ESPERMOTESTE

FINALIDADE:
Conjunto de reagentes para a complementao do Espermograma.
Somente para diagnstico de uso in vitro.
IDENTIFICAO E ARMAZENAMENTO:
Conservar entre 2 a 8C.
Reagentes:
CVI - Corante Vital: Eosina amarela a 1%
CONT - Contraste: Nigrosina 6%
BUF - Tampo de Hipoosmolaridade: Cloreto de Sdio a 0,9%,
PIR - Piridina: Piridina 100%
AAC - Anidrido Actico: Anidrido Actico a 100%
STD - Padro: Frutose 300 mg/dL, cido Ctrico 300 mg/dL, cido Benzico 0,1%
RGT - Reagente de Cor: Resorcinol a 0,1%, Tiouria a 0,1%, Etanol a 100%
RAC - Reagente cido: cido Clordrico 55%
PREPARO DO REAGENTE DE USO:
Todos os reagentes se encontram prontos para uso.
ESTABILIDADE:
Os reagentes so estveis at o vencimento da data de validade quando
armazenados a 2 - 8C.
TRANSPORTE:
O transporte do kit deve ser feito pela rota mais direta evitando-se as chegadas nos
finais de semana e feriados no local de destino. O kit no afetado pelo transporte
desde que seja entregue ao destinatrio no perodo mximo de 07 dias e em uma
temperatura de at 37C.
TERMOS E CONDIES DE GARANTIA:
O fabricante garante a qualidade do produto, se este for armazenado como descrito
acima e em sua embalagem original
PRECAUES:
Como no se pode assegurar que amostras biolgicas e no transmitem infeces,
recomenda-se manuse-los de acordo com as instrues de biossegurana.
Todo material contaminado com amostras dos pacientes ou padro do kit deve ser
inativado por autoclavao (60 min. a 120) ou por imerso em soluo de
hipoclorito de sdio a 10% por no mnimo 60 minutos;
Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao dos
reagentes. O PIR txico e facilmente inflamvel; Nocivo por inalao, em contato
com a pele e por ingesto. O AAC inflamvel; nocivo por inalao e ingesto;
provoca queimaduras. O RGT pode ser txico em caso de ingesto; facilmente
inflamvel; pode causar irritaes nos olhos e na pele em contato prolongado.
Para o descarte seguro dos reagentes e materiais biolgicos, sugerimos utilizar as
regulamentaes normativas locais, estaduais ou federais para a preservao
ambiental.

Aspecto:
Opalescncia acinzentada. Quando a concentrao de espermatozides estiver muito
baixa a aparncia ficar menos opaca.
Odor:
Odor sui generis, que pode ser comparado ao do suco de castanhas.
Reao (pH):
O pH deve ser determinado 1 hora aps a ejaculao.
Deve variar de 7,2 a 8.
pH > 8: deficincia prosttica
pH < 7 em amostra azoosprmica: disgenesia dos canais deferentes, vesculas
seminais ou epiddimos.
Liquefao:
A liquefao normal ocorre de 6 a 30 minutos temperatura ambiente.
A liquefao pode ser primria, parcial ou secundria.
Coagulao:
Imediatamente aps a emisso o esperma transforma-se em gel. Em temperatura
ambiente o gel se transforma em sol de 15 a 30 minutos aps a emisso.
B- EXAME MICROSCPICO
Contagem:
Concentrao espermtica: Igual ou superior a 20 milhes/mL.
Cmara de Neubauer: a diluio depende da concentrao espermtica. Diluir com
soluo salina a 0,5% em formol
Alta: 1:50 a 1:100
Baixa: 1:20 a 1:30
Muito baixa: 1:5 a 1:10
Espermatozides/mL: (nmero contado x diluio x 10.000) / 4
4 = nmero de quadrantes da cmara (contagem de leuccitos).
Normozoospermia: acima de 20 milhes/mL
Oligozoospermia: de 1 a 20 milhes/mL
Criptozoospermia: menor que 1 milho/mL
Azoospermia: ausncia de espermatozides
Polizoospermia: acima de 250 milhes/mL
Grau de motilidade:
O Grau de Motilidade pode ser classificado em:
Grau A: Motilidade rpida, progressiva e linear
Grau B: Motilidade lenta e/ou no linear
Grau C: Motilidade no progressiva
Grau D: Sem Motilidade
Pacientes normais apresentam no mnimo 25% dos espermatozides com grau A.
Aglutinao:
Verificar a aderncia dos espermatozides mveis uns nos outros.
A aderncia pode ser: cabea-cabea, pea intermediriapea intermediria,
cauda-cauda ou mista.
Pacientes normais apresentam at 5% dos espermatozides com aderncia.

