Articulo Analisis Hierro

MTODO DE VALIDACIN PARA LA DETERMINACIN DE HIERRO EN
UNA MUESTRA DE HGADO DE VACA.

METHOD OF VALIDATION FOR THE DETERMINATION OF IRON IN A
SAMPLE OF LIVER OF IT VACATES.
ABRIL ANGELA Y MARTNEZ AIDA, PROFESORAS EN FORMACIN DE LA
UNIVERSIDAD PEDAGGICA NACIONAL.
RESUMEN
En el presente artculo se describe y se da a conocer los resultados obtenidos
de la experiencia de laboratorio que se llev a cabo en la universidad
pedaggica nacional en el espacio acadmico de mtodos de anlisis qumico,
donde se va a determinar hierro en una muestra de hgado de vaca, por medio
del mtodo instrumental espectrofotometra (validacin del mtodo).
Palabras clave
Espectrofotometra, hierro, validacin del mtodo, ley de Lamber Beer,
spectronic 20.
SUMMARY
The present article describes and discloses the results of the laboratory
experiment was carried out in the National Pedagogical University in the
academic field of chemical analysis methods, which will determine iron in a
liver sample beef, by means of spectrophotometry, instrumental method
(method validation).
Words key
spectrophotometry, iron, validation of the method, law of Lamber Beer,
spectronic 20.
INTRODUCCIN
INSTRUMENTRUMENTACIN
TCNICAS
ESPECTROFOTOMETRA.
1
Y
DE
Los componentes bsicos de un

espectrofotmetro son:
1. fuente
radiante.
estable
de
energa
1 Pecsok,R y Shields, D, cap. 10.
2.
un
monocromador
para
desdoblar la radiacin de las
longitudes de onda que la forman.
3. recipientes transparentes para la
muestra.
4. un detector de la radiacin con
un sistema de lectura acoplado
(medidor o registro).
SPECTROFOTMETRO
SPECTRONIC 20 DE BAUSH AND
LOMB.
Como el hgado (analito) no se
Opera dentro de un margen de 340

a 625m y puede ampliarse hasta
750m, aproximadamente. Una
rejilla
de
difraccin
de
600
lneas/mm dispersa la radiacin de
una lmpara de tungsteno. Las
rendijas permiten el paso de una
radiacin de ancho de banda
constante de 20m, la rejilla se
hace girar para seleccionar la
banda de radiacin deseada con el
botn de control de longitudes de
onda calibrado.
necesita una transformacin
El aparato se normaliza a cada

longitud de onda:
encuentra
TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
(HGADO DE VACA)
forma
qumica
apropiada para analizarla, sino que
Primero es fundamental que la

muestra est en forma liquida para
el ensayo pero como el hgado no se
pude disolver tan fcilmente en su
forma fsica original
calentarlo
es necesario
despus
calcinarlo.
Cuando el analito requiere
una
transformacin en su forma fsica,

sta puede hacerse simplemente
cambiando la temperatura .3
Kenneth A, Rubinson, Judith E,
Rubinson Pag, 97
Otra
parte
importante
en
el
tratamiento de la muestra es la
digestin, pues cuando una parte o
la totalidad de la muestra no se
disuelven en un disolvente como es
comn, entonces se requieren unas
condiciones vigorosas. La digestin
es un proceso que requiere poner el
slido en disolucin
con la ayuda
de cidos, bases, agentes oxidantes

o enzimas.4
El mtodo de digestin en el caso
del
hgado
de
vaca
destruccin
de
los
implica
la
componentes
orgnicos mientras que se dejan los

inorgnicos.
Estos
normalmente,
oxidacin
orgnicos,
de
se
realizan,
mediante
los
la
compuestos
quedando
compuestos inorgnicos
2 Pecsok,R y Shields, D, pag, 190.
por
medio de ciertos analitos.
1. calibrando el botn de control de

amplificador a modo que el medidor
quede en 0% de transferencia (T)
cuando no llegue radiacin al
fototubo (ajuste por corriente
obscura). 2. Calibrando el control
de luz a modo de que el medidor en
100% T cuando la muestra en
blanco esta el haz La sensibilidad
que se obtiene con el fototubo del
spectronic 20. Es evidente que la
calibracin del 100% de T con el
blanco requiere mayor poder
radiante a 600m q a 400m. La
calibracin del control de la luz
permite las atenuaciones deseadas.
Las
calibraciones
antes
mencionadas tienen que hacerse
cada vez que se cambia la longitud
de onda.
de
los
en las
cenizas resultantes. La calcinacin
normalmente, se lleva a cabo en un

