估算

劑量換算
代謝率: 6.25(rats)/9.1(mice)
體表面積係數: 0.018(rats)/0.0026(mice)
體表面積係數: 6.2
攝食乾重: 500 g/day
體重直接換算

安全性試驗之分類
一般毒性試驗(General toxicity study)
 單劑量急性毒性試驗
 重覆劑量亞急性與亞慢性毒性試驗
 慢性毒與致癌性毒性試驗
特殊毒性試驗(Specific toxicity study)

 基因毒性試驗
 生殖與發育毒性試驗
 皮膚、眼球、免疫、神經及其他毒性試驗

健康食品安全性評估試驗
1. 基因毒性試驗
 Gene mutation test with bacteria
 Chromosomal aberration with mammalian cells in culture
 Micronucleus test with rodents
2. 28天重複劑量亞急性毒性試驗
3. 90天重複劑量亞急性毒性試驗
4. 致畸性試驗
5. 致癌性試驗
6. 繁殖毒性試驗

（一）基因毒性試驗(Genotoxicity study)
可分為體內(in vivo)與體外(in vitro)測試，其目的

為偵測試驗物質直接或間接引發的基因傷害及程
度。
一般基因毒性試驗有助於預測試驗物質的致癌性，
且有助於致癌性試驗的結果分析。
試驗物質須進行三種以上的基因毒性測試，包括：
 微生物基因突變分析，
 體外哺乳類細胞基因毒性分析，
 動物體內基因毒性分析。

微生物基因突變分析
使用細菌基因突變測試法 (gene mutation in bacteria)
菌株，需使用下列5種菌株：
 ⅠS. typhimurium TA98
 ⅡS. typhimurium TA100
 Ⅲ S. typhimurium TA1535
 Ⅳ S. typhimurium TA1537、TA97、或TA97a ，擇一使用。
 Ⅴ S. typhimurium TA102、E. coli WP2 uvr A、或E. coli WP2 uvr A (pKM101) ，擇一使
用。
劑量範圍
 進行五個以上劑量組，最高劑量須足以產生明顯的毒性。
 毒性之產生可由初步試驗中逆突變的菌落 (revertants)數量的減少測得。若試驗物質為高
溶解度低毒性物質，最高劑量為5 mg/plate，若試驗物質具有明顯的抗菌活性，則以產生
抗菌活性的劑量作為最高劑量。若試驗物質為低溶解度物質，則以產生最少沈澱物的濃
度作為測試的最高濃度，但不超過5 mg/plate。
對照組:包含陰性對照組及陽性對照組。
代謝活化 (Metabolic activation) 進行含有及不含有S9混合物的測試。

測試方法
 前置培養法 (Preincubation method)，或
 平板混合試驗法 (Plate incorporation method)
試驗結果:每盤培養皿中突變菌落的數量，須以各測試點之平均值，再以表格
方式詳細記錄。
體外哺乳類細胞基因毒性分析
體外哺乳類細胞的染色體異常分析法 (In vitro
Chromosomal aberration test with mammalian cells in
culture) ，描述染色體變異的種類及數量，並計算含染色體
結構變異細胞之頻率。
體外鼷鼠淋巴瘤tk分析法 (In vitro mouse lymphoma tk

assay)。計算細胞之存活率、複製效率及細胞致突變之頻率。
染色體結構異常分析(chromosomal aberration):是收集分裂
中期之細胞，製作染色體玻片，在顯微鏡下觀察染色體
(chromosome)之形態並分析結構異常之比例。

動物活體基因毒性分析
使用5隻囓齒類動物造血細胞的染色體傷害分析法
(In vivo test for chromosomal damage using rodent
hematopoietic cells)。
染色體異常測試法:染色體變異的細胞總數，或每
個細胞變異的頻率。
骨髓細胞或周邊血液之微核測試法(Micronucleus
assay): 記錄多染性紅血球或網狀紅血球
(reticulocyte)中微核(micronuclei)發生的數目，及
多染性紅血球或網狀紅血球佔全部紅血球的比例。

