Centro de Bachillerato Tecnolgico

Industrial y de Servicio no. 85

Dr. Jos Mara Liceaga
Especialidad: Tcnico Laboratorista Qumico

Mdulo o Asignatura: Submdulo 3 Cuantifica Microorganismos con

Base en las Normas (CTIM)

Grado y Grupo: 4 ALM

No. De equipo: 2

Nombre del Docente: Q.F.B. Jess Melesio Ornelas Mijangos

TRABAJO: MUESTREO DE AGUA, SULEOS Y ALIMENTOS PARA ANALISIS
MICROBIOLOGICOS

Periodo Escolar: Febrero Julio 2015

Lugar y fecha: Coatzacoalcos ver. 11 de mayo del 2015.

MUESTREOS
Previo a un muestreo es importante tener claramente definida la forma como sern
tomadas las muestras, chequeando el presupuesto, el personal con que se cuenta, la
capacitacin del personal, el transporte, los costos de inversin, los costos de operacin y
mantenimiento, la vida til de los equipos, los requerimientos de energa y espacio y la
disponibilidad de los mismos, entre otros. A continuacin se muestran tres tipos de
muestreo de utilidad en la actualidad, muestreo de agua de proceso, muestreo de agua
potable y muestreo de aguas residuales y superficiales.
Agua potable:
Abra el grifo completamente y deje correr el agua por 2 o 3 minutos, o el tiempo suficiente
para permitir obtener limpia la lnea se servicio. Reduzca el flujo de agua para permitir el
llenado de la botella sin salpicar. Si la limpieza del grifo es cuestionable, o se requiere
para fines especiales de muestreo, desinfecte el borde de la llave del grifo antes del
muestreo con hipoclorito de sodio (100 mg de NaOCl/L). Deje correr el agua mnimo 3
minutos despus del tratamiento.
La recoleccin de muestras de un pozo se hace despus de haber bombeado durante
este lapso de tiempo cercano a los 10 minutos.

Agua natural:
Cuando se toman muestras de un ro, arroyo, lago, reservorio o corriente superficial, se
recomienda muestrear en el centro de la corriente a una profundidad media, si solo puede
hacerse una toma pequea. No es conveniente tomar muestras demasiado cerca de la
orilla o demasiado lejos del punto de drenaje al igual que por encima o por debajo de este
punto. Si se dispone del equipo adecuado, lo mejor es hacer una toma "integral" desde la
superficie al fondo, en la zona media de la corriente. Este muestreo es importante
especialmente para la determinacin de slidos en suspensin. Como nica precaucin,
se aconseja no colocar el envase recolector en direccin de la corriente.

La eleccin del lugar de muestreo en reservorios, lagos y pantanos depender de las

condiciones locales y del objetivo del estudio. En cualquier caso, se debe evitar tomar la
espuma superficial y las reas de turbulencia excesiva.

Si de antemano se sabe que hay componentes txicos en el agua, debe tomarse las
precauciones necesarias para manipular las muestras, como el contacto directo con la piel
y colocar una nota informativa en el rotulo de identificacin del envase.
Agua no potable:

Cuando se toman muestras de un ro, arroyo, lago o reservorio, mediante una botella,
debe tomar el recipiente en su mano y hundirlo de tal forma que el cuello de la botella
quede hacia abajo, y debajo de la superficie del agua; luego gire la botella con direccin
contra la corriente. Si no hay corriente, como en el caso de un reservorio, cree, una
corriente artificial empujando hacia adelante botella horizontalmente en una
direccin opuesta a la mano.

Muestreo de aguas de proceso

Aqu se describen los procedimientos de muestreo de agua en las etapas del proceso de
potabilizacin para su anlisis fsico-qumico.
Etapas a seguir:

Identificacin de las muestras y registro de las condiciones de muestreo: los

frascos sern rotulados con el nombre del sitio de muestreo. En el registro
correspondiente se consignarn fecha y hora de recoleccin, muestreador y
cualquier observacin que contribuya a esclarecer las condiciones de la muestra.