horno
calentado
Baln aforado 250 ml
elctricamente,
pero, con materiales adicionales

especiales, se puede llevar a cabo
en hornos microondas.
0 0.0
2
El reactivo utilizado parar desrrollar
0.1
0.2
0.5
2 2.5
1 ml Hidroxilamina
color cuando la muestra tenido el

tratamirnto que necesitaba es la ofenantrolina que
al actuar con el
10 ml solucin reguladora
hierro de la muestra , todo ese

hierro
se
complejo.
convierte
en
un
4 ml o fenantrolina (color)
Aforar con H2O a 50 ml
Almacenar oscuridad 10 ml
4, 5,
Leer A
Kenneth A, Rubinson, Judith E,
Rubinson Pag, 98,100

6.
Daniel C, Harris Pag, 749
METODOLOGA
BARRIDO ESPECTRAL Y CURVA DE

CALIBRACIN
400 nm
430 nm
W=0.35g (NH4) Fe (SO4)26H2O
460 nm
(Sal de morh)
490 nm
Disolverlo en H2O
2ml HCl [
520 nm
Determinar la longitud
de
mxima absorbancia
550 nm
580 nm
610 nm
640 nm
670 nm
5 10
15
Leer A
TRATMIENTO
DE
HIGADO DE VACA
LA
MUESTRA
RESULTADOS Y DISCUSIN
Para
Muestra calcinada
la
determinacin
midi la
concentrada
Enfriar
de
cpsula de porcelana
LA
LONGITUD
de %T
3 ml HCl
onda (nm)
Filtrar
Evaporar a
400
residuos
sequedad
64
48
39
33,5
34,5
93
74
430
460
490
520
610
700
slidos
Adicionar ~ 20 ml
GRAFICA N1
volumen de 50 ml
el
cual
DE
ONDA
ANALTICA.
longitud
de 10 ml
en
TABLA N1 DETERMINACIN DE
Transferir a una
Tomar alcuota
Fe
mas
con el reactivo O fenantrolina
1 ml HNO3 [ ]
de agua
solucin
previamente se le desarrollo color
5 ml HCl [ ]
completando a
la
longitud de onda de trabajo para

ello se
Desarrollar color
de
DE
LA
0,194
0,319
0,409
0,475
0,462
0,032
0,131
DETERMINACIN
LONGITUD
ANALTICA.
DE
ONDA
0.5
CURVA
DE
0.4
METODO
RINBOM
PARA
EL
EN
EL
REALIZADO
EQUIPO HITASHI
0.3
0.2
TABLA N3 DE ABSORBANCIA Y
0.1
CONCENTRACIN
CONCENTRACI
0
350 400 450 500 550 600 650 700 750
N (ppm)
0,02
0,1
0,2
0,5
1
2
2,5
5
10
15
GRAFICA N2 DETERMINACIN
DE
LA
LONGITUD
DE
ONDA
ANALTICA.
100
80
0,05
0,132
0,22
0,521
0,978
0,413
0,015
0,866
1,032
1,356
60
40
GRAFICA N3 CURVA DE RINBOM
20
ABSORBANCIA
0
350400450500550600650700750
Las anteriores graficas muestran

que la longitud de onda de trabajo
VS
CONCENTRACIN
1.5
es de 490 nm ya que es la de
mxima absorbancia.
Para
determinar donde el mtodo
cumple la ley de Beer en cada uno

de los equipos que se utilizaron se
0.5
0
0
10 12 14 16
realiza la curva de Ringbom:
ESPECTROFOTOMETRO:
HITASHI
TABLA N4 DE LOGARITMO DE LA
CONCENTRACIN
PORCETAJE
DE TRANSMITANCIA.
log C
%T
89,12
73,79
60,25
30,13
10,52
38,64
96,6
13,61
9329
4,4
-1,699
-1
-0,699
-0,301
0
0,301
0,398
0,699
1
1,176
100
PORCENTAJE
TRANSMITANCIA
DE
VS LOGARITMO
DE LA CONCENTRACIN
120
100
80
60
40
20