健康食品安全性評估
一般毒性試驗
II. 重覆劑量毒試驗
亞急性毒試驗(Subacute toxicity study):每天連續投與14或28天投與，並進行以
一半數目動物的14天恢復期試驗
亞慢性毒試驗(Subchronic toxicity study): 3至6個月投與
目的:
評估測試物質重覆使用所造成的累積性毒性、測試物質毒性標的器官、及毒性
之復原性。以瞭解毒性變化之產生，或同時測定無毒性顯示之劑量(no-
observed-adverse-effect-level; NOAEL 或no-observed-effect-level;
NOEL)及其致癌性。
方法:
持續不同時間內，重覆給予動物試驗物質
觀察臨床症狀與毒性反應
臨床病理檢驗
組織病理診斷

（二、三）28/90 天餵食毒性試驗
(28/90-day feeding toxicity study)
囓齒類，最常使用的動物為鼠，雄、雌至少各10隻動物，週
齡為5-6週。
至少要有三個劑量組：
(1) 高劑量為該劑量足以使試驗動物產生毒性症狀，但不造成死亡；
(2) 低劑量為不會引起毒性的劑量；
(3) 中間劑量為足以引起最低毒性作用 (如血中酵素值改變或體重成長速度
下降)。
觀察與檢驗
 臨床觀察:
 體重與食物消耗量
 臨床病理檢驗:血液檢驗 (Hematology) 、血清生化檢驗 (Clinical
Chemistry) 、尿液檢驗 (Urinalysis) 、眼睛檢查 (Ophthalmological
examination) 。
 組織病理檢驗:一般器官與組織的組織病理檢驗及稱重之項目如下，但
可依試驗性質之特性及肉眼檢查發現之異常變化而有所增減：
 臟器稱重：liver、adrenals、kidneys、gonad等分別稱重。
 組織病理檢驗：adrenals、heart、kidneys、liver、spleen、及目標器官。

臨床前試驗-安全性評估
生殖與發育毒性試驗
(四)致畸胎性試驗 (Teratogenicity)
器官發生期，評估試驗物質對胚胎發育之影響及造成畸胎之可能性。
動物:
 小鼠、大鼠；雌雄1:1共居一飼養箱中；每組共20對；兔子則
為每組共12對。
投藥期:
 雌大鼠、小鼠為第6-15懷孕日
 雌兔為第7-16懷孕日
 觀察項目:
於第20懷孕日(兔子則第29懷孕日)，全部雌性動物進行解剖，檢
測其懷孕成功率、胎兒的死亡率、黃體數目等。同時肉眼觀察雌
性動物的器官與組織變化。
檢查產仔數、測生存胎兒稱重、性別判斷、檢查外表、內部器官
等。
新生兒進行骨骼與內臟組織檢查。

一般毒性試驗
(五)致癌性試驗(Carcinogenicity)
目的:
 在1至2年(囓齒類動物)的試驗期間中，確定長期投與測試物質
在動物身上造成腫瘤的可能性，以評估測試物質是否可長期
使用。
方法:需使用兩種以上囓齒類動物動物
 初步致癌性試驗:單一劑量毒性試驗，90天重覆劑量毒性試驗
 長期致癌性試驗:小鼠為24個月，而鼷鼠與倉鼠則為18個月
觀察項目
 觀察臨床症狀與毒性反應
 臨床病理檢驗
 組織病理診斷

生殖與發育毒性試驗
(六)繁殖試驗(Fertility and reproductive toxicity)
懷孕前至懷孕初期，評估試驗物質對雌、雄兩性動物的生殖力
及對受精卵運送著床的影響。
動物:
 小鼠、大鼠；雌雄1:1共居一飼養箱中；每組共20對。
投藥期:
 雄鼠 (約5-6周齡)，每天投藥共60天，在進行交配期間內亦每天投藥，至交配
成功為止。
 雌鼠為性成熟(約9-10周齡)，投藥兩周，然後進行交配，交配期間亦每天投
藥，至交配成功後，持續投藥至胚胎器官形成期(約為6th懷孕日)
 觀察項目:
 雄鼠交配成功後，以安樂死解剖，觀察睪丸與副睪。
 雌鼠懷孕第21天，以安樂死解剖，檢查卵巢黃體數目，胚胎著床與被吸收數目，
及胚胎死亡率。
 交配指數=(交配成功的動物數目/動物同居的數目) ×100
 生育力指數=(雌性動物懷孕的數目/交配成功的雌性動物數目) ×100

試驗技術與項目
1. 動物飼養與臨床觀察
 動物房環境與進出管控
動物房保持在溫度23±2℃、濕度50±10%及光照12小時亮、12
小時暗。
 試驗期間之動物臨床觀察包括眼睛檢查、使用檢眼鏡檢查眼
睛的外部及內部構造。
 定期之飼料攝取、體重增減紀錄
 試驗工作、藥物投與