Seleccin del punto de muestreo: los puntos de muestreo en una planta de

tratamiento sern:

Tabla 1. Puntos de muestreo en una planta de tratamiento

Clase de agua

Punto de muestreo

Cruda

Tanque de compensacin

Decantada (proceso)

Canaletas de recoleccin

Filtrada (proceso)

Grifos de salida de los filtros

Tanques de almacenamiento
(potable)

Los propios tanques

Tratada (potable)

Manhole de salida

Fuente: Elaboracin Propia

Volmenes de muestras: para anlisis fsico-qumicos, se recolectarn 500 mL. De

requerirse mayor volumen de muestra, podrn recolectarse dos frascos o uno de
mayor volumen, en funcin de los anlisis a realizar.

Conservacin y almacenaje: inmediatamente recolectadas, las muestras sern

trasladadas al Laboratorio para su anlisis inmediato. De no ser posible, se
refrigerarn y analizarn en un tiempo no superior a 24 horas.

Muestreo de agua potable

Se describen los procedimientos de recoleccin de muestras de agua potable para la

realizacin de anlisis fsico-qumicos, el alcance es todos los muestreos de agua potable,
lo cual incluye entre otros:

Plantas de tratamiento, redes de distribucin y tanques de almacenamiento

Dispensadores y bebederos de agua potable

Tanques de almacenamiento de edificios y empresas

Etapas
a
seguir:
Identificacin de las muestras y registro de las condiciones de muestreo: los frascos son
rotulados identificando el sitio de recoleccin de la muestra, se aade toda otra
informacin necesaria como fecha y hora de recoleccin, olor, concentracin de cloro
residual y cualquier observacin que contribuya a esclarecer las condiciones de la
muestra.

Seleccin del punto de muestreo: se debe elegir un grifo alimentado por un tubo
que se desprenda directamente de la red de distribucin y no de un depsito o
tanque de almacenamiento. En las viviendas, el grifo seleccionado debe
encontrarse lo ms cerca posible del medidor, preferiblemente en el jardn. En
caso de no ser posible, se muestrear en una llave interior, siempre que
visualmente las condiciones higinicas del punto sean adecuadas. Paralos
tanques de almacenamiento se tomarn del grifo presente en ellos, o en caso de
ausencia, empleando una pita amarrada a la boca del frasco, la cual debe ser
estril para muestras microbiolgicas.

Drenaje de la tubera: abrir completamente el grifo y dejar correr el agua al menos

un minuto; si la apariencia del agua lo requiere, el tiempo puede prolongarse pero
no ms de 5 minutos. Si pasado este tiempo, an la apariencia del agua no es
adecuada, se procede a recolectar la muestra.

Recoleccin de muestra para anlisis fsico-qumicos: se recolecta en frasco

plstico cuyo volumen ser funcin de los parmetros a analizar y que
habitualmente es de 250 mL para turbiedad, pH y color y de 500 a 1000 mL para
los anlisis mnimos. Se enjuaga 2-3 veces el frasco con el agua a muestrear y
finalmente se llena y tapa.

Conservacin y almacenaje: inmediatamente recolectadas, las muestras se

almacenan en una nevera porttil para su traslado al Laboratorio.

Muestreo de aguas residuales y naturales

Describir los procedimientos de muestreo de aguas naturales y residuales para la

realizacin de anlisis fsico-qumicos, el alcance son todos los muestreos de aguas
naturales y residuales (por tanto, se excluyen los de agua potable), lo cual incluye entre
otros:
Aguas residuales:

Plantas de tratamiento de aguas residuales industriales y/o domsticas

Puntos de descarga internos o externos de industrias

Redes de alcantarillado

Aguas naturales:

Marinas, tanto en playas como estuarios, bahas o mar abierto

Interiores: ros, lagunas, caos, cinagas y pozos

Etapas
a
seguir:
Definicin
del
plan
de
muestreo:
Este aspecto es primordial, pues posibilitar la obtencin de muestras representativas del
fenmeno que se desee estudiar, por lo que es conveniente realizarlo conjuntamente con
el cliente. Cuando se trate de un sitio de muestreo nuevo, se recopilar toda la
informacin posible antes de realizar el trabajo, lo cual puede incluir visita previa y/o
reunin con el cliente. Siempre que sea factible y que la complejidad esperada lo amerite,
debe disponerse de un croquis, mapa o dibujo del sitio. En caso contrario, una vez en el
sitio se proceder de forma operativa a fin de ejecutar el muestreo en la forma ms
adecuada.