PORCETAJE
VS
DE
TRANSMITANCIA
LOGARITMO
DE
0
-2
-1.5
-1
-0.5
0.5
1.5
LA
CONCENTRACIN
ESPECTROFOTOMETRO:
150
BEKMAN
100
CURVA
50
METODO
-1.5
-1
-0.5
RINBOM
PARA
EL
EN
EL
REALIZADO
EQUIPO BEKMAN
0
-2
DE
0.5
1.5
TABLA N6 DE ABSORBANCIA Y
CONCENTRACIN
TABLA N5 DE ABSORTANCIA Y
LOGARITMO
DE
CONCENTRACIN
log C
-1,699
-1
-0,699
-0,301
0
0,301
0,398
0,699
1
1,176
100 - %T
10,88
26,21
39,75
69,87
89,48
61,36
3,4
86,39
90,71
95,6
LA
CONCENTRACIN
(ppm)
0,02
0,1
0,2
0,5
1
2
2,5
5
10
15
0,031
0,031
0,037
0,039
0,073
0,418
0,456
0,883
1,475
1,443

ABSORBANCIA
CONCENTRACIN
VS
TABLA
1.5
N8
DE
100
PORCENTAJE DE TRANSMITANCIA
LOGARITMO
DE
LA
CONCENTRACIN
0.5
0
0
10 12 14 16
TABLA N7 DE LOGARITMO DE LA
CONCENTRACIN
PORCETAJE
DE TRANSMITANCIA.
log C
%T
93,11
93,11
91,83
91,41
84,53
38,19
34,99
13,09
3,35
3,6
-1,699
-1
-0,699
-0,301
0
0,301
0,398
0,699
1
1,176
log C
100
-1,699
-1
-0,699
-0,301
0
0,301
0,398
0,699
1
1,176
%T
3,89
3,89
8,17
8,59
15,47
61,81
65,01
86,91
96,65
96,4

100
PORCENTAJE
TRANSMITANCIA
DE
VS LOGARITMO
DE LA CONCENTRACIN
120
100
80
PORCETAJE
60
VS
DE
TRANSMITANCIA
LOGARITMO
DE
LA
40
CONCENTRACIN
20
0
100
-2 -1.5 -1 -0.5
0.5
1.5
80
60
ESPECTROFOTOMETRO: SDZ
40
CURVA
METODO
20
-1.5
-1
-0.5
RINBOM
REALIZADO
EQUIPO SHIMADZU.
0
-2
DE
0.5
1.5
PARA
EL
EN
EL
TABLA
N9
ABSORBANCIA
CONCENTRACIN
C ppm
0,02
0,1
0,2
0,5
1
2
2,5
5
10
15
A
-8,174
0,000921
0,024
0,086
0,175
0,38
0,436
0,98
1,431
1,468
0,398
0,699
1,000
1,176
GRAFICA N10 PORCENTAJE DE

TRANSMITANCIA
VS
LOGARITMO
DE LA CONCENTRACIN
log C vs %T
20000000000.000
15000000000.000
10000000000.000

ABSORBANCIA
36,644
10,471
3,707
3,404
5000000000.000
VS
CONCENTRACIN
-2.000
0.000
0.000
ONCENTRACION VS ABSORBANCIA
TABLASDZ
N11
2.000
100
MENOS
PORCENTAJE DE TRANSMITANCIA
Y
2
10 12 14 16
log C
-4
-1,699
-6
-10
N10
PORCENTAJE
DE
TRANSMITANCIA Y LOGARITMO DE
LA CONCENTRACIN
log C
-1,699
-1,000
-0,699
-0,301
0,000
0,301
100-%T
14927943995,7
-8
TABLA
DE
CONCENTRACIN
0
-2 0
LOGARITMO
%T
14927944095,79
0
99,788
94,624
82,035
66,834
41,687
-1,000
-0,699
-0,301
0,000
0,301
0,398
0,699
1,000
1,176
90
0,212
5,376
17,965
33,166
58,313
63,356
89,529
96,293
96,596
LA
CONCENTRACION VS ABSORBANCIA SP
GRAFICA N11 ABSORTANCIA VS