2. 臨床病理
 血液檢驗: hematocrit、hemoglobin、erythrocyte count、total and
differential leukocyte counts 及凝血因子 (例如clotting time、
prothrombin time、activated partial thromboplastin time ) 等之測量。
 血清生化檢驗: 血清生化檢驗內容包括電解質的平衡、醣類的代
謝、及肝與腎功能等。
 尿液檢驗: 顯微鏡觀察尿沈渣，測量尿液之量、酸鹼值與比重，
並測量尿液中之protein, glucose, ketones, bilirubin 與 occult blood
等。

3. 肉眼觀察
 試驗期間進行臨床觀察，並記錄動物是否有臨床症狀或其他
異常。
 動物飼養期間如有死亡狀況時或飼養期間結束時得以安樂死
人道處理（euthanasia）犧牲剖檢動物，並找出致死原因
（cause of death）並計算動物存活率（survivability）。
 屍體剖檢時，肉眼觀察及記錄動物的器官與組織之變化，並
測量主要臟器重量。
 器官絕對重量值(absolute value)與相對重量值(relative value)
(v.s. brain) 。

4. 組織病理診斷
 試驗結束後，將各組動物以乙醚麻醉犧牲後剖檢，取出臟器稱
重後以10％中性福馬林緩衝液固定保存，經組織固定、脫水及
蠟浸潤處理，再以組織包埋機製作成組織蠟塊，組織蠟塊以旋
轉式切片機切成厚度約為 2-4 μm 的石蠟薄片，經H.E.
（hematoxylin and eosin stain）染色、封片製作成組織病理切
片後，由毒性病理師做顯微鏡觀察診斷。

健康食品-功能性評估分類 (88個字號 2007)
健康功能產品
調降血脂(32) 威望身寶寧、賜多利奶粉、紅麴清醇膠囊、歐妙精製魚油膠囊、桂格大燕麥片、桂格即沖即食大燕麥
片、桂格三寶燕麥、金車甲殼素複方膠囊、益百康、健康食用油、瑞沛保健膠囊、可果美蕃茄汁、紅
麴膠囊、益品年食用油、悅寶甘蔗原素錠、得意的一天高單元葵花油、統一低糖高纖豆漿、世展水
溶性甲殼素、益品年食用油、茶裏王日式無糖綠茶、御茶園每朝健康綠茶、引藻片、桂格紅麴養生
穀粉、賜多利奶粉、可立清粉末飲品、天然紅麴、桂格高鈣脫脂奶粉、桂格黃金麩片燕麥片、清醍醐
養生液、養生茶、統一植醇牛奶、愛之味蕃茄汁
調節腸胃道(27) 統一AB優酪乳、賜多利奶粉、雙歧桿菌、奧利多碳酸飲料、味全優酪乳、豐力富奶粉、複合益生菌、
優沛蕾低脂原味醱酵乳、優沛蕾活菌球醱酵乳、優沛蕾ABC三益菌原味優酪乳、光泉晶球優酪乳— 低
脂、桂格成長奶粉健康三益菌配方、金車乳酸活菌、康貝兒乳酸菌、桂格高鈣脫脂奶粉健康三益菌配
方、養樂多活菌發酵乳、林鳳營優酪乳、桂格全家奶粉、美之水纖維飲料、TCELL-1乳酸菌粉、暢樂
有益菌顆粒、威望常寶寧、LGG優酪乳、田中寶養生液、如新華茂益生菌配方、凝態活性發酵乳(大
粒果實)、雅芳康采乳酸菌
骨質疏鬆威望佳美錠
牙齒保健(2) 波爾益牙口香糖(綠茶薄荷)、益齒達® 無糖口香糖-薄荷
調整免疫(8) 雙鶴極品靈芝、高境界乳漿蛋白、人生樂膠囊、如新超級靈芝、靈芝王、田中寶養生液、統一活力寶
典特級蜂膠、賜多利奶粉
調節血糖(2) 加特福GT&F奶粉、炳翰人參粉
護肝(9) 雙鶴極品靈芝、如新華茂超級靈芝、維力康膠囊、順康500香菇菌絲體萃取物、洛神花保健膠囊、統
一活力寶典極品靈芝、桂格養氣人蔘、白蘭氏五味子芝麻錠、富得康北蟲草(蛹蟲草)膠囊
抗疲勞(4) 白蘭氏雞精、人生樂膠囊、如新華茂蟲草精沛膠囊、統一四物雞精
延緩老化雙鶴御品靈芝
不易形成體脂花王益品年食用油、統一綺麗健康油
(2)
健康食品之調節血脂功能評估方法
健康食品之胃腸道功能改善評估方法
健康食品之護肝功能評估方法(針對化學性肝損傷)
健康食品之免疫調節功能評估方法