COLETA E PREPARO DA AMOSTRA:

O material dever ser coletado no laboratrio por automasturbao. O paciente
dever ser instrudo para evitar perda de material.
Transporte: Se a coleta no puder ser realizada no laboratrio, a amostra dever ser
enviada em no mximo 30 minutos aps o recolhimento. A amostra biolgica deve
ser acondicionada em recipiente hermeticamente fechado, em seguida embalada de
forma a mant-la em temperatura recomendada (15-25C) desde o remetente at a
entrega ao destinatrio. Esta amostra deve ser identificada com o smbolo de
amostra biolgica. O primeiro procedimento no laboratrio dever ser a incubao
do material em estufa a 37C para que se possa observar o tempo de liquefao.
O perodo de abstinncia dever ser de 2 a 5 dias, mas deve-se levar em conta a
atividade sexual do paciente. Devem ser registrados o perodo de abstinncia, data
e hora da coleta, perodo de intervalo entre a coleta e o exame, medicamentos
usados.
O frasco utilizado para a coleta deve ser estril e, se possvel de plstico no
espermaticida.
Os testes sero realizados com o produto de uma nica ejaculao.

Vitalidade:
Reflete a proporo de espermatozides vivos e espermatozides mortos.
O corante Vital penetra no espermatozide morto resultando em uma cor vermelha,
enquanto que o espermatozide vivo no se cora.

MATERIAIS NECESSRIOS E NO FORNECIDOS:

Pipetas
Cronmetro
pHmetro
Microscpico
Cmara de Neubauer
Tubos de ensaio
Lmina e lamnula
Banho-Maria
Fotmetro UV/VIS

OBS: Esta lmina poder ser usada para estudo de morfologia.

PROCEDIMENTOS:
A- EXAME MACROSCPICO
Volume:
Em condies normais varia de 2 a 5 mL.
Hipospermia: volume < 2 mL
Hiperespermia: volume > 6 mL
Aspermia: ausncia total de ejaculado
Consistncia/Viscosidade:
Com uma pipeta de 0,1 mL com 11 cm de coluna de esperma, gotejar
cronometrando 3 gotas.
4,8 a 5,2 segundos: normal
Maior que 5,2 segundos: viscosidade elevada
Menor que 4,8 segundos: baixa viscosidade
Cor:
Cinza claro, tornando-se translcido aps a liquefao.
Picitos conferem colorao amarelada, e hemcias uma colorao avermelhada.

Em um tubo de hemlise pipetar:

CVI
Esperma
Misturar bem e aguardar 1 minuto.
CONT
Misturar, fazer esfregaos e a
espermatozides vivos e os mortos.

10 L
10 L

microscopia

por

20 L
imerso

contando

os

% Espermatozides vivos = n espermatozides vivos x 100

n total de espermatozides
Pacientes normais: Acima de 70% de formas vivas

Morfologia:
Devem ser contados no mnimo 200 espermatozides, sendo o resultado relatado
em porcentagem.
Pode-se encontrar at 30% de espermatozides atpicos dentre os espermatozides
analisados.
As anormalidades so classificadas em alteraes de cabea, da pea intermediria e
da cauda.
As seguintes coloraes podem ser utilizadas:
- Colorao pelo mtodo de Papanicolau
- Colorao pelo mtodo de May-Grnwald-Giemsa
- Colorao pelo mtodo de Vital
C- ANLISES COMPLEMENTARES
Teste de Hipoosmolaridade
Este teste oferece informao adicional sobre a integridade e a funcionalidade da
membrana celular da cauda do espermatozide.
Procedimento:
Em um tubo de ensaio colocar 0,5 mL de reagente BUF e 0,5 mL de gua
deionizada. Deixar em banho-maria a 37C por 10 minutos.
Adicionar 0,100 mL de esperma. Agitar e esperar 30 minutos em banho-maria a
37C.
Pipetar 20 L do sedimento formado em uma lmina, colocando uma lamnula por
cima. Observar no microscpio, com objetiva de 400x, 10 campos. Contar o nmero
de espermatozides com edema em relao ao nmero total de espermatozides.
Valor de referncia: igual ou maior a 60% de espermatozides com edema.
REV. 06/12

Determinao do cido Ctrico:

Este mtodo se baseia no desenvolvimento de uma colorao amarelada originada
quando o cido ctrico reage com a piridina e anidrido actico.
Procedimento:
Centrifugar o esperma a 3.000 rpm durante 10 minutos.
Branco
Amostra
STD
gua deionizada
0,5 mL
0,5 mL
0,5 mL
Esperma
25 L
STD
25 L
Deixar em banho de gelo por 2 minutos. Deixar no banho e pipetar.
PIR
0,6 mL
0,6 mL
0,6 mL
Homogeneizar.
AAC
2,5 mL
2,5 mL
2,5 mL
Homogeneizar bem e manter por mais 2 minutos no banho de gelo. Depois deste
tempo transferir os tubos para o banho-maria a 37C e incubar por 5 minutos.
Efetuar as leituras em 420 nm (filtro azul).
Caso ocorra turvao no tubo TESTE, filtrar a soluo em papel qualitativo e
efetuar a leitura.
Clculo:
cido Ctrico (mg/dL) =