LOGARITMO
DE
LA
CONCENTRACIN
1.2
1
0.8
0.6
100-%T vs logC
5000000000.000
0.000
-2.000
0.000
-5000000000.000
0.4
0.2
0
0.01
0.01
0.02
0.02
0.03
2.000
-10000000000.000
-15000000000.000
-20000000000.000
ESPECTROFOTOMETRO:
SPECTRONIC 20 VERDE
CURVA DE RINBOM PARA EL
METODO
REALIZADO
EN
EL
EQUIPO SPECTRONIC 20 VERDE
TABLA N12
ABSORBANCIA Y
CONCENTRACIN
[ ] ppm
0,02
0,1
0,2
0,5
1
Spv
0,017
0,02
0,02
0,017
0,008
TABLA
13
%T
LOG
%T
VS
LOG
CONCENTRACIN
%T
96,161
95,499
95,499
96,161
98,175
log C
-1,699
-1,000
-0,699
-0,301
0,000
GRAFICA
13
CONCENTRACIN
%T vs logC
100.000
GRAFICA N12 ABSORBANCIA VS
98.000
CONCENTRACIN
96.000
94.000
-2.000 -1.500 -1.000 -0.500 0.000
TABLA N14 ABSORTANCIA Y LOG

CONCENTRACIN.
log C
100-%T
-1,699
-1,000
-0,699
-0,301
0,000
3,839
4,501
4,501
3,839
1,825
GRAFICA N15 ABSORBANCIA VS

CONCENTRACIN
CONCENTRACION VS ABSORBANCIA SP
GRAFICA N14 ABSORTANCIA VS

LOG CONCENTRACIN.
100-%T vs log C
6
4
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
2
0
0.000
2.000
4.000
6.000
2 4
8 10 12 14 16
8.000
ESPECTROFOTOMETRO:
SPECTRONIC 20
CURVA DE RINBOM PARA
METODO
REALIZADO
EN
EQUIPO SPECTRONIC 20
TABLA N15
ABSORBANCIA Y
CONCENTRACIN
[ ] ppm
0,02
0,1
0,2
0,5
1
2
2,5
5
10
15
Sp
0,013
0,017
0,022
0,031
0,026
0,475
0,456
1
1,602
1,523
EL
EL
TABLA N16 % TRANSMITANCIA Y

LOG CONCENTRACIN
%T
97,051
96,161
95,060
93,111
94,189
33,497
34,995
10,000
2,500
2,999
logC
-1,699
-1,000
-0,699
-0,301
0,000
0,301
0,398
0,699
1,000
1,176
GRAFICA N16 % TRANSMITANCIA

VS LOG CONCENTRACIN
Despus de determinar el rango
% T vs log C
donde se cumple la ley de Beer

utilizando los datos obtenidos del
150.000
equipo
100.000
espectronic
20
negro,
continuacin se desarrolla la curva
50.000
0.000
-2.000 -1.000 0.000
de calibracin.
1.000
2.000
TABLA
N18
CURVA
DE
CALIBRACION.
TABLA
N17
ABSORTANCIA VS
LOG CONCENTRACIN
logC
100-%T
2,949
3,839
4,940
6,889
5,811
66,503
65,005
90,000
97,500
97,001
-1,699
-1,000
-0,699
-0,301
0,000
0,301
0,398
0,699
1,000
1,176
concentraci
n
0,100
0,200
0,500
1,000
0,032
0,108
0,134
0,240
GRAFICA
CURVA
N18
DE
CALIBRACION.
curva de calibracion
0.150
0.100
0.050
GRAFICA N17 ABSORTANCIA Y