健康食品之調節血脂功能
評估方法
以倉鼠(Hamster)為試驗動物
每組動物≧8隻, 實驗期4-8週
實驗飼料含該保健食品之劑量應為換算成廠商所建議消費
者之每天攝取量的 1-5倍之間
研究組別分為
1. 控制組(基礎飼料)
2. 高油組(飼料含10％油脂與0.2％膽固醇)
2. 正控制組(可調節血脂之物質處理 )
3. 實驗組(試驗樣品處理)

健康食品之調節血脂功能
評估方法
血脂質測定指標：
(1)血清三酸甘油酯（TG）、血清總膽固醇（TC）、高密度脂
蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)值。
(2)高油組飼料可含10％油脂與0.2％膽固醇。經飼養適當週數
後，高油組之血脂質會逐漸上升，若攝取含檢測樣品飼料
的實驗組，其血脂質明顯(P<0.05)低於高油組，則可認定
該產品具降低血脂質之功能。
(3)測定LDL對氧化之穩定度，當實驗組之LDL被氧化所需之
誘發時間(Lag phase)比控制組顯著延長(P<0.05)時，則可宣
稱「攝取該產品可延緩低密度脂蛋白之氧化」。

健康食品之胃腸道功能改善
評估方法
改善腸內細菌菌相
1.檢測1種益生菌：Bifidobacterium
2. 檢測1種有害（或無益）菌：Clostridium
perfringens
改善胃腸道運動
 可促進腸道運動
 有助於增加排便量

改善腸內細菌菌相評估方法
試驗動物：6週大雄性 Sprague Dawley（SD）rat
每組動物≧8隻, 實驗期至少5週
採樣：
餵食期結束後，以按摩方式收集動物糞便，或取
盲腸（cecum）內容物，加入無菌厭氧稀釋液，震
盪器混合，進行稀釋及微生物平板塗抹並置入厭
氧操作箱中培養。

改善胃腸道運動評估方法
試驗動物：雄性大、小鼠(胃腸運動試驗)；雄性大鼠(排便
試驗)
每組動物8-10隻, 實驗期至少5週
胃腸運動試驗：
 小鼠禁食後經口投予試驗物質，投予試驗物質30分鐘後，經口投予
活性炭或放射性物質，30分鐘後立即脫頸椎犧牲小鼠，測量幽門至
盲腸的長度為小腸總長度，幽門至活性炭前沿為活性炭推進長度。
排便試驗：
 糞便量測定時，大鼠投予藥物後置放於代謝籠，隔16-18小時收集糞
便一次，由糞便乾重與溼重算出含水量百分比。
若糞便的重量或粒數明顯增加，以及胃腸運動試驗於實驗
組優於對照組者，則稱之具改善胃腸道運動功能。

護肝功能評估方法之修訂(2009/11/3)
針對四氯化碳誘導化學性肝損傷
針對常用止痛藥物乙醯胺基苯酚誘導化學性肝炎
損傷
針對應用硫代乙醯胺(thioacetamide)誘導肝纖維化
之慢性肝損傷
針對應用酒精液態飼糧誘導酒精性脂肪肝

健康食品之護肝功能評估方法
(四氯化碳誘導化學性肝損傷 )
因四氯化碳受肝微粒酵素活化成三氯甲烷自由基，然後與
蛋白質結合導致蛋白質合成受阻，並引起脂質分解代謝失
調，引起肝細胞內三酸甘油酯蓄積，另外三氯甲烷自由基
形成過氧化物，導致脂質過氧化而使得肝細胞膜損傷，造
成肝中酵素滲出及細胞病變而壞死。
以雄性SD或Wistar大鼠為試驗動物
每組動物10-12隻,實驗期8週
研究組別分為
 對照組(正常飲食組): I.P.或灌食olive oil 十 d.d.H2O (P.O.)
 肝損傷組 (四氯化碳處理組): I.P. (40% CCl4 / olive oil) 或灌食(20％
CCl4 / olive oil)十d.d.H2O (P.O.)
 正對照組(Silymarin治療組 ): I.P. (40％ CCl4 / olive oil) 或灌食(20％
CCl4 / olive oil + Silymarin (P.O.)
 實驗組(試驗樣品處理組) I.P. (40％ CCl4 / olive oil) 或灌食(20％ CCl4
/ olive oil) 十試驗樣品(P.O.）
實驗組有二種或以上劑量組，其中之一為人體建議攝取量，
另一組則為人體建議攝取量之2-5倍左右）

