Introduccin

En la multiplicacin de plntulas in vitro de papa (micropropagacin) se

utilizan medios nutritivos que incluyen sacarosa y reguladores del
crecimiento. Uno de los problemas comunes en los laboratorios de
cultivos in vitro comerciales y de investigacin, es la contaminacin del
medio con microorganismos. (Liefert et al., 1992; Reed et al., 1994) Esto
no slo afecta el crecimiento y la sanidad de las plntulas sino que
repercute en el ya elevado costo de produccin de estos laboratorios. El
uso de antibiticos en el medio no ha resultado una solucin prctica
debido a que se han observado efectos fitotxicos. (Lizrraga et al., 1991;
Gilbert J. E et al., 1991). Kozai et al. (1992) investigaron las condiciones
ambientales dentro de los envases comnmente utilizados en cultivos in
vitro y determinaron que controlando el micro ambiente se logra favorecer
el crecimiento y desarrollo de las plntulas, reducir los desrdenes
fisiolgicos, evitar prdidas por contaminacin y facilitar la aclimatacin
durante el trasplante de papa y otros cultivos, lo que llevara a una
reduccin del costo de produccin. Estos autores observaron que se
pueden regenerar plntulas de papa por medios autotrficos debido a que
los segmentos y las plntulas obtenidas poseen una alta capacidad para
fotosintetizar.
El objetivo de este trabajo fue desarrollar un mtodo de propagacin
rpido basado en los conceptos de un cultivo autotrfico que favoreciera
el crecimiento de las plntulas de papa y adems, redujera al mnimo las

prdidas debido a la contaminacin y al shock de trasplante.

Materiales y Mtodos
En una primera fase se evaluaron envases, substratos y soluciones
nutritivas, de bajo costo y muy prcticos, que permitieran el crecimiento
autotrfico del material y en donde se manifestaran las ventajas citadas
de esta tcnica. En una segunda etapa se busc un mtodo que
permitiera el repique de las plntulas obtenidas autotrficamente, para lo
cual se evaluaron microesquejes de distinta ubicacin en la planta madre
segn su capacidad de regeneracin, adaptabilidad al trasplante y
produccin de minitubrculos.

Materiales
Se utilizaron plntulas in vitro obtenidas segn los protocolos
recomendados por CIP (Lizrraga R, et al., 1991) las que se
micropropagaron en tubos de ensayo (10 cm x15 mm) conteniendo 4 mL
de medio. Durante la primera etapa se trabaj con las variedades Spunta y
Kennebec y se corroboraron los resultados obtenidos en otros 10
cultivares. En la segunda parte se trabaj con la variedad Frital INTA.

PRCTICA 6
EMBRIOGNESISSOMTICAAPARTIRDECALLODEMAZ
INTRODUCCION
Un embrin es la estructura ms temprana en fase multicelular de un
individuo que aparece antes de que ste desarrolle todas las estructuras y
rganos caractersticos de la especie a la que pertenece. En las plantas
estamos familiarizados con los embriones que se forman dentro de las

semillas; estos embriones son producto de la reproduccin sexual en la que

se fusionan dos gametos para formar el cigoto, que por divisiones sucesivas
forman un embrin cigtico o sexual. Sin embargo, las plantas pueden
desarrollar embriones no cigticos, morfolgica y funcionalmente correctos,
a partir de diferentes tipos de tejidos y clulas vegetativas, tanto de la fase
gametoftica como esporoftica.
A finales de los aos 1950 se obtuvieron los primeros embriones asexuales o
smaticos en un cultivo de races de zanahoria. Posteriormente se
obtuvieron en muchas otras especies, tanto angiospermas como
gimnospermas, lo que hace pensar que la embriognesis somtica es una
capacidad universal dentro de las plantas superiores.
En general la embriognesis somtica se induce ms fcilmente sobre
explantos juveniles que adultos. Es comn utilizar embriones cigticos
inmaduros, cotiledones o hipocotilos como explantos iniciales.

MATERIALYMTODOS
Material vegetal: callo embriognico de la lnea pura de maz A188 obtenido
a partir del cultivo de embriones inmaduros (1-2 mm longitud) en medio de
callognesis (sales minerales y vitaminas N6, 2,8 g/l prolina, 100 mg/l
casaminocidos, 1 mg/l 2,4-D, 10 M nitrato de plata, 2 g/l gelrite, pH 5,7).
El callo se mantiene en oscuridad a 28C.
Porciones de unos 5 mm del callo embriognico se cultivan en el medio
REGEN I. Las placas se sellan con esparadrapo poroso. Tras 3 semanas en
oscuridad y 28C se diferenciarn estructuras blanquecinas en la superficie
del callo que corresponden a los embriones madurados.
Se subcultiva todo el material en medio REGEN II. Se mantienen las placas
en fotoperiodo de da largo donde germinarn los embriones en 2-3
semanas.
Las plntulas desarrolladas se individualizan con cuidado y se cultivan
separadamente para que enracen y adquieran vigor en el medio
ENRAIZAMIENTO, dispensado en cajas Magenta. Las plantas bien
desarrolladas pueden trasplantarse, de modo similar a lo realizado con las
plantas de patata.

MEDIOS DE CULTIVO

Nombre del medio

REGEN I

REGEN II

ENRAIZAMIENTO

Macro y micronutrientes

MS

MS

MS/2

Vitaminas

MS

MS

MS/2

Myo-inositol (mg/L)

100

100

Sacarosa (g/L)

30

60

20

Gelrite (g/L)

2.5

RESULTADOS.PARMETROSAMEDIR

Describir el proceso de embriognesis somtica observado en la prctica.

Utilizar la lupa binocular para seguir el desarrollo de los embriones y el lugar
en que aparecen.
MICROPROPAGACIN DE TOMATE (Lycopersicon esculentum Mill.)
Andrs Osvaldo Lpez Prez, Otilio Vzquez Martnez, Jos Luis Arredondo
Figueroa
El tomate rojo o jitomate es un una hortaliza de fruto con importancia
global; sus costos de produccin se ven afectados por los mtodos de
propagacin utilizados actualmente basados en el uso de semillas. La
micropropagacin in vitro es una alternativa biotecnolgica que puede
aportar beneficios a la produccin de plantas y a la calidad de los frutos
obtenidos a partir de estas. El tomate Marmande es una variedad que no se
cultiva de forma comercial en Mxico pero que puede ser una alternativa
para el mercado de frutos de mayor calidad organolptica y de un nuevo
inters al mbito gourmet. El objetivo del presente fue desarrollar un
sistema de multiplicacin in vitro de tomate mediante el uso de segmentos
nodales como explantes. Se probaron distintas formulaciones de medio
nutritivos y tambin distintas concentraciones y combinaciones de
fitorreguladores. La mayor frecuencia de brotacin se observ cuando se
cultivaron los explantes en medio B5 (Gamborg) adicionado con 1.0 y 0.1 1
mgL-1 de CIN (cinetina) y AIA (cido indolactico) respectivamente.
Tambin se observ que el uso de BA bencil adenina indujo la formacin de
tejido calloso inhibi la formacin de races. Las plantas obtenidas por
multiplicacin in vitro se compararon con plantas propagadas por
germinacin bajo condiciones de invernadero. No se observaron diferencias
significativas en la altura de la planta, grosor del tallo, numero de frutos por
planta y peso de los mismos, sin embargo, si se observ un dimetro mayor
en los frutos cosechados de plantas multiplicadas in vitro.