El tipo (puntual o compuesta) y nmero de muestras a recolectar y los parmetros a

determinar en cada una de ellas, determinarn los frascos (nmero y caractersticas) y
equipos de medicin y muestreo necesarios. Para aquellos parmetros que requieren
preservante, estos se aadirn previamente a los frascos de recoleccin. Cuando el
muestreo implique tambin la obtencin de muestras de agua potable, stas deben
recolectarse inicialmente y conservarse en neveras diferentes.
Ejecucin del muestreo:
Identificacin de las muestras y registro de las condiciones de muestreo: cada frasco ser
rotulado con el nombre del punto de muestreo y para clientes externos, con el nombre de
estos. En la(s) planilla(s) de muestreo correspondiente, se consignar toda la informacin
necesaria como fecha y hora de recoleccin, tipo de muestra (puntual o compuesta),
parmetros medidos en el sitio y cualquier observacin que contribuya a esclarecer las
condiciones de la muestra. En lo posible se recomienda establecer puntos de muestreo
permanentes, tratando de asegurar condiciones de muestreo reproducibles.
Determinacin de parmetros in situ: se medirn directamente en el cuerpo de agua. En
los casos que esta operacin se dificulte y se obtenga una muestra con algn dispositivo
de muestreo (como frasco, botella muestreadora o balde), estos parmetros deben
medirse a la mayor prontitud posible directamente en dicho dispositivo para as minimizar
cualquier error.
Muestras puntuales: se recolectarn directamente en los frascos asignados o con el
dispositivo de muestreo adecuado, segn resulte ms conveniente. Antes de ser llenados,
los frascos deben ser enjuagados por lo menos tres veces con la muestra a analizar,
siempre y cuando no tengan preservativo o estn previamente esterilizados, en cuyos
casos, se omite el enjuague. Cuando eventualmente deba obtenerse la muestra en el
frasco y esto resulte irrealizable, se obtendr una alcuota del dispositivo de muestreo
empleado, previo a medicin de parmetros in situ y/u obtencin de otras alcuotas. Toda
situacin que se desve del procedimiento de muestreo establecido, debe consignarse en
la planilla de muestreo.
Muestras compuestas: se observarn las precauciones descritas previamente para las
muestras puntuales. Las muestras compuestas se preparan mezclando varias muestras
puntuales o mediante la recoleccin de una fraccin continua de la descarga o cuerpo de
agua a muestrear; las porciones individuales se recogen a intervalos de tiempo
previamente establecidos, preferiblemente en envases de boca amplia y volumen en
funcin de los anlisis a realizar.
Para los casos de corrientes o descargas, existen dos posibilidades para su recoleccin,
en funcin de que se considere o no el flujo:

Sin considerar el flujo: se mezclan alcuotas de iguales volmenes, a medida que

se van obteniendo o al colectarse la ltima muestra.

En funcin del flujo: con los datos de su comportamiento durante el tiempo de

muestreo, se calcula la proporcionalidad entre las alcuotas y con base a sta y el
volumen de muestra compuesta necesaria, se determinan los volmenes de cada
alcuota y se procede a su mezcla.