健康食品之護肝功能評估方法
(四氯化碳誘導化學性肝損傷)
所有實驗動物分別於第一週、第三週及第六週投予試驗樣品後2小
時，以尾部採血方式檢測肝臟的生化功能：GOT (AST)、GPT
(ALT)、TG、Cholesterol。最後於第八週結束時全部犧牲，採血檢
驗肝臟生化功能。
所有實驗動物於實驗結束犧牲取肝臟標本，秤重後固定於10％的中
性福馬林（Formaline）液中，石蠟包埋切片後分別作HE 、
Masson 染色(膠原纖維、肌纖維)來進行病理學觀察。
各組肝臟分別進行檢測抗氧化成分Glutathione(GSH)、Glutathione
reductase (GSH Rd) 、Glutathione peroxidase (GSH Px)、
Superoxide dismutase (SOD)、Catalase等酵素活性。
評估肝臟組織膠原蛋白 (Hydroxyproline)過度增生及脂質過氧化
(Lipid peroxidation)程度方面的改善。

健康食品之護肝功能評估方法增訂草案
(乙醯胺基苯酚誘導化學性肝炎損傷)
乙醯胺基苯酚 (N-acetyl-p-aminophenol, APAP)，
為常見解熱鎮痛藥物成分，過量使用會造成肝腎
損傷。根據美國1998-2007年統計，乙醯胺基苯酚
使用過量是急性肝衰竭病患最主要病因。
本健康食品護肝保健功效之評估方法採用400
mg/kg bw劑量之APAP誘導雄性BALB/c小鼠慢性
肝炎損傷之模式，第一週血液生化值ALT (GPT)
及AST (GOT)之參考值分別為150-450 IU/L，且其
肝臟組織病理切片符合人類病理進展，所以此動
物實驗模式應可做為。

(硫代乙醯胺誘導肝纖維化之慢性肝損傷)
硫代乙醯胺(thioacetamide; TAA在大（小）白鼠所
誘發肝損傷之病理變化類似人類的肝損傷病變，
因此，以TAA 誘發肝纖維化作為化學性肝損傷動
物模式。
TAA為高度肝特異性的毒性，從給予動物到致死
有約3.5 到7 天的時間可以觀察肝細胞壞死到肝衰
竭死亡的病變過程。
TAA 進入動物體中經由混和功能氧化酶系統
(mixed function oxidese system)代謝之產物可破壞
肝細胞並造成肝壞死與氧化壓力 (oxidative stress)。
若持續進行則會演變成肝纖維化甚至出現節結。

(針對應用酒精液態飼糧誘導酒精性脂肪肝)
正常的肝臟中，脂質所佔重量應低於肝臟總重量之5％。最
常引起脂肪肝的原因有肥胖症、飲酒、高三酸甘油酯血症、
血糖代謝異常(如糖尿病)、營養缺乏、長期接觸傷害肝臟的
化學物質或藥物等。
急性大量酒精的攝入會導致肝細胞損傷，主要由於粒線體
DNA耗損及脂質過氧化及而啟動肝細胞凋亡與壞死，導致
還原態麩胱甘肽(GSH)耗損，因而使得肝臟對過氧化傷害的
保護功能降低。
Lieber-DeCarli Diet長期餵飼來誘發酒精性肝病變，應用大
鼠餵飼液態飼料(飼料成分依照動物所需總能量所提供之
36%碳水化合物以酒精取代) ，結果顯示動物發展為脂肪肝
且伴有三酸甘油酯及肝膽固醇脂上升。此一誘發酒精性肝
病變之實驗動物模式，已成為主要的脂肪肝誘發動物模式。