LOG CONCENTRACIN
0.000
0.000
0.500
1.000
1.500
100-%T vs logC
120.000
100.000
ECUACIN DE LA RECTA (CURVA

DE CALIBRACIN):
80.000
60.000
r=0,96
b= 0,205
a=0,036
40.000
20.000
0.000
-2.000 -1.000 0.000
1.000
2.000
A=0,205*C + 0,036
PRUEBA DE RESIDUOS
TABLA
N19
PRUEBA
DE
RESIDUOS.
A
A-A`
0,032
0,108
0,057
0,077
0,100
0,200
-0,025
0,031
0,134
0,139
0,500
-0,004
0,240
0,241
1,000
-0,001
GRAFICA
N19
TABLA N20
PRUEBA
0,0
00
A-A`vs A`
0.200
0,0
00
0,0
00
3 n1
mcc
LD=
0
=0
0,205
LC=
10 n1
mcc
LC=
100
=0
0,205
0.300
-0.040
SENSIBILIDAD
Dados los resultados de la grafica
de residuos se descartan dos datos,
por lo que solo dos datos cumplen
la ley de Beer; los datos dados en
concentracin
son
0,1ppm
a
0,2ppm; por lo tanto se debe volver
al laboratorio a comprobar los datos
para saber con seguridad si
cumplen la ley de Beer, debido al
tiempo no es posible rectificar
dichos datos.
S= Mcc
TABLA N21
A
0,032
0,108
S=
A
0,076
0,O 76
0,205 =0,371ppm
PRECISIN
LIMITE DE DETECCIN
0,0
00
LIMITE DE CUANTIFICACIN
0.020
0.100
0,0
00
LD=
0.040
0.000
0.000
-0.020
Promedio de absorbancia=0
Desviacin estndar=0
DE
RESIDUOS.
A
0,00
0
TABLA N22
C
0,5
00
A
0,13
4
A
0,1
40
A
0,1
40
A
0,1
40
A
0,1
34
Exactitud frente al patrn: 1.0ppm
0.1361.0 100=86.4
1.0
%Exactitud =
X = 0,138
n-1=
0.1360.5 100=72.8
0.5
%Exactitud =
3,2863
El mtodo es mas exacto frente al
n1
CV=
x
patrn 1.0 ppm y relativamente

exacto en 0.5 ppm mientras que en
los patrones 0.1 y 0.2 el mtodo es
3,2863
CV= 0,138 =0,024
poco confiable.
CONCENTRACIN
0,024*100=2,4%
precisin
del
sistema.
C=
0,024+0,044
= 0,089ppm
0,76
EXACTITUD
V expV T
VT
%Exactitud=
0.1360.1 100=36
0.1
%Exactitud=
DE HIERRO EN EL HIGADO DE
VACA
A= 0.205 C + 0.036
TABLA N23
= 500nm muestra.
lectu
ras
1
%T
promedio A
86
0,064
86
87
86
86
0,0
66
0,0
66
0,0
60
0,0
66
0,0
66
Exactitud frente al patrn: 0.2 ppm
0.1360.2 100=32
0.2
%Exactitud=
EXPERIMENTA
C=
0.0640.036
=0.136 ppm Fe
0.205
4
0.136 mg
50 ml
L
5
1 L
0.516 g
1000 g
1000 ml
mg TABLA N26
=13,178
Fe
1 Kg
Kg
ABSORBANCIAS
CONCENTRACIN TEORICA
A= 0.205 C + 0.036
TABLA N24
CONCENTRA
CION 0,5
LECTURAS
1
2
3
4
5
A
0,134
0,140
0,140
0,140
0,134
Muestra: 0.516 g
0.1380,036
=0,497 ppm
0,205
%Error=
PROMEDIO
Y
DE
DESVIACIN
ESTNDAR DE LOS DATOS DE LA