En todo caso, el recipiente para la muestra compuesta debe tener indicado los volmenes
a colectar para facilitar las adiciones de las alcuotas. Si se utilizan conservantes, estos se
aadirn inicialmente al envase de la muestra de forma que todas las porciones de la
mezcla queden protegidas lo antes posible.
Conservacin y almacenaje, Inmediatamente recolectadas, las muestras se almacenan
segn lo establecido para cada parmetro. Para las que requieran refrigeracin, se
emplearn neveras porttiles. Para muestras compuestas, mientras dure el tiempo de
recoleccin, se seguirn las indicaciones para garantizar su integridad. La verificacin del
pH a las muestras que lo requieran, se realizar con papel indicador de pH y de ser
necesario, se ajustar el mismo; una vez en el laboratorio, ser nuevamente verificado por
el analista al recibir las muestras.
Todos los equipos de medicin a usar en el campo deben ser verificados previamente y
consignados en el documento respectivo. Debe disponerse de las soluciones adecuadas
que permitan la verificacin in situ de los equipos, en especial al realizar mediciones en
aguas residuales, las cuales pueden causar interferencias en el funcionamiento de los
electrodos. Tambin se dispondr de soluciones limpiadoras para las membranas de los
equipos en caso de que stas se ensucien. Se debe tener en cuenta todas las normas de
seguridad industrial y los accesorios a utilizar, para eliminar y minimizar los riesgos que
puedan ocasionar accidentes.
Obtencin
de
muestras
compuestas
en
funcin
del
flujo
o
caudal:
Para cada parmetro (o grupo de estos), en funcin del volumen total de muestra a
recolectar, acondicionar tantos frascos de dicho volumen como alcuotas deban
obtenerse. Al obtener cada alcuota en el tiempo establecido, consignar el caudal, colectar
el volumen total del frasco y preservar la muestra segn lo establecido en la IE
correspondiente (por ejemplo, refrigeracin y/o adicin de preservante). Una vez
concluido el muestreo y con base a los resultados del caudal, se proceder a preparar la
muestra compuesta. Para fines prcticos, esta operacin puede realizarse en el
laboratorio.
Para determinar los volmenes a mezclar de cada una de las alcuotas, aplicar la
siguiente frmula:
vi = (qi*V)/(Q*n)
Donde:
vi =

volumen de la alcuota en el tiempo ti

qi =

caudal en el tiempo ti

V=

volumen total de muestra

Q=

caudal promedio total

n=

nmero de alcuotas

Tipos de muestreo del suelo

El muestreo del suelo se usa para cuantificar el contenido del suelo en un rea
determinada. Las estrategias implicadas van desde el contacto directo y el anlisis de la
tierra para la aplicacin de la topografa. Mientras que las muestras puntuales de la tierra
pueden ser deseables en un caso, otras veces requieren una visin ms amplia, y estas
diferentes estrategias proporcionan una amplia gama de tcnicas para explorar el terreno
que conforma el mundo.
Aleatorio
Muestreo aleatorio directo del suelo significa que el investigador toma muestras de suelo
de las reas de un sitio determinado elegido al azar. La imagen de la tierra que da un
investigador es muy bsica, pero el muestreo al azar es un buen lugar para empezar
cuando hay poco conocimiento previo del sitio. Ofrece la imagen ms general, dando
pistas sobre dnde buscar con otros mtodos, o si el sitio es adecuado para un uso
determinado. Puede ser utilizado con fines agrcolas para determinar los niveles
generales de importantes nutrientes como el nitrgeno y el fsforo, le dice al investigador
si el sitio es adecuado para los cultivos y cosechas, sugiere que podra hacerlo mejor.
Cuadrcula
En el muestreo de cuadrcula, un rea se divide en secciones. Esto da una mejor idea de
la variabilidad de la zona y la concentracin y la densidad de nutrientes. Evita el peligro de
un muestreo aleatorio, que a veces puede dar lugar a demasiadas muestras recogidas de
la misma regin. Esta informacin puede ser utilizada por los agricultores para ajustar las
cantidades y tipos de fertilizantes que utilizan, para identificar los microorganismos que
habitan en el rea o para evaluar los peligros de la tierra contaminada.
Toma de muestras
El muestreo constituye la etapa inicial y fundamental para la adecuada interpretacin de
los resultados obtenidos en el laboratorio. Pero debido a que el suelo es un material muy
heterogneo, con diferentes condiciones de origen, topografa, manejo, tipos de
vegetacin, etc.; es necesario definir unidades con caractersticas ms o menos similares,
que permitan establecer lo que se conoce como unidades de
muestreo.
El objetivo bsico de todo muestreo es obtener datos de una poblacin de individuos u
objetos con caractersticas homogneas que los identifican como grupo. Dado que puede
ser difcil tomar muchas muestras o muestrear una gran extensin de terreno, los datos se
obtienen a partir de una o ms muestras, las cuales deben ser representativas.
En cualquiera de los casos que se presentan a continuacin es importante sealar que la
tcnica con que se realiza el muestreo, depende del objetivo del estudio. De esta forma,

se puede decir que hay tcnicas para el muestreo de suelos en aspectos como fertilidad,
clasificacin, fsica, mineraloga, determinacin de micro y macroorganismos, mecnica,
etc. Lo mismo sucede si se habla de muestreo de aguas: para potabilidad y para riego;
muestreo de tejido vegetal, bien sea para identificar o diagnosticar problemas
nutricionales (toxicidad o deficiencias), controlar la evolucin de la nutricin de los
cultivos, entre otros.
Muestreo de suelos
Separe aquellas reas con caractersticas similares, con base en los siguientes criterios:

Grado de pendiente

Grado de erosin

Tipo de vegetacin (edad de la explotacin, cultivos anteriores)

Manejo previo (fertilizacin, preparacin del suelo)

Presencia de rocas, cuerpos de agua, otros factores.