健康食品免疫調節功能評估
免疫調節功能評估
 細胞增生/毒性檢測（PBMC & 免疫細胞株）
 細胞激素檢測（mRNA ＆蛋白質）
 吞噬細胞活性檢測
 免疫球蛋白定量檢測
 自然殺手細胞活性檢測
 免疫細胞族群比例分析檢測
抗腫瘤活性分析
 細胞增生/毒性檢測（腫瘤細胞株）
 細胞週期
 細胞凋亡
http://www.emobio.com/index.htm
常用的BALB/c或是B6小鼠，6-8週大，每組隻數
至少10隻。
餵食進行至少6週。
非特異性免疫反應：
 包括如中性白血球(neutrophils)及單核球(monocytes)的吞噬能
力或是自然殺手細胞的活性(natural killer activity)，及其他沒
有利用抗原刺激的免疫反應。
特異性免疫反應(以卵蛋白刺激）：
 在小鼠身上注射特定的抗原，再進行抗原特異性免疫反應的
評估，其中必須包括如特異性抗體的測定或是抗原特異性的T
細胞增殖反應和細胞激素的研究。

健康食品之免疫調節功能評估方法(動物實驗 )
常用的BALB/c或是B6小鼠，6-8週大，每組隻數
至少10隻。餵食進行至少6週。
特異性免疫反應
 脾臟或是淋巴結細胞增殖反應
 抗體分泌實驗
 細胞激素分泌實驗
 脾臟細胞及淋巴結細胞表面標記分析
 自然殺手細胞活性
 吞噬細胞活性
 卵白蛋白(ovalbumin)誘發的特異性抗體產生
 OVA-特異性的T細胞增殖反應
 OVA-特異性的細胞激素製造

(人體的臨床試驗)
經人體試驗委員會通過。建議每組至少30人。
 周邊血液單核球(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)的反應
 抗體分泌實驗
 細胞激素分泌實驗
 自然殺手細胞活性
 吞噬細胞活性
 周邊血液單核球的表面標記分析
 破傷風類毒素(tetanus toxoid, TT) 或B型肝炎表面抗原(hepatitis B
surface antigen, HBsAg) 誘發的特異性抗體產生
 TT或B型肝炎表面抗原-特異性的T細胞增殖反應
 TT或B型肝炎表面抗原-特異性的細胞激素製造

檢測方式介紹
細胞增生/毒性檢測
細胞激素檢測
抗腫瘤活性分析
腫瘤生成與移轉能力檢測
細胞增生/毒性檢測
【檢測方法】
 本檢測是將不同的待測件，藉由與體外培養細胞共同作用的方式，測試此待
測件是否具有促進細胞增生或毒殺細胞之作用。
　
細胞增生偵測試劑：
 alamarBlueTM
 WST-1
【檢測標的】
人類周邊血液單核細胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell ,
PBMC）
正常細胞株：纖維母細胞（IMR-90）
人類癌細胞株
 肝癌細胞株：Hep 3B及Hep G2B.
 乳癌細胞株：MCF7C.
 大腸癌細胞株：COLO 205D.
 肺癌細胞株：NCI-H460E.
 卵巢癌細胞株：NIH: OVCAR-3F.
 腎癌細胞株：A-498G.
 免疫細胞株：Jurkat、U-937、NK-92、K-562和CA46
細胞激素檢測
吞噬細胞活性檢測
免疫球蛋白定量檢測
自然殺手細胞活性檢測
免疫細胞族群比例檢測
抗腫瘤活性分析:
細胞週期分析檢測
抗腫瘤活性分析:
細胞凋亡分析檢測
腫瘤生成與移轉能力檢測
【檢測方法】利用病患微量之組織檢體，以Multiplex PCR 的
方法同時檢測與腫瘤生成、惡性化、侵襲、轉移、以及血
管新生等相關之基因表現（mRNA）
【檢測標的】
 Heparanase
 COX-2
 MMPs (MMP-1,MMP-2,MMP-3,MMP-7,MMP-9,MT1-MMP)
 TIMP-1
 VEGF(121 , 165 , 189)
 FLK-1
 FLT1
 Cathepsin (B , H , K , L , S)

輔仁大學 食品科學研究所 食品營養與生物醫學當代研究 機能性保健食品/健康食品 之安全性與功效性評估

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特殊毒性試驗(Specific toxicity study)

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可分為體內(in vivo)與體外(in vitro)測試，其目的

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代謝活化 (Metabolic activation) 進行含有及不含有S9混合物的測試。

體外鼷鼠淋巴瘤tk分析法 (In vitro mouse lymphoma tk

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