TABLA 24.
PROMEDI DESV.STAN
OA
DAR
0,138
3,29E-03
TABLA N27
Promedio A=0,138
C=
0,140
0,134
V expV T
VT
100=72,636
0.497
%Error=
prom+3de
sv
prom+2de
sv
prom+des
v
Prom
prom-desv
prom2desv
prom3desv
1,47E-01
lecturas
1,000
A
0,134
1,44E-01
2,000
0,140
1,41E-01
3,000
0,140
0,138
1,35E-01
1,31E-01
4,000
5,000
6,000
0,140
0,134
1,28E-01
7,000
TABLA
N28,
CONTROL.
0.1360.497
CARTA DE CONTROL
TABLA N25
CONCENTRACION 0,5
LECTURAS
A
1
0,134
2
0,140
3
0,140
CARTA
DE
VALORES
prom+3desv
prom+2desv
1,47E-01
1,44E-01
prom+desv
1,41E-01
prom
0,138
prom-desv
1,35E-01
prom-2desv
1,31E-01
prom-3desv
1,28E-01
GRAFICA N20
tabla de control
67%
0.075
0.073
0.072
0.070
0.069
0.067
0.065
1
0.050
0.049
0.048
0.047
0.046
0.044
0.043
2
76%
0.037
0.036
0.036
0.035
0.034
0.033
0.032
81% 84%
0.030
0.029
0.028
0.028
0.027
0.026
0.026
0.025
0.024
0.024
0.023
0.023
0.022
0.021
5
86% 88%
0.021
0.021
0.020
0.020
0.019
0.018
0.018
0.018
0.017
0.016
6
7
CONCLUSIONES
El rango de concentracin
donde se da la linealidad del
mtodo en todos los equipos
es de 0,1ppm a 0,5ppm.
El rango de la longitud de
onda mxima adecuado para
trabajar es de 490nm a
520nm.
Debido al porcentaje de error

relativamente alto, no es
confiable la concentracin
obtenida de hierro en el
hgado de vaca.
BIBLIOGRAFA
Pecsok, R, y Shields, D.
mtodos
modernos de
anlisis
qumico.
Ed.
Limusa, Mxico 1973.
Harris, Daniel C. Anlisis
qumico cuantitativo .Grupo
Editorial.
1992.
Rubinson,
Iberoamrica,
Kenneth
A.
Rubinson Judith E. Anlisis

Instrumental.
Educacin
2001
Ed.
Pearson
S.A.
Madrid.

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MTODO DE VALIDACIN PARA LA DETERMINACIN DE HIERRO EN

UNA MUESTRA DE HGADO DE VACA.

Los componentes bsicos de un

1 Pecsok,R y Shields, D, cap. 10.

Como el hgado (analito) no se

Opera dentro de un margen de 340

necesita una transformacin

El aparato se normaliza a cada

apropiada para analizarla, sino que

Primero es fundamental que la

Cuando el analito requiere

transformacin en su forma fsica,

de cidos, bases, agentes oxidantes

orgnicos mientras que se dejan los

medio de ciertos analitos.

1. calibrando el botn de control de

cenizas resultantes. La calcinacin

normalmente, se lleva a cabo en un

Baln aforado 250 ml

pero, con materiales adicionales

El reactivo utilizado parar desrrollar

color cuando la muestra tenido el

hierro de la muestra , todo ese

Aforar con H2O a 50 ml

Rubinson Pag, 98,100

Daniel C, Harris Pag, 749

BARRIDO ESPECTRAL Y CURVA DE

W=0.35g (NH4) Fe (SO4)26H2O

con el reactivo O fenantrolina

previamente se le desarrollo color

longitud de onda de trabajo para

GRAFICA N3 CURVA DE RINBOM

Las anteriores graficas muestran

determinar donde el mtodo

cumple la ley de Beer en cada uno

realiza la curva de Ringbom:

GRAFICA N5 CURVA DE RINBOM

GRAFICA N4 CURVA DE RINBOM

GRAFICA N6 CURVA DE RINBOM

GRAFICA N8 CURVA DE RINBOM

GRAFICA N7 CURVA DE RINBOM

GRAFICA N10 PORCENTAJE DE

GRAFICA N9 CURVA DE RINBOM

GRAFICA N11 ABSORTANCIA VS

GRAFICA N12 ABSORBANCIA VS

TABLA N14 ABSORTANCIA Y LOG

GRAFICA N15 ABSORBANCIA VS

GRAFICA N14 ABSORTANCIA VS

TABLA N16 % TRANSMITANCIA Y

GRAFICA N16 % TRANSMITANCIA

Despus de determinar el rango

donde se cumple la ley de Beer

continuacin se desarrolla la curva

GRAFICA N17 ABSORTANCIA Y

ECUACIN DE LA RECTA (CURVA

Exactitud frente al patrn: 1.0ppm

El mtodo es mas exacto frente al

patrn 1.0 ppm y relativamente

Exactitud frente al patrn: 0.2 ppm

Exactitud frente al patrn: 0.5ppm

ESTNDAR DE LOS DATOS DE LA

Debido al porcentaje de error

Rubinson Judith E. Anlisis