Si el predio es uniforme en los aspectos anteriores se considera como una unidad para el
muestreo un rea no mayor de 10 hectreas, de lo contrario puede subdividirse en reas
de segn las diferentes caractersticas encontradas, para cada una de las cuales se
efecta el muestreo (Figura 1, punto 1).
La herramienta ms apropiada para el muestreo es el barreno, pues con l puede
mantenerse una cantidad y profundidad de muestra por punto bastante homognea. Sin
embargo, si no se cuenta con un barreno, el muestreo puede hacerse con una pala o
paln y un balde o lona limpios y procurando tomar una cantidad similar de suelo en cada
punto y a la misma profundidad (Figura 1, punto 2).
El tipo de muestreo ms adecuado y sencillo para su aplicacin es al azar en zig-zag. En
este mtodo se toman unas 15 20 submuestras a lo largo y ancho del terreno que luego
se mezclan en el balde o lona (Figura 1, punto 3).
Para la toma de muestras con pala, abra un hoyo de aproximadamente 25 x 25 cm de
lado y 20 cm de profundidad, retire los 2 cm primeros del suelo y extraiga la muestra. En
general la profundidad de muestreo est entre 2 y 20 cm que es el rea de accin de las
races. Sin embargo, los pastos acostumbran muestrearse a menor profundidad (0-10 cm)
y para algunos cultivos perennes puede ser importante realizar muestreos ms profundos
(Figura 1, punto 4).
Mezcle en un balde las submuestras hasta obtener una muestra compuesta homognea
(Figura 1, punto 5).
Empaque aproximadamente 1 kg en bolsas plsticas o de papel encerado que no hayan
sido usadas antes. No usar bolsas o empaques que contengan fertilizantes u otras
sustancias qumicas (herbicidas, pesticidas, enmiendas, etc.). Proceda a identificar la
muestra en forma concisa y exacta; precise el nmero de lote o predio, el cultivo o uso

actual y el tipo y la cantidad de fertilizantes y enmiendas aplicadas. El rtulo de

identificacin no debe estar en contacto directo con el suelo a analizar (Figura 1, punto 6).

Figura 1. Procedimiento a seguir para obtener una muestra de suelo que represente el
rea que desea analizar con fines
En el Laboratorio de Microbiologa de Suelos se ofrecen los servicios que se detallan:
- Cuantificacin del grado de micorrizacin arbuscular en races
- Evaluacin del potencial micorrcicos de suelos
- Evaluacin de la densidad de esporas de hongos formadores de micorrizas en muestras
de suelos
- Ensayos de eficiencia de inoculacin en condiciones controladas
- Recuento total de bacterias cultivables de suelo
- Recuentos de Solubilizadores de P y de Actinomycetes
- Recuento total de hongos cultivables del suelo
- Determinacin de actividad enzimtica (FDA)
- Instalacin de ensayos a campo. Monitoreo y evaluacin de la inoculacin de
microorganismos benficos en cultivos de inters. Anlisis de resultados y elaboracin de
informes
-Extraccin de ADN de muestras de suelo, amplificacin por PCR para grupos de
microorganismos (bacterias, hongos, hongos formadores de micorrizas), determinacin de
la variabilidad gentica en muestras de suelo.

- Determinacin de gneros de hongos formadores de micorrizas por tcnicas

moleculares.