Abs

amostra

Abs

x 300

STD

Valor de referncia: 350 a 450 mg/dL

Linearidade: 1000 mg/dL
Determinao da Frutose:
Este mtodo se baseia na reao de Selivanoff, que provoca a transformao da
frutose em furfural, que junto com o resorcinol produz uma colorao rosa.
Procedimento:
Aps a liquefao fazer a determinao da frutose imediatamente. No sendo
possvel, armazenar uma alquota em congelador (abaixo de 0C) para evitar a
frutlise.
Branco
Amostra
STD
gua deionizada
0,5 mL
0,5 mL
0,5 mL
Esperma
25 L
STD
25 L
RGT
0,5 mL
0,5 mL
0,5 mL
RAC
2,5 mL
2,5 mL
2,5 mL
Homogenizar bem e colocar em banho fervente por 5 minutos. Esfriar. Realizar as
leituras do TESTE e do PADRO em 530 nm (filtro verde).
Frutose (mg/dL) =

Abs

amostra

Abs

x 300

APRESENTAO DO KIT:
N CAT
REAGENTE
CVI
CONT
BUF
PIR
022
AAC
STD
RGT
RAC
CVI
CONT
BUF
PIR
022-E
AAC
STD
RGT
RAC

VOLUME
1 x 0,5 mL
1 x 1,0 mL
1 x 10 mL
1 x 15 mL
1 x 50 mL
1 x 2 mL
1 x 10 mL
1 x 50 mL
1 x 1,0 mL
1 x 2,0 mL
1 x 20 mL
1 x 30 mL
1 x 100 mL
1 x 4 mL
1 x 20 mL
1 x 100 mL

40

BIBLIOGRAFIA:
WHO: Manual of basic techniques for a health laboratory.
Canado, J. Romeu; Greco, J. B; Galizzi, Joo; et al.: Mtodos de Laboratrio
Aplicados Clnica, Sexta Edio, 1985. Ed. Guanabara.
Piva, S. Espermograma, Livraria Editora Santos, So Paulo, 1988.
Janini J. B. M., Pereira O. S.. Atlas de Morfologia Espermtica. Editora Atheneu, Rio
de Janeiro, 2001.
DEPARTAMENTO DE SERVIOS ASSOCIADOS:
Para esclarecimentos de dvidas do consumidor quanto ao produto:
Telefax (31) 3067-6400 E-mail: invitroms@invitro.com.br
N. DO LOTE, DATA DE FABRICAO, DATA DE VALIDADE VIDE RTULO DO
PRODUTO.
Produzido e Distribudo por In Vitro Diagnstica Ltda
Rua Cromita, 278, Distrito Industrial Itabira/MG. CEP: 35903-053
Telefone: 31-3067-6400 Fax: 31-3067-6401
e-mail: invitroms@invitro.com.br
Resp. Tc.: Patrcia C. C. Vilela CRF 4463
Reg. M.S. 10303460313
SIGNIFICADO DOS SMBOLOS UTILIZADOS NOS RTULOS DO PRODUTO
O contedo suficiente para <n> testes
Data limite de utilizao
Limite de temperatura (conservar a)
Nmero do Catlogo
Txico

Linearidade: 1500 mg/dL

Determinao da Frutlise:
Fazer a determinao da Frutose. Incubar outra alquota de esperma em estufa a
37C por 5 horas. Aps este perodo determinar a Frutose nesta alquota.

Consultar Instruo de Uso

Valor de referncia: O valor da frutose aps a incubao deve ser 50% inferior ao
valor da frutose inicial.

Produto Diagnstico In Vitro

Frutose (mg/dL) =

Inflamvel

Abs

20

STD

Valor de referncia: 150 a 300 mg/dL

Abs

N TESTES

amostra

x 300

Nmero do lote

STD

D- CARACTERSTICAS E DESEMPENHO
Repetitividade:
Foram realizadas 10 dosagens sucessivas com 2 amostras obtendo-se os seguintes
resultados:

Corrosivo
Data de Fabricao

REPETIBILIDADE:
Amostra 1
Frutose
cido Ctrico
Amostra 2
Frutose
cido Ctrico

Mdia (mg/dL)

DP (mg/dL)

% CV

302,5
381,2

4,1
2,7

1,04
0,53

175,7
420,1

3,1
2,9

1,4
0,5

DP (mg/dL)

% CV

3,5
4,0

1,8
0,9

4,1
2,8

1,15
0,6

REPRODUTIBILIDADE:
Mdia (mg/dL)
Amostra 1
Frutose
151,1
cido Ctrico
364,7
Amostra 2
Frutose
280,7
cido Ctrico
401,8

REV. 06/12