3. Muestreo.
El muestreo consiste en separa una serie de muestras representativas del lote
para someterlas al anlisis microbiolgico.
A. Muestreo nico
Cuando hay que hacer un muestreo de una partida nica de alimento hay
que considerar que los datos de mayor importancia los proporcionan las
normas de elaboracin y conservacin del alimento. Esto es especialmente
importante en partidas de alimentos importados, sobre todo los enlatados.
Ningn muestreo nico puede dar una garanta total de calidad
microbiolgica del alimento; si se analizan 30 muestras de una partida
suficientemente grande y no aparece ninguna en malas condiciones
microbiolgicas, an hay una probabilidad razonable de que el 10% del lote
sea microbiolgicamente defectuoso.
Como norma general, si se trata de un lote desconocido es conveniente
analizar un nmero de muestras equivalente al 1% si el lote es grande y al
10% si es pequeo. Aunque estos valores hay que adecuarlos a las
condiciones reales.
Cuando se analiza una muestra nica el mejor criterio de seguimiento son
las especificaciones del fabricante. Las muestras nicas estn siempre
sometidas a una gran probabilidad de falsos negativos.
B. Analisis repetido.
Se pueden definir dos tipos de riesgomicrobiolgico: (a) el riesgo del
consumidor: probabilidad de aceptacin de lotes substndard y (b) el riesgo
del fabricante: probabilidad de rechazo de lotes substndard.
Un sistema de muestras basado en el anlisis de 10 muestras al azar y
rechazo del lote cuando se detecte una defectuosa obligar al fabricante a
establecer medidas de seguridad suficientes para proteger adecuadamente
al consumidor.
C Planes de muestreo de tres categoras.

Se aceptan con condiciones algunos alimentos que sobrepasen la norma

microbiolgica establecida conforme a los valores microbiolgicos de
referencia. Clase: aceptable, grado intermedio, inaceptable. [En aquellos
casos en que el obtener valores ms altos que los de referencia no hace
inaceptable el alimento].
D. Toma de muestras representativas.
Una vez decidido el nmero de muestras que hay que tomar, han de
seleccionarse stas de forma estadsticamente representativa utilizando
tablas de nmero al azar. Dentro de cada unidad hay que tomar muestras
representativas de todos los constituyentes del alimento, para ello se debe
homogeniezar la muestra usando batidoras o stomacher.
4. Utilizacion de los microorganismos como marcadores (indices e
indicadores).
A. Introduccin histrica, terminologa y bases de su utilizacin.
Historicamente, desde hace un siglo se estudia la deteccin de, primero, E.
coli y posteriormente, el grupo coli-aerogenes (enterobacteriaceas) como
ndice de contaminacin final en lugar de investigar la presencia
de Salmonella typhi.
B. Terminologa

Microorganismo ndice: aqul cuya presencia aletar de la posible

presencia de un microorganismo patgeno relacionado
ecolgicamente con l. (Ej.: E. col ndice de S. typhi).
Microorganismo indicador: aquel cuyo mumero indica un
tratamiento inadecuado o una contaminacin posterior del alimento
analizado.
Un microorganismo dado puede actuar como ndice e indicador
simultaneamente, incluso en un mismo alimento. A pesar de que
actualmente es posible detectar casi cualquier tipo de
microorganismo patgeno, se siguen llevando a cabo anlisis de
microorganismo determinados como marcadores por razones de
economa, rapidez y sensibilidad.

Los princiaples marcadores son: grupo coli-aerogenes, E. coli, y

estreptococos del grupo D de Lancefield.
Bibliografa
http://inta.gob.ar/servicios/analisis-microbiologicos-de-muestras-desuelos(11/04/2015)
Garay, J.A., J.M. Betancourt, G. Ramirez, B. Marn. B. Cadavid, L
Panizzo, L. Lesmes, E. Snchez, H. Lozano, y A. Franco. 2003.
Manual de tcnicas analticas para determinacin de parmetros
fisicoqumicos y contaminantes marinos: aguas, sedimentos y
organismos. INVEMAR, Santa Marta, 25-56 p. Norma Tcnica
Colombiana NTC-ISO 3650-5Calidad del agua. Vocabulario. Parte
5. 2007-03-21(11/0/2015)
APHA, AWWA, WEF, Standar Methods for the examination of
water & waste water, 21st Edition, Centennial Edition, Washintong
D.C, 2005.
Norma Tcnica Colombiana NTC-ISO 5667-1Calidad del agua.
Muestreo.Parte 1.Directrices para el diseo de programas y
tcnicas de muestreo, 2010-12-23
11/05/2015